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黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-β1/Smads信号通路的影响
目的 观察黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-pl/Smads信号蛋白的影响,探讨黄芪对腹膜纤维化的阻抑作用与机制.方法 实验分为5组,每组10只.阴性对照组:每日腹腔注射生理盐水20 mL/只,共35d；模型组:每日腹腔注射4.25％葡萄糖腹透液20 mL/只,共35 d；黄芪低、中、高剂量组:于造模第16天开始每日腹腔注射黄芪腹透液(腹透液中加入黄芪注射液,分别含黄芪生药终浓度10、20、40 mg/mL)20 mL/只,共20d.HE染色观察腹膜病理改变；快速免疫组化法检测腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN、E-cadherin、α-SMA的表达；Western blot检测腹膜组织TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad2/3、p-smad2/3、Smad7蛋白的表达；RT-PCR检测TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad7mRNA表达.结果 ①模型组PMCs呈圆形或柱形,有脱落,间皮下基质增生,大量成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润,纤维素样物质沉积,腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN表达上调,黄芪各干预组上述变化有改善,以高剂量组作用较为明显；②模型组EMT标记蛋白α-SMA表达上调,E-cadherin表达下调,高、中剂量黄芪组能一定程度地逆转腹膜组织E-cadherin表达下降与α-SMA高表达；③模型组Samds信号蛋白p-smad2/3、Smad7表达上调,黄芪可不同程度地下调p-smad2/3高表达,增强Samd7的表达,高剂量组作用较为显著.结论 高糖腹透析液可促使PMCs EMT的发生,黄芪很可能通过抑制TGF-β1,并作用于Smads信号转导通路正、负反馈环路中的Smad2/3、Smad7关键信号蛋白,阻抑PMCs EMT的发生.
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黄芪甲苷抑制高糖腹透液诱导 HMrSV5氧化应激与EMT 的实验研究
目的：观察黄芪甲苷(Astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)对高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞 HMrSV5氧化应激及 EMT 的影响,探讨 ROS 在 EMT 中的作用及 AS-Ⅳ干预机制。方法采用葡萄糖腹透液诱导建立 HMrSV5氧化应激模型,相差显微镜观察细胞形态变化,MTT 检测 AS-Ⅳ及葡萄糖腹透液对细胞活力的影响；予40μg/mL AS-Ⅳ干预 HMrSV5氧化应激,DHE 荧光探针检测药物作用前后 ROS 生成水平变化,Western blot 检测 EMT 相关蛋白变化；与 ROS 清除剂 NAC 作对照,观察 AS-Ⅳ干预 HMrSV5氧化应激 EMT 指标及 Smads 蛋白的变化。结果①40、50μg/mL AS-Ⅳ干预后细胞活力稍有上升(P <0.05)；随腹透液作用时间的延长及葡萄糖浓度提高,细胞活力明显抑制,以4.25%高糖腹透液干预48 h 明显(P <0.05),细胞拉伸变长；②40μg/mL AS-Ⅳ作用细胞能抑制形态改变,降低模型组 ROS 的生成(P <0.05),上调 E-cadherin、ZO-1表达,下调α-SMA 表达,并抑制 Smad2/3磷酸化；③5 mmol/L NAC 产生类似调控作用。结论高糖腹透液可抑制 PMCs 细胞活性,增加 ROS 生成,导致 PMCs EMT,其分子机制可能与 ROS 参与调控的 Smads 通路激活有关,而 AS-Ⅳ可能通过减少 ROS生成,抑制 Smad2/3磷酸化,阻抑 PMCs EMT。
