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红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织补体C3及肾小管上皮间充质转分化的影响
目的 探讨红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏纤维化的影响及其机制.方法 建立单侧输尿管梗阻大鼠模型,并把实验动物分成假手术组(对照组)、单侧输尿管梗阻组、单侧输尿管梗阻大鼠红细胞生成素小剂量治疗组(100u·kg-1·d-1红细胞生成素,小剂量组)和单侧输尿管梗阻大鼠红细胞生成素大剂量治疗组(1000u· kg-1·d-1红细胞生成素,大剂量组).在单侧输尿管梗阻术后第3 ～14天隔天腹膜内注射红细胞生成素,所有大鼠在第14天处死；观察肾组织病理变化；免疫组化检测各组大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白、上皮细胞钙黏蛋白和补体C3的表达.结果 与单侧输尿管梗阻组比较,单侧输尿管梗阻大鼠用红细胞生成素治疗后,梗阻侧肾脏胶原纤维含量明显减少,且大剂量红细胞生成素治疗组减少更明显.与对照组比较,单侧输尿管梗阻组大鼠梗阻侧肾脏肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白大量表达,肾小管上皮细胞钙黏蛋白表达明显减弱,并可见肾小管上皮细胞大量表达C3.与单侧输尿管梗阻组比较,单侧输尿管梗阻大鼠用红细胞生成素治疗后,梗阻侧肾脏肾小管上皮细胞C3和α-平滑肌肌动蛋白表达明显减弱,上皮细胞钙黏蛋白表达明显增强,以上改变在大剂量红细胞生成素治疗组更加明显.结论 红细胞生成素可抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮间充质转分化,减轻肾间质纤维化,这种作用可能与其抑制肾小管上皮细胞补体C3的表达有关.
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巨噬细胞介导上皮间充质转分化在纤维化疾病中的作用
纤维化与多器官病变的不良预后密切相关,至今仍缺乏有效治疗措施.近年来研究表明,巨噬细胞与上皮细胞相互作用,诱导上皮间充质转分化(EMT),在多种纤维化疾病发病过程中起关键作用.本文就巨噬细胞在EMT相关纤维化疾病中的致病机制进行综述,为明确其在纤维化疾病治疗中的潜在临床价值提供参考.
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miRNAs与腹膜纤维化关系的研究进展
近年发现微小RNA（miRNAs）是转录后基因调控的关键因素，参与诸多疾病的发生、发展。腹膜透析是终末期肾脏疾病的主要替代治疗方法之一，腹膜纤维化是导致腹透患者退出腹透治疗的主要因素，制约了腹膜透析的应用和发展。miRNAs与腹膜纤维化发生密切相关。本文就miRNAs在腹膜纤维化发病机制及治疗中的作用进行综述。
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钙黏蛋白在肾脏纤维化中的研究进展
肾脏纤维化是由多种因素参与并诱导的几乎不可逆转损伤性改变,可发生、发展甚至恶性演变致肾功能衰竭,成为目前尤为关注的健康问题.上皮间充质转分化(EMT)是一种在病理状态下上皮细胞改变表型,逐渐向成纤维细胞转变的进程.EMT过程在肾脏纤维化中起到重要调控作用.钙黏蛋白是一组跨膜蛋白,在纤维化研究背景下,表现出不可忽视的作用.本文综述了钙黏蛋白在肾脏纤维化疾病中的作用及机制,并对钙黏蛋白作为潜在的治疗靶点进行了一定展望.
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泽泻对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织补体C3及肾纤维化的影响
目的:探讨泽泻对单侧输尿管梗阻(unilateral uretreal obstructire,UUO)大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的作用及其机制.方法:采用单侧输尿管梗阻方法制作大鼠肾间质纤维化模型.30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO组和泽泻治疗组.术前3d开始,泽泻治疗组给予中药泽泻9 g·kg-1·d-1饮片溶于适量生理盐水中灌胃用.术后14d处死大鼠,观察梗阻侧肾组织病理损害和间质纤维化,免疫组化检测α-SMA、E-cadherin、补体成分C3在肾组织中的表达.结果:UUO组大鼠肾间质纤维化明显,泽泻干预后肾间质纤维化程度减轻.免疫组化结果表明UUO组大鼠C3和α-SMA表达明显增加,E-cadherin表达明显减少;泽泻干预后,C3和α-SMA的表达明显低于UUO组(P<0.05),E-cadherin的表达高于UUO组(P<0.05).结论:UUO大鼠肾小管上皮细胞的C3表达增加,中药泽泻能减轻UUO大鼠C3的表达,抑制肾小管上皮细胞EMT.
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高糖及核因子κB通路诱导足细胞上皮间充质转分化的研究
目的:探讨高糖对小鼠足细胞上皮间充质转分化(EMT)与迁移的影响及其分子机制. 方法:以永生化小鼠足细胞株(足细胞)为研究对象,设置正常糖组(5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5 mmol/L葡萄糖+25mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、核因子κB(NF-κB)特异性抑制剂小白菊内酯(PTL)+高糖组,作用时间24h.采用Transwell检测细胞迁移能力,Western Blot检测蛋白表达,qPCR检测mRNA表达情况,免疫荧光检测NF-κB入核情况. 结果:与正常糖及甘露醇组比较,高糖刺激足细胞24h后细胞的迁移能力明显增强(P＜0.05),足细胞特征性蛋白nephrin明显下调(P＜0.05),纤连蛋白(FN)及mRNA表达显著增加(P＜0.05),而E钙黏蛋白(E-cadherin)及其mRNA表达明显下降(P＜0.05).同时,与上述对照组比较,高糖明显上调p-IκBα(P＜0.05)下调IκBα(P＜0.05)促使足细胞胞质中的NF-κB入核同时上调p-p65的表达;干预细胞PTL后,足细胞的EMT和迁移得到明显抑制(P＜0.05),nephrin蛋白表达明显上升(P＜0.05). 结论:高糖通过激活NF-κB通路诱导足细胞发生EMT及迁移.
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二甲双胍对糖尿病肾病小鼠肾脏保护作用
目的：研究二甲双胍对糖尿病肾病小鼠肾脏的作用及其可能机制。方法将10只db／db小鼠随机均分为糖尿病肾病组（A组）和二甲双胍治疗组（B组）；另选5只db／m小鼠为正常对照组（C组）。采用自动生化分析仪及ELISA法检测各组小鼠肾功能相关指标，PAS染色和Masson染色法分别观察小鼠肾脏组织中基质沉积和纤维化程度，Western blot法检测E‐钙黏蛋白（E‐cadherin）和α‐平滑肌肌动蛋白（α‐SMA）的蛋白表达，全自动分光光度计检测超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和丙二醛（MDA）浓度。结果与C组相比，A组肾小球肥大，毛细血管基底膜增厚，胶原纤维明显增加，空腹血糖、血尿素氮、肌酐和24‐h尿微量白蛋白水平升高，MDA和α‐SMA表达增加， SOD、CAT和E‐cadherin表达降低（P＜0．01）；而B组能有效改善A组上述各观察指标的变化过程（P＜0．01）。结论二甲双胍通过抑制肾脏上皮间充质转分化过程和氧化应激反应，从而阻断糖尿病肾病小鼠肾脏纤维化的发展，起到保护肾脏的作用。
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BMSCs 对糖尿病肾病大鼠的治疗作用及机制探讨
目的：观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）对糖尿病肾病（DN）大鼠的治疗作用，并探讨其作用机制。方法将20只DN造模型成功大鼠随机分为观察组和对照组各10只，分别于造模4周尾静脉输注BMSCs、生理盐水；另选10只正常大鼠作为空白组，不做任何处理。造模12周，检测各组24 h尿蛋白定量、血肌酐（ Scr ）、血糖、裂孔隔膜蛋白（nephrin）和肌间线蛋白（desmin）水平。结果与空白组比较，对照组及观察组血糖、24 h尿蛋白量、 Scr和desmin表达升高，nephrin表达减少（P均＜0．05）；与对照组比较，观察组24 h尿蛋白量、 Scr和desmin表达降低，nephrin表达增加（ P均＜0．05）。结论 BMSCs对DN大鼠肾脏具有治疗作用，可能与其改善足细胞EMT有关。
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白细胞介素6通过STAT3诱导腹膜间皮细胞上皮间质转分化
目的 探讨信号传导与转录激活基因3(STAT3)对白细胞介素6(IL-6)诱导人腹膜间皮细胞(HPMC)上皮间质转分化(EMT)的作用.方法 体外培养HPMC并分组:(1)50 μg/L IL-6刺激HPMC不同时间,按刺激时间24、48、72 h分组;(2)不同浓度IL-6刺激HPMC 24 h,按IL-6浓度50、100μg/L分组;(3)应用慢病毒介导的RNA干扰技术建立稳定沉默STAT3基因的HPMC,分成空白对照组、IL-6组、空载体组、空载体+IL-6组、慢病毒感染组、慢病毒感染+IL-6组,其中IL-6刺激均以50μg/L终浓度刺激24 h.实时荧光定量PCR检测上皮钙黏素(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达;Western印迹检测上述分子的蛋白表达及通路蛋白Janus激酶2(JAK2)、STAT3磷酸化水平;细胞免疫荧光观察E-cadherin、α-SMA的表达和分布.结果 与对照组比较,不同IL-6浓度组和不同作用时间组细胞E-cadherin蛋白和mRNA表达均下降(均P＜0.05),α-SMA、VEGF的蛋白和mRNA表达均升高(均P＜0.05),通路蛋白磷酸化(p)-JAK2/JAK2比值和p-STAT3/STAT3比值均升高(均P＜0.05),且均呈剂量和时间依赖性.沉默STAT3基因后,与空载体+IL-6组比较,慢病毒感染+lL-6组α-SMA、VEGF蛋白表达均下降(均P＜0.05),E-cadherin蛋白表达上升(P＜0.05). 结论 IL-6通过激活STAT3通路而刺激HPMC分泌VEGF并诱导EMT的发生.沉默STAT3基因可抑制人腹膜间皮细胞EMT的发生.
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红细胞生成素抑制C3a介导的肾小管上皮细胞间充质转分化
目的 观察红细胞生成素(EPO)对补体成分C3片段C3a介导的肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)的影响.方法 将人近端肾小管上皮细胞(HK-2)分为6组:对照组、EPO组、TGF-β组、TGF-β+EPO组、C3a组、EPO+C3a组,分别用RT-PCR、Western印迹和细胞免疫荧光方法检测HK-2细胞α-SMA、E-cadherin、C3的mRNA和蛋白表达.结果 与对照组和EPO组比较,C3a或TGF-β干预HK2细胞后,αt-SMA mRNA和蛋白表达增强(均P＜0.05),E-cadherin mRNA和蛋白表达减少(均P＜ 0.05),补体C3 mRNA和蛋白表达增强(均P＜ 0.05)；而同时给予EPO干预后,C3a或TGF-β的上述作用可被明显减弱(均P＜0.05).结论 EPO可抑制C3a介导的肾小管上皮细胞EMT.
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NF-κB通路在单核细胞诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用
目的 观察单核细胞(U937细胞)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)转分化的影响及其分子机制.方法 将HK-2细胞与人单核细胞系U937细胞共培养；倒置相差显微镜观察HK-2细胞形态；Western印迹、实时荧光定量PCR法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、E钙黏蛋白( E-cadherin)和胞间黏附分子1(ICAM-1)表达；BCECF-AM荧光染色法测定单核细胞黏附；流式细胞仪法检测HK-2细胞表面分子ICAM-1表达；基因芯片筛选HK-2细胞基因变化；利用信号阻断剂阻断基因芯片筛选出的信号通路,进一步验证单核细胞诱导肾小管上皮细胞转分化的分子机制.结果 单核细胞可直接诱导HK-2细胞发生形态变化,减少HK-2细胞E-cadherin表达(均P＜0.05),并上调α-SMA、FN表达(均P＜0.05).应用CD18抗体阻断CD18-ICAM-1可抑制单核细胞黏附及其诱导的HK-2细胞形态变化.基因芯片结果显示,NF-κB信号通路分子CC亚族趋化因子配体20( CCL20)、白细胞介素(IL)2、IL-8、脂磷壁酸(LTA)及血小板内皮细胞黏附分子1(PECAM1)表达明显增加(均P＜ 0.05).NF-KB信号阻断剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)能显著抑制HK-2细胞形态变化及表面ICAM-1表达,抑制单核细胞诱导的肾小管上皮细胞转分化.结论 单核细胞通过CD18分子与HK-2细胞表面ICAM-1结合,从而启动NF-κB信号通路介导的特定基因转录,终导致肾小管上皮细胞发生转分化.
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结缔组织生长因子诱导人近端肾小管上皮细胞整合素连接激酶的表达及与激酶信号途径的关系
目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)对人近端肾小管上皮细胞系HK-2整合素连接激酶(ILK)表达的影响,以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶(P13-K)途径对该因子表达的影响.方法 用不同浓度的CTGF作用HK-2细胞24 h及50 μg/L的CTGF作用HK-2细胞不同时间,以实时PCR和Western印迹方法检测ILK mRNA及蛋白的表达.用信号通路特异性抑制剂预处理,观察其对CTGF的干预作用.结果 CTGF呈时间及浓度依赖性诱导人近端肾小管上皮细胞ILK蛋白表达.5、20、50μg/L的CTGF可使ILK表达量分别增加为对照组的3.284、5.103、5.638倍.50μg/L CTGF使ILK的表达在6 h开始升高,高峰在48 h(为对照组5.740倍),MEK抑制剂PD98059和P13-K抑制剂LY294002显著降低CTGF诱导的HK-2细胞ILK基因和蛋白的表达(P均＜0.05).p38 MAPK抑制剂SB203580对CTGF诱导的ILK表达无显著影响.结论 CTGF能诱导 HK-2细胞ILK蛋白的表达,该作用可能与ERK1/2和P13-K信号途径激活有关.
