首页 > 文献资料
-
凝血酶增高NMDA受体敏感性与组织型谷氨酰胺转移酶的关系
目的探讨凝血酶增高大鼠的小脑颗粒细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)敏感性是否与细胞内组织型谷氨酰胺转移酶(tTG)变化有关.方法以0.01 U/ml浓度凝血酶单独或与tTG抑制剂单丹磺酰尸胺(MDC) 0.5×10-4 mol/L处理原代培养的Wistar大鼠小脑颗粒细胞30 min后,以0.1×10-4 mol/L、0.25×10-4 mol/L和0.5×10-4 mol/L 3种浓度NMDA作用3 h诱导上述处理的细胞凋亡,比较流式细胞仪检测到的细胞凋亡率差异以判断NMDA受体敏感性的变化;RT-PCR和Gelpro图像分析软件检测各NMDA浓度有/无凝血酶预处理的细胞内tTG mRNA变化差异.结果凝血酶预处理细胞后上述3种浓度NMDA诱导的细胞凋亡率均升高[(8.3±0.5～15.1±0.8)%, (14.1±1.1～23.8±0.7)%, (26.8±1.9～33.7±2.1)%].预处理细胞时加入MDC可阻断凝血酶对NMDA受体的这种影响,细胞凋亡率降至(5.8±1.2)%、(11.5±1.5)%和(19.0±1.7)%;凝血酶预处理后各浓度NMDA处理细胞内tTG mRNA量均同一浓度单独NMDA处理的细胞高.结论凝血酶通过增高细胞内tTG使小脑颗粒细胞NMDA受体敏感性增高.
关键词： 受体 N-甲基-D-天冬氨酸 凝血酶 脱噬作用 -
极化液对缺血/再灌大鼠心肌细胞死亡及心脏功能的影响:胰岛素的关键作用
目的探讨葡萄糖-胰岛素-钾极化液(GIK)对心肌缺血/再灌(MI/R)后心肌细胞死亡(坏死和凋亡)及心脏功能的影响,并比较和分析GIK各组分在其中的作用.方法制备大鼠MI/R模型,分别用生理盐水、GIK、葡萄糖-钾液(GK)或胰岛素干预分组.观察动脉血压、血糖、左室压等的变化,再灌注结束后检测心肌梗死或提取DNA检测心肌细胞凋亡.结果 MI/R造成明显的心脏功能障碍、心肌梗死和缺血区细胞凋亡.GIK与胰岛素(而非GK)具有相似的减轻再灌注心肌损伤作用,包括减少心肌梗死范围[(41.3±8.3)% 和 (39.6±8.6)% 比对照组(54.4±10.4)%,q=4.34和q=4.90,P值均<0.05]、减弱DNA梯带形成及促进再灌后心脏收缩/舒张功能恢复.结论 GIK可减少心肌梗死、促进缺血心脏功能恢复,胰岛素可能通过抑制缺血心肌细胞凋亡在GIK心肌保护中发挥关键作用.
-
去卵巢大鼠骨质疏松凋亡细胞及其相关因素观察
目的 探讨去卵巢大鼠骨细胞凋亡活性及其相关因素。方法 采用3′-OH末端DNA原位标记技术观察凋亡细胞活性；采用免疫组化SABC法观察bcl-2、Fas、转化生长因子（TGF）β1的表达情况。结果 去卵巢大鼠成骨细胞的凋亡细胞活性为（40.5±5.2）%，较假手术组 (24.5±3.0)%与去卵巢+尼尔雌醇/左炔诺孕酮治疗组［OVX+N/L组，（26.4±2.9)%］明显增加，差异有显著性(P＜0.01)；去卵巢大鼠破骨细胞的凋亡细胞活性为（8.4±1.2）%，明显低于假手术组(24.0±2.9)%与OVX+N/L组(26.5±3.1)%，差异具有显著性(P＜0.01)。3组成骨细胞与破骨细胞内bcl-2阳性表达率均较低，差异无显著性(P值均>0.05)；去卵巢大鼠组成骨细胞内Fas(80.0%)高于假手术组（40.0%）和OVX+N/L组（40.0%），而破骨细胞内Fas(20.0%)低于假手术组(70.0%)和OVX+N/L组 (73.3%)，后者差异有显著性(χ2=7.94，P＜0.05)，OVX组成骨和破骨细胞内TGFβ1(分别为20.0%、0)， 均低于其他两组，前者差异有极显著意义(χ2=13.104, P＜0.01)。结论 去卵巢大鼠骨丢失主要是由于雌激素水平低下引起破骨细胞凋亡减少、成骨细胞凋亡活性增加致骨吸收功能明显增加而超过骨形成所致；TGFβ1的分泌可能需要雌激素的刺激，TGFβ1表达可能抑制成骨细胞凋亡，促进破骨细胞凋亡，Fas可能诱导破骨细胞凋亡。
-
丙型肝炎病毒非结构蛋白5A抑制肿瘤坏死因子α诱导HepG2细胞凋亡的作用研究
目的研究丙型肝炎病毒非结构蛋白5A(HCV NS5A)对肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导HepG2细胞凋亡的抑制作用.方法设计HCV-1b NS5A区基因片段的特异引物,以逆转录巢式PCR方法扩增NS5A基因片段,并将其进行TA克隆,对阳性克隆进行酶切与序列鉴定;构建NS5A基因表达载体;通过Lipofectamine基因转染法,将NS5A区基因导入HepG2细胞,加入TNFα培养48h;应用Western blot检测caspase-3被切割、细胞色素C释放的情况以及通过AnnecxinV-FITC染色两种方法,观察NS5A蛋白对TNFα诱导的HepG2细胞凋亡的抑制效应. 结果成功建立HCV NS5A蛋白真核表达转基因细胞模型,发现该蛋白对TNFα所诱导HepG2细胞凋亡有抑制作用.结论 HCV NS5A蛋白可以抑制TNFα诱导的HepG2细胞凋亡.
-
T淋巴细胞活化诱导的细胞死亡在肾综合征出血热发病中的作用
目的 研究肾综合征出血热(HFRS)患者外周血T淋巴细胞(PBL-T)活化诱导细胞死亡(activation-induced cell death,AICD)的发生情况,探讨AICD在HFRS发病机制中的作用.方法 以免疫磁珠负性分离PBL-T;应用植物血凝素(PHA)和离子霉素(ionomycin)体外培养诱导细胞活化;采用HE染色和脱氧核苷酸原位末端标记法(TUNEL)染色观察凋亡情况并用流式细胞仪检测PBL-T的凋亡率.应用Western blot检测HFRS患者外周血T淋巴细胞caspase-3的表达情况,用RT-PCR对汉坦病毒的特异性基因片段进行检测. 结果 HFRS患者诱导组PBL-T凋亡率为 (27.79±0.99)%,明显高于未诱导组的(17.16±1.14)%(P＜0.01);无论是否诱导,患者PBL-T的凋亡率均高于健康人.HFRS患者诱导组PBL-T caspase-3的17 000活性成分表达显著增加.扩增产物测序结果,有19例患者血清出现阳性条带,其中汉滩病毒7例,汉城病毒12例.结论 以PHA和离子霉素可有效地诱导体外培养的PBL-T发生AICD.HFRS患者PBL-T经激活诱导后凋亡率明显提高.有79.2%的患者可以扩增到汉坦病毒特异性的基因片段 .HFRS患者PBL-T凋亡相关蛋白caspase-3的表达增加,提示AICD可能与HFRS的发病机制有关.
-
TNP-470对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的探讨TNP-470对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法以不同浓度的TNP-470作用于培养的肺腺癌AGZY-82A细胞株,以免疫组化S-P法检测肺腺癌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、p53、bcl-2、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF 受体Flk-1的表达.结果随着TNP-470浓度的增加,肺腺癌细胞VEGF、Flk-1、PCNA的表达减少,p53、bcl-2的表达逐渐增加;当TNP-470为107 μg/L时,细胞增殖几乎停止.随着TNP-470(104 μg/L)作用时间的延长,肺腺癌细胞VEGF、Flk-1、PCNA的表达逐渐减少,而p53、bcl-2的表达逐渐增加.结论 TNP-470通过使肺腺癌细胞自分泌VEGF减少,Flk表达降低,从而抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡.
-
肿瘤坏死因子α及caspase-3表达与暴发性肝衰竭细胞凋亡
目的研究肿瘤坏死因子α(TNFα)与caspase-3表达在实验性暴发性肝衰竭(FHF)中对肝细胞凋亡的作用.方法用脂多糖和D-氨基半乳糖制备FHF小鼠模型; ELISA和逆转录PCR法检测血清TNFα水平及肝组织TNFα mRNA表达;原位杂交法检测肝组织内caspase-3表达;DNA琼脂糖凝胶电泳和末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测肝细胞凋亡.结果用药后2h开始,TNFα mRNA表达增加(0.91±0.75, 正常值0.32±0.10),血清TNFα水平升高[(320.50±86.57)ng/L,正常值(16.66±7.01)ng/L],caspase-3少量表达;8h后,血清ALT和总胆红素(TBil)水平显著增加[分别为(560.66±60.20)U/L和(163.66±34.51)μmol/L,正常值为(23.56±8.03)U/L和(14.90±4.80)μmol/L],caspase-3表达至高峰,并出现典型的肝细胞凋亡改变;12h后,血清ALT和TBil水平达高峰,caspase-3表达较8h减少,肝细胞坏死和凋亡同时存在.抗TNFα单抗阻断试验后,肝细胞凋亡和坏死明显减轻,TUNEL和caspase-3表达显著减少.结论 TNFα有促进肝细胞凋亡与坏死作用,肝细胞凋亡与caspase-3的激活有关,在时间上肝细胞凋亡先于坏死.
-
老年性痴呆致病基因早老素1突变作用机制的研究
目的研究阿尔茨海默病(AD)致病基因早老素(PS)突变导致AD的可能发病机制.方法利用PS神经细胞模型,应用细胞内钙拮抗剂及抗氧化剂处理细胞后检测细胞凋亡及细胞内钙水平.结果 4种细胞在自然状态下细胞内钙及凋亡程度差异无显著性(P＞0.05),经β淀粉样蛋白(Aβ)的诱导,含突变PS-1细胞凋亡的百分率及细胞内钙浓度较其他3组显著升高(P＜0.01).4种细胞经金纳多或尼莫地平处理后,含突变的PS-1细胞内钙浓度及凋亡率较其他3种细胞差异无显著性(P＞0.05).突变PS-1细胞内钙浓度变化与细胞凋亡程度呈正相关(P＜0.01).结论突变PS-1导致AD的可能机制是:突变的PS-1促进细胞内钙超载、提高细胞内氧化应激反应,从而导致细胞凋亡增加,加速了老年性痴呆患者细胞的退行性变.细胞内钙拮抗剂及抗氧化剂可以对抗PS突变导致的细胞内钙的水平升高及细胞凋亡程度而减少细胞凋亡.
-
线粒体损伤在幽门螺杆菌诱导胃癌细胞凋亡中的作用
目的研究线粒体途径在幽门螺杆菌(Hp)诱导胃癌细胞凋亡过程中的作用.方法采用Western blotting检测细胞内线粒体DNA细胞色素氧化酶(COX)Ⅰ蛋白表达的含量;流式细胞术测定细胞凋亡和线粒体膜电位变化.结果 Hp培养滤液呈剂量和时间依赖性地直接诱导SGC-7901细胞凋亡,随着其浓度的增加,细胞的凋亡率呈上升的趋势.Hp培养滤液处理SGC-7901细胞4 h后,线粒体膜电位开始降低,8 h后下降更明显,12 h 已基本降至低,24 h后无明显变化. Hp培养滤液作用胃癌细胞后, 线粒体DNA COXⅠ蛋白表达明显低于对照组(632.8±40.6 vs 895.1±44.2,P<0.05).结论线粒体途径可能在Hp诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡过程中起重要作用.
-
尿毒症病人循环单核细胞Fas的表达及血浆FasL水平
目的 慢性肾功能衰竭（肾衰）病人单核细胞功能低下与其凋亡加速有关,兹拟进一步探讨尿毒症病人单核细胞凋亡加速的机制。方法 对7例尿毒症未透析病人和18例血液透析（血透）病人进行观察，以15例正常人为对照。采用流式细胞仪检测单核细胞Fas和Fas配基（Fas ligand ，FasL）的表达；以ELISA法测定血浆中可溶性FasL（sFasL）的水平。在体外将单核细胞与重组人FasL共同孵育，抽提DNA后用碘化丙啶染色、流式细胞仪检测单核细胞凋亡率，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察单核细胞存活率。结果 尿毒症未透析病人和血透病人单核细胞Fas的表达较正常人明显上调(P＜0.05)；血透病人的Fas表达水平高于非透析病人(P＜0.05)，但使用聚砜膜和纤维素膜透析器血透的病人之间以及透析前、后Fas的表达差异无显著性（P＞0.05）。正常人和尿毒症病人的单核细胞表面均未检测出FasL表达。正常人血浆中未能检测出sFasL，但尿毒症病人血浆中存在有sFasL；sFasL的水平在尿毒症未透析病人和血透病人之间、血透病人透前与透后之间、以及采用聚砜膜和纤维素膜透析器进行透析的两者之间差异均无显著性（P＞0.05）。单核细胞与重组人FasL在体外共同培养2 h后，血透病人单核细胞的凋亡率较正常人明显增高，而其存活率则较正常人明显低下。结论 尿毒症病人单核细胞表面功能性Fas表达上调，血浆中存在sFasL，这可能是慢性肾衰病人单核细胞凋亡的原因之一。
-
TF-1细胞凋亡相关基因19与甲状腺肿瘤之间关系的初步探讨
目的探讨TF-1细胞凋亡相关基因19(TFAR19)在甲状腺腺瘤(TA)和甲状腺乳头状癌(PTC)中是否有表达及其细胞定位.方法 6例TA和 6例PTC患者,经手术得到甲状腺肿瘤组织标本并获病理诊断,以6例TA患者的瘤周正常甲状腺组织作为对照.TFAR19表达的检测采用免疫组化染色.结果 TFAR19在正常甲状腺组织中几乎未见表达;在TA组的甲状腺肿瘤组织中呈强阳性表达,而在PTC组中呈阴性表达.结论 TFAR19凋亡通路在TA中被激活,而在PTC中则受到抑制,提示细胞凋亡与增殖之间的平衡失调可能在PTC的发病机制中具有重要作用.
关键词： 脱噬作用 甲状腺肿瘤 TF-1细胞凋亡相关基因19 -
高剂量极化液对心肌梗死患者细胞凋亡因子的影响
目的探讨急性心肌梗死(AMI)再灌注治疗联合高剂量极化液(GIK)持续静脉滴注对心肌损伤和细胞凋亡因子sFas和sFasL血清水平的影响.方法 74例AMI患者再灌注后随机分为GIK组(35例) 和非GIK组(39例),另设正常对照组(34例).GIK组在接受再灌注后即刻予以高剂量GIK 滴注24 h.检测患者入组即刻、24 h、3 d、7 d和14 d血清sFas和sFasL水平.结果 (1) AMI患者入组即刻血清sFas和sFasL水平明显高于正常对照组 (P<0.01);(2) 再灌注后GIK组和非GIK组血清sFas水平在24 h显著降低(P<0.01 ),3～7 d再次增高 (P<0.01 );(3) 为重要的发现是在14 d时,sFas水平在GIK组明显降低(P<0.01 ),而非GIK组14 d与7 d比较差异无统计学意义;(4) 血清sFasL水平在14 d期间GIK组与非GIK组比较差异无统计学意义 (P>0.05) .结论再灌注治疗联合高剂量GIK滴注明显降低AMI患者血清sFas水平,提示高剂量GIK可能通过减少缺血再灌注损伤实现对缺血心肌的保护作用.
关键词： 心肌梗塞 脱噬作用 葡萄糖-胰岛素-钾溶液 -
丁酸盐与非甾体抗炎药对大肠腺癌细胞HT-29的作用
目的观察丁酸盐和非甾体抗炎药 (NSAIDs)对大肠腺癌细胞HT-29的作用,并探讨其可能的作用机制.方法用酶联免疫法定量检测HT-29细胞所分泌的前列腺素(PG)E2;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;电镜观察凋亡细胞的形态学.结果丁酸盐可刺激细胞分泌大量的PGE2 ,阿司匹林和NS-398则抑制PGE2的分泌;3种药物均具有促进细胞凋亡的作用,且其作用呈浓度和时间依赖性(P＜0.05);药物联用可使其作用不同程度地增强.结论单用丁酸盐和2种NSAIDs制剂均有促凋亡作用,联用可通过下调环氧化酶-2的表达进一步增强疗效.
-
Ad-Gax转染对缺氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡及其相关基因表达的影响
目的 观察Gax基因转染对缺氧性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡及其相关基因表达的影响.方法 腺病毒介导Gax转染体外原代培养的PASMCs.透射电镜观察细胞凋亡形态;原位细胞凋亡检测法观察Ad-Gax转染前后在常氧和缺氧处理2 h、6 h、12 h、24 h、48 h大鼠PASMCs凋亡情况;免疫细胞化学法测PASMCs Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 透射电镜观察到Ad-Gax转染后PASMCs产生凋亡现象.未转染缺氧刺激前后,均无或可见极少量的阳性细胞;Ad-Gax转染后,如无缺氧刺激,也无或仅可见少量的阳性细胞,予缺氧刺激后,阳性细胞显著增多,尤其在转染后24～48 h更明显.转染组常氧、缺氧2 h、6 h、12 h、24 h、48 h细胞凋亡百分率均显著高于未转染组(P＜0.01).Ad-Gax转染前,与常氧时比较,缺氧刺激PASMCs后,Bax蛋白表达略为升高但无统计学意义;而Bcl-2蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).Ad-Gax转染PASMCs后,缺氧刺激使Bcl-2蛋白表达显著降低(P＜0.01),Bax蛋白表达显著增高(P＜0.01).转染组细胞凋亡率与Bcl-2/Bax比值呈负相关(r=-0.53,P＜0.01).结论 Ad-Gax转染可诱导缺氧性PASMCs凋亡,其机制可能是通过上调Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白的表达,尤其是通过降低Bcl-2/Bax比值实现的.
-
食管癌细胞环氧合酶2表达与丝裂霉素C诱导有关
目的探讨食管癌细胞环氧合酶2(COX-2)表达与丝裂霉素C(MMC)处理的关系及可能机制.方法四唑蓝法检测2 mg/L MMC处理对食管癌细胞株EC/CUHK-1生长的影响,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡细胞比例,逆转录-PCR及Western blot分别检测COX-2 mRNA与COX-2、Bcl-2、p53及Rb蛋白的非磷酸化亚型(pRb)表达.结果 MMC处理后0、0.5、2、4和8 h,凋亡细胞比率分别为(4.12±0.83)%,(1.00±0.11)%,(4.32±0.99)%,(9.46±2.11)%和(31.10±3.57)%.处理后0.5、2和4 h,COX-2 mRNA相对表达量分别为处理前的2.60、1.70和0.08倍;COX-2蛋白为2.0、3.1和2.8倍;Bcl-2为3.6、14.0和12.0倍;p53为1.8、0.5和0.2倍;pRb为8.2、8.4和6.2倍,Rb蛋白的磷酸化亚型(ppRb)为1.8、0.5和0.2倍.MMC处理后COX-2 mRNA、pRb和p53蛋白之间以及COX-2、ppRb和Bcl-2蛋白之间的表达改变密切相关.结论 MMC可上调食管癌细胞的COX-2表达,且明显与Bcl-2过表达相关,p53及Rb磷酸化积累可能调节COX-2蛋白的表达.
-
核因子-κB活化抑制增强高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡
目的研究地塞米松(DXM)和长春新碱(VCR)对高三尖杉酯碱(HH)诱导白血病细胞凋亡与核因子-κB(NF-κB)活化的影响.方法采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、DNA电泳方法观察HH诱导K562-n细胞凋亡,采用电泳迁移率变动分析(EMSA)观察HH 诱导K562-n细胞NF-κB活化.结果用(0.5、5、50) μmol/L 的 HH 均能诱导K562-n细胞凋亡率分别为(30.00±3.34,47.13±3.18,68.63±8.14)%,与对照组相比,有良好的浓度依赖关系(P＜0.05);DXM 1 μmol/L和VCR 0.1 μmol/L 本身无诱导K562-n细胞凋亡的作用,但均能增强 HH 0.5 μmol/L诱导的K562-n细胞凋亡,凋亡增加率分别为85.8%和114.6% (P值均<0.05).K562-n细胞未经药物诱导NF-κB也有轻度活化;HH 0.5 μmol/L可明显诱导K562-n细胞NF-κB活化,DXM 1 μmol/L和VCR 0.1 μmol/L能显著抑制HH 0.5 μmol/L诱导的NF-κB活化,抑制率分别为32.0%和39.4%(P值均<0.05).结论 HH诱导K562-n细胞凋亡的同时激活NF-κB;DXM和VCR可通过抑制NF-κB活化,增强其诱导K562-n细胞凋亡的作用.
-
扩张型心肌病的心肌组织细胞凋亡的研究
目的研究扩张型心肌病(DCM)的心肌细胞凋亡及其与心功能的关系.方法 DCM组21例,其心肌组织14例来自右室心内膜心肌活检(EMB)亚组,7例来自死后尸检(尸检亚组);对照组为5例死于非心血管疾病的尸检心肌组织.用原位细胞凋亡法检测心肌组织凋亡细胞,计算凋亡指数(AI).结果 (1) DCM组的AI明显高于正常组(P《0.01),EMB亚组的AI明显低于尸检亚组(P《0.01),但明显高于对照组(P《0.01).(2) DCM组中,心胸比(HTR) 《0.6、左室舒张末期内径(LVDd)《65 mm和左室射血分数(LVEF)≥40%的患者AI均分别明显低于HTR≥0.6、LVDd≥65 mm和LVEF《40%的患者(P值均《0.01),但仍分别显著高于对照组(P值均《0.01). 结论 DCM存在明显心肌细胞凋亡并随心功能恶化而程度加重,提示凋亡是DCM的心肌细胞丢失和心功能不全的重要机制.
-
凋亡调控蛋白在B细胞非霍奇金淋巴瘤的表达及其与细胞凋亡的关系
目的探讨髓细胞白血病基因1(MCL-1)、Survivin在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)表达及其与细胞凋亡的关系.方法应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术和免疫组织化学SP法检测43例B-NHL和10例反应性增生(RH)淋巴组织细胞凋亡率和MCL-1、Survivin的表达水平.结果 MCL-1和Survivin在43例B-NHL中阳性表达率分别为58.1%(25/43)和69.8%(30/43),而MCL-1在RH淋巴组织阴性表达,Survivin在RH淋巴组织低表达10.0%(1/10),MCL-1在侵袭性B-NHL表达的频率和强度明显高于惰性B-NHL(70.0%,30.8%,P<0.05),Survivin在侵袭性B-NHL中表达的阳性率明显高于惰性B-NHL(80.0%,46.2%,P<0.05);MCL-1阳性表达组与凋亡指数(AI)无相关,Survivin阳性表达组与AI正相关(r=0.429,P<0.01),此外,两者表达呈显著正相关(r=0.598,P<0.001). 结论 MCL-1对B-NHL细胞凋亡作用不如Survivin明显,后者可能参与了B-NHL细胞凋亡调节,二者在B-NHL的共表达与其发生发展有关.
-
大鼠心肌缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡与Fas、FasL基因表达的变化
目的探讨大鼠实验性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡与Fas及Fas蛋白配体(Fas Ligand,FasL)基因表达的变化及与心肌组织损伤的关系.方法以穿线结扎或松扎左冠状动脉制备大鼠心肌缺血再灌注模型.64只大鼠随机分成假手术组(假手术24h)、缺血再灌注Ⅰ组(缺血30min、再灌注24 h)、缺血再灌注Ⅱ组(缺血30min、再灌注72 h)及缺血再灌注Ⅲ组(缺血3 h、再灌注24h).以缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡的变化,S-P免疫组化法分别检测Fas与FasL蛋白水平变化,采用逆转录聚合酶链反应法检测Fas基因mRNA的表达改变,并分析心肌组织病理学损伤程度.结果心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡指数及Fas蛋白阳性染色指数与炎性细胞FasL蛋白阳性染色指数均增加,且均随缺血或再灌注时间延长而进一步增高;Fas基因的mRNA表达也上调,但以再灌注24 h时达高峰;心肌缺血再灌注后心肌组织呈大小不一的灶性坏死,坏死周围有炎性细胞浸润.结论心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡、Fas基因的蛋白与mRNA表达水平及炎性细胞的FasL蛋白表达量均增加,心肌细胞凋亡与Fas/FasL系统参与了心肌缺血再灌注损伤过程.
-
血管紧张素ⅡⅠ型受体阻断剂抑制大鼠缺血-再灌注模型心肌细胞凋亡
目的观察血管紧张素ⅡⅠ型受体阻断剂losartan对大鼠心肌缺血-再灌注模型心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白P53和Bcl-2表达的影响。方法 Wistar大鼠随机分为三组: (1)假手术组(5只)；(2)缺血-再灌注组(6只)：结扎左冠状动脉45 min，再灌注4 h；(3)losartan组(6只)：缺血前15 min和再灌注1 h分别静脉注射losartan 10 mg/kg。采用TUNEL和DNA电泳方法检测心肌细胞凋亡，免疫组织化学方法检测心肌组织P53和Bcl-2蛋白表达。结果缺血-再灌注组凋亡心肌细胞数量为(28.4±1.4)％，losartan组凋亡心肌细胞数量显著减少(10.3±2.1)％，P＜0.01。缺血-再灌注组心肌P53表达增加。losartan抑制P53的表达，增加Bcl-2表达。结论缺血-再灌注过程中大鼠心肌细胞可以发生凋亡，血管紧张素ⅡⅠ型受体阻断剂可减少心肌细胞凋亡的数量，抑制心肌P53的表达、促进Bcl-2的表达。
