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喜脑宁对大鼠全脑缺血的保护作用及机制研究
目的:探讨喜脑宁冻干粉(XNN)对全脑缺血的保护作用及其可能机制.方法:采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血/再灌注模型,观察XNN对脑缺血再灌注过程中脑电图及翻正反射恢复时间、脑含水量、脑指数、脑组织匀浆MDA和LD含量、SOD,LDH和NOS活性、海马ET含量的影响;观察XNN对ADP诱导的血小板聚集率的影响;采用Fura-2/AM负载法,观察XNN对血小板内静息[Ca~(2+)]_i;和CaCl_2诱导血小板内[Ca~(2+)]_i,浓度变化的影响.结果:在全脑缺血再灌注模型上,XNN可以缩短翻正反射恢复时间,促进脑电图的恢复;降低脑含水量、脑指数;提高脑组织SOD,LDH活性,降低LD,MDA含量和NOS活性;降低海马组织ET含量.XNN对ADP诱导的血小板聚集有一定的抑制作用,能降低血小板内静息期[Ca~(2+)]_i,并对CaCl_2诱导的血小板内[Ca~(2+)]_i的升高有抑制作用.结论:XNN对全脑缺血具有一定的保护作用.
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刺桐醇提取物对去卵巢大鼠体内钙稳态的影响及作用机制分析
目的:考察刺桐醇提取物对去卵巢大鼠体内钙稳态的影响及对小肠近端、肾脏相关基因表达的调控.方法:大鼠手术处理4周后,将去卵巢大鼠随机分为模型组、阳性对照组、刺桐低、高剂量组(300,600 mg·kg-1·d-1),另有8只为假手术组,8只为正常对照组.灌胃给药治疗14周.血清、尿液中钙含量采用比色法测定.采用RT-PCR技术分析小肠及肾脏基因表达.结果:对体内钙稳态的影响,与模型组比较,刺桐提取物高、低剂量都显著抑制尿钙排泄(P＜0.001),并且有效改善去卵巢大鼠低血钙水平.机制分析表明,刺桐提取物高、低剂量能够成剂量依赖性地显著上调大鼠小肠近端VDB基因表达(P＜0.05)以及肾脏caBP-9k基因表达(P＜0.05).结论:刺桐醇提取物能够维持去卵巢大鼠体内钙稳态.
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粉防己碱对硝酸甘油致三叉神经节卫星胶质细胞激活的影响
目的:探讨粉防己碱(Tet)对硝酸甘油(GTN)激活的三叉神经节卫星胶质细胞释放的炎性因子的影响及其机制.方法:体外纯化培养新生大鼠三叉神经节卫星胶质细胞；实验分正常对照组、GTN组和Tet治疗组；GTN组和Tet治疗组利用0.55 mmol·L-1 GTN诱导卫星胶质细胞激活,Tet治疗组同时给予1×10-7 mol·L-1 Tet进行干预.应用AlamarBlue检测细胞存活情况；利用Fluo-3/AM探针负载后,激光共聚焦显微镜观测各实验组细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化；FQ-PCR检测NF-κB,IL-1β mRNA的表达情况；利用双重免疫荧光技术同时对卫星胶质细胞进行鉴定和NF-κB表达的检测.结果:AlamarBlue实验表明,GTN刺激后细胞活力明显下降(P＜0.05),而不同浓度的Tet对GTN刺激的胶质细胞活力影响不同,终筛选出适宜的Tet治疗浓度为1×10-7 mol·L-1.与GTN组相比,Tet可以抑制GTN诱导的卫星胶质细胞内[Ca2+]；增高(P＜0.05)；FQ-PCR和免疫荧光双标实验发现,Tet可降低胶质细胞内NF-κB mRNA和蛋白的表达(P＜0.05)；同时,Tet治疗后IL-1β mRNA的表达降低(P＜0.05).结论:Tet可以通过阻断卫星胶质细胞内钙离子内流调控NF-κB的表达,从而减少炎症因子IL-1β的释放,为Tet用于偏头痛的防治提供了实验依据.
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不同配伍对麻杏石甘汤中钙镁溶出量的影响
目的:建立毛细管电泳法测定麻杏石甘汤中钙镁含量的方法,并测定不同配伍麻杏石甘汤中钙镁的溶出量.方法:采用L9(34)正交设计,用毛细管电泳法测定钙镁的含量.电泳条件:背景缓冲液为6.4 mmol·L-1咪唑溶液(冰乙酸调pH至3.5);检测波长214 nm;分离电压10kV;重力进样(8cm×7s);柱温室温.结果:钙离子测定的线性范围0.00968～9.68mg.L-1,相关系数0.9981,检测限0.0021 mg·L-1,定量限0.0071mg·L-1,平均回收率:100.4%;镁离子测定的线性范围为0.01～10 mg·L-1,相关系数为0.9959,检测限为0.0028 mg·L-1,定量限0.0089mg·L-1,平均回收率96.4%.结论:本法快速简便、灵敏度高,可作为麻杏石甘汤中钙镁含量的测定方法.麻杏石甘汤中麻黄和杏仁对钙的溶出量影响显著,炙甘草对钙的溶出量影响不显著;麻黄对镁的溶出量影响显著,而杏仁和炙甘草对镁的溶出量影响不显著.
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不同桦纤孔菌成分测定与分析
该文以来自世界各地15种桦纤孔菌菌丝体为材料,进行水分、矿质元素、有效成分含量比较.水分含量结果显示:来自芬兰的菌株芬桦游离水质量分数高,达到77.21％,显著优于其他菌株.来自吉林的菌株JL04游离水质量分数低,仅为54.6％.来自黑龙江的菌株HLJ01结合水质量分数高,达10.74％,与其他菌株间有显著差异;桦俄结合水含量低;矿质元素含量结果显示:菌株NBRC9788钙质量分数高,达3.49 mg·g-1,显著优于其他菌株;菌株芬桦次之;含量低的为CX02.MAFF420165磷质量分数高,可达210.12 μ,g·g-1,显著优于其他菌株;JL04磷含量低.有效成分含量结果显示:菌株HLJ01三萜类化合物白桦脂醇质量分数较高,为23.7 mg·g-1,显著优于其他菌株.菌株HLJ01为生物产品研发的优良菌株,芬桦次之.MAFF420165,MAFF420308三萜类化合物白桦脂醇含量均较低,不适合生产白桦脂醇.菌株芬桦多糖含量高,可达9.7％,显著优于其他菌株,是开发多糖产品的优良菌株.菌株MAFF420308与MAFF420256多糖含量较低,均为1.2％左右.多糖产品开发研究中尽量避免使用此菌株.
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补肾益精方提高卵巢切除大鼠骨质疏松模型松质骨骨质量的实验研究
目的：探讨补肾益精方对去卵巢大鼠骨质疏松模型松质骨骨质量的影响。方法：40只10月龄Wistar雌性大鼠随机分为正常组、模型组、倍美力组和补肾益精方组，每组10只。正常组仅行假手术，其余3组行卵巢切除术。术后第91天开始给药，连续用药90天，处死动物，取出第2腰椎，测定骨质密度和钙、磷、有机质含量；取出第3腰椎，测定其骨质密度和生物力学性能。应用上述多项指标评价骨质量。结果：补肾益精方能明显提高骨质疏松大鼠腰椎骨的骨质密度和钙、磷、有机质含量，增强椎骨的抗压生物力学性能。结论：补肾益精方能够提高去卵巢大鼠松质骨的骨质量。
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定心方对大鼠缺氧及正常心肌细胞内钙、膜电位和线粒体膜电位的影响
目的：探讨定心方(DXR)抗心律失常的分子机理。方法：采用胰蛋白酶法分离培养心肌细胞，用不同荧光染料分别标记细胞，在激光共聚焦显微镜上测定DXR血清对心肌细胞内钙〔Ca2＋〕i、膜电位(MP)和线粒体膜电位(MMP)的变化。结果：缺氧使心肌细胞〔Ca2＋〕i和MMP升高，而使MP降低，DXR血清降低了正常和缺氧心肌细胞〔Ca2＋〕i，改善了缺氧引起的MP降低，使缺氧状态下MMP保持在基线水平。结论：DXR能通过抑制缺氧引起的〔Ca2＋〕i和MMP升高，及拮抗缺氧所致的MP降低，从而发挥保护心肌细胞，防治心律失常的作用。
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聪圣胶囊对小鼠脑缺血损伤后细胞内游离钙含量的影响
目的:研究聪圣胶囊对小鼠脑缺血再灌注后脑组织突触体及拟缺血损伤神经细胞内[Ca2+]i的影响,分析聪圣胶囊抗脑缺血损伤的作用机制.方法:采用Fura-2/AM双波长荧光分光光度法,检测小鼠脑组织突触体和胎鼠神经细胞悬液内[Ca2+]i.结果:聪圣胶囊3g/kg和9g/kg灌胃给药可减轻小鼠脑缺血再灌注后突触体内钙超载程度;聪圣胶囊含药血清可抑制低糖低氧1h及高浓度(200μmol/L)谷氨酸引起的神经细胞内钙的升高.结论:聪圣胶囊可通过减轻脑缺血损伤后钙超载程度来发挥抗脑缺血作用.
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参麦注射液对神经细胞凋亡及胞浆钙变化的影响
目的：研究神经细胞经缺氧/缺糖培养诱导的凋亡发生率、胞内游离钙离子变化及参麦注射液的治疗作用。方法：碘化丙啶染色，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；Fluo-3负载，流式细胞仪观察胞内钙平均荧光值变化。结果：缺氧/缺糖培养可诱导神经细胞凋亡和引起细胞内游离钙离子增高，参麦注射液能抑制细胞凋亡、降低细胞内游离钙离子浓度。结论：凋亡是神经细胞死亡方式之一，参麦注射液能抑制缺氧/缺糖诱导的神经细胞凋亡及钙超载，有神经细胞保护作用。
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不同钙浓度透析液对血透患者肾性骨病疗效观察
目的:探讨不同钙浓度透析液对血透患者肾性骨病疗效观察.方法:选取我院2016年2月-2017年8月肾内科血透中心行长期透析的200名血透患者为研究对象,采用随机抽签分组A、B两组,两组均使用钙剂(碳酸钙或醋酸钙)作为磷结合剂,A组采用钙离子浓度为1.50 mmol/L透析液进行透析,B组采用钙离子浓度为1.25 mmol/L透析液进行透析,比较两组患者的各项生化指标、骨密度、肾性骨病症状发生情况.结果:A组治疗后血清钙(SCa)明显高于B组、而血清磷(SP)、血清碱性磷酸酶(AKP)明显低于B组(P<0.05),且A治疗后甲状旁腺激素(PTH)浓度明显低于B组(P<0.05);A组治疗后手指指骨骨密度明显高于B组,差异有统计学意义(P<0.05);A组治疗后肌痛、骨痛、肌痛性痉挛、病理性骨折等肾性骨病相关症状发生率与对照组相比明显降低(P<0.05).结论:选用1.5 mmol/L钙离子浓度透析液较1.25 mmol/L钙离子浓度透析液对慢性肾衰竭患者进行透析能增高SCa浓度,降低SP、AKP、PTH,对减少肾性骨病患病风险有显著意义.
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24小时尿枸橼酸、草酸定量检测在泌尿系结石诊断中的应用
目的 通过病例对照研究的方法,探讨24h尿中枸橼酸、草酸的含量与泌尿系结石症的关系,为临床治疗及诊断提供一定依据.方法 收集65例泌尿系结石患者及正常人的24h尿液标本,测定其尿枸橼酸、草酸及钙的含量,对检测结果进行比较,并分析其与泌尿系结石的相关性.结果 结石组患者24 h尿枸橼酸含量为224.26±147.63 mg,对照组人群为434.58±280.89mg,二者差异具有统计学意义(P＜0.05);结石组24h尿草酸含量为48.41±10.22mg,显著高于正常组32.34±5.26 mg,差异具有统计学意义(P＜0.05);结石患者24h尿液中的枸橼酸/钙比值,显著低于正常人,差异具有统计学意义(P＜0.05);尿草酸与尿枸橼酸水平呈负相关;总体上,尿草酸与尿钙无明显相关(P＞0.05),但在一定浓度范围内,尿钙排泄水平随尿草酸浓度上升而增高.结论 对泌尿系结石患者进行代谢评估时,24 h尿枸橼酸/钙比值的降低相对于尿枸橼酸降低可能临床意义更大,高草酸尿能导致尿钙排泄增加,枸椽酸钾制剂口服治疗对高草酸尿所致的尿钙增高可能有一定作用.
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MAPK和Ca2+通路对介导弱氧修饰LDL增强HUVEC PAI-1活性
探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白(mmLDL)对血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)活性的影响及促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联反应及第二信使Ca2+在其中作用.用mmLDL作用于传代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),发色底物法检测PAI-1活性的变化,用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度的变化.结果显示,几种不同浓度的mmLDL(12.5～200mg/L)作用HUVEC 12h,PAI-1活性显著增加.PD98059(60μmol/L)能阻断mmLDL对PAI-1活性的诱导反应.mmLDL(50mg/L)能显著诱导HUVEC胞内游离钙离子浓度增高.表明mmLDL作用HUVEC能诱导PAI-1活性明显增加;MAPK级联反应和胞内Ca2+可能起到重要作用.
关键词： 内皮细胞 纤溶酶原激活物抑制剂 促分裂原活化蛋白激酶 钙 -
黑龙江省健康青少年血清钙、磷、碱性磷酸酶的参考范围
目的：调查分析黑龙江省健康青少年血清钙、磷和碱性磷酸酶水平，建立性别和年龄相关的参考范围。方法于2008年7月－2009年6月，从黑龙江省哈尔滨和牡丹江的市区、郊区随机抽取2101名9～18岁健康中小学生进行体检，测定血清钙、磷和碱性磷酸酶浓度。筛除离群数据个体后，共2091名受试者入选。考虑性别和年龄因素，建立相应的血清钙、磷和碱性磷酸酶的参考范围（ P2.5～P97.5）。结果描述了9～18岁青少年男性和女性血清钙、磷和碱性磷酸酶水平随年龄、性别的变化趋势。血清钙、磷和碱性磷酸酶水平与年龄呈明显的负相关，且男性高于女性（ P＜0.001）。全部人群的血清钙、磷和女性的碱性磷酸酶水平随年龄的增加而下降，而男性的13岁年龄组碱性磷酸酶水平高，13岁前随年龄增加而增加，13岁后随年龄增加而降低。结论初步建立了黑龙江省健康青少年血清钙、磷和碱性磷酸酶的参考范围，对临床医生特别是儿科医生对上述指标的结果解释和临床干预具有很好的参考价值。
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弱氧化修饰低密度脂蛋白诱导ECV304组织因子基因表达及银杏内酯B的抑制作用
为研究弱氧化修饰低密度脂蛋白(mmLDL)对ECV304组织因子(TF)蛋白含量和mRNA水平的影响、对胞浆游离钙离子([Ca2+]i)的影响,以及银杏内酯B等的干预作用.采用ELISA法检测细胞内TF蛋白含量,用RT-PCR法检测细胞内TF mRNA水平,用激光共聚焦显微镜观察[Ca2+]i的变化.结果显示,40mg/L mmLDL作用ECV304 4h,能使TF蛋白含量及mRNA水平显著增加,并迅速升高[Ca2+]i.抗氧化剂银杏内酯B及PKC抑制剂Staurosporine可拮抗mmLDL的上述诱导反应.以上结果提示,mmLDL 可诱导ECV304 TF表达,Ca2+与PKC 参与mmLDL诱导ECV304 TF基因表达过程,并且银杏内酯B可抑制mmLDL的此种效应.
关键词： 弱氧化修饰低密度脂蛋白 组织因子 钙 ECV304 银杏内酯B -
尼古丁对脐静脉内皮细胞蛋白激酶C和Ras蛋白活性及胞浆钙浓度的影响
为研究尼古丁对血管内皮细胞胞内游离钙、蛋白激酶C(PKC)和Ras蛋白的作用,用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度的变化,用γ-32P-ATP掺入法检测PKC活性,用GST-RBD沉淀并纯化活化的Ras蛋白和Western印迹杂交法检测Ras蛋白含量.观察到(1～5)10-4mol/L尼古丁使人脐静脉内皮细胞[Ca2+]i迅速增加,峰值约超过基础值50%～200%,钙通道阻滞剂尼莫地平可拮抗尼古丁的此种效应;10-4mol/L尼古丁作用1～12h后胞浆PKC活性明显降低; 而胞膜PKC活性则升高.10-4～10-3mol/L尼古丁作用于人脐静脉内皮细胞10～30min可使活化的Ras蛋白含量增加.以上结果提示尼古丁可使人脐静脉内皮细胞[Ca2+]i增加和活化内皮细胞的PKC及Ras蛋白.
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Ca2+与NO在H2O2所致大鼠肠系膜微血管通透性增高中的作用
目的 观察内皮细胞Ca2+浓度及NO生成在H2O2所致正常成年大鼠肠系膜微血管通透性增高中的作用.方法 通过测定在体大鼠肠系膜微血管静水传导性观察微血管通透性变化.采用钙荧光指示剂( Fura 2-AM)、NO荧光指示剂(DAF-2 DA)标记在体微血管内皮细胞,并应用荧光显微镜检测细胞内钙或NO的荧光信号,观察H2O2作用下内皮细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)、NO的变化.结果 H2O2可增加正常成年大鼠微血管通透性(为正常对照的6.13±0.87倍,P＜0.01),同时增加微血管内皮细胞[Ca2+]i[(714.58±144.70) nmol/L,P＜0.01],并促进内皮细胞NO的生成(为正常对照荧光强度的1034.3％±44.3％,P＜0.01).Ca2+通道阻滞剂氯化镧可抑制H2O2所引起的微血管通透性增加(P＜0.01)及内皮细胞[Ca2+]i升高(P＜0.01).NOS抑制剂AP-Cav-1可抑制H2O2所引起的微血管通透性增加(P＜0.01),但对H2O2的Ca2+增加作用无影响.结论 H2O2所致的通透性增加与细胞内Ca2+增加、NO的产生增多有关.
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超氧阴离子自由基对大鼠肝卵圆细胞胞内自由钙浓度的影响
采用激光共聚焦扫描显微镜,观察黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶反应系统(X/XO)生成不同浓度的超氧阴离子自由基()致培养的大鼠肝卵圆细胞(WB细胞)胞质内钙浓度的变化,结果发现:仅小剂量的(X:200mmol/L XO: 0.2mu/mL)引起胞质内钙浓度升高,约30s后达到峰值,60s后恢复正常.部分细胞观察到数次钙浓度间断升高、幅度逐渐下降的现象.超氧化物歧化酶(SOD)可抑制此变化,过氧化氢酶(CAT)无效果.细胞在无钙液中观察仍出现钙峰,但受内钙库耗竭剂Thapsigargin阻断.结果表明,小剂量可诱使肝卵圆细胞胞内钙库钙释放造成瞬间胞质自由钙浓度增高,并可能引发胞内钙浓度的衰减振荡,此可能与通过影响胞内重要信号转导因子钙,调控细胞生物学功能如增殖、转化相关.
关键词： 超氧阴离子自由基 肝卵圆细胞 钙 激光共聚焦扫描显微镜 -
大电导钾通道对小鼠皮层神经元胞内游离钙和动作电位的影响
目的 探讨大电导钾通道(BK)对小鼠大脑皮层神经元胞内游离钙([Ca2+]i)和兴奋性的调节作用.方法 体外培养小鼠皮层神经元,用膜片钳技术观察BK特异性阻断剂iberiotoxin对神经元[Ca2+];和动作电位频率的影响,用显微荧光测钙法观察iberiotoxin对高钾条件下[Ca2+]i的影响.结果 生理状态下,iberiotoxin灌流(100 mmol/L)对神经元细胞自发动作电位的频率、[Ca2+]i无显著影响;持续电刺激去极化后,iberiotoxin灌流使动作电位频率增加,[Ca2+]i显著升高.高钾溶液(20 mmol/L)引起神经元[Ca2+]i升高,而iberiotoxin灌流则使[Ca2+]i进一步显著升高.结论 BK对小鼠受持续去极化刺激或高钾条件时的神经元[Ca2+]i和兴奋性具有明显调节作用.
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大鼠胃壁细胞GnRH受体的定位及GnRH类似物对壁细胞内钙的影响
目的观察促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)受体在培养的大鼠胃粘膜壁细胞中的定位,并探讨GnRH类似物阿拉瑞林(alarelin)对壁细胞内游离钙动员的机制.方法采用免疫组织化学和原位杂交技术;应用Ca2+指示剂Fluo-3-AM作为细胞内钙离子的荧光探针,对负载培养的胃壁细胞,应用激光共聚焦显微镜技术检测单个细胞内钙荧光强度的变化.结果大鼠胃壁细胞呈GnRH受体免疫反应阳性,阳性物质位于细胞质,细胞核为阴性;同样壁细胞内可检测到GnRH受体mRNA杂交信号,阳性物质位于细胞质,细胞核为阴性;胞内Ca2+浓度变化为:1.在Hank液中,GnRH类似物浓度为10-8、10-7、10-6 mol/L时,胃壁细胞内Ca2+浓度逐渐升高,其峰高(峰值减去静息值)分别为7.1±1.4、12.1±1.7、16.8±2.2.其达峰时间也逐渐增快,分别为34.2±6.4s、18.9±1.2s、10.4±2.3s.相邻两组间其峰高及达峰时间均存在显著性差异(P＜0.05),且呈明显剂量依赖性.2.在D-Hank液(去除外钙)中,阿拉瑞林可轻度短暂升高胞内Ca2+;用内罗啶孵育后再加入阿拉瑞林也可轻度短暂升高胞内Ca2+,二者无显著性差异.3.当用拉西地平孵育后再加入阿拉瑞林,可明显抑制胞内Ca2+的增加.4.当用PLC(磷酸脂二酶)抑制剂和PKC(蛋白激酶C)抑制剂孵育后,再加阿拉瑞林,其胞内Ca2+升高仍受到抑制,明显小于单独应用10-6 mol/L的阿拉瑞林组(P＜0.01).结论大鼠胃壁细胞能自身表达GnRH受体;GnRH类似物可明显升高胃壁细胞内Ca2+浓度,且胞内Ca2+的增加主要源于外钙的内流,部分源于内钙的释放.其中细胞外钙的内流主要是通过L-型钙通道实现的.
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钙蛋白酶10的分子生物学特性及其与糖代谢关系的研究进展
钙蛋白酶10基因存在多种形式的单核苷酸多态性,是2型糖尿病发生发展过程中的危险因素.蛋白质研究发现,钙蛋白酶10属于非溶酶体类半胱氨酸蛋白酶,但结构中缺少经典钙蛋白酶所具有的EF手性结构域.新近研究表明,钙蛋白酶10广泛分布于胰岛、骨骼肌、肝脏等多种组织,在胰岛素分泌、骨骼肌等组织糖摄取、以及线粒体呼吸等生命过程中发挥着重要作用.
