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周期素依赖激酶抑制剂对大鼠局灶性脑梗死后胶质增生的影响
目的通过抑制细胞周期素依赖激酶(cyclin-dependent kinase,CDKs),对星形胶.质细胞增殖进行干预,以探讨其对胶质增生的影响.方法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌流模型,随机分为脑缺血对照组和干预组(分别于再灌流后第3天、第5天腹腔注射CDKs抑制剂),应用免疫印迹和免疫组织化学方法检测各组MCAO后第4周损伤侧皮层胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)的表达;并通过HE染色对皮层中风囊体积进行测定,观察CDKs抑制剂对胶质增生的影响.结果MCAO后第4周,皮层可形成明显的中风囊,并且在胶质瘢痕附近存在密集、活化的星形胶质细胞;损伤侧皮层CFAP蛋白的表达明显增强.经给予CDK抑制剂处理后,可明显缩小中风囊体积(P＜0.05),并部分抑制了GFAP蛋白的表达(P＜0.05)以及星形胶质细胞的过度增殖.结论通过对细胞周期蛋白的调控,可部分抑制胶质增生,从而有可能为神经再生和功能重建提供更有利的生存环境.
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S-100蛋白与心肺脑复苏的关系进展
一、S-100蛋白的特征S-100蛋白是1965年由Moore首次报道从牛脑中分离出来的一种酸性钙结合蛋白,主要存在于中枢神经系统各部的星形胶质细胞的胞液中,因其可100%溶解于pH值为7的饱和硫酸铵溶液里,故命名为S-100蛋白[1].
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Wnt/β-catenin信号通路激活剂对过氧化氢诱导的星形胶质细胞凋亡的影响
目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路激活剂对过氧化氢诱导的星形胶质细胞凋亡的影响.方法 分离培养大鼠星形胶质细胞,分为5组,依次为:对照组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,其中对照组用正常的细胞培养液培养,模型组用含有400 μmol/L的过氧化氢孵育20 h,低剂量组、中剂量组、高剂量组先用10 μM、20μM、40 μM的Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl处理20 h后再用400 μmol/L的过氧化氢孵育20 h.用噻唑蓝(M TT)检测星形胶质细胞活力,流式细胞术检测星形胶质细胞凋亡,ELISA法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc蛋白表达.结果 过氧化氢处理后细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中MDA含量增加,细胞培养液中LDH含量也升高.低、中、高剂量的LiCl预处理后经过氧化氢处理后的星形胶质细胞活力升高,细胞凋亡率降低,细胞中MDA水平降低,培养液上清中LDH水平也下降,细胞中凋亡相关蛋白Cleaved Caspses-3表达水平也明显降低,并且低剂量的LiCl对星形胶质细胞的影响作用小,高剂量的LiCl对星形胶质细胞的影响作用大.结论 Wnt/β-catenin信号通路激活剂能够通过减弱过氧化氢对星形胶质细胞的氧化损伤减少星形胶质细胞凋亡.
关键词： 星形胶质细胞 过氧化氢 Wnt/β-catenin信号通路 凋亡 -
不同压力液压冲击损伤星形胶质细胞的形态学变化
目的 研究体外培养大鼠脑皮质星形胶质细胞不同液压冲击损伤下形态学改变.方法 根据Scott's细胞液压冲击损伤原理,建立体外培养星形胶质细胞液压冲击损伤模型.原代培养SD大鼠脑皮质星形胶质细胞,分为对照组、0.05 MPa、0.10 MPa、0.20 MPa、0.40 MPa、0.60 MPa冲击压力组(n=8),观察细胞形态学变化和培养上清LDH含量变化.结果 星形胶质细胞平均坏死率随着压力增高而显著增高,当压力达到0.6 MPa时,细胞的平均坏死率达到51.11%.0.20 MPa组培养上清LDH含量与对照组相比升高显著,当压力达到0.40 MPa以上时培养上清LDH含量与对照组相比反而成下降趋势.结论 0.20 MPa液压冲击压力比较适合进行星形胶质细胞的损伤性研究.
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脑缺血炎症反应与星形胶质细胞的关系
脑缺血后星形胶质细胞作为中枢神经系统第一个受损的细胞,出现肥大、增殖,并合成表达多种炎症介质,启动免疫级联反应.星形胶质细胞产生的炎症介质共同作用于中枢神经系统,损伤和保护脑组织机制并存.了解星形胶质细胞及其表达的炎症介质,对寻找减轻脑缺血后炎症反应损伤的新途径具有重要意义.
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糖尿病对星形胶质细胞功能影响的实验研究进展
糖尿病可以引起中枢神经系统的功能障碍。星形胶质细胞作为中枢神经系统的重要组成部分，亦受糖尿病的影响而改变，主要表现在星形胶质细胞的体积、细胞间缝隙连接、蛋白表达、糖原贮存等方面。
关键词： 糖尿病 星形胶质细胞 神经胶质原纤维酸性蛋白 S100B蛋白 综述 -
不同胎龄胎鼠脊髓源性神经干细胞特性比较
目的：探讨不同胎龄胎鼠脊髓源性神经干细胞(NSCs)的增殖分化能力。方法 Sprague-Dawley孕鼠分为A组(孕12 d)、B组(孕14 d)、C组(孕16 d)，酶消化法结合机械分离法提取细胞，检测不同时间各组神经干细胞球的直径、数量，CCK-8法绘制细胞生长曲线。BrdU/Nestin免疫荧光染色鉴定NSCs。10%胎牛血清诱导分化后行β-tubulinⅢ、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色，比较各组神经元的分化比例。结果各组细胞BrdU、Nestin、β-tubulinⅢ、GFAP免疫荧光染色均为阳性。B组β-tubulinⅢ染色阳性的比例高；B、C两组各时间点神经球直径、数量及神经元的分化比例高于A组(P<0.05)。第3代NSCs培养第5天， B组细胞吸光度高于C组(P<0.05)。结论孕14 d左右取材培养的脊髓神经干细胞生物学特性稳定，增殖活力强，诱导分化后神经元的分化比例较高。
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细胞松弛素D对大鼠脊髓星形胶质细胞水通道蛋白和内向整流性钾通道4.1基因表达的影响
目的：探讨不同浓度细胞松弛素D(CytD)对大鼠脊髓星形胶质细胞骨架重构，水通道蛋白(AQP)1、AQP4及内向整流性钾通道4.1(Kir4.1)基因表达的影响。方法原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞，加CytD 0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml、0.80μg/ml和1.00μg/ml共培养2 h、12 h和24 h。MTT法检测细胞增殖情况；鬼笔环肽联合Hoechst 33342套染后激光共聚焦显微镜下观察共培养2 h后细胞骨架重构情况；RT-PCR法检测共培养2 h时AQP1、AQP4和Kir4.1 mRNA表达水平。结果细胞生存率随CytD浓度升高和作用时间延长而减少。CytD使大鼠脊髓星形胶质细胞微丝发生解聚、弯曲，但极性未失。CytD 0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml上调AQP1、AQP4和Kir4.1 mRNA表达。结论适当浓度CytD可以重建星形胶质细胞骨架，上调大鼠脊髓星形胶质细胞AQP1、AQP4和Kir4.1基因表达。
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脂多糖对大鼠星形胶质细胞Ski蛋白表达的影响
目的 探讨内毒素脂多糖对大鼠星形胶质细胞ski蛋白表达规律及胞定位的影响.方法 新生3 d内Sprague-Dawley大鼠,取大脑皮质分离星形胶质细胞,体外培养.采用0μg/ml、0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml脂多糖诱导6 h;采用0.1μg/ml脂多糖诱导0 d、2 d、4 d、6 d、8 d.Western blotting法检测星形胶质细胞中ski蛋白的表达,间接免疫荧光双标法检测ski在星形胶质细胞中的定位.结果 0.1μg/ml脂多糖诱导下,ski蛋白表达高(F=46.656,P<0.001).0.1μg/ml脂多糖诱导4 d时高,6 d时逐渐降低.在无脂多糖诱导及脂多糖诱导6 d时,ski蛋白主要表达于细胞核;脂多糖诱导2 d、4 d时,细胞质中出现ski表达.结论 脂多糖可诱导星形胶质细胞ski蛋白表达,可能参与炎症反应.
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体外培养大鼠星形胶质细胞划伤模型
目的 复制体外培养大鼠星形胶质细胞划伤模型.方法 利用传至第2代的体外培养的大鼠星形胶质细胞进行细胞划伤实验.分别于划伤前10 min、划伤后1、3、6、12、24 h观察细胞形态变化,并取培养上清液进行乳酸脱氢酶活性测定.结果 细胞划伤后划痕两侧边缘整齐,随时间推移细胞突起逐渐向划痕区延伸,且划痕区出现星形胶质细胞.细胞划伤后乳酸脱氢酶漏出量短时间内迅速增加,之后各时间点持续增加(P＜0.05),且均高于相应时间点的对照组(P＜0.05).结论 细胞形态变化及培养上清液中乳酸脱氢酶漏出量证实体外培养大鼠星形胶质细胞划伤模型复制成功.
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Ski对脂多糖诱导大鼠星形胶质细胞炎症因子释放的影响
目的 探讨Ski对激活星形胶质细胞炎症因子分泌的影响.方法 从3日龄Sprague-Dawley大鼠大脑皮质分离星形胶质细胞,分为空白对照组、阴性对照组、siRNA组,siRNA组沉默Ski基因.48 h后,采用Western blotting和免疫荧光染色检测Ski表达;再以脂多糖激活星形胶质细胞24 h.ELISA检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的浓度.结果 siRNA组Ski蛋白表达显著降低(P<0.001);激活后,TNF-α、IL-1β浓度显著减少(P<0.001).结论 Ski可能参与星形胶质细胞炎症反应.
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体外培养大鼠星形胶质细胞水通道蛋白4的表达
目的 研究水通道蛋白4(AQP4)在体外培养大鼠星形胶质细胞中的表达规律.方法 取新生1 d Wistar大鼠大脑皮层行星形胶质细胞原代培养,分别于原代培养3 d、5 d、7 d、9 d及传代培养9 d行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色;实时荧光定量聚合酶链反应及AQP4免疫荧光染色检测AQP4 mRNA及蛋白的表达.结果 原代及传代培养不同时间点95％以上细胞GFAP免疫荧光染色阳性,且GFAP表达量逐渐增加.原代培养3 d有AQP4 mRNA表达,3 d和5 d AQP4 mRNA表达水平无显著性差异(P>0.05),7 d AQP4 mRNA表达升高(P<0.05),9 d持续升高(P<0.05);传代培养9 d与原代培养9 d AQP4 mRNA表达无显著性差异(P>0.05).AQP4蛋白表达与AQP4 mRNA表达一致.结论 大鼠星形胶质细胞原代培养3 d即有AQP4表达,之后逐渐增加,9d左右表达渐趋稳定.
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酸性成纤维细胞生长因子保护庆大霉素对海马星形胶质细胞毒性作用的分裂原活化蛋白激酶通路机制
目的 探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素损伤的海马星形胶质细胞保护作用可能的机制.方法 新生24 h Sprague-Dawley大鼠分离、纯化海马星形胶质细胞,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色鉴定,传3代细胞接种于24孔培养板培养3 d,分为3组:对照组正常培养,损伤组以2.0 g/L庆大霉素培养24 h,保护组加入4.25μg/L aFGF培养24 h后再加入2.0 g/L庆大霉素培养24 h.Western blotting检测P38、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)1、ERK2、c-Jun氨基末端激酶(JNK)1、JNK2的表达.结果 成功培养细胞,纯度>95%.与对照组比较,损伤组ERK1表达增加(P<0.05);保护组与损伤组比较,P38表达增加(P<0.05),ERK1表达减少(P<0.05);其余两两比较均无显著性差异(P>0.05).结论 信号通路中的P38和ERK1可能在aFGF对抗庆大霉素诱导的海马星形胶质细胞损伤过程中发挥作用.
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甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后星形胶质细胞的影响
目的 观察大鼠脊髓损伤后甲基强的松龙(MP)对星形胶质细胞(AS)增殖和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 雄性SPF级10周龄大鼠48只,制成脊髓右侧半横断损伤模型,分为MP组和对照组,每组24只.术后每4 d进行1次行为学(BBB)评分.MP组通过尾静脉注射MP溶液,对照组同时注射等量生理盐水,两组大鼠分别在3 d、7 d、14 d、28 d处死,应用免疫组化技术观察GFAP的表达,并做灰度值测定和GFAP阳性细胞计数.结果 与对照组相比,MP组在损伤后21 d内行为学方面无显著性差异,在25 d后MP组优于对照组.脊髓损伤后3 d和7 d,MP组活性化AS数目明显少于对照组,14 d后无显著性差异;3 d、7 d、21 d时,MP组胶质性瘢痕中GFAP表达量均明显低于对照组,28 d时两组无显著性差异.结论 急性脊髓损伤后大剂量MP冲击疗法能减少AS活化的数目,减少胶质性瘢痕的形成,并能促进后肢功能的恢复.
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碱性成纤维细胞生长因子-壳聚糖载体诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的转化
目的：探索碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)-壳聚糖载体对成年大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)向神经细胞转化的诱导作用。方法采用免疫组织化学进行定性观察，并定量计数rMSCs诱导转化为神经干细胞、神经元和星形胶质细胞等神经细胞，噻唑蓝(MTT)比色法定量检测诱导后细胞的活性。结果 rMSCs经bFGF-壳聚糖载体诱导后，表达神经干细胞标记物nestin、神经元标记物β-tubulinⅢ和星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)， nestin在bFGF-壳聚糖组中高表达，9 d时达到大值49.40%。结论 bFGF-壳聚糖载体可以诱导成年rMSCs高比例地分化为神经干细胞。
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肌萎缩侧索硬化培养模型中星形胶质细胞的变化
目的 应用脊髓片器官型培养模型制备选择性运动神经元死亡的肌萎缩侧索硬化(ALS)体外模型,探讨星形胶质细胞在ALS发病中的作用.方法 脊髓器官型培养采用8日龄SD大鼠的腰段脊髓,在培养液中加入浓度为100 μmol/L的苏-羟天冬氨酸(THA),建立ALS脊髓器官型培养模型;用神经元特异的SMI-32和星形胶质细胞特异的GFAP染色,并对细胞计数.结果 与对照组相比,THA 100 μmol/L组的脊髓前角以及周边的白质中星形胶质细胞明显增生,增生的程度随用药时间的延长而增加,且伴随细胞数量的增加,其形态也发生改变.结论 THA干预制造的ALS模型中,在前角位置有明显的星形胶质细胞增生,且增生的时间明显早于运动神经元的丢失.
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沉默ski基因对大鼠星形胶质细胞迁移的影响
目的 研究ski基因在大鼠星形胶质细胞迁移过程中的作用.方法 分离大鼠脑皮质星形胶质细胞,体外培养.合成ski基因和阴性对照小干扰片段.设置ski-siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组.采用脂质体法将特异性针对ski基因的siRNA和阴性对照siRNA转入大鼠星形胶质细胞.采用Western blotting检测各组ski蛋白的表达水平;采用Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验检测ski-siRNA转染后星形胶质细胞迁移能力的变化.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,ski-siRNA转染组细胞内ski蛋白的相对表达水平显著降低(F=132.957,P<0.001).Transwell细胞迁移实验发现,ski-siRNA转染组每孔迁移细胞数少于空白对照组和阴性对照组(F>47.197,P<0.05).细胞划痕实验显示,转染组细胞1~5 d的划痕愈合率均明显低于对照组(F>69.187,P<0.01).结论 沉默ski基因能显著抑制星形胶质细胞的迁移能力,ski可能参与星形胶质细胞的转移过程,进而调控胶质瘢痕的形成.
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大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成的病理学规律
目的 观察大鼠胸髓完全横断损伤后进入陈旧性脊髓损伤期的时间,并确定胶质瘢痕的时间、空间分布.方法 24只成年雌性Wistar大鼠采用完全横切模型,分别于术后1 d、3 d、7 d、2周、4周、2个月、3个月、3.5个月通过组织化学和免疫组织化学方法检测损伤区囊腔、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和NG2表达的变化.结果 囊腔大小的变化和GFAP表达水平的变化都在损伤后2个月开始减缓,并于损伤后3个月达到稳定,而NG2蛋白的表达于损伤后1个月开始趋于缓和,并于3个月达到稳定.结论 脊髓损伤后于1个月开始进入陈旧期,3个月达到陈旧性损伤的稳定期.
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甲基汞对原代大鼠星形胶质细胞的毒性作用
目的 初步研究甲基汞对原代SD大鼠星形胶质细胞产生毒性的机制.方法 用甲基汞作用于原代SD大鼠星形胶质细胞,用高效液相色谱检测细胞氧化还原水平,用Western-blot检测核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达水平.结果 随着甲基汞浓度的增加,星形胶质细胞的还原水平明显下降.在甲基汞浓度较小时,随着甲基汞浓度的增加,星形胶质细胞Nrf2表达水平呈增长趋势;在甲基汞浓度较大时,随着甲基汞浓度的增加,星形胶质细胞Nrf2表达水平呈减少趋势.结论 甲基汞对原代SD大鼠星形胶质细胞的毒性作用可能通过改变还原型谷胱甘肽(GSH)和Nrf2的功能而实现.
关键词： 甲基汞 星形胶质细胞 毒性作用 核因子E2相关因子2(Nrf2) -
Ski在大鼠脊髓损伤后不同时间的表达变化
目的：探究ski在大鼠正常及损伤后脊髓中的表达及随时间变化的规律。方法60只成年雌性Sprague-Dawley大鼠，随机分为假手术组(n=30)和损伤组(n=30)，各组设1周、2周、4周、8周、12周亚组，每个亚组6只大鼠。用Allen法制备T10打击损伤模型。损伤后1 d、3 d、1周、2周、4周、8周、12周行BBB后肢功能评分；术后1周、2周、4周、8周、12周，各组取3只大鼠行HE染色，观察损伤后脊髓病理变化及空洞形成；另3只大鼠行ski免疫荧光染色及半定量分析。结果损伤组各时间点BBB评分均低于假手术组(P<0.05)。损伤后1周、2周，脊髓主要以坏死为主；4周时空洞完全形成，空洞周围有致密瘢痕组织；8周、12周空洞及瘢痕无明显变化，但损伤中心及附近脊髓明显变细。ski在正常脊髓中表达较低，损伤后ski表达逐渐增高，8周时达到高峰，12周时有所降低；ski在正常及损伤后12周脊髓中主要分布于白质；损伤后2周、4周和8周时灰质中出现明确ski表达。在损伤中心，ski在空洞周围密集表达。结论 ski在脊髓损伤后表达。它可能作用于星形胶质细胞，并调控其活化、增生以及胶质瘢痕形成。
