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甲基汞对原代大鼠星形胶质细胞的毒性作用
目的 初步研究甲基汞对原代SD大鼠星形胶质细胞产生毒性的机制.方法 用甲基汞作用于原代SD大鼠星形胶质细胞,用高效液相色谱检测细胞氧化还原水平,用Western-blot检测核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达水平.结果 随着甲基汞浓度的增加,星形胶质细胞的还原水平明显下降.在甲基汞浓度较小时,随着甲基汞浓度的增加,星形胶质细胞Nrf2表达水平呈增长趋势;在甲基汞浓度较大时,随着甲基汞浓度的增加,星形胶质细胞Nrf2表达水平呈减少趋势.结论 甲基汞对原代SD大鼠星形胶质细胞的毒性作用可能通过改变还原型谷胱甘肽(GSH)和Nrf2的功能而实现.
关键词： 甲基汞 星形胶质细胞 毒性作用 核因子E2相关因子2(Nrf2) -
Nrf2信号通路在铅致SH-SY5Y细胞氧化应激中作用
目的 研究神经细胞内核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路是否对铅暴露所致的氧化应激产生应答及其可能机制.方法 用低、中、高剂量(5、25、125 μmol/L)的醋酸铅溶液对人神经母细胞瘤SH-SY 5 Y细胞染毒,用2 ′,7 ′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针检测染毒2h后细胞活性氧(ROS)水平,染毒24 h后用二硫基双硝基苯甲酸( DTNB)比色法检测还原性谷胱甘肽(GSH)水平,western blot法检测蛋白激酶C-δ(PKC-δ)、酪氧酸激酶2(CKⅡ)以及胞浆和胞核中Nrf2蛋白的表达水平.结果 随着染毒剂量增加,低、中、高剂量组ROS含量依次为(559.17±54.56)、(585.50±36.41)、(621.00±29.96),与对照组(533.50±46.47)比较,中、高剂量组含量明显升高(P＜0.05)；GSH含量依次为(165.39±17.37)、( 140.92±14.77)、(84.03±10.31),与对照组(222.10±14.91)比较,低、中、高剂量组含量均明显降低(P＜0.01)；与对照组比较,低、中、高剂量组胞浆Nrf 2相对灰度值为(0.38±0.09)、(0.27±0.09)、(0.25±0.11),胞浆Nrf2表达均明显降低(P＜0.05)；低、中、高剂量组胞核Nrf2相对灰度值为( 1.38±0.50)、(1.55±0.49)、(2.79±1.56),仅高剂量组胞核Nrf2蛋白表达明显增高(P＜0.05).低、中、高剂量组PKC-δ相对灰度值为(1.84±0.46)、(2.55±0.36)、(2.38±0.77),与对照组比较均明显升高(P＜0.05)；低、中、高剂量组CKⅡ相对灰度值为(1.28±0.32)、(1.34±0.21)、(1.52±0.42),与对照组比较仅高剂量组表达明显升高(P＜0.05).结论 铅致神经细胞氧化损伤的同时激活胞浆中Nrf2转移人核内,进而发挥氧化应答,PKC-8、CKⅡ在铅致Nff 2激活过程中具有一定作用.
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活性氧通过MAPKs和PI3K/AKT通路激活Nrf2研究进展
机体在应对过量活性氧(ROS)时能够通过一些细胞信号转导通路,增强细胞内许多保护性蛋白的表达.核因子E2相关因子2(Nrf2)是细胞对抗氧化应激的重要调控因子之一,在ROS诱导的抗氧化蛋白表达中具有重要作用.然而ROS激活Nrf2的具体机制并不完全清楚.有研究表明ROS可通过丝裂原活化的蛋白激酶(MAPKs)和磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3 K/AKT)细胞信号通路激活Nrf2,以应对氧化应激对细胞造成的损伤.提示,MAPKs、PI3K/AKT 2个重要的信号通路在ROS诱导的Nrf2活化中具有重要作用.
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壹期煤工尘肺患者血清氧化应激指标水平变化
目的 探讨壹期煤工尘肺(CWP)患者血清氧化应激指标血红素氧合酶-1(HO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、总抗氧化能力(T-AOC)、8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)及脂质过氧化产物(LPO)水平变化及意义.方法 采用酶联免疫吸附法检测33名井上健康工人(对照组),40名井下健康接尘矿工(接尘组)及91例壹期CWP患者(CWP组)血清中HO-1、Nrf2和8-iso-PGF2α水平;化学比色法检测血清T-AOC和LPO水平.结果 与对照组比较,接尘组Nrf2、T-AOC和LPO水平升高,CWP组LPO水平升高,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),CWP组T-AOC水平低于接尘组(P＜0.01),CWP组饮酒患者血清中HO-1、Nrf2和8-iso-PGF2α水平低于非饮酒者(P＜0.05).CWP组HO-1和Nrf2、8-iso-PGF2α,Nrf2和8-iso-PGF2α水平呈明显正相关(rs值分别为0.840、0.882、0.885,P＜0.01).结论 氧化应激反应与壹期CWP发生发展有关;饮酒可影响CWP患者氧化应激水平;检测T-AOC水平有助于CWP的早期筛检.
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铅对SH-SY5Y细胞的Nrf2转录活性及HO-1和γ-GCSc蛋白表达的影响
[目的]研究铅对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SYSY)的细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)转录活性以及下游血红素加氧酶1(HO-1)和谷氨酸半胱氨酸合成酶(γ-GCSc)表达的影响. [方法]用不同剂量的醋酸铅溶液(0、5、25、125 μmol/L)对体外培养的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)染毒12、24h后,用四甲基偶氮唑蓝法测细胞存活率；用凝胶迁移试验测细胞核内Nrf2-抗氧化反应元件(ARE)结合能力；用Western blot法检测染毒细胞内HO-1和γ-GCSc的蛋白水平.[结果]与对照组相比,醋酸铅染毒使SH-SY5Y的存活率降低,细胞核内Nrf2-ARE结合能力升高,Nrf2调控的下游基因HO-1和γ-GCSc的蛋白表达水平也明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05). [结论]铅对SH-SY5Y细胞毒性作用具有剂量反应关系.铅可激活SH-SY5Y细胞Nrf2的转录活性,并导致Nrf2介导的抗氧化酶HO-1和γ-GCSc的表达水平升高.
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Nrf2表达与顺铂诱导食管癌细胞凋亡关系的实验研究
目的 探讨干扰核因子E2相关因子2(Nrf2)表达与顺铂诱导食管癌细胞凋亡的关系.方法 食管癌Eca-109细胞转染干扰质粒Nrf2-SiRNA为干扰组,转染si-NC为阴性对照组,不作任何处理为空白对照组,MTT法测定各组Eca-109细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测Eca-109细胞顺铂作用后的凋亡情况;Western blotting检测Eca-109细胞顺铂作用后caspase-3蛋白表达的变化.结果 干扰组Nrf2表达量为0.14±0.02,低于阴性对照组和空白对照组的0.61±0.07和0.57±0.04,差异有统计学意义(P<0.05).MTT法显示空白对照组、阴性对照组和干扰组的IC50分别为15.29、14.02和8.87 mg/L,差异有统计学意义(P<0. 05).顺铂(10 mg/L)作用24 h后,空白对照组、阴性对照组和干扰组的细胞凋亡率分别为(18.12±2.36)％、(17.04±2.21)％和(28.07±2.44)％,caspase-3蛋白表达量分别为0.72±0.03、0.73±0.05和1.02±0.17,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Nrf2表达降低增加了顺铂诱导Eca-109细胞凋亡的能力,可能作为食管癌顺铂化疗增敏的一个靶点.
关键词： 食管癌 核因子E2相关因子2(Nrf2) 顺铂 凋亡 -
核因子E2相关因子2过表达对间充质干细胞抗缺氧和抗凋亡能力的影响
目的 研究核因子E2相关因子2(Nrf2)对间充质干细胞(MSCs)的抗缺氧及抗凋亡能力的影响.方法 将过表达Nrf2的重组质粒及辅助质粒转染人胚肾细胞(293FT),获得过表达Nrf2的高滴度慢病毒.MSCs分别转染过表达Nrf2慢病毒以及空载体慢病毒,构建稳定过表达Nrf2的Nrf2-MSCs(Nrf2过表达组)以及绿色荧光蛋白(GFP)-MSCs(对照组).采用荧光显微镜观察两组细胞的绿色荧光表达情况.采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测两组细胞中Nrf2蛋白的表达水平.采用光学显微镜观察两组细胞的抗缺氧能力,采用流式细胞术检测两组细胞的抗凋亡能力.结果 成功构建了稳定过表达Nrf2的Nrf2-MSCs,Western Blot法检测结果显示Nrf2过表达组细胞的Nrf2蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01).缺氧处理15 h后,Nrf2过表达组的细胞活力明显高于对照组.流式细胞术检测表明Nrf2过表达组细胞的凋亡率为(30.9±1.4)%,明显低于对照组细胞的(61.3±1.3)%(P<0.05).结论 稳定过表达Nrf2的Nrf2-MSCs在低氧环境中具有一定的抗缺氧、抗凋亡能力.
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三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡的机制研究
目的 通过研究三氧化二砷对人肝癌细胞株HepG2活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)水平、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和核因子E2相关因子2(Nrf2)表达的影响,探讨三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡的机制.方法分别采用0、2.5、5和10 μmol/L三氧化二砷处理HepG2达24 h后,MTT实验测定细胞存活率(另增25、50 μmol/L浓度组),流式细胞术检测细胞凋亡水平,DCFH-DA荧光探针测定细胞内ROS水平,5,5-二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)比色法检测细胞中GSH含量,蛋白印记检测γ-GCS催化亚基GCLC和调节亚基GCLM以及核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白的表达水平.结果 随着三氧化二砷染毒浓度的增加,HepG2细胞凋亡率、ROS水平和Nrf2蛋白表达均增加(P＜0.05),而细胞存活率、GSH含量、GCLC和GCLM蛋白表达量均降低(P＜0.05).结论 三氧化二砷通过诱导细胞产生ROS,抑制γ-GCS的表达以及减少GSH合成,从而诱导人肝癌细胞凋亡.
