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Nrf2信号通路在铅致SH-SY5Y细胞氧化应激中作用
目的 研究神经细胞内核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路是否对铅暴露所致的氧化应激产生应答及其可能机制.方法 用低、中、高剂量(5、25、125 μmol/L)的醋酸铅溶液对人神经母细胞瘤SH-SY 5 Y细胞染毒,用2 ′,7 ′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针检测染毒2h后细胞活性氧(ROS)水平,染毒24 h后用二硫基双硝基苯甲酸( DTNB)比色法检测还原性谷胱甘肽(GSH)水平,western blot法检测蛋白激酶C-δ(PKC-δ)、酪氧酸激酶2(CKⅡ)以及胞浆和胞核中Nrf2蛋白的表达水平.结果 随着染毒剂量增加,低、中、高剂量组ROS含量依次为(559.17±54.56)、(585.50±36.41)、(621.00±29.96),与对照组(533.50±46.47)比较,中、高剂量组含量明显升高(P＜0.05)；GSH含量依次为(165.39±17.37)、( 140.92±14.77)、(84.03±10.31),与对照组(222.10±14.91)比较,低、中、高剂量组含量均明显降低(P＜0.01)；与对照组比较,低、中、高剂量组胞浆Nrf 2相对灰度值为(0.38±0.09)、(0.27±0.09)、(0.25±0.11),胞浆Nrf2表达均明显降低(P＜0.05)；低、中、高剂量组胞核Nrf2相对灰度值为( 1.38±0.50)、(1.55±0.49)、(2.79±1.56),仅高剂量组胞核Nrf2蛋白表达明显增高(P＜0.05).低、中、高剂量组PKC-δ相对灰度值为(1.84±0.46)、(2.55±0.36)、(2.38±0.77),与对照组比较均明显升高(P＜0.05)；低、中、高剂量组CKⅡ相对灰度值为(1.28±0.32)、(1.34±0.21)、(1.52±0.42),与对照组比较仅高剂量组表达明显升高(P＜0.05).结论 铅致神经细胞氧化损伤的同时激活胞浆中Nrf2转移人核内,进而发挥氧化应答,PKC-8、CKⅡ在铅致Nff 2激活过程中具有一定作用.
