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颞叶癫痫模型和失神癫痫模型的行为学、组织学对比研究
目的比较匹罗卡品癫痫模型及戊四唑点燃癫痫模型的行为学特征及组织学特征.方法制作两种不同的癫痫模型,应用Vedio观察行为学特征,不同时点Nissl染色及Neo-timms'染色,对比研究神经元丢失及苔藓出芽的变化.结果戊四唑点燃模型无持续性癫痫自发发作,癫痫产生过程中无神经元丢失及苔藓出芽现象;匹罗卡品癫痫持续状态模型在海马的CA1、CA3及齿状回的门区出现神经元丢失,在大鼠出现反复自发发作的同时出现苔藓纤维出芽现象.结论戊四唑点燃模型类似人类失神癫痫特征,匹罗卡品癫痫持续状态模型类似人类慢性颞叶癫痫特征,神经元丢失和苔藓纤维出芽可能是癫痫发生的原因,是一理想的颞叶癫痫动物模型.
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锂-匹罗卡品颞叶癫癇模型的建立及苔藓纤维出芽的动态变化
目的 研究锂-匹罗卡品颞叶癫癇模型大鼠致癇后NFDA2性发作的行为学特点及海马结构病理改变的动态变化.方法 将所有Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,实验组大鼠腹腔依次注射氯化锂、匹罗卡品诱发癫癇持续状态(SE)后,观察其自发性癫癇发作(SRS),分别于SE后1周至10周5个不同时间点取材,Nissl染色和Timm染色分别观察海马神经元损伤及苔藓纤维出芽 (MFS)的变化.结果 注射匹罗卡品后84%的大鼠可诱发出SE,经过10～20 d的缄默期后,可观察到Ⅰ～Ⅲ级的反复SRS,病理学检查可见海马神经元的损伤及齿状回内分子层MFS.结论 锂-匹罗卡品颞叶癫癇模型与人类颞叶癫癇有类似发作特点及病理改变,是一种理想的颞叶癫癇动物模型.
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茸菖胶囊对戊四唑致痫大鼠学习记忆能力及海马苔藓纤维出芽的影响
[目的]观察茸菖胶囊对戊四唑致癫痫大鼠学习记忆能力及海马组织苔藓纤维发芽(MFS)的影响.[方法]以戊四唑点燃大鼠为模型,随机分为中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、丙戊酸钠组、模型组、正常组,水迷宫实验记录逃避潜伏期和跨越平台次数,戊四唑惊厥阈实验测定惊厥潜伏期,Timm染色法观察海马苔鲜纤维出芽.[结果]各治疗组大鼠与治疗前相比,均可减少大鼠的发作程度,水迷宫实验:中药组逃避潜伏期和跨越平台次数均明显短于模型组(P＞0.05).Timm染色结果表明:各治疗组海马CA3区及齿状回分子层Timm染色颗粒MFS评分低于模型组(P＜0.01).[结论]茸菖胶囊可以有效控制癫痫大鼠的发作次数及级别,改善戊四唑致癫痫大鼠的学习记忆能力,其作用机制与抑制海葬纤维异常出芽,从而保护海马神经元有关.
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熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤影响的研究
[目的]探讨熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤的影响.[方法]应用氯化锂-匹罗卡品复制难治性癫痫大鼠模型.观察实验大鼠的反复自发性发作(SRS)情况、海马形态学改变和苔藓纤维出芽(MFS).[结果]1)治疗组癫痫大鼠SRS的发作次数均明显低于模型组(P＜0.01).2)光、电镜结果显示:各治疗组中联合治疗组海马结构损伤轻.3 )Timm染色结果显示:联合治疗组对海马CA3区及齿状回MFS有较强的干预作用,优于单药治疗组.这种干预作用的强弱与熄风胶囊的剂量呈现一定正相关关系.[结论]熄风胶囊单药及与卡马西平(CBZ)联合用药能够有效的控制氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠的SRS,降低海马神经元损伤的程度,抑制苔藓纤维异常出芽.
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锂-匹罗卡品致颞叶癫痫小鼠模型的建立及苔藓纤维出芽的实验研究
目的 探讨腹腔注射锂-匹罗卡品建立小鼠颞叶癫痫(EP)模型方法及其行为学改变与苔藓纤维出芽的关系.方法 小鼠腹腔注射锂-匹罗卡品建立颞叶EP膜型,应用ZnSe金属自显影技术(AMG)检测3d、7d、15d、30d及60d的苔藓纤维出芽情况.结果 锂-匹罗卡品注射后,约40%的小鼠呈现癫痫持续状态,并出现慢性自发发作.形态学检查发现海马齿状回分子层苔藓纤维出芽,并且随着时间的延长,苔藓纤维出芽逐渐增多.结论 腹腔注射锂-匹罗卡品小鼠模型是一种理想的颞叶EP动物模型,苔藓纤维出芽可作为判断SE模型是否成功的形态学标准.
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锌转运体3、TSQ及Zinquin三种荧光染色对癫痫小鼠海马苔藓纤维出芽的研究
目的 研究锌转运体3、TSQ及Zinquin荧光染色在癫痫小鼠海马苔藓纤维出芽的染色情况.方法 小鼠腹腔注射匹罗卡品建立小鼠癫痫模型,应用锌转运体3、TSQ及Zinquin三种荧光染色技术对造模后15d,30d,60d的模型小鼠苔藓纤维出芽进行标记染色.结果 在造模后15d,三种荧光染色开始出现在小鼠海马的颗粒细胞层.造模后30d,三种荧光染色出现在海马内分子层.而在造模后60d,海马内分子层芽生的苔藓纤维的荧光染色进一步加强.结论 锌转运体3、TSQ及Zinquin三种荧光染色可以做为苔藓纤维出芽的标记方法.
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N-cadherin在颞叶癫痫海马苔藓纤维出芽和突触重组中的作用
目的探讨神经性钙粘附分子(N-cadherin)在癫痫状态后海马苔藓纤维出芽和突触重组中的作用.方法取锂-匹罗卡品诱导大鼠癫痫持续状态及慢性自发性颞叶癫痫发作期的大鼠脑片,用Timm染色和免疫组化的方法分别检测苔藓纤维出芽和N-cadherin在大鼠海马组织中的表达.结果癫痫状态后第2周和第4周的实验组大鼠可见到苔藓纤维出芽,穿越齿状回颗粒细胞层到达内分子层,并在此形成一条致密的层状带(Timm染色).免疫组化染色发现实验组大鼠在第2周和第4周,海马齿状回内分子层可以看到强染色,并形成一条致密带,与Timm染色时观察到的条带一致.结论癫痫状态后在海马齿状回内分子层N-cadherin的表达上调,N-cadherin可能参与了癫痫后苔藓纤维出芽和突触重组过程.
关键词： N-cadherin 颞叶癫痫 苔藓纤维出芽 突触重组 -
高频电刺激对癫痫模型大鼠慢性期海马苔藓纤维出芽及痫性发作影响
目的:局部注射海人酸制作癫痫大鼠模型,研究局部高频电刺激对癫痫大鼠苔藓纤维出芽及痫性发作的影响.方法:海马局部注射海人酸制作大鼠颞叶癫痫模型,选择局部海马癫痫灶进行高频电刺激,选择不同时间点,观察大鼠癫痫发作特点及脑电变化,通过改良Timm染色法,观察海马病理改变.结果:行为和脑电变化,点燃大鼠行为学上可分三期,包括急性期、静止期、慢性期,同时各个时期有相应的脑电特征表现.电刺激可减少慢性期大鼠癫痫发作的次数和痫性放电的次数(P<0.001).病理改变,点燃后大鼠海马Timm染色可见4 d时苔藓纤维出芽开始出现,到14 d明显(P<0.01),Golijeh评分电刺激组较海人酸组低(P<0.05).结论:局部高频电刺激海马能有效抑制海人酸癫痫模型大鼠的癫痫发作及痫性放电,抑制海马苔藓纤维出芽可能是高频电刺激控制癫痫发作的作用机制之一.
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Tau蛋白在点燃大鼠海马苔藓纤维出芽中的作用探讨
目的 观察总tau蛋白及其p-ptauser202在戊四氮点燃癫(痫)模型海马中的表达变化,探讨其在苔藓纤维出芽中的作用.方法 180只雄性SD大鼠随机分为对照组(腹腔注射生理盐水)和模型组(腹腔注射戊四氮),均n=90.于不同的时间点应用Timm染色观察苔藓纤维出芽,免疫组化和Western blot检测各时间点海马总tau蛋白及p-ptauser202蛋白表达情况.结果 模型组各时间点CA1、CA3、DG区苔藓纤维出芽较对照组明显增多,差异有统计学意义(P＜0.05)；模型组第1周CA1区、CA3区,第2周DG区的p-ptauser202蛋白表达与对照组比较明显增多,差异均有统计学意义(分别为CA1区P＜0.05,CA3区P＜0.01,DG区P＜0.01)；门区(H区)tau蛋白及p-ptauser202蛋白在各时间点的表达明显增多,差异有显著统计学意义(P＜0.01);对照组无动态变化.结论 tau蛋白可能通过其磷酸化水平的增高参与癫(痫)点燃大鼠的苔藓纤维出芽,在癫(痫)的发生和发展中起重要作用.
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颞叶癫(癎)大鼠海马内Rnd1 mRNA及蛋白表达变化
目的:动态观察小分子GTPase Rho家族的Rnd1 mRNA及其蛋白在氯化锂-毛果芸香碱(匹罗卡品)致(癎)大鼠模型海马中的表达变化,探讨其在颞叶癫(癎)发生发展中的作用.方法:在氯化锂-毛果芸香碱颞叶癫(癎)模型中应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测癫(癎)持续发作(SE)后各时间点海马内Rnd1 mRNA的表达变化,并运用免疫组织化学染色法及Neo-Timm染色法分别检测齿状回门区、CA1区及CA3区中该蛋白在不同时间点的表达变化及苔藓纤维出芽(MFS)情况.结果:实验发现模型组于SE后8 h内即出现Rnd1表达上调,SE后约1 d达高峰,7 d左右回复至对照组水平,此后其mRNA表达水平与对照组相似;而免疫组化染色发现Rnd1蛋白表达从SE后8 h内即开始上调,约3 d达高峰,至7 d虽略有回落,但仍高于对照组水平,且这种情况可一直持续至慢性期.结论:急性期海马齿状回门区Rnd1表达上调可能通过促进MFS的发生参与了颞叶癫(癎)的发生.
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神经干细胞移植对发育期癫痫大鼠的影响
目的 观察新生大鼠海马神经干细胞(NSCs)移植对发育期癫痫大鼠海马CA3区和齿状回苔藓纤维出芽(MFS)的影响.方法 取新生24 h SD大鼠海马,提取、培养及纯化NSCs并行免疫荧光染色鉴定.选择21日龄SD大鼠,建立戊四氮慢性癫痫点燃模型,分为无癫痫发作组(正常对照组)、癫痫未治疗组(癫痫组)、癫痫+PBS侧脑室注射组(假手术组)和癫痫+NSCs侧脑室注射组(治疗组),每组10只.在癫痫发作后第7天,假手术组和治疗组分别将PBS和5-嗅-2-脱氧尿苷(BrdU)标记的NSCs移植入大鼠侧脑室.术后8周,采用免疫组织化学方法观察海马CA3区和齿状回BrdU阳性细胞的变化,Timm银染色方法观察海马区MFS评分.结果 培养的细胞聚集呈悬浮生长,形成典型的神经球,免疫荧光染色巢蛋白及BrdU呈阳性表达,并能不断分裂增殖,移植入癫痫大鼠海马区8周后能检测到其存在并向四周迁移.与正常对照组比较,癫痫组和假手术组大鼠MFS评分升高(P＜0.05);与癫痫组和假手术组比较,治疗组MFS评分降低(P＜0.05);癫痫组与假手术组MFS评分差异无统计学意义(P＞0.05).结论 NSCs移植入癫痫大鼠海马后能够存活,并且可以降低海马CA3区和齿状回 MFS 程度,有效抑制癫痫发作.
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匹鲁卡品癫痫模型及戊四氮点燃模型新生鼠行为学和组织学的对比研究
目的 比较匹鲁卡品(毛果芸香碱)点燃新生鼠痫性发作模型及戊四氮点燃模型的行为学特征及组织学改变,为实验模型的选择奠定基础.方法 选择SD新生大鼠为研究对象,制作两种不同的新生鼠癫痫模型,观察新生鼠的行为学表现、不同时点Nissl染色等组织学改变.结果 两种模型的行为学特征有所不同,匹鲁卡品点燃模型中未见神经元丢失及苔藓出芽现象,戊四氮癫痫持续状态模型中无神经元丢失,但明显出现苔藓纤维出芽现象.结论 腹腔注射匹鲁卡品小鼠模型是一种理想的颞叶癫痫动物模型,苔藓纤维出芽可作为判断癫痫持续状态模型是否成功的形态学标准.
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青霉素点燃模型及匹罗卡品癫痫模型的行为学、组织学对比研究
目的 比较青霉素点燃模型及匹罗卡品癫痫模型的行为学特征、海马神经元丢失及苔藓纤维出芽的不同特征.方法 制作两种不同的癫痫模型,应用Vedio观察行为学特征,不同时点Nissl染色及Neo-timms'染色,对比研究神经元丢失及苔藓出芽的变化.结果 两种模型有不同的行为学特征,青霉素点燃模型中无神经元丢失及苔藓出芽现象,匹罗卡品癫痫持续状态模型中出现神经元丢失及苔藓纤维出芽现象.结论 青霉素点燃模型类似人类失神癫痫特征,匹罗卡品癫痫持续状态模型类似人类慢性颞叶癫痫特征,是一理想的颞叶癫痫动物模型.
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法舒地尔对戊四氮点燃大鼠海马丝切蛋白及苔藓纤维出芽的影响
目的 探讨法舒地尔对戊四氮(PTZ)点燃大鼠海马组织中丝切蛋白(cofilin,非磷酸化形式)表达与苔藓纤维出芽程度关系的影响.方法 210只SD雄性大鼠分成戊四氮组、法舒地尔干预组和生理盐水对照组,采用PTZ慢性点燃癫癎模型,应用SABC法检测cofilin表达,用Timm染色检测苔鲜纤维出芽情况.结果 PTZ组大鼠点燃率、病死率与法舒地尔组比较差异无统计学意义.PTZ组和法舒地尔组CA3区苔藓纤维出芽评分差异无统计学意义,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).PTZ组和法舒地尔组海马非磷酸化cofilin表达差异无统计学意义.结论 丝切蛋白可能通过苔藓纤维出芽与癫癎的发生相关.
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癫癎突触可塑性的研究动态
癫癎的形成与大脑神经元之间异常突触联系和病理性神经环路的建立而导致的兴奋性增强有关,这些异常突触联系和病理性神经环路也是突触可塑性的表现.通过癫癎点燃动物模型、癫癎状态和癫癎形成机制的研究表明,长时程增强(LTP)、NF-κB基因调控蛋白、苔藓纤维出芽(MFS)、神经肽Y(NPY)、NCAM以及谷氨酸受体NMDA型和KA型等,均参与神经元突触可塑性的过程,在癫癎的发生机制中起着重要作用.
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戊四氮点燃模型大鼠GSK-3β活性的动态变化及其与苔藓纤维出芽的关系
目的 探讨戊四氮点燃模型大鼠GSK-3β活性变化与苔藓纤维出芽的关系.方法 取戊四氮点燃模型大鼠给药后3 d、1、2、4和6周的脑片,通过Timm染色观察苔藓纤维出芽的动态变化;取各时间点的大鼠海马组织,通过酶活性测定方法 检测GSK-3β活性变化.结果 戊四氮组各时间点GA3区苔藓纤维出芽评分均有显著性差异(P＜0.05);从3 d起评分逐渐增加,2周时达高峰并维持至6周.在点燃过程中海马GSK-3β蛋白活性逐渐增高,2周达高峰,4、6周表达逐渐下调到生理盐水对照组水平,除6周组外各时间点与相应时间点生理盐水对照组比较差异均有统计学意义.结论 GSK-3β通过活性上调参与了苔藓纤维出芽过程,促进了癫(癎)的发生.
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EphA5/ephrinA5在癫癎大鼠海马CA3区的表达变化及作用
探讨EphA5及其配体ephrinA5在癫癎大鼠模型海马内表达变化及其在颞叶癫癎发病中的作用.方法将240只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组(n=120)和癫癎组(n=120),建立氯化锂-匹罗卡品颞叶癫癎大鼠模型.致癎后分别选取12 h、24 h、7 d、15 d、30 d和60 d 6个时间点为亚组(n=20),采用原位杂交法检测各亚组大鼠海马CA3区和齿状回(DG)ephrinA5 mRNA表达水平(n=9);采用免疫组化法检测各亚组大鼠海马CA3区和DG EphA5蛋白的表达水平(n=9);采用Neo-Timm银染法观察各亚组大鼠海马CA3区的苔藓纤维出芽情况(n=2).结果原位杂交结果显示:ephrinA5 mRNA在海马CA3区可见表达,但在DG无表达;与同时间点对照组相比,致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 mRNA表达明显下调(P<0.05),在致癎后30 d、60 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 mRNA表达逐渐上调(P<0.05),且与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).免疫组化结果显示:EphA5蛋白在大鼠海马CA3区及DG区均有表达,其水平变化趋势与ephrinA5 mRNA相一致.Neo-Timm银染法结果显示:致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区存在明显苔藓纤维出芽.结论配体ephrinA5协同受体EphA5在海马CA3区的表达下调,可能共同参与了CA3区的苔藓纤维出芽作用机制,并与癫癎的发生、发展关系密切.
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颞叶癫痫海马突触重组及其与钙调控的关系
苔藓纤维出芽是颞叶癫痫突触重组的主要表现.出芽的苔藓纤维在颗粒细胞间形成兴奋性环路,使颗粒细胞产生同步化电活动的阈值降低,也可经海马结构内的传导通路,使海马结构在传出途径上的电活动增强,从而导致反复自发性癫痫发作的发生.钙离子作为一种信使参与多种细胞功能活动的调节,钙通道功能的改变可引起细胞内外钙离子浓度的变化,而细胞内高钙和细胞外低钙均可诱发神经电活动紊乱,因此钙稳态在癫痫发生发展及海马突触重组的形成中起重要作用.
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海马苔藓纤维出芽与颞叶癫痫
海马颗粒细胞苔藓纤维出芽(MFS)导致局部环路重建，在颞叶癫痫的发生与发展过程中起关键性作用。本文综述了近年有关海马MFS的病理解剖生理学特点、出芽机理及其与颞叶癫痫关系的新研究成果，以期为探讨颞叶癫痫的形成机制提供新的思路。
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TRPC6在匹罗卡品致痫大鼠海马苔藓纤维出芽中的作用
目的 观察传统型瞬时受体电位通道6(TRPC6)蛋白在匹罗卡品致痫大鼠海马中的表达变化,探讨其在海马苔藓纤维出芽中的作用.方法 72只SD大鼠随机分为实验组(n=60)和对照组(n=12).实验组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射法建立颞叶癫痫模型；对照组腹腔注射等量无菌生理盐水.实验组按癫痫持续状态(SE)后1d、7d、15d、30 d和60 d分为5个亚组,每亚组12只大鼠.以上各亚组及对照组再分为2个小组,分别进行Western blot检测TRPC6及突触重建标志蛋白Synaptophysin在海马中的表达和Timm染色观察海马苔藓纤维出芽并评分.结果 实验组TRPC6蛋白表达量在SE后1d达高峰(P＜0.01),其他时间点均显著高于对照组(P＜0.01).Synaptophysin蛋白表达量在SE后7d、15d、30 d和60 d显著增加(7 d:P＜0.05;15 d、30 d、60 d:P＜0.01),30 d达峰值(P＜0.01).实验组大鼠齿状回内分子层在SE后7d出现Timm颗粒,并呈进行性增加.结论 TRPC6可能参与了苔藓纤维出芽这一过程.
关键词： 传统型瞬时受体电位通道6 匹罗卡品 颞叶癫痫 苔藓纤维出芽 大鼠
