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四君子汤多糖对小肠上皮细胞迁移多胺信号通路钙离子调控的影响
目的:观察四君子汤多糖对小肠上皮IEC-6细胞迁移多胺信号通路钙离子调控的影响,探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制.方法:在IEC-6细胞实验中,设正常对照组,阳性对照组,四君子汤多糖低、中、高剂量组(40、80、160mg/L);负荷实验则设模型组(d-二氟甲基鸟氨酸,DFMO),各用药组在加受试药同时加入DFMO;划痕法制造细胞迁移模型;相差倒置显微镜观察细胞迁移情况;HPLC法测定细胞内多胺(精脒和精胺)含量;RT-qPCR和Westem Blot法分别检测瞬时受体电位通道1(TRPCl) mRNA和蛋白表达;Western Blot法检测磷脂酶C-γ1 (PLC-γ l)蛋白表达;酶联免疫法检测三磷酸肌醇(IP3)含量;流式细胞仪检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]cyt);无钙培养条件是以不含钙离子的细胞培养液代替常规的含钙细胞培养液.结果:与正常对照组比较,四君子汤多糖各剂量组可促进细胞迁移、增加细胞内精脒和精胺含量、提高TRPC1 mRNA及蛋白表达、提高PLC-γ/1蛋白表达和IP3含量、增加[Ca2+]cyt(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,四君子汤多糖各剂量组可逆转DFMO所致的细胞迁移抑制、细胞多胺含量降低、TRPC1 mRNA和蛋白表达降低、PLC-γ 1蛋白表达和IP3含量降低、[Ca2+]cyt降低(P＜0.05,P＜0.01);与正常对照组(含钙培养)比较,无钙培养可致细胞迁移抑制(P＜0.01);与正常对照组(无钙培养)比较,各剂量四君子汤多糖可改善无钙培养所致的细胞迁移抑制(P＜0.05,P＜0.01),但不能使细胞迁移恢复正常水平.结论:四君子汤多糖促进细胞迁移与其作用于多胺调控信号通路有关,其中对Ca2+调控是其关键指标.
关键词： 四君子汤多糖 小肠上皮细胞(IEC-6) 细胞迁移 多胺 钙调控 -
稳心颗粒对房颤大鼠心房肌钙调控Cav1.2-CaM-CaMKⅡ信号通路的影响
目的:探索房颤(Af)模型发生维持机制的关键病理环节,并阐释稳心颗粒对Af大鼠心房肌钙调控Cav1.2-CaM-CaMKⅡ信号通路的影响机制.方法:选取健康雄性SD大鼠50只,将体质量均衡大鼠随机分为正常组(10只)和造模组(40只)2组,将造模成功大鼠随机分为模型组、稳心颗粒组、维拉帕米组与正常组共4组,连续给药4周,期间持续尾静脉注射Ach-CaCl2.以Langendorff恒温恒流灌流系统,描记离体心电图,同时以S1S2程控刺激检测各组大鼠心房有效不应期.运用Western blot方法检测Af模型大鼠心房肌Cav1.2、钙调蛋白(CaM)、2型钙调蛋白激酶(CaMKⅡ)、2型兰尼碱受体(RYR2)、2型兰尼碱受体磷酸化(P-RYR2)蛋白表达程度.结果:大鼠给药治疗4周后,①心房有效不应期(AERP)组间比较:与正常组比较,模型组大鼠AERP显著缩短(P≤0.01);与模型组比较,维拉帕米组、稳心颗粒组大鼠AERP显著延长(P≤0.05).②稳心颗粒组大鼠心房肌Cav1.2蛋白表达水平上调,CaM蛋白、CaMKⅡ蛋白表达水平下调,RyR2磷酸化程度降低.结论:稳心颗粒治疗房颤的机制可能为减轻Af膜型大鼠心房肌细胞内钙超载,恢复细胞内钙稳态.
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心房颤动时心房肌电重构与Ca2+调控异常的研究进展
心房颤动(AF)时心房肌电重构在AF的发生和发展中起至关重要的作用,直接和间接证据表明频率相关的细胞内Ca2+超负荷是电重构时心房肌电生理特性改变的始动因素,细胞内Ca2+的平衡取决于细胞外Ca2+通过L型Ca2+通道进入细胞内和肌浆网对Ca2+的释放、摄取和储存.有限的动物实验和临床资料表明,快速心房起搏和持续性AF时,L型Ca2+通道和肌浆网Ca2+调控蛋白信使核糖核酸(mRNA)和蛋白质表达下调,是AF电重构的分子生物学机制.
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钙调控与心肌缺血再灌注损伤的中西医防治研究进展
冠脉血运重建是治疗冠心病的重要措施,而心肌缺血再灌注损伤是影响其疗效的重要因素之一。Ca2+在心肌舒缩中起重要作用,Ca2+内流所致心肌细胞钙超载是心肌缺血再灌注损伤的重要因素和病理机制,是近年来心血管领域研究的热点问题之一。本研究综述钙调控与心肌缺血再灌注损伤的中西医防治研究近况。
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卡托普利对甲状腺素性心肌肥厚大鼠血管平滑肌收缩反应的影响
目的研究卡托普利对甲状腺素(THY)性心肌肥厚大鼠血管平滑肌的内钙释放和外钙内流所致收缩的影响.方法大鼠连续10 d每天ip THY 0.5 mg/kg造成心肌肥厚及血管病变模型,卡托普利在d8, 9, 10 po 50、100 mg/kg给药,在d11, 大鼠的胸主动脉进行由高钾引起的三相收缩,比较在正常组、THY肥厚组和卡托普利组大鼠血管平滑肌的内钙释放和外钙内流所致收缩的变化.结果肥厚组的心室/体重(VW/BW)指数比正常组明显升高,而卡托普利能显著降低之;THY心肌肥厚大鼠的平滑肌由内钙释放和外钙内流所致的收缩百分率比正常组都显著增加,而卡托普利剂量为50 mg/kg时对由外钙内流所致的收缩比正常组和肥厚组的显著降低,对内钙释放无影响;卡托普利剂量为100 mg/kg时对由内钙释放所致的收缩比正常组和肥厚组的显著降低,对外钙内流所致的收缩与肥厚组比显著减少.结论卡托普利对THY性心肌肥厚大鼠血管平滑肌高钾引起的收缩反应有显著抑制作用,其机制可能与卡托普利抑制血管平滑肌的内钙动员和外钙内流有关.
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心房颤动时心房肌钙调控的变化
心房颤动(AF)时存在明确的钙调控改变,主要表现在细胞膜L型钙通道电流降低,肌浆网钙调控蛋白基因表达改变和功能减低,钙的循环受到影响,它们都是影响AF电重构的关键环节.而钙超负荷可能是诱发这些变化及心肌收缩力降低的始动因素.相应的药物干预可能是未来AF防治的方向.
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颞叶癫痫海马突触重组及其与钙调控的关系
苔藓纤维出芽是颞叶癫痫突触重组的主要表现.出芽的苔藓纤维在颗粒细胞间形成兴奋性环路,使颗粒细胞产生同步化电活动的阈值降低,也可经海马结构内的传导通路,使海马结构在传出途径上的电活动增强,从而导致反复自发性癫痫发作的发生.钙离子作为一种信使参与多种细胞功能活动的调节,钙通道功能的改变可引起细胞内外钙离子浓度的变化,而细胞内高钙和细胞外低钙均可诱发神经电活动紊乱,因此钙稳态在癫痫发生发展及海马突触重组的形成中起重要作用.
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2型糖尿病大鼠心功能变化及RAGE表达增强和钙调控异常
目的:通过自发性2型糖尿病大鼠观察糖尿病状态下大鼠的心脏结构和功能变化,同时探讨糖尿病心肌病的发病机制.方法:用Zucker糖尿病肥胖(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠建立糖尿病模型,Zucker lean (ZL)大鼠为对照组.利用超声多普勒法检测ZDF大鼠心脏结构和功能的改变;麦胚凝集素染色计算单个心脏细胞面积;Western blot检测心肌细胞肥大标志物 β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP),以及晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)、L型钙通道蛋白α1C亚基(L-type calcium channel α1C subunit,CaV1.2)和钙库操纵性钙通道相关功能蛋白Orai1的表达水平.结果:与ZL大鼠相比,ZDF大鼠的血糖和体重明显增加,左心室壁增厚,心脏舒张功能明显减弱,收缩功能轻度增强;ZDF大鼠左室心肌细胞表面积明显增大,心肌细胞肥大相关蛋白β-MHC和ANP的表达水平也明显增加;ZDF大鼠心肌组织中的RAGE和Orai1蛋白表达增高,CaV1.2蛋白表达下降(P<0.05).结论:2型糖尿病大鼠心肌细胞肥大,心室肥厚,心功能代偿性增强,其机制可能与RAGE表达增强和钙调控异常有关.
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甲状腺激素下调慢性心力衰竭大鼠心肌钙调神经磷酸酶通路的机制研究
目的 在体研究甲状腺素(thyroid hormone,TH)对慢性心力衰竭(heart failure,HF)大鼠血流动力学及心脏Ca2+-调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)-T细胞核因子3(nuclear factor 3 of activated T cells,NFAT3)通路的影响.方法 SD大鼠90只随机分为3组,各组30只:(1)假手术组(sham组);(2)HF模型组(HF组);(3)TH治疗组(TH组).缩窄腹主动脉建立HF动物模型,TH组术后灌胃予左甲状腺素钠[1.5μg/(100 g·d)].各组大鼠喂养8周后测定有创血流动力学指标,取材称量全心湿质量(heart wet weight,HW)、全肺湿质量(lung weight,LW),计算心质量指数[HW/体质量(body weight,BW)]、肺质量指数(LW/BW),测定心肌[Ca2+]i浓度及CaN活性,Western blot检测CaN-A、总NFAT3(T-NFAT3)、磷酸化NFAT3(P-NFAT3)蛋白表达水平.结果 (1)TH治疗显著改善HF大鼠收缩压(systolic pressure,SP)、左心室收缩压(left intraventricular systolic pressure,LVSP)、+dp/dt max、左心室舒张压(left ventricular diastolic pressure,LVDP)、左心室舒张末期压力(left ventricu?lar end-diastolic pressure,LVEDP)、-dp/dt max;TH组与HF组心率比较,差异无统计学意义(P>0.05).(2)TH组HW/BW[(3.44±0.27)mg/g vs.(4.18±0.28)mg/g,P<0.01]及LW/BW[(8.02±0.41)mg/g vs.(8.56±0.45)mg/g,P<0.01]均较HF组有所降低,差异有统计学意义.(3)与HF组比较,TH组大鼠[Ca2+]i[(115.50±10.76)nmol/L vs.(159.36±7.21)nmol/L,P<0.01]及CaN活性[(21.33±2.35)nmol·min-1·mg-1 protein vs.(42.96±3.36)nmol·min-1·mg-1 protein,P<0.05]均显著降低.(4)HF组P-NFAT3表达(0.41±0.10 vs.0.80±0.11,P<0.01)及P-NFAT3/T-NFAT3比值(0.13±0.03 vs.0.25±0.04,P<0.01)较Sham组显著减少,差异有统计学意义;TH组P-NFAT3表达(0.86±0.11 vs.0.41±0.10,P<0.01)及P-NFAT3/T-NFAT3比值(0.27±0.03 vs.0.13±0.03,P<0.01)较HF组则显著增加,差异有统计学意义;虽TH组P-NFAT3表达较Sham组有所增加,而TH组P-NFAT3/T-NFAT3比值与Sham组比较,差异无统计学意义(P=0.193).结论 TH通过改善心肌钙稳态,减少对CaN的病理激活而维持下游NFAT3蛋白磷酸化状态,使HF大鼠的解剖病理和血流动力学获益.
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环腺苷二磷酸核糖对血管平滑肌细胞钙调控的研究进展
游离钙在介导和调节血管平滑肌细胞(vascular smoothmuscle cells,VSMCs)的功能中起着重要作用,很多血管活性物质也都通过改变胞内钙浓度来实现它们的功能.已有较多认识的三磷酸肌醇(inositol,1,4,5-trisphosphace,IP3)是胞内重要的第二信使,它通过肌浆网上的IP3受体介导钙释放,从而引起胞内钙浓度的变化.cADPR作为一个新近认识的钙动员第二信使也参与了对胞内钙的调控,而且是独立于IP3通路的.目前越来越多的研究已经开始关注这条通路,并取得了一系列的研究结果,本文就cADPR信号通路在VSMCs钙调控中的作用作一综述.
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肌浆网/内质网钙调控在心血管疾病中的研究进展
肌浆网/内质网(SR/ER)是细胞内重要的钙储库及调控系统,主要通过Ca2释放通道雷尼丁受体(RyR)和1,4,5-三磷酸肌醇受体(IRR),以及Ca2摄取蛋白肌浆网Ca2-ATP酶(SERCA)和基质交感分子1(STIM1)等调节钙信号,维持细胞内钙稳态.研究发现,SR/ER钙平衡对细胞正常生理功能的发挥和信息传递非常重要,SR/ER钙稳态失调与缺血性心脏病、心肌肥厚、高血压及心力衰竭等心血管疾病的发生发展密切相关.本文就SR/ER钙调控在心血管疾病中的研究进展作一概述,重点阐述SR/ER钙离子通道和相关调控蛋白对细胞内钙信号的调节机制,以期为临床心血管疾病的治疗提供重要策略和潜在靶点.
