基层医院呼吸道合胞病毒检测方法的筛选

目的：筛选快速、可靠、易推广的适合基层医院的呼吸道合胞病毒(respiratory sycytial virus,RSV)的检测方法。方法双抗体夹心ELISA法、直接免疫荧光法、免疫层析金标法、桥联酶标法检测50例经临床确诊为RSV感染患儿的鼻咽分泌物。结果 RSV阳性检出率依次为40%、88%、84%、80%。结论直接免疫荧光法快速、可靠、易推广，是基层医院RSV感染早期诊断的优选方法。

2008-2012年武汉市儿童流行性感冒病毒及呼吸道合胞病毒流行特征

目的 了解2008-2012年武汉市14岁及以下流行性感冒(简称流感)样症状患儿流感病毒和呼吸道合胞病毒(RSV)的感染情况及病毒流行特征.方法 于2008年7月至2012年6月在武汉市某医院门诊和急诊患者中,选择14岁以下的流感样病例作为研究对象,共2854例.研究对象各采集1份咽拭子标本,共采集2854份.从流感样病例咽拭子标本中提取病毒核酸,应用实时荧光定量逆转录PCR (RT-PCR)对流感病毒和RSV进行核酸检测和亚型鉴定,分析两种病毒感染的时间和年龄特征.结果 2854例患儿检测流感病毒阳性758例,阳性率为26.6％.其中,甲型流感病毒阳性547例(19.2％)、乙型流感病毒阳性211例(7.4％).流感病毒每年流行呈双峰特征,即夏季峰和冬春季峰.6～ 14岁组患儿流感病毒检测阳性率为48.0％(275/573),明显高于3～5岁组[26.6％ (213/801)]和3岁以下组[18.3％ (270/1480)],差异有统计学意义(x2=187.432,P＜0.01).患儿中RSV检测阳性219例,阳性率为7.7％,其中,RSV-A阳性108例,RSV-B阳性112例,混合感染1例.RSV流行呈明显的季节性,发病主要集中在秋、冬、春季,占全部发病病例的96.8％(212/219),每年流行情况波动较大.RSV-A、RSV-B交替流行,交替周期为2年,2008年9月至2009年5月及2009年12月至2010年3月以RSV-B感染为主,分别占76.6％(36/47)和96.9％(62/64)；2010年11月至2011年3月及2011年9月至2012年4月以RSV-A感染为主,分别占92.5％(37/40)和100.0％(48/48).但随着年龄的增长,RSV-A和RSV-B阳性率不断下降(RSV-A:x2=36.223,P ＜0.01；RSV-B:x2=36.281,P＜0.01),其中,RSV-A在＜1、1、2、3、4、5 ～9、10～ 14岁年龄组阳性率分别为7.0％ (26/373) 、5.9％ (39/662) 、4.0％ (18/445) 、3.2％ (13/406)、1.3％(3/236)、1.4％(7/517)、0.9％ (2/215)；RSV-B在各年龄组的阳性率分别为6.4％(24/373) 、6.0％(40/662)、4.5％(20/445)、4.4％(18/406)、1.3％(3/236)、1.0％(5/517) 、0.9％(2/215).0～3岁组RSV阳性197例,占RSV阳性患者总数的90.0％(197/219).2009年11月甲型H1N1流感暴发流行时,RSV阳性率为3.0％ (3/100),低于2008、2010、2011年同月份RSV检测阳性率[分别为18.2％ (6/33)、10.8％ (10/93) 、10.0％ (4/40)],差异有统计学意义(x2=8.450,P＜0.05)；2011年1月甲型H1N1流感暴发流行时,RSV阳性率为5.7％(3/53),低于2009、2010、2012年同月份RSV检测阳性率[分别为21.7％(5/23) 、28.6％(22/77)、16.0％(8/50)],差异有统计学意义(x2=11.233,P＜0.05)；2011年9月,流感夏季峰缺失时,RSV检测阳性率为25.0％(10/40),高于2008、2009、2010年同月份RSV检测阳性率[分别为11.4％ (4/35) 、1.7％ (2/118)、0.0％ (0/109)],差异有统计学意义(x2=32.521,P ＜0.01).结论 流感病毒和RSV是武汉地区流感样患儿重要的病原,两种病毒流行的季节性、年龄分布等特征各不相同,流感病毒对RSV的流行存在着一定的抑制作用.

黄芪雾化吸入佐治毛细支气管炎疗效观察

毛细支气管炎(简称毛支)是婴幼儿时期常见的病毒性下呼吸道感染,发病与婴幼儿支气管的解剖学特点有关.该病常见于呼吸道合胞体病毒(RSV)感染,起病急、病情进展迅速,其临床症状似肺炎,但喘憋更显著;临床治疗较困难且疗效不理想.本科2002年10月-2004年12月用黄芪雾化吸入佐治毛支,疗效较好,现报道如下.

呼吸道合胞病毒肺炎患儿TLR4及IFN-γ临床观察

呼吸道合胞病毒(RSV)是引起婴幼儿冬季下呼吸道感染的重要和常见病原,可表现为咳嗽、喘息、气促,临床上6个月以内婴儿的毛细支气管炎以及年幼儿RSV肺炎可威胁生命.除年龄外,其他高危因素如先天性心脏病伴有肺动脉高压或慢性肺疾患、早产、早产伴支气管肺发育不良均可增加RSV感染的严重度和死亡率[1].另外,RSV感染引起的毛细支气管炎与儿童反复喘息密切相关,也是儿童哮喘急性发作的重要诱因.本文旨在研究RSV肺炎患儿急性期外周血单核细胞表面Toll样受体4(TLR4)及血清中γ-干扰素(IFN-γ)水平的变化及RSV感染后诱导气道炎症的机制.

人呼吸道合胞病毒M2-1基因的扩增

人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)为呼吸道副黏液病毒,是婴幼儿下呼吸道感染的主要原因[1],近几年越来越多的证据证明hRSV也是老年人及免疫低下病人重要的感染病原体[2].现将我们建立的扩增hRSV M2-1的方法报告如下.

金欣口服液对RSV感染人胚肺成纤维细胞β-干扰素mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染人胚肺成纤维(HELF)细胞是否通过诱生β-干扰素影响感染细胞增殖.方法 体外建立RSV A型LONG株攻击HELF细胞模型,设细胞对照组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和金欣口服液组.采用Real-time PCR及ELISA法检测各组细胞β-干扰素mRNA及蛋白的表达.结果 与正常细胞(2-△△Ct值为1.79)比较,RSV感染24 h后HELF细胞β-干扰素mRNA的表达量没有明显下降(2-△△Ct值为1),空白血清组、利巴韦林组、金欣口服液组分别为0.967,0.86,0.57,差异均无统计学意义(P>0.05).采用先加药后感染病毒、先感染病毒后加药、单用含药血清干预3种加药方式,各组β-干扰素表达均为0 ng/L.结论 (1)RSV不刺激β-干扰素mRNA及蛋白的生成;(2)金欣口服液也不诱导β-干扰素mRNA及蛋白的生成,而金欣口服液含药血清可抑制感染细胞的增殖作用,可能存在其他的非依赖于β-干扰素的途径.

上海地区2009年至2010年婴儿呼吸道感染病毒谱系的特征

目的 使用Seeplex(R)RV15 ACE检测试剂盒检测上海地区婴儿呼吸道感染病毒的病原谱系.方法 征集新华医院儿科呼吸道发热门诊0～1岁组患儿62例,以咽拭子对呼吸道分泌物采样,提取样本中病毒核酸,反转录合成cDNA,使用Seeplex(R)RV15 ACE检测试剂盒扩增15种呼吸道病毒的目的 基因,以琼脂糖凝胶电泳检测特异性产物条带,判定感染病毒.并以检出病毒与检出季节和临床特征进行比较.数据采用Fisher's精确检验和卡方检验.结果 62例呼吸道感染患儿从咽拭子中检出病毒阳性36例,占58.1%,其中呼吸道合胞病毒B型(RSV-B)、鼻病毒、腺病毒、肠道病毒(hEV)、冠状病毒229E-NL63、A型流感病毒、副流感病毒1型和3型、博卡病毒、偏肺病毒、B型流感病毒的检出率分别为12.9%、11.3%、11.3%、8.0%、6.5%、6.5%、4.8%、4.8%、1.6%、1.6%和1.6%.检出双重感染6例,三重感染1例,多重感染占阳性病例的19.4%(7/36).冬季RSV-B检出率,高于其他三季(Fisher's精确检验,P=0.001),夏季检出hEV高于其他三季(Fisher's精确检验,P=0.01).结论 RSV-B、鼻病毒和腺病毒是上海地区婴儿呼吸道感染的前三位病毒病原体,多重病毒感染常见.

人类偏肺病毒与呼吸道合胞病毒呼吸道感染的临床研究

目的 了解福州地区人类偏肺病毒(HMPV)感染情况,比较HMPV与呼吸道合胞病毒(RSV)引起呼吸道感染的临床特征及流行特点.方法 采集2005年至2007年连续两个冬春季节153份福建省立医院就诊呼吸道感染患者痰标本或咽拭子标本,RT-PCR和套式RT-PCR分别检测RSV和HMPV,部分阳性PCR产物测序,DNAMAN软件分析;结合临床资料,比较两种病毒所引起的呼吸道感染临床症状、体征和流行特点.结果 153份鼻咽分泌物标本中,32份HMPV阳性,阳性率为20.9%;26份RSV阳性,阳性率为17.0%,8份HMPV和RSV均阳性.随机抽取3份标本,HMPV核苷酸序列一致,登载NCBI基因库(序列号DQ887758),基因进化树分析为单一基因型,属A基因型,但发生部分变异.2005年至2006年冬春HMPV阳性26份,阳性率为26.7%,2006年至2007年冬春HMPV阳性6份,阳性率为10.7%,而RSV检出情况与HMPV相反.儿童RSV感染平均年龄为(2.65±2.65)岁,HMPV为(4.58±3.35)岁.两种病毒引起呼吸道感染症状均以咳嗽、咽痛,发热为主.结论 HMPV与RSV均是福州地区冬春季节呼吸道病毒感染的主要病原体,两者可合并感染;HMPV主要感染年龄较大儿童,HMPV与RSV的临床特征相似.本研究期间福州地区发现的HMPV为单一基因型.

孟鲁司特治疗呼吸道合胞体病毒毛细支气管炎的临床研究

目的:观察孟鲁司特(顺尔宁)对呼吸道合胞体病毒毛细支气管炎患儿临床症状及预后的影响.方法:选择年龄6～12月的毛细支气管炎患儿,均为首次发病,采用鼻咽分泌物免疫荧光法定性检测呼吸道合胞体病毒抗原,阳性者作为研究对象,共60例.随机分为两组:治疗组30例;对照组30例.两组患儿均采用相同的综合性治疗,并给予布地奈德混悬液、爱全乐、全乐宁雾化吸入,治疗组在上述基础上加孟鲁司特(顺尔宁)4 mg每晚1次口服;观察各组患儿咳嗽、气喘及肺部啰音情况,并统计住院天数.对所有病例随访3个月,观察各组患儿在此期间再次出现喘息的人数及发病率.结果:治疗组在入院第3天、第7天临床症状、体征评分与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);治疗组住院时间较对照组短,差异有统计学意义(P＜0.05);在随访3个月期间,治疗组有1例出现再次喘息,而对照组有8例,其中2例出现喘息后加孟鲁司特(顺尔宁)口服后未再反复.结论:呼吸道合胞体病毒感染后加用孟鲁司特(顺尔宁)可有效改善临床症状并缩短住院时间.孟鲁司特(顺尔宁)可降低感染引起的气道高反应性,降低病毒感染后喘息的发生率,从而达到预防哮喘的作用.

抗呼吸道合胞体病毒感染用药现况、研发进展和市场趋势

1 呼吸道合胞体病毒感染尽管随着预防性抗体的开发和获准上市,呼吸道合胞体病毒(RSV)相关死亡率已明显下降,但此病毒感染至今仍是婴儿因病毒性疾病死亡的首要原因.RSV也会在中、老年人群中引起细支气管炎、肺炎及使慢性阻塞性肺病恶化,进而显著提高住院率和死亡率.

儿童呼吸道病毒感染的病因治疗

急性呼吸道感染是小儿常见的疾病.病毒在儿童急性呼吸道感染的病原地位十分突出,临床常见的呼吸道病毒主要有呼吸道合胞体病毒(RSV)、流感病毒(InfV)、副流感病毒(PifV)、腺病毒(AdV)、巨细胞病毒(CMV)和肠道病毒(EV).

抗呼吸道合胞体病毒感染的人源单克隆抗体——Motavizumab

呼吸道合胞体病毒(RSV)是诱发婴幼儿及儿童病毒性细支气管炎和肺炎的主要病原体,为有包膜RNA病毒,主要入侵呼吸道上皮细胞.病毒包膜F糖蛋白介导包膜与宿主细胞膜的融合,被感染细胞随之也发生融合,终形成合胞体.不同RSV株的F蛋白序列类似,故而F蛋白可作为治疗靶标.RSV感染性疾病的症状直接由病毒性细胞病变以及对感染的宿主反应所引起.病毒复制与对RSV感染的超常的免疫应答紧密相关,而研究表明,RSV所诱发的细胞因子产生的方式影响病毒复制与宿主免疫应答之间的平衡,这终决定了疾病的表现形式.约有70%的婴儿在出生后1年内以及几乎所有儿童在2岁时均会感染RSV, 而早产儿和患有慢性肺病或先心病的患者罹患严重RSV感染性疾病的风险率高,常需住院治疗,其他高危人群包括老年人、有潜在呼吸系统疾病或心脏疾病者以及免疫力低下者.采用反向遗传学或载体疫苗技术开发的RSV减毒活疫苗有望能控制RSV感染.

呼吸道合胞病毒性毛细支气管炎血清sICAM-1检测的意义

目的: 探讨细胞间粘附分子1(ICAM-1)在呼吸道合胞病毒性毛细支气管炎(RSV毛支)发病中的作用. 方法: 采用 ELISA 法分别检测41例 RSV 毛支患儿急性期和恢复期血清可溶性 ICAM-1(sICAM-1 )水平,并以30例健康儿童为对照组. 结果: RSV 毛支患儿急性期 sICAM-1水平较对照组明显升高[(280.78±57.88)ng/ml和(250.6 2± 46.03)ng/ml,P<0.05].恢复期sICAM-1[(234.09±60.34)ng/ml]明显低于急性期(P<0.01),与对照组比较差异无统计学意义. 结论:RSV毛支患儿体内粘附分子表达增多,结果可能导致气道阻塞和高反应性.

A亚型人呼吸道合胞病毒G基因的克隆、真核表达

目的克隆A亚型人呼吸道合胞病毒(HRSV)G基因,构建G基因的真核表达载体,并进行表达和鉴定.方法自行设计引物,利用RT-PCR技术,从感染HRSV的HEp-2细胞中获得G基因片段,克隆到pGEM-T easy载体,经核酸序列分析,进一步亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),酶切鉴定后,脂质体法转染COS-7细胞,RT-PCR和Western blotting鉴定基因转录和蛋白表达.结果真核表达载体pcDNA3.1(+)G的限制性内切酶分析结果与预期一致,基因序列分析显示没有发生无义突变.转染COS-7细胞后,RT-PCR检测到G基因有转录,Western blotting分析观察到G蛋白特异性的表达条带.结论成功克隆A亚型HRSV G基因,并在真核细胞中获得表达.

穿琥宁治疗小儿呼吸道合胞病毒性肺炎疗效观察

目的:探讨穿琥宁注射液治疗小儿呼吸道合胞病毒性肺炎的临床疗效.方法:将80例呼吸道合胞病毒性肺炎的患儿随机分为观察组40例及对照组40例.观察组用穿琥宁注射液静脉滴注,每天15 mg/kg;而对照组用病毒唑静脉滴注,每天10 mg/kg.治疗过程中每天观察临床症状及体征的变化.结果:观察组各临床症状及体征均较对照组消失早(P＜0.01～P＜0.001);观察组总有效率为95%,而对照组总有效率为80%(P＜0.05).结论:穿琥宁注射液治疗小儿呼吸道合胞病毒性肺炎可提高治愈率,缩短疗程.

基于液相芯片技术的呼吸道病原体多重检测技术的建立

呼吸道感染是临床常见的疾病之一，可由多种病原体引起，包括细菌、病毒、支原体、衣原体等，其临床表现与治疗因病原体不同而存在较大差异(1-4)。研究表明95%的急性上呼吸道疾病和大部分的下呼吸道疾病均由细菌外的病原感染引起，其中以呼吸道病毒为常见，包括呼吸道合胞体病毒(respiratory syncytial virus, RSV)、腺病毒(adenovirus, ADV)、流感病毒A型（Influenza virus A, INFA）、流感病毒B型（Influenza virus B, INFB）、副流感病毒(parainfluenza virus, PIV)等(5,6)。大部分呼吸道病毒具有感染力强、传播快、潜伏期短、发病急等特点，并且新致病性病毒还在不断被发现。据统计，呼吸道和胞病毒、甲型流感、乙型流感和副流感病毒是呼吸道病毒感染中常见的病原体，占病毒感染种类的90%，致死率8%左右，严重危害到公众的健康和安全(7)。因此，建立一种快速准确的诊断方法，不仅有利于病因确诊，也有利于临床采取针对性治疗，同时在病毒的流行病学调查以及阻止病毒的传播与扩散中具有重要的作用。

呼吸道合胞体病毒F蛋白二级结构分析及其B细胞表位预测

目的：分析呼吸道合胞体病毒（RSV） F蛋白的二级结构并预测其B细胞表位。方法分析RSV F蛋白的二级结构，得出RSV F蛋白中可能出现的信号肽序列以及位置。基于同源建模的方法预测RSV F蛋白的三级结构，以三级结构为基础预测F蛋白中可能存在的构象B表位和线性B表位。结果 F蛋白的574个编码氨基酸中占主要比例的是丝氨酸（10．45％）、亮氨酸（10．28％）、天冬酰胺（8．71％）和苏氨酸（8．71％）；可能有7个蛋白结合位点、6个产生螺旋结构的区域；可能存在两个主要的β-折叠片蛋白；F蛋白N-末端第1～25区段为信号肽。 RSV F蛋白头部主要由β-折叠片、无规则卷曲和转角组成，尾部主要由两段长的α-螺旋组成。 RSV F蛋白中可能存在4个构象B表位、8个线性B表位。结论 F蛋白编码氨基酸主要为丝氨酸和亮氨酸，可能有7个蛋白结合位点、6个产生螺旋结构的区域、两个主要的β-折叠片蛋白。RSV F蛋白中可能存在4个构象B表位、8个线性B表位。

189例呼吸道病毒感染患儿联合C反应蛋白检测的临床意义

目的 探讨C反应蛋白(CRP)检测在儿童呼吸道病毒感染中的临床意义,并对其价值进行评估.方法 对该院779例下呼吸道感染患儿的7种呼吸道病毒,流感病毒(ⅣA、B型)、副流感病毒(PⅣⅠ、Ⅱ、Ⅲ型)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)的感染状况进行回顾性分析,并结合血中CRP的检测结果进行探讨.结果 779例呼吸道感染的患儿中阳性标本有189例,阳性率为24.26％.其中单病毒感染117例,占总阳性率的61.90％.两种以上呼吸道病毒混合病毒感染72例,占总阳性率的38.10％.两种以上呼吸道病毒混合感染时,44.44％的患儿血清中CRP阳性,而单病毒感染时CRP阳性率则为24.79％,混合病毒感染组CRP阳性率与单病毒感染组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 儿童发生呼吸道病毒混合感染时,由于机体免疫功能受到抑制,患儿伴有细菌性感染的可能性增大,CRP可以作为重要的监测指标之一.

23-10 洛伐他汀对呼吸道合胞体病毒的体内外活性

生活方式是儿童乳糜泻的重要危险因素

瑞典2～15岁儿童中乳糜泻的发生率不断增加，其可能与剖宫产、孕期尿路感染、出生季节和地点有关。一项新的研究发现，环境和生活方式是乳糜泻发病的重要因素。该研究表明，上述因素可能在早年引起不良的微生物群改变，从而增加乳糜泻风险。而通过推行自然分娩和减少抗生素使用，有助预防乳糜泻的发生。该研究还发现，春季、夏季和秋季出生的儿童乳糜泻风险较高，这说明病毒感染等环境因素可能是危险因素。此外，出生在瑞典南部的儿童相较北部的儿童风险较高。瑞典医生们都知道，每年的呼吸道合胞体病毒（ RSV）、轮状病毒和流感病毒流行一般都开始于南部地区，然后传播到北部，这也证明了病毒感染假说。研究显示，如果母亲超过35岁且收入较高，孩子乳糜泻风险较低。这两个因素说明，这些母亲具有更为健康的生活方式。