首页 > 文献资料
-
围着床期血清差异蛋白质筛选
目的 初步筛选与着床相关的蛋白质.方法 分别采集因输卵管因素接受体外受精-胚胎移植(VF-ET)治疗的妇女胚胎移植后2 d和2周后患者血清,以2周后患者血清人体绒毛膜促性腺激素(β-HCG)为标准,β-HCG＜100 U/L者为着床失败组,共28例.β-HCG＞100 U/L者为着床成功组,共27例.利用2-DE电泳技术对比分离两组间蛋白质谱,分离两组胚胎移植后2 d血清中的差异蛋白质,以MALDI-TOF技术进行蛋白测序.结果 差异蛋白质经质谱测序结果为人结合珠蛋白/触珠蛋白前体,分子量为45861Da.结论 着床成功与失败患者围着床期血清蛋白质谱存在差异,差异蛋白测序证实为人结合珠蛋白/触珠蛋白前体;该蛋白质在早期的血清检测中有可能特异性地反映着床的成败;可进一步研究,做成相关抗体来检测患者血清中的含量,早期预测着床成功性.
关键词： 人结合珠蛋白/触珠蛋白 着床 蛋白质谱 血清 体外受精-胚胎移植 -
不明原因流产与正常早孕妇女血清蛋白质谱
目的研究不明原因流产患者血清蛋白质谱特征,探讨不明原因自发性流产的可能病因.方法采用表面增强激光解离飞行时间质谱技术(SELDI-TOFMS),运用WCX2蛋白质芯片检测39例不明原因流产患者和30例正常早孕血清蛋白质谱,获得的蛋白质谱用Biomarker Wizard软件分析,初步筛选蛋白质峰,结合生物信息学的支持向量机方法建立并测试不明原因流产患者血清蛋白质指纹图谱模型.结果在芯片上捕获到251种蛋白质,经蛋白质质谱仪分析发现不明原因流产患者与正常对照组有29种差异蛋白,从中筛出差异显著的5种蛋白质组成原发不孕患者血清的蛋白质谱佳优化模型,其中质荷比(m/z)分别为8 350,6 954,8 634,8 826的4种蛋白质表达下降,质荷比为(m/z)6 628的蛋白质表达上调.模型经三倍交叉验证实验测定,其敏感性为83.9%,特异性为83.7%,阳性预测值为81.1%.结论不明原因流产患者与正常早孕者血清蛋白质谱存在明显差异,深入研究可能为不明原因流产的病因学提供基础,同时有助于自发性流产血清生物标记物的筛查和发现.
-
应用蛋白质谱建立活动性肺结核病的血清诊断模型
目的 应用蛋白质谱技术研究活动性肺结核病患者的血清诊断标志物,建立诊断模型早期诊断活动性肺结核.方法 应用表面加强激光解吸-电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)和蛋白芯片技术检测264例活动性肺结核患者、其他呼吸疾病患者和正常人血清;应用Ciphergen蛋白芯片3.1.1软件比较、分析血清蛋白峰,找出差异蛋白;应用Biomarker Pattern 5.0软件建立活动性肺结核的诊断模型.结果 129例活动性肺结核血清和135例对照血清蛋白指纹图谱比较,有50个差异蛋白峰(P<0.01).以69例其他呼吸疾病血清和66例健康人血清为对照,选择5个蛋白峰(4360、3311、8160、5723、15173 m/z)建立诊断模型1,该模型诊断活动性肺结核的灵敏度为82.95%,特异性为89.63%,准确率为86.36%.以69例其他呼吸疾病血清为对照,选择3个蛋白峰(5643、4486、4360 m/z)建立诊断模型2,该模型诊断活动性肺结核的灵敏度为96.9%,特异性为97.8%,准确率为97.3%.结论 应用蛋白质谱技术分析肺结核病患者血清可能建立一种新的结核病早期诊断方法 .
关键词： 活动性肺结核 蛋白质谱 表面加强激光解吸-电离飞行时间质谱 血清诊断 -
光动力学疗法过程中小鼠皮肤蛋白质谱变化的研究
目的 寻找皮肤对血卟啉单甲醚光动力学疗法(hematoporphyrin monomethyl ether mediated photodyrnamic therapy,HMME-PDT)应答的蛋白质分子标志物.方法 雌性BALB/c小鼠尾静脉注射血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)10 mg/kg后即刻以532 nm的激光对其皮肤进行照射,功率密度50 mW/cm2,光斑直径1 cm,照光时间20 min;同时设立单纯照光组、单纯光敏剂组以及空白对照组.术后24 h从照射局部皮肤取材,以裂解液提取皮肤蛋白,然后用蛋白质芯片(WCX2)和SELDI蛋白质芯片阅读机检测小鼠皮肤差异蛋白质的表达.结果 HMME-PDT能够明显改变照射局部皮肤蛋白质谱的表达,在质荷比为相对分子质量(Mr)4949～18 828之间,共有7个蛋白质峰的强度发生了显著改变,其中2个蛋白质表达上调,另外5个蛋白质表达下调.单独照光组在Mrl4 927处有1个蛋白质的表达下调,与PDT处理组在该点的变化一致,且与正常对照相比有显著差异.结论 PDT照射能显著改变小鼠皮肤蛋白质谱的表达,单纯照光也能引起个别蛋白的表达发生改变,并且与PDT在该点的表达趋势一致,提示这些差异蛋白质的表达与皮肤对PDT所产生的氧化应激或照光引起的光热效应的应答机制有关.
-
血清蛋白质谱与人工神经网络模型诊断卵巢癌的应用性研究
目的建立筛选卵巢癌血清蛋白质谱与人工神经网络诊断模型的研究.方法用H4(疏水表面)蛋白芯片结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测卵巢癌患者和健康人血清样本的蛋白质谱,同时采用人工神经网络筛选差异蛋白以建立诊断模型.结果用SELDI-TOF-MS技术和H4蛋白芯片从47例卵巢癌和29名健康人血清中,筛选出4个有明显表达差异的蛋白,其质荷比(m/z)分别为5 881、7 553、6 652和9 391.用其中的18名健康人和29例卵巢癌患者样本作训练集和交叉验证后,再用筛选出的4个差异蛋白质建立人工神经网络预测模型.然后,对11名健康人和18例卵巢癌患者样本进行盲法测试,以验证该模型. 结果显示,我们建立的诊断模型对卵巢癌检测的敏感性为100%,特异性为90.9%,阳性率为94.7%.结论血清蛋白质谱与人工神经网络模型对小样本的卵巢癌诊断具有较高的敏感性和特异性,可扩大样本进行深入的应用性研究.
-
颞叶癫痫大鼠突触后致密物中差异性表达蛋白的筛选和鉴定
目的 筛选和鉴定颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)大鼠模型突触后致密物(postsynaptic density,PSD)中差异性表达的蛋白质.方法 建立氯化锂-毛果芸香碱TLE大鼠模型,收集TLE组和健康对照组大鼠新鲜全脑组织,联合应用蔗糖密度梯度离心和膜顺序提取技术提取PSD蛋白质,进行双向凝胶电泳,通过PDQuest图像分析软件筛选TLE组差异性表达的蛋白质点,并应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行鉴定.结果 与健康对照组比较,TLE组存在70个差异性表达PSD蛋白质点,其中表达上调的蛋白质主要包括果糖二磷酸醛缩酶、肌酸激酶和热休克蛋白27,表达下调的蛋白质主要包括微管蛋白、肌动蛋白、中间丝蛋白α和脯氨酰顺反异构酶.结论 TLE大鼠PSD中存在差异性表达蛋白质,其异常表达可能与TLE的形成、发作或神经元保护有关.
-
应用Clin Prot 系统分析结肠腺癌患者血清蛋白表达谱
目的 寻找可能与结肠腺癌相关的血清候选蛋白,为结肠腺癌的综合防治提供重要的理论基础和手段.方法 收集36 例结肠腺癌患者和22 例正常对照组血清,经Clinprot 磁珠纯化,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-FOF-MS) 分析建立相应的蛋白质指纹图谱,应用Clinpro Tools 生物信息学方法研究其血清蛋白表达谱.对不同质荷比(M/Z) 的差异蛋白通过在数据库中的分析比对,筛选出可能与结肠腺癌发病相关的血清候选蛋白.结果 结肠腺癌和正常对照组血清样本蛋白丰度平均变异系数为0.229,与对照组比较,结肠腺癌组有15 种蛋白上调,7 种蛋白下调.选取差异为明显的两个蛋白:M2369.93Da 和M6051.12,建立结肠腺癌组和正常对照组差异表达蛋白平均谱图,采用GA 模型算法,选取差异蛋白,结肠腺癌阳性和阴性识别率为79.7%,准确性结肠癌阳性组为96.1%,结肠癌阴性组为85.5%,预测能力为72.8%.结论 通过液体蛋白芯片飞行时间质谱系统作为分析工具,发现15种蛋白上调,7 种蛋白下调,这些蛋白可能为潜在的结肠腺癌肿瘤标志物.
关键词： 结肠腺癌 液体蛋白芯片飞行时间质谱系统 蛋白质谱 -
应用蛋白质谱建立肺隐球菌病的血清诊断模型
目的 应用蛋白质谱技术分析肺隐球菌病患者的血清诊断标志物,建立肺隐球菌病的早期诊断模型.方法 应用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱技术和蛋白芯片技术检测30例肺隐球菌病患者、30例社区获得性肺炎患者和31例正常健康人的血清;用Proteinchip Sohware 3.2.1软件采集血清蛋白质表达谱并进行标准化处理,用Biomarker Wizard软件提取信噪比大于5的蛋白峰进行后续统计分析,用SPSS 21.0软件对各组蛋白表达谱进行单因素方差分析,对存在差异表达的蛋白峰采用BPS5.0软件建立诊断决策模型并进行验证.结果 对91份血清样本的血清蛋白飞行质谱数据进行两两比较得到差异表达的蛋白峰有87个,筛选出可用于建立模型的4个蛋白峰(M2709_31、M5332_43、M7564_22、M11669_2),所建模型诊断肺隐球菌病的灵敏度为93.33％.结论 应用蛋白质谱技术分析肺隐球菌病患者的血清蛋白质表达谱可建立一种新的肺隐球菌病早期诊断方法.
-
多囊卵巢综合征患者在不同疾病状态下蛋白质谱的变化
目的 了解多囊卵巢综合征(PCOS)患者不同疾病状态下血清蛋白质谱变化.方法 采用表面增强激光解离飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)弱阳离子交换蛋白芯片对PCOS患者胰岛素抵抗(IR)、非胰岛素抵抗(non-IR)患者和正常对照者(每组各30例)的血清蛋白质谱进行检测.结果 筛查出PCOS IR组与正常组相比有27个差异蛋白质峰,PCOS non-IR组与正常组相比有17个差异蛋白质峰,PCOS IR和non-IR组相比有19个差异蛋白质峰.进一步运用支持向量机(SVM)在差异蛋白质中筛选标志性蛋白质建立了PCOS IR、PCOS non-IR和IR诊断模型,3组模型的敏感性、特异性、阳性及阴性预测值均达80%以上.结论 PCOS患者在IR和non-IR两种疾病状态下血清蛋白质表达谱发生显著的变化;运用SELDI-TOF MS技术结合SVM可以快速而有效地建立PCOS诊断模型.
-
甲状腺相关眼病患者泪液中溶菌酶C与乳铁蛋白的表达
目的 比较甲状腺相关性眼病(TAO)患者与健康人泪液中的溶菌酶C和乳铁蛋白的表达差异.方法 泪液样品采自TAO活跃期的患者25眼(病例组)和年龄、性别相匹配的健康志愿者25眼(对照组).将泪液标本进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳,采用15％的凝胶分离两组样品的差异蛋白条带,收集标记的差异蛋白条带进行凝胶内胰蛋白酶消化,然后进行质谱分析,以确定在差异条带中的蛋白质组分.Scaffold搜索引擎分析质谱的结果,进行蛋白质的鉴定.结果 通过对差异蛋白条带的质谱分析,发现在TAO患者泪液中大多数蛋白表现为下调或者缺失,但是溶菌酶C和乳铁蛋白却发生了上调.鉴定蛋白的相对定量比值(病例/对照):溶菌酶C为4.88,乳铁蛋白为1.60.结论 TAO患者泪液中的溶菌酶C和乳铁蛋白均发生上调,说明两者可能参与了TAO的炎症过程.
-
急性白血病血清蛋白质谱特征研究
目的 应用差异蛋白质谱的方法研究急性白血病患者与健康人血清中蛋白质谱的表达差异.方法 提取51例急性白血病患者和10名健康志愿者的外周血血清,去除血清样品中的高丰度蛋白,用双向凝胶电泳方法进行血清低丰度蛋白质的分离,找出急性白血病患者与健康人血清中的差异蛋白点,切出差异蛋白点后进行脱色、胶内酶切、肽段提取,表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱(MALDI TOF/TOF MS)进行分析获得肽质量指纹图.使用蛋白质数据库MSDB提供的Masort检索程序进行评价.结果 成组t检验结果显示,与健康对照组比较,急性白血病患者血清有19个差异有统计学意义的异常表达蛋白点(P＜0.05),经过质谱鉴定α1-胰蛋白酶抑制剂(P＜0.01)、前白蛋白(P＜0.01)、胰蛋白酶抑制剂(P＜0.01)、载脂蛋白E(P＜0.01)、载脂蛋白A-Ⅳ(P＜0.01)为表达下降,而视黄醇结合蛋白(P＜0.05)、结合珠蛋白HP2(P ＜0.05)、血清外源性凝集素(P＜0.05)、H因子同源物(P＜0.05)、血清淀粉样蛋白A1(P＜0.01)为表达上调,进一步分层分析发现血清外源性凝集素表达高的急性白血病患者治疗效果较差.结论 急性白血病患者外周血血清中存在多种蛋白质的差异表达,血清外源性凝集素的表达差异与治疗效果相关,这些蛋白的差异表达可作为新的急性白血病诊断标志或者预后指标.
-
胃癌患者血清蛋白质指纹图谱的初步探讨
目的:探讨胃癌发生、发展过程中患者血清蛋白质指纹图谱,筛选与胃癌病理分期密切相关的蛋白质分子.方法:用WCX2(弱阳离子交换芯片)蛋白芯片结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测30例胃癌患者和26例健康者、3例胃良性病患者血清样本的蛋白质谱,同时采用相关计算机软件筛选不同组别间差异蛋白.结果:初步筛选出对早期胃癌有代表性的4个差异蛋白,质荷比(M/Z)分别为6193、6363、16073和16317;2个与胃癌脏器转移相关的差异蛋白(32463、34906M/Z).结论:SELDI-TOF-MS蛋白质芯片用于胃癌患者血清蛋白质谱分析可筛选出有意义的差异表达蛋白,有进一步研究的价值.
-
蛋白质组学与机械性脑损伤
1994年由Williams和澳大利亚悉尼Maquarie大学的Marc Wilkins等人首先提出了"蛋白质组(proteome)"这一概念[1,2],蛋白质组一词,源于蛋白质(protein)与基因组(genome)两个词的杂合,近年来,迅速发展成为一门新兴学科-蛋白质组学(proteomics).
-
RCCS模拟微重力对铜绿假单胞菌毒力编码基因和蛋白质谱的影响
目的 探讨三维细胞培养系统( RCCS)模拟微重力环境对铜绿假单胞菌( PA)毒力编码基因表达及菌体蛋白质谱的影响. 方法 应用RCCS建立PA ATCC 27853模拟微重力培养体系,实验组旋转瓶轴心与地面平行模拟微重力环境,对照组即重力组旋转瓶轴心与地面垂直;采用实时荧光定量聚合酶链反应( Real-time PCR)检测cDNA样本中毒力编码基因外毒素(toxA)、弹性蛋白酶(lasB)、鼠李脂糖(rhlA)、绿脓菌素(phza2)mRNA的相对含量;利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术及CM10芯片检测PA菌体蛋白质谱. 结果 RCCS模拟微重力处理14 d后,Real-time PCR检测实验组cDNA样本中toxA、lasB、rhlA、phza2 毒力编码基因相对含量均低于对照组( P<0. 05 );表面增强激光解吸电离飞行时间质谱检测发现有82种小分子菌体蛋白质[荷比在(2~20) × 103 Da范围内],两组42种菌体蛋白相对含量表达差异有统计学意义,实验组20种蛋白质相对含量表达高于对照组,22种蛋白质相对含量表达低于对照组( P<0. 05 ). 结论 RCCS模拟微重力培养条件下PA毒力编码基因表达和菌体蛋白质谱发生显著变化.
-
利用二维色谱与质谱联用技术检测大肠癌蛋白质谱差异表达
大肠癌是当前严重危害人类健康的恶性肿瘤.全世界每年大约有100万大肠癌新发例,49.2万人死于大肠癌[1].近年来,大肠癌的诊断及综合治疗水平取得了很大的进展,但其发病率和死亡率并未发生根本性的变化,因此大肠癌复杂的发病机制需要继续不断的研究.肿瘤蛋白质组学是近年来发展起来的新兴科学,随着技术的不同完善,在临床研究中越受青睐,应用越来越广.本研究应用蛋白质组学技术中的重要方法二维色谱与质谱联用技术探讨Dukes B期大肠癌与癌旁正常组织的蛋白质的差异性,为进一步研究大肠癌的病因、机制、转移及治疗提供依据.
-
双向电泳联合MALDI-TOF-MS技术在筛选食管癌铂类耐药患者中的应用研究
目的:采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测食管癌(EC)患者化疗敏感性血清蛋白质谱,指导临床EC患者化疗方案的选择.方法:收集2013年1月至2014年6月我院收治的EC术后复发并行含铂化疗的患者40例,按照化疗疗效分为敏感组和耐药组.将两组蛋白质双向凝胶电泳图谱用ImageMaster 2D platinum 5.0软件分析并匹配,筛选出两组差异斑点,并采用MALDI-TOF-MS技术检测EC患者化疗敏感性血清蛋白质谱.结果:两组差异斑点共有68个,以耐药组为参照,敏感组患者血清蛋白下调的斑点有42个,上调的斑点有26个.从这68个差异斑点中筛选出8个斑点进行质谱鉴定,通过数据库检索分析和鉴定终确定上述斑点所对应的蛋白质名称分别为Kininogen-1,Alpha-2-HS-glycoprotein,Fibrinogen beta chain,Clusterin,Retinol-binding protein 4,Beta-2-glycoprotein l,Ig kappa chain C region,Complement C4-A.结论:基于铂类化疗的EC敏感患者和耐药患者间存在差异表达蛋白.
关键词： MALDI-TOF-MS 化疗耐药 食管癌 蛋白质谱 -
蛋白指纹图谱技术分析炎症性肠病血清蛋白质组学特征的诊断价值
目的探索 IBD 血清差异蛋白指纹图谱的诊断模型及其临床应用价值。方法应用弱阳离子磁珠联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI‐TOF‐MS）技术对72例 IBD 患者（其中CD 54例、UC 18例）和44名健康对照者的血清蛋白质谱进行分析，将3组两两对比，采用 Wilcoxon 秩和检验筛选出 P＜0．05的差异蛋白质峰，通过遗传算法结合支持向量机模型的方法筛选出佳诊断模型，用留一法评估模型的预测效果。结果 CD 组与健康对照组，UC 组与健康对照组，CD 组与 UC 组中分别筛选出差异大的10个蛋白质峰。质量／电荷比（M ／Z）值为3275．29，4963．91，4980．53，5336．90的4个蛋白质峰组合所建立的诊断模型能很好地区分 CD 组与健康对照组，其诊断 CD 的特异度为97．7％，敏感度为92．6％。 M ／Z 值为2272．41，2660．42，3029．77，5002．78的4个蛋白质峰组合所建立的诊断模型能很好地区分 UC 组与健康对照组，其诊断 UC 的特异度为100．0％，敏感度为94．4％。M ／Z 值为2082．63，2210．64，4039．02，4298．30，4978．03，5002．22的6个蛋白质峰组合模型，诊断 CD 的特异度为50．0％，敏感度为88．9％。结论 MALDI‐TOF‐MS 技术联合遗传算法结合支持向量机模型所建立的 CD 与 UC 血清差异蛋白的诊断模型，对 IBD 具有较高的诊断价值。
-
蛋白质谱分析在肝胆胰肿瘤诊治中的应用
表面增强激光解析离子化-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)是近年用来研究蛋白质组学的一项新的技术,具有高通量、高效率、高灵敏度等特点,可以快速分析各种生物样品中蛋白质组的组成,在基础医学研究及临床疾病诊断方面应用日益增多.现就其原理、特点和在肝胆胰肿瘤中的应用及发展前景作一综述.
关键词： 蛋白质谱 SELDI-TOF-MS质谱分析 肝胆胰 肿瘤 综述文献 -
应用液体蛋白芯片飞行时间质谱系统研究卵巢癌的血清蛋白表达谱
目的:应用液体蛋白芯片飞行时间质谱系统分析卵巢癌的血清蛋白质表达谱,寻找具有潜在诊断意义的血清标志物,以利于卵巢癌的早期诊断.方法:收集2组卵巢肿瘤患者(其中卵巢浆液性乳头状囊腺癌20例、卵巢浆液性乳头状囊腺瘤9例)和1组正常人(10例)血清样本,经ClinProt磁珠纯化、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析及ClinProTools生物信息学方法研究其血清蛋白表达谱.每组样品重复检测3次.结果:3组血清样品的蛋白丰度的平均变异系数(CV值),分别为0.151、0.246和0.147,证实该试验标准具有良好重复性.质荷比(m/z)为1451和2673的蛋白峰能较好地鉴别卵巢癌和非癌组.结论:液体蛋白芯片飞行时间质谱系统作为研究蛋白表达谱的工具,具有较好的重复性与精度,筛选得到的m/z为1451和2673的蛋白可能为潜在的卵巢癌肿瘤标志物.
关键词： 卵巢肿瘤 液体蛋白芯片飞行质谱 蛋白质谱 早期诊断 -
血清蛋白质指纹图谱用于胃癌早期诊断的研究
目的:探讨血清蛋白质指纹图谱用于胃癌早期诊断的可行性.方法:用弱阳离子交换芯片蛋白芯片结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术检测血清蛋白质指纹图谱.以30例胃癌(10例早期、14例进展期、6例伴远隔脏器转移)与30例正常对照为训练组建立早期胃癌决策树分类器模型,并用盲筛方法对未参加建模的27例胃癌患者及7例良性病、19例健康者进行验证.结果:初步建立了3个对早期胃癌诊断预警分类效果较好的模型,参加盲筛的9例早期胃癌患者均被准确鉴别,模型的总体敏感性96.3%,特异性73.1%～84.6%;阴性预测值94.7%～95.7%;阳性预测值78.9%～86.7%.结论:虽然本实验建立的用于胃癌患者早期诊断预警模型在与胃良性病鉴别上效果不理想,但可有效用于人群中的早期胃癌初步筛查,有进一步研究的价值.
