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Wnt7a在红藻氨酸致痫大鼠颞叶癫痫形成过程中的变化
目的 探讨Wnt7a mRNA和蛋白在红藻氨酸(KA)致痫大鼠颞叶癫痫形成过程中的时间变化过程,明确Wnt7a是否参与颞叶癫痫海马神经发生. 方法 利用生后30天的雄性SD大鼠(哈尔滨医科大学附属第二医院动物室提供),经皮下注射KA制成颞叶癫痫动物模型后,应用Real-time PCR和Western blot技术检测KA后不同时期(急性期、自发性反复癫痫形成初期和慢性癫痫稳定形成期)实验组和生理盐水(NS)对照组(每组动物各六只)大鼠海马组织中Wnt7a mRNA和蛋白的表达. 结果 KA致痫后在颞叶癫痫形成过程中,各时期KA组动物海马组织Wnt7a mRNA的表达同相应时期NS组相比,在急性期显著下降(NS组:1.000±0.000,KA组:0.304±0.113,P＜0.001),在自发性反复癫痫形成初期增高且差异有统计学意义(NS组:1.000±0.000,KA组:3.369±1.455,P =0.010),在慢性癫痫稳定形成期增高且差异有统计学意义(NS组:1.000±0.000,KA组:5.845±3.524,P =0.020).KA组各时期的动物海马组织Wnt7a mRNA的表达相比较,癫痫形成初期及慢性期均较急性期显著增高(P＜0.05),慢性期较癫痫形成初期增高但差异无统计学意义(P＞0.05).大鼠海马组织中Wnt7a蛋白的表达无论在时间上还是在组别间差异均无统计学意义. 结论 Wnt7a可能调控KA点燃颞叶癫痫大鼠的海马神经发生,参与颞叶癫痫的形成.
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补肾调经方和逍遥丸对超促排卵小鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响
目的 观察补肾调经方和逍遥丸对超促排卵小鼠子宫内膜Wnt 通路的影响.方法 将 90 只雌性小鼠随机分为 6 组:补肾高、低剂量组,疏肝高、低剂量组,控制性超促排卵组(COH)和空白对照组,每组 15 只.各组每日腹腔注射生理盐水,连续8 d;第 9 天,除空白对照组腹腔注射生理盐水外,各组注射孕马血清,48 h 后注射人绒毛膜促性腺激素.各组小鼠分别与雄鼠按 1:1 合笼,次晨观察妊娠情况后给药.补肾高、低剂量组分别给予补肾调经方口服液(5.4 和 2.7 g/ml),疏肝高、低剂量组分别给予逍遥丸混悬液(0.6 和 0.3 g/ml), COH 组和空白对照组给予生理盐水,连续 4 d.处死小鼠并取材,应用 RT-PCR 方法分别测定小鼠子宫 Wnt7a 和β-catenin 的表达情况.结果 与空白对照组比较,COH 组 Wnt7a 和 β-catenin 表达降低;与 COH 组比较,补肾高剂量组和疏肝高剂量组Wnt7a 和 β-catenin 表达增加(P < 0.05);补肾高剂量组与疏肝高剂量组间比较无统计学意义(P > 0.05).结论 补肾调经方、逍遥丸改善小鼠子宫内膜容受性,促进胚胎着床,其机制与上调 Wnt7a 和 β-catenin 表达水平,激活 Wnt/β-catenin 信号转导通路有关.
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莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠Wnt7a和APC表达的影响
目的：观察莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠Wnt7a和APC表达的影响。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型（ MCAO）。将50只Sprague-Dawley 大鼠随机分为假手术组，模型组，莫诺苷小、中、大剂量组（30 mg／kg、90mg／kg、270 mg／kg）。利用蛋白免疫印迹法检测Wnt7a和APC表达变化。结果造模7 d，模型组大鼠皮层Wnt7a的表达比假手术组显著升高，APC表达显著下降；与模型组相比，莫诺苷大剂量组Wnt7a表达明显升高；莫诺苷小、中、大剂量组APC的表达显著降低。结论莫诺苷可以促进缺血性脑损伤后Wnt7a表达，抑制APC表达，从而激活Wnt信号通路。
关键词： 莫诺苷 Wnt7a 结肠腺瘤样息肉病蛋白 脑缺血 再灌注 -
Wnt7a在BMSCs成骨分化中的作用和机制
目的 探索Wnt7a在骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化中的作用和机制.方法 分离和培养人BMSCs,使用lipo2000在BMSCs中转染干扰Wnt7a和mock寡核苷酸序列,3d后通过Westen Blot 分析寡核苷酸干扰序列siRNA-Wnt7a的干扰效果.诱导培养10d后通过Westen Blot分析BMSCs细胞沉默Wnt7a对骨标志蛋白osteocalcin和骨调控蛋白Runx2表达的影响.诱导培养2周后通过Alizarin S Red染色检测在BMSCs中沉默Wnt7a对骨诱导的影响.结果 在BMSCs中转染寡核苷酸干扰序列Wnt7a和mock 对照序列,3d后Western Blot结果显示寡核苷酸干扰序列Wnt7a可明显降低BMSCs中Wnt7a的表达.诱导培养10d后通过Western Blot试验发现沉默Wnt7a后骨分化标志蛋白osteocalcin表达降低;同时检测到诱导培养10d后,BMSCs沉默Wnt7a组Runx2表达降低.诱导培养2周后通过Alizarin S Red染色显示骨形成受阻.结论 Wnt7a在BMSCs成骨分化中通过激活骨调控蛋白Runx2促进骨分化标志蛋白osteocalcin,在BMSCs成骨形成中扮演着重要角色.
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Wnt7a及其受体Fzd5在大肠癌中的表达及意义
目的 探讨Wnt7a及其受体Frizzled(Fzd)5在大肠癌中的表达及关系,揭示大肠癌发生发展的可能机制.方法 收集大肠癌标本80例,以癌旁正常组织作为对照.qRT-PCR技术检测Wnt7a及其受体Fzd5在大肠癌及癌旁正常组织中mRNA水平的变化.Western印迹方法检测Wnt7a及其受体Fzd5在蛋白水平的变化,免疫组化检测Wnt7a及其受体Fzd5的表达变化及分布特点,同时观察Wnt7a及其受体Fzd5与大肠癌临床病理参数的关系.结果 与癌旁正常组织比较,大肠癌组织中Wnt7a及其受体Fzd5在mRNA及蛋白水平均明显增高(P<0.05);免疫组化及Western印迹结果显示,Wnt7a及其受体Fzd5均在细胞质表达,且大肠癌组织的表达强度明显高于癌旁正常组织(P<0.05).相关性分析表明,Wnt7a与受体Fzd5的表达均与大肠癌的体积、Duke分级及是否伴有淋巴结转移具有明显的相关性(P<0.05),且Wnt7a与受体Fzd5两者之间呈正相关.结论 Wnt7a可能通过与受体Fzd5的结合激活Wnt信号,参与了大肠癌的发生与发展.
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消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响
目的:探讨消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响.方法:雌性8～12周龄SD大鼠,采用自体移植法手术造模成功后,随机分为模型组、西药组、消瘤方高剂量与低剂量组;另设正常组、假手术组为对照.模型组和假手术组灌胃0.9％ NaCl溶液,西药组灌胃丹那唑混悬液,消瘤方高、低剂量组灌胃不同剂量(55.0、27.5 g· kg-1·d-1)的消瘤方药液,连续给药4周.剖腹观察子宫内膜组织种植及生长情况,并采用Western-blot法检测药物干预后模型大鼠在位及异位子宫内膜细胞Wnt7a、β-catenin蛋白表达的变化.结果:模型组异位内膜组织生长良好,中药高剂量与西药组异位内膜组织萎缩,而各组在位的子宫内膜组织肉眼观察无明显变化;与模型组比较,中药高剂量组和西药组在位、异位内膜细胞中Wnt7a、β-catenin蛋白的表达水平下降(P＜0.05),且均优于中药低剂量组(P＜0.05).结论:消瘤方可促进子宫内膜细胞凋亡,并可抑制Wnt通路的关键调节因子.
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Wnt7a/PCP信号通路在肾衰营养胶囊改善CRF大鼠骨骼肌萎缩中的作用
目的 探讨Wnt7a/PCP信号通路在肾衰营养胶囊改善CRF大鼠骨骼肌萎缩中的作用及机制.方法 将大鼠随机分为正常组、模型组、中药组和开同组,采用切除5/6肾并予4％酪蛋白饲料喂养制作CRF营养不良大鼠模型.采用免疫组化法检测TA中Myogenin和MyoD的表达;采用Western blot检测Wnt7a/PCP信号通路中的蛋白表达.结果 肾衰营养胶囊增加CRF大鼠体重和骨骼肌质量,增加TA中Myogenin和MyoD蛋白的表达,促进骨骼肌组织Wnt7a/PCP信号通路中蛋白表达上调.结论 肾衰营养胶囊具有改善CRF模型大鼠骨骼肌萎缩的作用,其机制可能与上调骨骼肌Wnt7a/PCP信号通路、促进MSC增殖分化相关.
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益肾活血丸改善子宫内膜容受性作用机制研究
目的:观察益肾活血丸改善子宫内膜容受性的情况以及该药治疗本病的作用机理.方法:试验组25例,选取10例做自身前后对照;对照组23例,选取8例做自身前后对照.2组自身对照患者分别于治疗前及治疗后排卵后7～10天刮取少量子宫内膜,余患者仅于治疗后排卵后7～8天刮取内膜,用半定量RT-PCR技术测定子宫内膜中HOXA10、HOXA 11、Wnt7a的表达量,并对HOXA10、HOXA 11与Wnt7a的关系进行相关性研究.结果:经过3个月经周期的治疗后,试验组、对照组中行自身前后对照患者子宫内膜中HOXA10 mRNA、HOXA11 mRNA、Wnt7a mRNA表达量均较治疗前明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).经过3个月经周期的治疗后,试验组子宫内膜中HOXA 10 mRNA、HOXA11 mRNA表达量稍高于对照组,差异无统计学意义:试验组子宫内膜中Wnt7a表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).HOXA10 mRNA与Wnt7a mRNA在子宫内膜容受性建立过程中呈高度正相关,相关系数r=0.842,P=0.000＜0.01,提示二者存在明显的直线相关关系.HOXA11 mRNA与Wnt7a mRNA在子宫内膜容受性建立过程中呈高度正相关,相关系数r=0.864,P=0.000＜0.01,提示二者存在明显的直线相关关系.结论:HOXA11可能与HOXA10一样参与了子宫内膜容受性的建立.中成药益肾活血丸可能通过经典Wnt/β-catenin信号通路改善肾虚血瘀型多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜容受性.
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Wnt7a蛋白在IFN-γ促神经干细胞增殖中的影响
目的 研究γ干扰素(IFN-γ)对神经干细胞的增殖和自我更新能力的影响;Wnt7a蛋白在IFN-γ促神经干细胞增殖和增强自我更新能力的机制.方法 从胎鼠端脑获取原代神经干细胞进行原代培养,分别添加一定浓度IFN-γ溶液和PBS溶液,分为IFN-γ处理组和PBS对照组,计算神经球体面积,细胞免疫荧光检测神经干细胞BrdU增值能力,蛋白免疫印迹检测神经干细胞IFN-γ信号通路蛋白pSTAT1和Wnt7a信号通路蛋白.结果 形态学显示IFN-γ增加神经球面积和BrdU+细胞数目,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01);蛋白免疫印迹结果显示IFN-γ促进了pSTAT1和Wnt7a蛋白增加,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 IFN-γ增强了神经干细胞的自我更新能力和增殖能力,并且激活了Wnt7a信号通路.
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Wnt7a-Akt/mTOR信号通路在肾衰营养胶囊改善慢性肾衰竭大鼠骨骼肌萎缩中的作用
目的 探讨Wnt7a-Akt/mTOR信号通路在肾衰营养胶囊改善慢性肾衰竭(CRF)大鼠骨骼肌萎缩中的作用及机制.方法采用切除5/6肾的方法制作CRF模型,予4%酪蛋白饲料喂养制作CRF营养不良大鼠模型.将大鼠随机分为正常组、模型组、中药组和开同组.采用组织病理学检测TA横截面积并计算肌纤维面积分布;采用同位素14+C-苯丙氨酸掺入法检测肌肉蛋白合成;采用Western blot检测Wnt7a-Akt/mTOR信号通路中的蛋白表达.结果 肾衰营养胶囊增加了CRF大鼠体质量和骨骼肌质量的作用,形态学表现为TA横截面积增加,促进蛋白质合成增加以及骨骼肌组织Wnt7a-Akt/mTOR信号通路中蛋白表达上调.结论肾衰营养胶囊具有改善CRF模型大鼠骨骼肌萎缩的作用,其机制可能上调骨骼肌Wnt7a-Akt/mTOR信号通路和促进骨骼肌蛋白质合成相关.
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苯并(a)芘通过干扰Wnt7a影响小鼠胚胎着床
目的:苯并(a)芘(benzo(a)pyrene,BaP)被证实是对生殖有不良影响的雌激素类似物,研究发现苯并(a)芘影响胚胎着床,本研究检测BaP对早孕小鼠子宫中Wnt信号通路的影响,以探讨其干扰胚胎着床的机制.方法:将成年雌雄昆明鼠进行交配,次日见阴栓记为妊娠第1天(D1).将孕鼠随机分为玉米油对照组(n=45)和BaP处理组(n=45),玉米油对照组从妊娠第1天开始给予玉米油灌胃,BaP处理组则给予0.2 mg/(kg·d)的BaP进行灌胃,直至妊娠的第4、5、6天(D4、D5、D6)分别处死,收取子宫材料,计数着床点数目,采用荧光定量PCR,免疫组化法,Western blot分别检测所收集子宫内膜材料中Wnt信号通路相关基因表达情况.结果:苯并(a)芘染毒后,引起胚胎着床数下降,差异具有统计学意义(P=0.000);荧光定量PCR显示Wnt7a mRNA水平在BaP组较对照组表达下降,差异具有统计学意义(P=0.000);而β-catenin mRNA在BaP组水平升高,差异具有统计学意义(P=0.002、P=0.003、P=0.011);Western blot和免疫组化也均显示BaP染毒后Wnt7a的表达下降,β-catenin的表达有所上升.结论:苯并(a)芘可能通过干扰Wnt7a、β-catenin的表达影响小鼠胚胎着床.
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Wnt7a对肝癌细胞凋亡、迁移及侵袭的影响
目的:检测Wnt7a在肝癌中的表达,分析Wnt7a对肝癌细胞活性、凋亡、迁移及侵袭的影响,探讨Wnt7a在肝癌中的作用.方法:分别采用免疫组织化学染色和Western blot检测组织和细胞系中Wnt7a的表达情况;Hep3B细胞经人重组Wnt7a蛋白(rWnt7a)处理后,MTT法检测细胞活性改变,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,Transwell分析细胞迁移及侵袭能力变化.结果:相对于癌旁组织,肿瘤组织低表达Wnt7a蛋白;经rWnt7a处理后,Hep3B细胞活性降低、细胞凋亡增多且迁移与侵袭能力下降.结论:Wnt7a蛋白能抑制Hep3B细胞生长、迁移与侵袭能力,可能在肝癌中发挥抑癌作用.
