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川芎嗪对白介素-1β诱导退变的椎间盘终板软骨细胞的保护作用
目的:研究川芎嗪对白介素-1β (IL-1β)诱导退变的终板软骨细胞的影响.方法:体外分离培养大鼠椎间盘终板软骨细胞,并用IL-1β和川芎嗪处理,进行细胞增殖、细胞免疫化学染色和RT-PCR检测.结果:川芎嗪(6.25-25.00μmol/L)逆转IL-1β对大鼠终板软骨细胞增殖的抑制影响,抑制IL-1 β诱导的软骨细胞IL-1 β、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、环氧化酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS mRNA)过量表达,逆转IL-1 β对于C012-1、Aggrecan、MMP-13和ADAMTS-5 mRNA表达的影响,增加IL-1β诱导后Ⅱ型胶原的蛋白表达.结论:本研究证实川芎嗪可以抑制IL-1 β诱导后软骨细胞的退变表现.
关键词： 川芎嗪 白介素-1β 软骨细胞 Ⅱ型胶原 基质金属蛋白酶-13 -
痹痛灵颗粒含药血清对家兔关节软骨细胞体外培养的影响
目的:研究痹痛灵颗粒对家兔关节软骨细胞体外培养的影响.方法:将痹痛灵颗粒按2ml/kg给予新西兰兔灌胃,连续3天,制备含药血清;取体外培养兔软骨细胞,设立不同浓度痹痛灵颗粒含药血清组及空白血清组、实验对照组、抗骨质增生胶囊含药血清组,观察各组对一氧化氮合酶(NOS)及超氧化物歧化酶(SOD)的影响.结果:痹痛灵颗粒可显著提高SOD活性,且降低NOS活性.结论:痹痛灵颗粒能有效防治骨性关节炎,其作用机制可能与抑制血清NO表达,激活SOD有关.
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淫羊藿苷含药血清对兔软骨细胞增殖及糖胺聚糖分泌的影响
目的:观察不同浓度淫羊藿苷含药血清对兔膝软骨细胞增殖率及糖胺聚糖(GAG)分泌的影响.方法:将3周龄健康新西兰大白兔后肢膝关节分离培养软骨细胞进行鉴定,用制备低、中、高浓度淫羊藿苷(ICA-L、ICA-M、ICA-H)及低剂量仙灵骨葆胶囊(XLGB)含药血清干预分离培养软骨细胞,形态学观察软骨细胞及MTT检测细胞增殖率,邻联甲苯胺(DMB)染色法检测细胞内GAG含量.结果:与对照组比较,空白血清组及含药血清组均使兔软骨细胞大量增殖(P＜0.01);XLGB组和ICA-L组细胞增殖率较空白血清组显著增高(P＜0.01),ICA-L组明显.与对照组比较,空白血清组及XLGB组、ICA-L组、ICA-M组均使兔软骨细胞GAG分泌增多(P＜0.01),其中,ICA-L组分泌GAG多.结论:低浓度淫羊藿苷含药血清对兔软骨细胞增殖率及其分泌GAG功能强大,单纯淫羊藿苷原液对软骨细胞生长有抑制作用,经过生物转化后的含药血清药效与浓度非正比关系.
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壮骨健膝方对IL-1 β诱导后软骨细胞表达Caveolin-1、p-p38、MMP-3、MMP-13及TNF-α的影响
目的:观察壮骨健膝方对IL-1 β诱导后软骨细胞中Caveolin-1、p-p38及其培养液中MMP-3、MMP-13和TNF-α表达的影响,探讨该方保护关节软骨的机制.方法:制备兔含药血清;取新西兰大白兔膝关节第二代软骨细胞,以10ng/mL IL-1β进行诱导,48h后随机分为空白血清组、含药血清组、阻滞剂A组、阻滞剂B组,并设未诱导的细胞为正常对照组,分别用不同方法干预6h后,检测软骨细胞及其培养液中上述5个指标的表达.结果:空白血清组5个指标的表达均高于其它各组(P＜0.05),而3个干预组均能降低其表达(P＜0.05),其中含药血清与SB203580联用的阻滞剂B组效果明显.结论:壮骨健膝方对关节软骨的保护作用可能与其抑制Caveolinp38MAPK信号通路的激活,进而降低软骨细胞表达MMP-3、MMP-13及TNF-α有关.
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仙灵骨葆胶囊含药血清对兔软骨细胞增殖及分泌功能的影响
目的:通过体外软骨细胞培养的方法,观察仙灵骨葆胶囊含药血清对新西兰兔膝软骨细胞增殖凋亡及糖胺聚糖(GAG)分泌的影响.方法:将新西兰大白兔后肢膝关节软骨细胞分离培养,化学染色鉴定,用4组不同浓度仙灵骨葆胶囊含药血清干预分离软骨细胞,观察其形态学,观察软骨细胞及MTT检测细胞增殖率,邻联甲苯胺(DMB)染色法检测细胞内GAG含量.结果:空白血清组及不同剂量含药血清组均使兔软骨细胞大量增殖(P＜0.01),且强弱依次为低浓度组＞中浓度组＞空白组＞高浓度组＞对照组;空白血清组及不同浓度的含药血清组均使兔软骨细胞GAG的合成增多(P＜0.01),且强弱依次为高浓度组＞低浓度组＞中浓度组＞空白组＞对照组.结论:仙灵骨葆胶囊各浓度含药血清可不同程度地刺激兔软骨细胞增殖,分泌GAG,低浓度综合作用强.
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骨痹舒含药血清对IL-1β作用下关节软骨细胞表达Type-Ⅱ Collagen、MMP-1、MMP-13的影响
目的:观察骨痹舒含药血清对IL-1β作用下体外培养的兔关节软骨细胞表达Coll-Ⅱ、MMP-1、MMP-13的影响,探讨骨痹舒防治OA的作用机制.方法:获取1月龄兔关节软骨细胞,取第1代细胞用于实验.实验分为空白组、模型组、骨痹舒组、抗骨增生组4组,培养第4d时,模型组、骨痹舒组及抗骨增生组分别加入IL-1β10ng/mL继续培养,分别在培养后24、48、72h用In-cell Western法检测各蛋白表达情况.结果:各时间点空白组与模型组Coll-Ⅱ、MMP-1及MMP-13表达差异均有统计学意义(P<0.05),骨痹舒组较模型组Coll-Ⅱ表达在48、72h时间点有显著性差异(P<0.05),MMP-1及MMP-13表达在各时间点均有显著性差异(P<0.05).结论:骨痹舒能有效抑制IL-1β对Coll-Ⅱ的降解和破坏作用,能抑制IL-1β对MMP-1、MMP-13的诱导和激活作用.
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补肾壮筋汤对兔膝骨关节炎软骨形态学和骨架蛋白ROCK、Cofilin、Phospho-Cofilin、LIMK1和Phospho-LIMK1的影响
目的:探讨补肾壮筋汤对兔膝骨性关节炎(OA)模型形态学和细胞骨架蛋白的影响.方法:将48只3月龄新西兰大白兔随机分成4组,每组12只,分别为空白组、模型组、低剂量组和高剂量组,用Hulth法造成早期OA模型.空白组常规喂养;模型组以0.9％氯化钠溶液灌胃;低剂量组以补肾壮筋汤10.5g/kg灌胃,每天1次;高剂量组10.5g/kg灌胃补肾壮筋汤灌胃,每天2次,持续4周.采用HE染色观察软骨形态结构的变化,Western blot法检测OA软骨细胞ROCK、Cofilin、Phospho-Cofilin,LIMK1和Phospho-LIMK1蛋白含量变化.结果:HE:低剂量与高剂量组关节软骨退变程度较模型组轻(P＜0.05);Western blot:软骨细胞骨架蛋白ROCK、Cofilin、Phospho-Cofilin,LIMK1和Phospho-LIMK1蛋白表达,低剂量组与高剂量组均低于模型组(P＜0.05).结论:补肾壮筋汤可能通过调节细胞骨架信号通路相关蛋白的表达,抑制了软骨细胞骨架破坏的进程,减缓膝关节关节炎的退变.
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综述细胞外信号调节激酶1/2信号通路与肝肾亏虚型膝骨关节炎的相关性
细胞外信号调节激酶(ERK)是丝裂原活化蛋白激酶家族中的一个重要亚型,细胞外信号调节通路在膝骨关节炎发病过程中持续表达,对软骨细胞的增殖、凋亡有重要调节作用.肝肾亏虚为膝骨关节炎的常见证型,而补肝肾中药能有效调控细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的表达以达到治疗膝骨关节炎的效果.研究ERK 1/2与肝肾亏虚型膝骨关节炎的关系,能为揭示该病的发病机制和指导其临床治疗提供新依据和思路.
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化痰除湿法对早期实验性骨关节炎软骨细胞凋亡的影响
目的:探讨化痰除湿法在早期实验性骨关节炎软骨细胞凋亡的应用研究.方法:选用健康Wistar大鼠40只,体质量为(250±10)g,雌雄各半,按随机数字表法将80只大鼠分为A组化痰除湿法组、B组西药阳性对照组、C组模型组、D组空白对照组每组各20只.所有的大鼠均采用改良Hulth造模法进行造模实验,形成骨性关节炎模型,第4周开始给药,干预4周后取大鼠膝关节软骨光镜观察形态学变化,用原位末端标记法(TUNEL法)、免疫组化法分别观察软骨细胞凋亡情况和增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况,以及用放免法测定关节液中IL-1、TNFa的含量.结果:A组的软骨细胞凋亡指数小于模型组,而A组的PCNA表达要高于其他各组,化痰除湿法组大鼠关节液中IL-1、TNFa的含量均较其他组显著升高.结论:化痰除湿法在减少大鼠早期膝关节实验性OA软骨细胞的凋亡有着显著作用,可促进软骨细胞的增殖,对早期骨关节炎有较好的治疗作用.
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复元胶囊含药血清对软骨细胞增殖与合成代谢的影响
骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是中老年人常见的一种慢性、进展性关节疾病.其发病中心环节是关节软骨发生退行性改变,即软骨的变性、丢失,继之邻近软骨增生、骨化而形成的关节病变.软骨细胞是关节软骨中惟一的细胞,在软骨形成、代谢以及修复中起着极其重要的作用[1].复元胶囊是临床上长期用于治疗骨关节炎有效的中药复方实验制剂,但其作用机制尚不清楚.本实验建立软骨细胞体外培养体系,复原胶囊含药血清干预,MTT法、流式细胞仪检测技术以及同位素标记法观察复元胶囊含药血清对体外培养的软骨细胞增殖、细胞周期以及代谢的影响,并与临床上常用于治疗骨关节炎的壮骨关节丸相比较,探讨其防治骨关节炎的作用机制.
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纳米鹿茸粗多肽对体外培养的软骨细胞代谢的影响
软骨细胞是关节软骨中惟一的细胞,在软骨形成、代谢以及修复中起着极其重要的作用.有研究表明,鹿茸具有促软骨细胞增殖作用[1～3],本研究旨在探讨纳米鹿茸及普通鹿茸粗多肽对体外培养的软骨细胞代谢功能的影响,比较药物制成纳米粉后与普通粉的作用强度.
关键词： 纳米鹿茸及普通鹿茸粗多肽 软骨细胞 代谢 -
淫羊藿黄酮类化合物对骨及软骨细胞作用研究进展
淫羊藿是一种补肾壮骨中药,广泛应用于骨科临床,其中主要有效成分为黄酮类化合物,包括淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷和淫羊藿次苷等,具有促进成骨细胞分化、抑制破骨细胞分化与生成、促进软骨细胞生成等作用.故对近年来淫羊藿黄酮类化合物对骨及软骨细胞作用的实验研究作一综述,为其应用于临床提供理论依据.
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补肾益气活血方对兔软骨细胞凋亡和bcl-2mRNA表达的影响
目的:观察补肾益气活血方含药血清对硝普钠诱导的体外培养兔关节软骨细胞凋亡和bcl-2mRNA表达的影响.方法:取新西兰兔的关节软骨,将软骨细胞分离传代后,置入37℃、5%CO2培养箱内,各组在相应的血清培养24h后,采用TUNEL法和原位杂交法分别检测各组软骨细胞的凋亡和bcl-2mRNA表达.结果:①补肾益气活血方含药血清各组的软骨细胞凋亡率明显低于模型组(P＜0.01).②补肾益气活血方含药血清各组对软骨细胞bcl-2mRNA表达明显高于模型组(P＜0.01).结论:补肾益气活血方能通过上调bcl-2mRNA的表达,抑制软骨细胞的凋亡,达到防治膝骨关节炎的目的.
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中药在软骨组织工程的研究进展
软骨组织工程学是有可能解决软骨缺损的希望,骨髓间充质干细胞具有多向分化的潜能,是软骨组织工程学的理想种子细胞.研究表明中药具有调节BMSC 向软骨细胞分化的作用,本文就中药诱导BMSC 的软骨分化的研究现状行综述,以此来探讨中药在软骨组织工程中的应用前景.
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梅花鹿茸和马鹿茸多肽化学性质及生物活性比较
目的:比较梅花鹿茸多肽和马鹿茸多肽化学组成及生物活性异同.方法:用相同工艺提取梅花鹿茸和马鹿茸多肽组分;采用电泳和质谱等分离分析手段比较多肽组分的化学性质;用[3H]TdR参入细胞DNA比较两种鹿茸多肽的促细胞增殖活性.结果:梅花鹿茸和马鹿茸多肽组分的电泳图谱和质谱有明显差异,而中国的东北马鹿茸和新西兰马鹿茸多肽的图谱十分相近;梅花鹿茸和马鹿茸多肽对软骨细胞和表皮细胞分裂都有促进作用,但马鹿茸多肽对表皮细胞的增殖作用比梅花鹿茸多肽强.结论:梅花鹿茸和马鹿茸多肽的化学性质和生物活性有较大差异.
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复元胶囊及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R1治疗骨关节炎的分子机制研究
目的:从尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)系统研究复元胶囊含药血清及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R1治疗骨关节炎的分子机制.方法:原代培养兔软骨细胞,TNF-α诱导软骨细胞损伤,分为7组:空白组、模型组(TNF-α 10 μg·L-1组)、盐酸氨基葡萄糖25 g· L-1组、20%复元胶囊含药血清组、淫羊藿苷12.5 mg·L-1组、三七皂苷R1 125 mg·L-1组、淫羊三七组(12.5,125 mg·L-1),RT-PCR检测各组uPA,NF-κB( P65) mRNA的含量,EMSA检测NF-κB( P65)与DNA结合的活性,Western检测IκBα水平.结果:复元胶囊含药血清及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R1均可显著降低uPA,NF-κB mRNA 表达量,降低NF-κB (P65)与DNA结合的活性,升高IκBα水平,与TNF-α组比较,统计学有显著差异(P＜0.01),各给药组间无明显差异.结论:复元胶囊含药血清及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R1可通过降低NF-κB( P65)的活性,升高IκBα水平,从而降低uPA的表达,保护软骨细胞免受炎症因子的损伤.
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独活寄生汤水提物对软骨细胞G1期调控因子mRNA表达的影响
目的:探讨独活寄生汤水提物对软骨细胞G1期的影响.方法:取4周龄雄性SD大鼠,建立软骨细胞体外培养体系,第3代软骨细胞进行干预,采用MTT法检测不同浓度的独活寄生汤水提物对软骨细胞活性的影响;RT-PCR检测空白组、独活寄生汤水提物低、中、高剂量组(100,200,400 mg· L-1)软骨细胞Cyclin D1,CDK4,CDK6及P21 mRNA的表达.结果:MTT法检测显示,在一定的药物质量浓度范围内(50～800 mg·L-1),软骨细胞活性显著上升(P＜0.01);干预24 h后,Cyclin D1,CDK4及CDK6mRNA表达量各剂量组明显增加(P＜0.05),200 mg·L-1表达量大(P＜0.01);P21 mRNA表达量降低,且200 mg·L-抑制作用明显(P＜0.01).结论:独活寄生汤水提物通过影响软骨细胞G1期调控因子mRNA的表达,促进软骨细胞的增殖.
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补肾壮筋汤含药血清对力学刺激诱导软骨细胞凋亡的影响
目的 探讨补肾壮筋汤合药血清对力学刺激诱导软骨细胞凋亡的影响.方法 提取兔补肾壮筋汤含药血清,将软骨细胞培养基分为普通培养基组、空白兔血清培养基组(空白培养基组)及补肾壮筋汤培养基组(含药培养基组),对各组软骨细胞进行四点弯曲机械应力加载诱导凋亡.收集软骨细胞,流式细胞仪测定软骨细胞的凋亡率,并测定相应培养基中的IL-1β和NO的含量.结果 含药培养基组中软骨细胞的凋亡[(19.55±7.98)％]比普通培养基组[(39.32±l3.45)％]及空白培养基组[(37.87±9.67)％]低,差异有统计学意义(P＜0.05)；含药培养基组lL-1 β和NO含量也低于其他两组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 补肾壮筋汤含药血清对应力加载诱导软骨细胞的凋亡具有保护作用.
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左归丸对间充质干细胞向软骨细胞分化过程中Ⅱ型胶原及蛋白多糖基因表达的影响
目的 观察左归丸含药血清对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向软骨细胞定向分化过程中MSCs增殖、Ⅱ型胶原及蛋白多糖基因表达的影响.方法 分离培养大鼠MSCs,体外诱导其向软骨细胞分化,诱导同时分别以高(57 g/kg)、中(28.5 g/kg)、低(9.5 g/kg)浓度左归丸含药血清及大鼠空白血清刺激细胞.CCK-8法检测各组对MSCs增殖的影响.将第3代MSCs分为空白对照组(加入大鼠空白血清)、诱导对照组(加入诱导液及大鼠空白血清)及左归丸含药血清组(加入诱导液及中浓度左归丸含药血清),采用RT-PCR、免疫组织化学和Real-time PCR检测诱导分化软骨细胞中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达.结果 与空白对照组比较,不同浓度左归丸含药血清均能促进MSCs增殖(P＜0.05),其中以中浓度组为明显(P＜0.05).诱导第21天RT-PCR和免疫组织化学显示诱导对照组和左归丸含药血清组MSCs中均可见Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达,其中左归丸含药血清组中Ⅱ型胶原mRNA表达明显高于诱导对照组.Real-timePCR结果显示,诱导第21天左归丸含药血清组蛋白多糖mRNA相对表达定量分别约是第7、14天表达量的16倍和3倍(P＜0.05),并明显高于同期诱导对照组(P＜0.05).结论 左归丸含药血清能促进MSCs增殖、Ⅱ型胶原和蛋白多糖基因表达,可能是其软骨保护作用的分子基础之一.
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补肾固筋方对膝骨性关节炎模型兔血清及关节液IL-1、TNF-α表达的影响
目的 观察补肾固筋方对骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型兔血清及关节液IL-1、TNF-α表达的影响.方法 选取8月龄左右健康雄性新西兰大白兔36只,随机分为正常组、模型组、西药组、中药组,每组10只,除正常组外均采用改良Hulth A造模法造模,西药组给予美洛昔康(每日药量6 mg/kg),中药组给予补肾固筋方每日药量53 g/kg,连续给药8周,取血清及膝关节前方部分滑膜组织、股骨内髁关节软骨及软骨下骨,ELISA法检测血清及关节液IL-1、TNF-α含量.结果 西药组关节间隙狭窄,介于模型组和中药组之间,关节面粗糙,骨赘明显;中药组关节间隙稍窄,关节面稍粗糙伴轻微骨赘.与正常组比较,模型组血清及关节液IL-1、TNF-α含量升高(P＜0.01).与模型组比较,两个给药组血清及关节液IL-1、TNF-α含量降低(P＜0.01),两给药组之间比较,差异无统计学意义.结论 补肾固筋方通过抑制IL-1、TNF-α的分泌,延缓软骨退变,促进软骨基质的合成和软骨修复.
