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巴戟天-牛膝醇提物对SD大鼠软骨细胞G1/S周期蛋白与基因表达影响的实验研究
目的：探究巴戟天-牛膝醇提物（M-AAE）对体外培养的SD大鼠软骨细胞G1/S周期蛋白与mRNA含量表达的影响，为其防治骨关节炎的临床应用提供依据。方法：①用乙醇加热回流法获得其醇提物成分；采用机械-酶消化法分离SD大鼠膝关节处的关节软骨，建立体外培养细胞模型并进行鉴定；②MTT法检测M-AAE对软骨细胞增殖特性的影响，使用倒置相差显微镜镜下观察软骨细胞状态；③PCR、Western blot法分别检测体外培养大鼠软骨细胞经M-AAE的0，75，150，300μg·mL-1 DMEM溶液干预48 h后的mRNA、蛋白含量的表达。结果：①软骨细胞经Ⅱ型胶原法染色后，阳性对照组胞浆区域浸染为棕黄色；②经MTT检测M-AAE对软骨细胞增殖具有一定的时效-量效关系，其佳干预时间和浓度分别为48 h和150μg·mL-1；③M-AAE干预软骨细胞后，各加药组细胞周期蛋白依赖性激酶-4（CDK4）、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的mRNA与蛋白含量的表达量均明显高于0μg·mL-1组，其中以150μg·mL-1组的表达量高（P <0.01），75μg·mL-1组和300μg·mL-1组在CDK4及Cyclin D1mRNA上比较，其表达量差异无统计学意义（P >0.05）。结论：M-AEE可上调CDK4、CyclinD1 mRNA及蛋白表达，对SD大鼠软骨细胞具有一定的促增殖作用。
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跳骨片水提物对体外大鼠关节软骨细胞活性的影响
目的：探讨跳骨片水提物对体外大鼠关节软骨细胞活性的影响。方法：4周龄SPF级SD大鼠5只，采用机械-Ⅱ型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞，倒置相差显微镜观察软骨细胞的形态结构，Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定软骨细胞。0，25，50，100μg·mL-1跳骨片水提物对第3代软骨细胞，分别干预24，48，72 h后，MTT法检测细胞活性。结果：①Ⅱ型胶原免疫组化染色后软骨细胞胞浆呈棕黄色，为阳性；②以0μg·mL-1跳骨片水提物干预的软骨细胞作为对照组，干预24 h后，50μg·mL-1组软骨细胞活性明显高于对照组（P <0.05）；干预48h后，25，50μg·mL-1组明显高于对照组（P <0.05）；干预72h后，25，50，100μg·mL-1组与对照组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论：跳骨片水提物在25，50，100μg·mL-1时均可以促进软骨细胞的增殖，具有剂量和时间依赖性，其中50μg·mL-1干预24 h后为明显。
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骨关节炎患者关节软骨细胞合成和分解基因的表达研究
目的：初步探讨合成和分解相关基因Ⅱ型胶原a1（COL2A1）、聚蛋白多糖（ACAN）、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序结构的去整合素金属蛋白酶-5（ADAMTs-5）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-3（TIMP-3）在骨关节炎患者关节软骨细胞和外周血的表达水平。方法：入选行关节置换术的骨关节炎患者3例、类风湿关节炎患者3例和创伤截肢患者4例，分成骨关节炎组、类风湿关节炎组和创伤对照组，分别取离体关节软骨标本体外培养软骨细胞；入选骨关节炎患者9例、类风湿关节炎患者10例和健康对照者10例，分成骨关节炎组、类风湿关节炎组和正常对照组，分别抽取4 mL外周静脉血提取外周血单个核细胞，利用实时荧光定量聚合酶链反应法（RT-PCR）检测关节软骨细胞和外周血单个核细胞COL2A1、ACAN、ADAMTs-5、TIMP-3基因表达。采用非配对资料t检验比较各基因分别在关节软骨细胞、外周血单个核细胞表达的组间差异。结果：骨关节炎组与创伤对照组组间比较提示ACAN、TIMP-3、COL2A1基因在骨关节炎关节软骨细胞表达下调，ADAMTs-5基因表达上调，TIMP-3表达低于创伤对照组（P <0.05）；各基因在骨关节炎外周血单个核细胞表达无统计学意义（P >0.05）。结论：TIMP-3、COL2A1、ACAN和ADAMTs-5基因在关节软骨细胞中的异常表达趋势对骨关节炎发生发展有预警作用，在外周血的表达无特异性。
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牛膝多糖对软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达的影响
目的：探讨牛膝多糖（ABPS）对大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达的影响。方法：取4周龄健康SD大鼠10只，分离膝关节，刮下双侧膝关节表面软骨组织，采用机械-Ⅱ型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞。建立软骨细胞体外培养体系，倒置相差显微镜观察细胞形态，采用Ⅱ型胶原免疫组化法鉴定软骨细胞。体外培养到第2代软骨细胞，分别用0，50，100，200μg·mL-1的ABPS对软骨细胞进行干预。干预后，Western blot检测各组Ⅱ型胶原、蛋白聚糖的表达变化，免疫荧光观察空白组与加药组Ⅱ型胶原的表达变化。结果：第2代软骨细胞的形态学表明软骨细胞的典型特征：软骨细胞含有丰富的Ⅱ型胶原。Western blot检测结果显示，ABPS促进软骨细胞Ⅱ型胶原表达，并且在100μg·mL-1时表达高，差异有统计学意义（P <0.05）。同时100μg·mL-1的ABPS干预软骨细胞后，软骨细胞中的蛋白聚糖表达增加，但差异无统计学意义（P >0.05）。与空白组的Ⅱ型胶原荧光表达相比， ABPS干预后软骨细胞的Ⅱ型胶原荧光表达更强。结论：ABPS促进了软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达。
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独活寄生汤含药血清对兔退变软骨细胞“caveolin-p38MAPK”信号通路调控作用的影响
目的：观察独活寄生汤含药血清对兔退变软骨细胞“caveolin-p38MAPK”信号通路的调控作用，探讨独活寄生汤治疗骨关节炎的作用机制。方法：将20只3月龄新西兰兔随机分为生理盐水组（空白血清组）和独活寄生汤组（含药血清组），每组10只。分别在24 h、36 h、48 h不同采血时间点采集独活寄生汤含药血清和空白血清，将5%、10%、15%、20%不同浓度两种血清作用于体外培养第2代软骨细胞，确定含药血清佳干预条件；建立体外退变软骨细胞模型，分别给予独活寄生汤含药血清（含药血清组）和空白血清（空白血清组）干预36 h，收集软骨细胞，运用Western Blot法检测血清干预后退变软骨细胞caveolin-1、p38、p-p38蛋白表达，RT-PCR法检测血清干预后退变软骨细胞白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、基质金属蛋白酶（MMP）-3、MMP-13、caveolin-1 mRNA表达。结果：浓度为15%的36 h采血时间点含药血清的促增殖作用明显；退变软骨细胞中存在“caveolin-p38MAPK”信号通路的激活，独活寄生汤含药血清可抑制caveolin-1、p-p38蛋白表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13、caveolin-1 mRNA的表达，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：独活寄生汤能通过抑制“caveolin-p38MAPK”信号通路的激活及其下游效应分子，从而有效抑制软骨细胞凋亡。
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健膝丸含药血清对IL-1β作用下兔关节软骨细胞Type-II Collagen、MMP-1、MMP-13蛋白表达的影响
目的：观察健膝丸含药血清对白细胞介素-1β（IL-1β）作用下体外培养的兔关节软骨细胞表达II型胶原（Coll-II）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）的影响，探讨健膝丸防治骨关节炎的作用机制。方法：提取1月龄的兔关节软骨细胞、Ⅰ代细胞用于实验。实验分为空白组、模型组、健膝丸组和抗骨增生组。细胞在培养第4天时，模型组、健膝丸组和抗骨增生组分别加入10 ng·mL-1的IL-1β继续进行培养，分别在培养24h、48h、72h时提取蛋白，并用In-cell western blot法检测其表达情况。结果：各时间点空白组与模型组Coll-II、MMP-1及MMP-13的表达比较，差异均有统计学意义（P <0.05）；健膝丸组较模型组Coll-II的表达在48h、72h时，差异有统计学意义（P <0.05）；MMP-1及MMP-13表达在各时间点比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：健膝丸可能在刺激软骨细胞分泌Coll-II，或者减轻对Coll-II的破坏，及减少MMP-1、MMP-13表达等途径发挥作用，从而促进软骨细胞增殖和延缓软骨基质降解，具有保护软骨细胞、延缓软骨基质降解的作用，临床上可作为骨关节炎的治疗用药。
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药对巴戟天-杜仲总多糖的含量测定及其对大鼠软骨细胞增殖的影响
目的：研究药对巴戟天-杜仲总多糖对体外培养的大鼠软骨细胞增殖活性的影响。方法：①用水提醇沉法、Sevag法除蛋白提取纯化获得其总多糖，苯酚-硫酸比色法测定其总多糖含量；②MTT法分别检测体外培养大鼠软骨细胞在800，400，200，100，50μg·mL-1总多糖DMEM溶液中24，48，72 h的增殖能力。结果：①葡萄糖标准品线性回归方程为y=0.0100x-0.0018（r=0.9996），葡萄糖标准品在10～100μg·mL-1范围内线性关系良好，平均加样回收率为99.59%，RSD为0.40%；多糖含量为43.88%。②巴戟天-杜仲总多糖对软骨细胞具有一定的促增殖作用，当作用时间为48 h、多糖浓度为400μg·mL-1时，促增殖作用强。结论：①苯酚-硫酸比色法可作为药对巴戟天-杜仲总多糖的含量测定方法；②巴戟天-杜仲总多糖对软骨细胞的促增殖作用具有一定的时效量效关系。
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独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞Bcl-2、Bax表达的影响
目的：探讨独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞Bcl-2、Bax表达的影响。方法：建立体外退变软骨细胞模型，分别给予独活寄生汤含药血清（含药血清组）和空白血清（空白血清组）干预24 h、48 h、72 h，收集软骨细胞，运用RT-PCR法检测血清干预后退变软骨细胞Bcl-2、Bax mRNA表达， Western Blot法检测血清干预后退变软骨细胞Bcl-2、Bax蛋白表达。结果：独活寄生汤含药血清对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响与其对Bcl-2和Bax mRNA的影响具有相同的趋势，随着干预时间的延长，空白血清组和含药血清组Bcl-2蛋白阳性表达率均逐渐升高，含药血清组升高更显著；Bax蛋白阳性表达率逐渐降低，含药血清组降低更明显，且各时点之间比较，差异有统计学意义（P<0.01）。结论：独活寄生汤能通过上调大鼠骨关节炎软骨细胞抑制凋亡因子Bcl-2表达，下调促凋亡因子Bax表达，抑制线粒体凋亡通路的激活，从而有效抑制软骨细胞凋亡。
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独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞线粒体凋亡通路的影响
目的：观察独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞线粒体凋亡通路的影响，探讨独活寄生汤治疗骨关节炎的作用机制。方法：将36只健康清洁级2月龄SD大鼠随机分为生理盐水组（空白血清组）9只和独活寄生汤临床等效剂量组（含药血清组）27只。采用1 h、2 h、3 h不同采血时间点独活寄生汤含药血清和空白血清，将10%、15%、20%、30%不同浓度两种血清作用于体外培养第三代软骨细胞，确定含药血清佳干预条件；再用含药血清佳干预条件处理退变软骨细胞，分别干预24 h、48 h、72 h后，收集软骨细胞，进行相应指标的检测。采用Annexin V-FITC/PI染色流式检测退变软骨细胞凋亡情况，JC-1染色流式检测退变软骨细胞线粒体膜电位的改变，分光光度法检测退变软骨细胞中caspase-9和caspase-3活性。结果：浓度为10%的2 h采血时间点含药血清的促增殖作用明显；血清干预后，退变软骨细胞的凋亡率逐渐降低，具有时间依赖性；线粒体膜电位逐渐减低；随着干预时间的延长， caspase-9、caspase-3活性均逐渐降低，与空白血清组相比，含药血清组降低更显著。结论：独活寄生汤可通过调控线粒体凋亡通路相关调节因子caspase-9、caspase-3表达，有效抑制软骨细胞凋亡。
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祛风散寒除湿中药正清风痛宁缓释片对小鼠软骨细胞TGF-β、IL-1β、Fstl-1、TIMP-3表达水平的影响
目的：探讨祛风散寒除湿法治疗骨关节炎的分子机制。方法：以正清风痛宁缓释片为研究载体，通过实时定量PCR试验，检测软骨细胞转化生长因子-β、白细胞介素-1β、卵泡抑素样蛋白-1、基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA表达水平。结果：在正清风痛宁缓释片水提液高、中、低剂量组（以下简称S100、S50、S25组）以及模型对照组软骨细胞都有软骨细胞转化生长因子-β、白细胞介素-1β、卵泡抑素样蛋白-1、基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA表达。软骨细胞转化生长因子-βmRNA表达量，S100、S50、S25组明显高于模型对照组（P<0.01），而S25组与模型对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；白细胞介素-1βmRNA表达量S50组明显低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.01），S100组与模型对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；S25组白细胞介素-1β表达量与模型对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；卵泡抑素样蛋白-1 mRNA表达量S100、S50、S25组均高于模型对照组，但差异无统计学意义（P>0.05）；基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA表达量，S50、S100组明显高于模型对照组（P<0.01），而S25组与模型对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：祛风散寒除湿中药正清风痛宁缓释片对关节软骨具有保护作用，其对骨关节炎软骨的保护作用可能是通过上调软骨细胞转化生长因子-β、卵泡抑素样蛋白-1及基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA在软骨细胞的表达及下调炎性致病因子白细胞介素-1β的表达来实现的。
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健膝丸对大鼠膝骨关节炎SOD、MDA、NO的影响
目的：通过观察健膝丸对膝骨关节炎模型SD大鼠血清SOD、MDA、NO表达水平的影响，以探求健膝丸在防治膝骨关节炎方面的作用机理，从而为本药的临床应用及药物开发提供科学的理论依据，同时进一步探索骨关节炎的发病机制。方法：以40只雌性SD大鼠为实验对象，随机分为正常组、模型对照组、健膝丸组、抗骨增生胶囊组，每组10只。除正常组外，其余各组均采用改良Hulth法对大鼠进行造模。术后连续3 d肌肉注射青霉素20万U，1周后开始强迫大鼠每天活动0.5 h，连续8周。同时各组大鼠均采用灌胃给药途径给予相应药液，根据人与动物体表面积等效剂量折算出健膝丸组及抗骨增生胶囊组灌胃给药量。正常组及模型对照组给予质量浓度0.9％的生理盐水，连续8周。8周后分别抽取各组大鼠腹腔静脉血，离心后取上清，按照SOD、MDA、NO测试盒说明操作，用754分光光度计测各管吸光度（OD值），从而进一步计算出各组血清中的各指标的含量。结果：血清中SOD、MDA、NO含量测定结果显示，模型对照组与正常组比较，模型对照组血清中SOD活性显著下降（P<0.01），MDA、NO含量显著升高（P<0.01）。健膝丸组与正常组比较，SOD活性差异无统计学意义（P>0.05），MDA及NO含量差异有统计学意义（P<0.05）。健膝丸组与模型对照组比较，SOD活性显著升高（P<0.01），MDA含量差异无统计学意义（P>0.05）、NO含量显著下降（P<0.01）。对SOD、MDA、NO含量的影响，健膝丸组与抗骨增生胶囊组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：通过对实验各组SD大鼠血清中SOD、MDA、NO水平的检测，结果显示，在膝骨关节炎模型SD大鼠血清中, SOD活性下降，MDA及NO含量升高，由此可知氧自由基等因子在骨关节炎的发病及软骨细胞的破坏进程中起到重要作用。健膝丸对血清MDA的含量影响不明显，但可显著提高SOD活性、清除体内过量的氧自由基，同时抑制了NO的过度产生、降低其生物效应，改善关节微循环、保护软骨细胞或促使受损细胞的修复，从而起到延缓关节软骨退变的作用。
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跳骨片不同极性部位对软骨细胞活性的影响研究
目的:研究跳骨片不同极性部位对软骨细胞活性的影响.方法:用跳骨片的水提物、醇提物、多糖以及醇提物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物及残留的水相共8个组分干预体外培养的软骨细胞,采用MTT法检测不同极性部位作用48 h后软骨细胞的活性.结果:在一定剂量范围内,跳骨片的水提物、多糖,醇提物的乙酸乙酯萃取部位和水相干预组软骨细胞的活性增强,醇提物以及醇提物的石油醚、氯仿和正丁醇萃取部位干预组软骨细胞的活性降低.结论:跳骨片的水提物、多糖和醇提物的乙酸乙酯萃取及残留的水相部位能够促进软骨细胞的增殖,为跳骨片的有效部位.
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轴蛋白在骨关节炎中的作用机制及研究进展
轴蛋白是一个构架蛋白，其传导信号的方式主要是与Wnt信号转导途径中的许多相关成员结合形成复合体。近年来发现轴蛋白为抑制因子，能通过下调β-连环蛋白（β-catenin）水平来调节关节软骨的成熟、增殖分化以及凋亡。β-catenin作为Wnt信号通路中的重要成员，而轴蛋白作为Wnt信号通路的负调节因子，将为骨关节炎的诊断和治疗提供新的思路和有效的方法。
关键词： 骨关节炎 轴蛋白 Wnt/β-catenin 软骨细胞 综述 -
富血小板凝胶促软骨细胞增殖的体外实验研究
目的：利用二次离心法制备富血小板凝胶，将其与软骨细胞复合，观察软骨细胞增殖与表达，为组织工程软骨构建提供良好支架材料。方法将兔静脉血使用二次离心法制备富血小板血浆，检测其中多种生长因子浓度，并与分离培养的兔软骨细胞混合后以激活剂激活，培养并以MTT法观察软骨细胞增殖情况，使用realtime-PCR方法检测软骨细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原和SOX-9基因表达，并与普通培养软骨细胞比较，明确富血小板凝胶与软骨细胞混合后软骨细胞增殖表达情况。结果富血小板凝胶萃取液中PDGF-AB、TGF-β1、IGF-1、VEGF生长因子浓度明显高于全血(P<0.05)。富血小板凝胶与软骨细胞复合培养，软骨细胞增殖速度明显高于普通培养软骨细胞(P<0.05)。培养7 d后检测软骨细胞中蛋白聚糖、Ⅱ型胶原和SOX-9基因表达明显高于普通软骨细胞(P<0.05)。结论富血小板凝胶与软骨细胞共培养，可明显促进软骨细胞增殖和表达，是优良的组织工程软骨构建方案。
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Notch信号通路在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义
目的 探索Notch信号通路对骨关节炎(OA)软骨细胞基质合成的影响及可能的作用机制.方法 选择2017年我院收治的8例因膝关节OA行膝关节置换患者的股骨髁软骨作为观察组,再选择1例因外伤行膝上截肢的正常股骨髁软骨作为对照组.所取的标本行组织学检测或细胞分离培养及检测.细胞培养分组按照正常软骨细胞、OA软骨细胞、OA软骨细胞+γ-分泌酶抑制剂DAPT(DAPT组)、OA软骨细胞+重组人Delta4蛋白(DLL4组).免疫组化定性分析以及Western blot蛋白质印迹技术定量分析Notch-1、Notch-3、Jagged-1、Jagged-2、HES5的表达.结果 Notch信号通路表达水平在OA中发生变化,软骨细胞表型改变,Notch-1、Jagged-1、Jagged-2、HES5表达被激活.γ-分泌酶抑制剂DAPT(20 μmol/L)干预Notch信号通路后,抑制OA软骨细胞中Noctch-1、HES5、Jagged-1、Notch-3的表达,对Jagged-2的表达作用不明显.重组人Delta4蛋白(100 ng/μL)干预Notch信号通路后,促进Notch-1、Jagged-2、HES5的表达,对Jagged-1、Notch-3作用不太明显.结论 Notch信号通路表达水平在OA中发生变化;DLL4能激活Notch信号通路,DAPT能抑制Notch信号通路.
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人胰岛素样生长因子1基因转染关节软骨细胞及其稳定表达
目的研究人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)基因转染关节软骨细胞获得稳定表达的可行性.方法用脂质体转染法将含有hIGF-1 cDNA的真核表达载体转染兔关节软骨细胞,经G418筛选,形成阳性细胞克隆.继续培养4周,原位杂交检测hIGF-1的表达,免疫细胞化学检测Ⅱ型胶原的表达.结果 G418筛选后所获得的阳性细胞克隆,原位杂交检测表明hIGF-1基因得到稳定表达,免疫细胞化学检测显示转染后的软骨细胞仍表达Ⅱ型胶原.结论外源性hIGF-1基因能够在软骨细胞内获得稳定表达,而转染后的软骨细胞仍能稳定表达Ⅱ型胶原.
关键词： 人胰岛素样生长因子1 软骨细胞 基因转染 表达 -
骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型分化的影响因素
关节软骨在受到创伤后,难以自行修复.传统的治疗方法如软骨下骨钻孔术、软骨移植、骨膜或软骨膜移植、软骨细胞移植等因修复组织以纤维软骨为主,缺少正常透明软骨的力学性能及耐用性,故不能取得满意效果.而应用组织工程方法修复关节软骨缺损却展示了令人鼓舞的前景.
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软骨细胞对滑膜间充质干细胞诱导分化的影响
目的 明确软骨细胞对滑膜间充质干细胞(synovial mesenchymal stem cells,SMSCs)向软骨细胞诱导分化情况的影响. 方法 (1)消化分离原代软骨细胞和SMSCs,测定细胞存活率、计数并传代培养.显微镜下观察各代软骨细胞和SMSCs生长情况,并对软骨细胞和SMSCs进行类别鉴定.(2)取第1代兔软骨细胞和第3代SMSCs共培养,第3代SMSCs单独培养作为对照组.(3)5d、10 d后分别对SMSCs进行免疫荧光、免疫组化和流式细胞仪检测,通过观察SMSCs对Ⅱ型胶原的表达情况,了解软骨细胞诱导SMSCs向软骨细胞分化的影响. 结果 (1)原代软骨细胞刚分离初为卵圆形,贴壁后呈三角形或梭形.每100 mg软骨组织可分离出原代软骨细胞为3～5×105个,细胞存活率为90.0％.甲苯胺蓝染色后细胞质内可见散在蓝紫色异染颗粒.(2)原代滑膜细胞刚分离初为圆形,贴壁生长后可见少量较大卵圆形细胞和较多梭形细胞,传代后几乎都为梭形.每100 mg滑膜组织可分离出原代滑膜细胞为1～2×106个.SMSCs表面抗原CD68、CD90和CD105检测阳性率分别为0.5％、92.5％和90.7％.(3)对SMSCs的免疫组化、检测显示,与第1代软骨细胞共培养5d、10d后的第3代SMSCs对于Ⅱ型胶原的表达阳性率比单一生长的第3代SMSCs要高.(4)对SMSCs的流式细胞仪检测显示,与第1代软骨细胞共培养5d、10d后的第3代SMSCs对于Ⅱ型胶原的表达阳性率比单一生长的第3代SMSCs要高,并与免疫组化、检测的结果相吻合.结论 与第1代软骨细胞共培养的SMSCs对Ⅱ型胶原表达持上升,出现向软骨细胞分化的现象.软骨细胞能较好地诱导SMSCs向软骨细胞分化.
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人脐带源间充质干细胞体外成脂、成骨、成软骨诱导分化
目的 体外分离培养脐带来源间充质干细胞,确定其向脂肪、骨、软骨细胞的分化能力.方法 取新鲜的脐带组织,剔除脐动静脉,剩余部分剪成极为细小的组织块,0.2%Ⅱ型胶原酶37℃静止消化17 h,用含10%胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔培养基/Ham's F12培养基终止消化,培养3 ~ 5 d后得到较为均一的贴壁细胞.取第3代细胞做流式检测,并定向诱导分化,14 d后成脂、成骨染色鉴定,21 d后取诱导分化的细胞团做冰冻切片,阿尔法蓝染色软骨鉴定.结果 体外培养的间充质干细胞高表达CD29、CD13、CD90、CD105、CD44等间充质细胞标志物,不表达CD34、CD45、人类白细胞抗原DR等造血细胞标志物;诱导分化后油红O染色、冯库萨染色均为阳性,冰冻切片阿尔法蓝染色呈明显阳性.结论 人脐带间充质干细胞在体外能够培养并定向分化为脂肪、骨、软骨细胞.
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手部内生软骨瘤的治疗
内生软骨瘤为常见的良性肿瘤,由软骨细胞错构而成,多需手术刮除,自体骨植骨治疗.自1978年～2002年6月,我院收治56例患者,现报道如下.
