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富血小板凝胶治疗难愈性糖尿病足溃疡的随机对照研究
目的：评价富血小板凝胶(PRG)应用于难愈性糖尿病足溃疡的有效性和安全性。方法自2013年6月1日至2014年9月1日共纳入62例难愈性糖尿病足溃疡患者，采用完全随机化法分为PRG组和标准组。两组均给予基础治疗和创面常规治疗。PRG组则在创面常规治疗基础上，根据创面体积采血制备PRG并敷于创面；两组均在入组后3 d、以后每周更换一次敷料并观察创面情况直至愈合或12周末。采用t检验、u检验、χ2检验比较两组的基线数据及愈合效果、Kaplan?Meier生存分析比较两组随时间变化的愈合率、Cox回归分析筛选影响愈合的因素。结果 PRG组的愈合效果(分为无效、有效、显效、痊愈)明显好于标准组(u=－3.081，P<0.05)；其总有效率(显效+痊愈)及愈合率明显要高(分别为96.8%比71.0%，93.5%比61.3%，χ2=9.226、7.631，均P<0.05)；两组的Kaplan?Meier时间愈合曲线的比较差异有统计学意义(P<0.05)；PRG组的愈合时间显著短于标准组[26(21～35)比60(43～84) d，Z=－5.073，P<0.05]。Cox回归分析显示：凝胶治疗、ABI、治疗前体积有统计学意义(B=2.552、2.982、－0.343，RR=12.836、19.725、－0.343，均P<0.05)。PRG组与标准组的住院时间及住院费用的比较差异均无统计学意义（均P>0.05）。观察过程中，未见与凝胶治疗相关的严重不良反应发生。结论PRG应用于难愈性糖尿病足溃疡的疗效优于标准组，不增加住院费用，有良好的安全性。
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富血小板血浆在软骨修复领域的研究进展
软骨是缺乏血运的组织,创伤后很难利用自身的间充质干细胞进行修复,难以自愈,持续的关节软骨缺损可引发局部疼痛、水肿反应以及功能障碍、运动受限等其他症状.以往的临床治疗方法包括骨髓刺激法、软骨膜移植、自体软骨细胞移植等,但效果有限.富血小板血浆(PRP)是自体血提取的血小板浓缩物,含有丰富的生长因子及其他组织再生必须的细胞因子,可为软骨细胞生存提供良好的微环境,有望成为促进软骨再生的新方法.
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富血小板凝胶在糖尿病足溃疡治疗中的应用
富血小板凝胶是近年来新出现的辅助治疗糖尿病足溃疡(DFU)的方法之一.局部应用富血小板凝胶治疗DFU可有效改善DFU的难愈合性并提高溃疡愈合率,且无明显不良反应发生;也可降低截肢率,且没有增加医疗总费用.富血小板凝胶治疗DFU的作用机制可能与其中富含的生长因子、细胞因子和白细胞等有关,还可能与凝胶超微结构、溃疡中基质金属蛋白酶的变化有关.
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富血小板凝胶与拔牙窝新骨形成和骨量保持
背景:富血小板血浆能否促进骨组织的修复再生存在一定的争议.目的:研究富血小板血浆/凝胶对拔牙窝骨愈合过程中新骨形成和骨量保持的可能调节作用,探讨富血小板血浆/凝胶与骨愈合的相互关系.方法:通过拔牙建立Beagle犬拔牙窝骨缺损模型,同期在拔牙窝导入富血小板血浆或复血小板凝胶,并设计对照组.术后2,4,8,12周分别进行大体观察、放射影像学检查、三维CT平扫+重建、组织学检查拔牙窝颊舌侧牙槽嵴高度差、CT值以及新生骨面积.结果与结论:与富血小板血浆组和对照组比较,影像学结果表明富血小板凝胶组在第2,4,8周新骨形成的面积大(P < 0.01);组织学结果表明富血小板凝胶组在第2,4周新骨形成面积大(P < 0.05);在所有时间点上富血小板凝胶组颊舌侧牙槽嵴高度差值小(P < 0.05).在第12周,富血小板凝胶组颊舌侧牙槽嵴高度仍有2 mm差值.提示,富血小板凝胶具有促进牙槽窝早期愈合的能力,但其单独使用时促进牙槽窝骨量保持的效能有限.
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富血小板凝胶的制备及骨修复作用
富血小板血浆是自体源性、浓缩的含血小板的血浆,由其聚合而成的富血小板凝胶的应用是口腔颌面外科颌骨缺损修复的热点课题.目前,对于富血小板凝胶促进骨缺损修复的机制尚未完全阐明.普遍的观点认为聚合过程中血小板脱颗粒释放多种高浓度生长因子的联合作用刺激成骨,加速了骨修复.另外,富血小板凝胶的应用还存在一些尚待解决的问题.因此,富血小板凝胶在组织工程领域得到广泛应用尚需进一步的研究工作.相信随着研究的不断深入,富血小板凝胶必将广泛应用与骨组织工程.
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富血小板凝胶制备方法的比较与优选
背景：富血小板凝胶含有多种细胞生长因子，对于局部创伤及骨缺损的修复具有非常重要的作用。富血小板凝胶作为组织工程的支架的研究越来越多，但是对于其优化的制备方法目前尚无统一标准。
目的：简要综述近年来富血小板凝胶所含生长因子及制备方法的相关研究，总结多种富血小板凝胶的制备方法并进行比较，以此找出较为优化的制备方法。
方法：以“富血小板血浆，富血小板凝胶，组织工程”为检索词检索中国期刊全文数据库(1980年1月至2013年1月)，以“Platelet-rich plasma，Platelet-rich plasma gel，Tissue Engineering”为检索词检索PubMed数据库(1980年1月至2013年1月)，纳入与富血小板凝胶检测及制备方法相关的研究，排除不相关学科及内容的研究，检索得到322篇相关文献，筛选后终纳入67篇。
结果与结论：目前富血小板凝胶的多种制备方法都存在各自的优势，不能单纯凭借某一项数据断定何种制备方法好，需根据不同需要确定使用不同的方法。随着富血小板凝胶研究的不断深入，将会对创伤及骨缺损的临床修复以及组织工程研究起到至关重要的作用，也是未来组织工程支架研究的重要方向。 -
富白细胞-血小板纤维蛋白促进创面愈合的优势
背景:富白细胞-血小板血浆和富白细胞-血小板纤维蛋白是两种具有加快创面愈合功效的自体富血小板凝胶.目的:比较富白细胞-血小板纤维蛋白及富白细胞-血小板血浆在组成成分、结构、释放生长因子方面的差异?方法:抽取志愿者空腹静脉血,每份血样分别制备富白细胞-血小板纤维蛋白凝胶与富白细胞-血小板血浆凝胶,采用光镜及扫描电镜观察凝胶的微观结构,计算白细胞、血小板的浓缩倍数及回收率.将两种凝胶保存于DMEM培养基中,1,3,7,14,21 d后收集含有渗出液的培养液,ELISA法检测血小板源性生长因子、转化生长因子β1、血管内皮细胞生长因子的浓度.结果与结论:①光镜下显示,富白细胞-血小板纤维蛋白凝胶内的血小板?白细胞与红细胞分界清晰,可见大量白细胞及纤维蛋白簇集;富白细胞-血小板血浆凝胶的血小板、白细胞较少,散在红细胞中;②电镜下显示,富白细胞-血小板纤维蛋白凝胶中含有大量纤维蛋白,形成致密的特殊3D结构,交界处血小板叠加结构清晰;富白细胞-血小板血浆凝胶交界处纤维较少且夹杂大量血小板,部分血小板已裂解;③与富白细胞-血小板血浆凝胶比较,富白细胞-血小板纤维蛋白凝胶具有更高的血小板回收率(P=0)、白细胞回收率(P=0)及淋巴细胞回收率(P=0);④除血管内皮细胞生长因子外,富白细胞-血小板纤维蛋白凝胶保存3,7,14,21 d的转化生长因子 β1、血小板源性生长因子浓度高于富白细胞-血小板血浆凝胶;⑤结果表明与富白细胞-血小板血浆凝胶相比,富白细胞-血小板纤维蛋白凝胶制备更简单、结构更优、生长因子释放更缓慢,在治疗创面中更有优势.
关键词： 富白细胞-血小板纤维蛋白 富白细胞-血小板血浆 富血小板凝胶 机制 生长因子 生物材料 -
富血小板凝胶对金黄色葡萄球菌的体外抗菌性研究
目的 探究人体富血小板凝胶(PRG)对金黄色葡萄球菌的体外抗菌作用;对比观察不同浓度富血小板凝胶对金黄色葡萄球菌的体外抗菌作用.方法分别取20例健康志愿者外周静脉血30 ml,制备不同浓度富血小板凝胶,血小板浓度依次为1.8×1012/L(PRG1组)、1.2×1012/L(PRG2组)、0.6×1012/L(PRG3组).通过体外抗菌实验观察不同浓度PRG在甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)溶液中孵育1、2、4、8、12、24h后的抗菌效果.结果在孵育开始后,各浓度PRG菌落计数明显少于PBS对照组,PRG对MRSA和MSSA均有明显的抗菌作用(P＜0.05),各浓度PRG抗菌作用均在孵育2h后明显,随后逐渐下降;同一时间PRG1、PRG2和PRG3的抑菌率依次下降,与其含血小板浓度呈正相关关系,各组间菌落计数差异均有统计学意义(P＜0.05).在孵育12h后,细菌生长进入稳定期,各组抑菌率明显下降,各组菌落计数差异无统计学意义(P＞0.05).结论在一定时间内,PRG对MSSA和MRSA均有明显的抑制作用,PRG的抗菌作用与血小板浓度呈正相关关系.
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不同治疗周期自体富血小板凝胶对于下肢慢性创面的临床疗效分析
目的 观察不同治疗周期自体富血小板凝胶(APG)治疗下肢慢性创面的临床疗效.方法 下肢慢性创面患者89例,随机分为3组,按治疗周期分为:A组(1周)29例,B组(2周)30例,C组(3周)30例.治疗开始后1次/周(测量时间点为该周后1d,连续5周)分别进行创面细菌学检测、创面面积测定及组织病理活检,并记录创面愈合时间.通过比较各指标分析不同治疗周期的临床疗效.结果 A组与B组在创面感染率、愈合率、组织病理学评分及愈合时间比较差异无统计学意义(P>0.05).A组感染率6.90%,B组6.67%明显低于C组33.33%(P<0.05).3周后各时相点A组与B组的创面愈合率、组织病理学评分均明显优于C组(P<0.05);愈合时间A组(40.72±3.10)d与B组(41.13±3.84)d明显优于C组(48.73±4.11)d(P<0.05).结论 APG局部治疗下肢慢性创面的理想周期建议为2周,能获得满意的治疗效果及良好的患者依从性,值得临床推广.
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富血小板凝胶对角膜基质生物学功能的影响
目的 观察富血小板凝胶对角膜基质生物学功能的影响.方法 离心法分离兔全血获得富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP),采用体积分数5％PRP作用于兔角膜基质细胞,CCK-8(细胞增殖-毒性检测试剂盒)法检测PRP促角膜基质细胞增殖的作用.取PRP与凝血酶激活剂以9∶1的比例制备富血小板凝胶,对制备的富血小板凝胶进行组织形态学、对角膜基质细胞的作用、黏附性、生物相容性等多方面观察与评价.结果 体积分数5％ PRP能促进兔角膜基质细胞的增殖及活化.制备的富血小板凝胶呈透明状；组织学结构显示与正常角膜基质结构极为相似,呈典型的多孔性有序结构；倒置显微镜下观察及HE染色结果均显示兔角膜基质细胞在富血小板凝胶上能够良好黏附、生长、增殖并活化；此外,富血小板凝胶作为黏附剂能与猪角膜基质黏附,HE染色显示之间可形成紧密连接.结论 PRP能有效促进角膜基质细胞增殖活化,PRP与激活剂以合适比例制备的富血小板凝胶具有高度透明性、有序的组织结构、良好的生物相容性、良好的黏附性,适合用于角膜基质再生.
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自体富血小板凝胶治疗臀部巨大压疮1例的护理
对1例臀部巨大压疮患者在彻底清创,控制血糖,控制感染的基础上采用自体富血小板凝胶(PG)治疗.结果窦道愈合,疮面完全被健康肉芽组织覆盖,再行疮面植皮术,疮面完全愈合出院.提示有效的心理护理,疮面彻底清创,PG制备时严格无菌操作,确保按准确比例混合PG与溶媒,治疗后密切观察生命体征及疮面肉芽生长情况,可促进巨大溃疡愈合.
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不同比例激活剂对富血小板凝胶的生物学影响
目的 比较不同比例激活剂对富血小板凝胶的生物学影响,研究其用于角膜基质再生的可行性.方法 抽取兔全血,经二次离心法制备富血小板血浆(PRP),将PRP与激活剂按不同比例激活,制备PRP凝胶.实验分为3个实验组,分别为9∶1组(PRP∶激活剂=9∶1)、11∶1组(PRP∶激活剂=11∶1)及5∶1组(PRP∶激活剂=5∶1).将兔角膜基质细胞与PRP凝胶共同培养,进行组织形态学观察,用细胞增殖一毒性检测试剂盒法,分别检测3个实验组PRP凝胶释放的复合生长因子促角膜基质细胞的增殖作用.对不同实验组制备的PRP凝胶与双层猪角膜基质进行黏附性观察.结果 9∶1组制备的PRP凝胶促进兔角膜基质细胞的增殖和活化作用强于其他实验组.3个实验组中,只有9∶1组制备的PRP凝胶苏木精一伊红染色法染色结果显示,呈有序的网状支架结构,能紧密黏附并固定双层猪角膜基质.结论 PRP与激活剂以9∶1比例制备的PRP凝胶促角膜基质细胞增殖作用强,同时具有有序网状结构和良好的组织黏附性及相容性,是一种可以用于角膜基质再生的良好支架.
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同种异体富血小板凝胶在难愈性皮肤溃疡中的临床疗效研究
目的 评价同种异体富血小板凝胶(allogeneic rich platelet gel,APG)治疗难愈性皮肤溃疡的有效性和安全性.方法 2016年5月至2017年3月,按照难愈性皮肤溃疡的诊断标准,根据研究对象的纳入及排除标准,共筛选51例患者入组.实验前通过计算机产生随机数字表,按入组时间先后顺序将患者随机分为试验组(26例)和对照组(25例).两组患者治疗前均做细菌培养+药敏实验,并根据其结果给予抗感染治疗和局部溃疡面标准处理.试验组将同种异体APG外敷溃疡面或注射入窦道,再用凡士林油纱覆盖并用3M医用透明敷贴封闭创面,外用纱布敷料包扎;对照组患者选用新型敷料(速愈乐)治疗溃疡面,外用纱布敷料包扎.以溃疡愈合率、总有效率、窦道愈合率、愈合时间及安全性作为疗效评价指标.结果 试验组26例患者溃疡愈合率为77％(20/26),总有效率为100％(26/26),窦道愈合率为100％ (4/4),愈合时间为18 ～42 d,平均30.5 d.对照组25例患者溃疡愈合率为52％(13/25),总有效率为68％(17/25),窦道愈合率为20％ (1/5),愈合时间为21 ～58 d,平均38.5 d.试验组和对照组治疗前后的血常规,输血前ICT(HBV、HCV、HIV、梅毒),T细胞亚群计数(CD4、CD8、CD4/CD8的比值)及血小板抗体检测结果,治疗前后比较差异均无统计学意义(P＞0.05),治疗过程中均无不良反应,治疗后随访患者均无不适.结论 同种异体APG用于治疗难愈性皮肤溃疡安全有效.
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自体富血小板凝胶治疗糖尿病皮肤慢性难愈合创面的机制及临床应用进展
慢性难愈合创面即无法通过正常有序而及时的修复过程达到解剖和功能上的完整状态,常常是二期愈合的伤口[1].临床上指各种原因形成的创面,经一个月以上规范治疗未能愈合,也无愈合倾向者.20世纪我国人民群众体表慢性难愈合创面发生原因主要为创伤感染、压迫性溃疡、静脉性溃疡、糖尿病溃疡和其他因素.
关键词： 富血小板凝胶 富血小板血浆 糖尿病皮肤慢性难愈合创面 -
自体富血小板凝胶在难治性糖尿病皮肤溃疡中的应用
目的 对自体富血小板凝胶(autologous platelet-rich gel,APG)在难治性糖尿病皮肤溃疡中的应用进行综述.方法 广泛查阅文献,对APG促进糖尿病皮肤溃疡愈合的作用机制和疗效进行综合分析.结果 APG具有促进溃疡愈合的作用,特别是在难治性糖尿病皮肤溃疡方面有较好的效果.其主要作用机制可能与APG中含有高浓度的各种生长因子有关.结论 APG具有促进难治性糖尿病皮肤溃疡愈合的作用,有良好的应用前景,可以作为一种新的辅助治疗手段应用于临床.
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富血小板凝胶制备方法的研究进展
富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)是全血经过密度梯度离心法分离产生的血小板浓缩物.在PRP形成富血小板凝胶(platelet-rich gel,PRG)的过程中,血小板通过脱颗粒作用,释放血小板源性生长因子、转化生长因子β1、转化生长因子β2、胰岛素样生长因子、表皮生长因子和血管内皮细胞生长因子等[1].
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富血小板血浆复合软骨细胞用于聚氨酯支架成软骨的研究
目的:以聚氨酯(polyurethane,PU)支架、富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)及兔耳廓软骨细胞于裸鼠皮下构建组织工程软骨.方法:分离培养新西兰大白兔耳廓软骨细胞；制备PRP含量为5％、10％、15％、20％、25％、30％6种浓度的培养液,MTT检测其对软骨细胞增殖的影响.支架分3组(n=6):A组:PU/PRP/软骨细胞复合组；B组:PU支架；C组:PU/软骨细胞复合组,将3组支架同时分别移植入裸鼠背部皮下；8周后取出,通过大体观察、硬组织切片、Realtime-PCR检测新生软骨.结果:不同浓度的PRP均促进了软骨细胞的增殖,25％、30％浓度组效果明显(P＜0.05)；A组新生软骨与支架结合较紧密,牵拉组织不易与支架分离,B组无软骨形成,C组新生软骨容易与支架分离；A组硬组织切片可见大量成熟的软骨陷窝形成,而C组软骨陷窝较少；A组新生软骨中aggrecan、collagen Ⅱ、Sox9基因的表达均较C组均有不同程度的上调(P＜0.05).结论:以PU支架、PRP及耳廓软骨细胞可用于构建组织工程软骨.
关键词： 富血小板血浆 聚氨酯支架 软骨再生 Real-time-PCR 富血小板凝胶 -
不同激活剂对人富血小板血浆形成凝胶及释放活性物质影响的实验研究
目的 探讨葡萄糖酸钙和凝血酶对人富血小板血浆(PRP)形成富血小板凝胶(PRG)与释放生物活性物质的影响以及临床意义.方法 2016年5-8月,笔者单位招募符合入选标准的6名健康献血志愿者,采集每名志愿者血小板制备PRP.(1)每名志愿者取10 mL PRP,按照随机数字表法分为凝血酶激活组5 mL、葡萄糖酸钙激活组5 mL,凝血酶激活组加入100 U/mL凝血酶溶液0.5 mL、葡萄糖酸钙激活组加入100 g/L葡萄糖酸钙溶液0.5 mL,于37℃水浴中激活1h.记录PRG形成时间,观察激活1h内PRG的形成情况.激活1h,收集PRG,一部分行HE染色观察纤维蛋白分布,一部分于透射电镜下观察血小板超微结构;收集上清液,采用ELISA法检测TGF-p1、血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)、血管内皮生长因子、bFGF、EGF、胰岛素样生长因子Ⅰ的含量.(2)每名志愿者另取10 mL PRP同前分组,2次离心及2次PBS重新悬浮获得血小板悬液,同实验(1)加入相应激活剂处理1h.采用纳米颗粒跟踪分析仪检测血小板来源不同直径微囊泡浓度及总微囊泡浓度.对数据行t检验.结果 (1)凝血酶激活组PRG形成时间为(228±40)s,此时PRG体积大;激活30 min PRG体积回缩至小.葡萄糖酸钙激活组PRG形成时间为(690±71)s,此时PRG体积大;激活55 min PRG体积回缩至小.凝血酶激活组PRG形成时间明显短于葡萄糖酸钙激活组(t=15.17,P＜0.01).(2)HE染色显示,激活1h,凝血酶激活组PRG中纤维蛋白红染面积大,密集分布;葡萄糖酸钙激活组PRG中纤维蛋白红染面积小,松散分布.透射电镜显示,激活1h,凝血酶激活组PRG中血小板均呈碎片状;葡萄糖酸钙激活组PRG中可见正在裂解的血小板、α颗粒结构及未裂解的α颗粒、致密体结构.(3)凝血酶激活组PRP释放的PDGF-BB含量为(7.4±0.8)ng/mL,明显高于葡萄糖酸钙激活组[(4.9±0.5)ng/mL,t=5.41,P＜0.01].葡萄糖酸钙激活组PRP释放的bFGF含量为(960±151) pg/mL,明显高于凝血酶激活组[(384±56) pg/mL,t=8.75,P＜0.01].2组PRP释放的其余4种生长因子含量相近(t值为0.11 ～1.97,P值均大于0.05).(4)葡萄糖酸钙激活组血小板来源的总微囊泡、直径大于100 nm微囊泡、直径小于或等于100 nm外泌体的浓度分别为(165.8±15.1)×108/mL、(142.4±12.3)×108/mL、(23.4±2.9)×108/mL,均明显高于凝血酶激活组[分别为(24.7±4.6)×108/mL、(22.6±4.0)×108/mL、(2.1±0.7) ×108/mL,t值为17.36～22.66,P值均小于0.01].结论 葡萄糖酸钙缓慢激活PRP,形成的PRG回缩缓慢、释放高含量的bFGF和高浓度的微囊泡,宜于修复关节腔及窦道性创面;凝血酶快速激活PRP,形成的PRG回缩较快,释放高含量的PDGF-BB和一定浓度的微囊泡,宜于修复急性创伤.
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富血小板凝胶促软骨细胞增殖的体外实验研究
目的：利用二次离心法制备富血小板凝胶，将其与软骨细胞复合，观察软骨细胞增殖与表达，为组织工程软骨构建提供良好支架材料。方法将兔静脉血使用二次离心法制备富血小板血浆，检测其中多种生长因子浓度，并与分离培养的兔软骨细胞混合后以激活剂激活，培养并以MTT法观察软骨细胞增殖情况，使用realtime-PCR方法检测软骨细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原和SOX-9基因表达，并与普通培养软骨细胞比较，明确富血小板凝胶与软骨细胞混合后软骨细胞增殖表达情况。结果富血小板凝胶萃取液中PDGF-AB、TGF-β1、IGF-1、VEGF生长因子浓度明显高于全血(P<0.05)。富血小板凝胶与软骨细胞复合培养，软骨细胞增殖速度明显高于普通培养软骨细胞(P<0.05)。培养7 d后检测软骨细胞中蛋白聚糖、Ⅱ型胶原和SOX-9基因表达明显高于普通软骨细胞(P<0.05)。结论富血小板凝胶与软骨细胞共培养，可明显促进软骨细胞增殖和表达，是优良的组织工程软骨构建方案。
