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补肾益气活血方对兔软骨细胞凋亡和bcl-2mRNA表达的影响
目的:观察补肾益气活血方含药血清对硝普钠诱导的体外培养兔关节软骨细胞凋亡和bcl-2mRNA表达的影响.方法:取新西兰兔的关节软骨,将软骨细胞分离传代后,置入37℃、5%CO2培养箱内,各组在相应的血清培养24h后,采用TUNEL法和原位杂交法分别检测各组软骨细胞的凋亡和bcl-2mRNA表达.结果:①补肾益气活血方含药血清各组的软骨细胞凋亡率明显低于模型组(P＜0.01).②补肾益气活血方含药血清各组对软骨细胞bcl-2mRNA表达明显高于模型组(P＜0.01).结论:补肾益气活血方能通过上调bcl-2mRNA的表达,抑制软骨细胞的凋亡,达到防治膝骨关节炎的目的.
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大鼠脊髓慢性压迫及减压后神经细胞凋亡及其相关基因的表达
目的:观察慢性压迫性脊髓损伤后及减压后神经细胞凋亡和Bcl-2mRNA,P53mRNA,CASPASE-3对神经功能恢复的影响.方法:将55只同龄Wistar大鼠,置入后路渐进式压迫装置,制作成慢性压迫性脊髓损伤模型.随机分为假手术对照组(A组5只),慢性脊髓压迫组(B组25只),减压组(C组25只).应用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记(TUNEL)技术及原位杂交检测方法,观察各组细胞凋亡率及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA、P53mRNA、CASPASE-3在慢性压迫性脊髓损伤后及减压后的表达,分别于损伤后及减压后1、3、7、14、28d对慢性脊髓损伤区进行细胞凋亡及原位杂交检测.结果:A、B、C三组均发现神经细胞凋亡及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA,P53mRNA,CASPASE-3的表达,A、B、C三组细胞凋亡率及阳性细胞灰度值比较,差异有显著性意义(P＜0.05).阳性细胞表达程度与细胞凋亡的减少及神经功能的恢复相一致.结论:慢性压迫性脊髓损伤可导致大量的神经细胞凋亡,同时激活内源性保护机制,使脊髓发生适应性改变.减压可能通过激活此机制而减轻神经细胞凋亡,起到保护作用.
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升清降糖合剂对1型糖尿病小鼠胰岛细胞形态功能及凋亡相关基因的影响
目的:探讨升清降糖合荆(简称SQ)对1型糖尿病小鼠胰岛细胞形态功能及凋亡相关基因Bc1-2、Bax mRNA表达的影响.方法:小剂量连续多次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立1型糖尿病小鼠模型.根据不同的干预方式将1型糖尿病小鼠分为模型组、SQ低剂量组、SQ高剂量组.每周测小鼠体质量和血糖,于干预第6周末,各组小鼠麻醉后心脏取血,ELISA法测定血清C肽水平,取胰腺组织HE染色观察病理学改变,免疫组化法观察胰岛素表达情况,RT-QPCR法检测胰腺组织凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达.结果:平均体质量:正常对照组(26.32±0.91)＞SQ高剂量组(24.40±1.42) ＞SQ低剂量组(23.01±1.70)＞模型组(22.81±1.61),SQ高剂量组与模型组相比,差异具有显著性(P＜0.01).空腹血糖:模型组(18.69±2.21) ＞SQ低剂量组(15.92±3.35) ＞SQ高剂量组(14.13±4.19)＞正常对照组(6.51±0.70),SQ低、高剂量组相较于模型组血糖明显降低,差异有显著性(P＜0.05、P＜0.01).血清C肽:正常对照组(0.72±0.09) ＞SQ高剂量组(0.69±0.07) ＞SQ低剂量组(0.60±0.06)＞模型组(0.33±0.08),SQ低、高剂量组血清C肽与模型组相比均明显升高,差异有显著性(P＜0.01).Bcl-2mRNA、BaxmRNA、Bcl-2/Bax比值:Bcl-2mRNA正常对照组(1.03±0.28) ＞SQ高剂量组(0.66±0.20)＞SQ低剂量组(0.39±0.17)＞模型组(0.29±0.05);BaxmRNA模型组(5.73±0.80) ＞SQ低剂量组(2.80±1.11) ＞SQ高剂量组(1.68±0.90)＞正常对照组(1.04±0.31);Bcl-2/Bax比值正常对照组(1.09±0.56) ＞SQ高剂量组(0.50±0.26)＞ SQ低剂量组(0.15±0.08)＞模型组(o.05±0.01),与模型组相比,SQ低、高剂量组Bcl-2mRNA、Bcl-2/Bax比值均显著升高,BaxmRNA均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).胰岛病理切片HE染色形态学观察发现:模型组小鼠胰岛明显萎缩,轮廓不规则,胰岛细胞数量明显减少,排列紊乱,分布稀疏,胞质染色浅呈空泡状,部分胞核固缩,伴有炎症细胞浸润,SQ低、高剂量组小鼠胰岛细胞受损程度较轻.胰岛素免疫组化染色:模型组小鼠胰岛素染色阳性面积仅占胰岛较小部分,SQ低、高剂量组染色较深,在胰岛内分布较广泛均匀.结论:SQ能明显增加糖尿病小鼠的体质量,降低空腹血糖水平,提高血清C肽水平,具有保护胰岛细胞功能,促进胰岛素分泌的作用.其机制可能与其上调1型糖尿病模型小鼠胰腺组织Bcl-2mRNA表达、抑制BaxmRNA表达,调节Bcl-2/Bax比值,抗胰岛细胞凋亡有关.
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同种异体骨髓间充质干细胞穴位移植1天与7天对急性心肌梗死后心肌细胞凋亡的对比研究
目的:进行兔骨髓间充质干细胞(MSCs)穴位移植1天与7天对梗死区心肌细胞凋亡的对比研究.方法:将已建立心肌梗死模型的日本大耳白兔随机分为3组,包括模型组、穴位移植干细胞1天组、穴位移植干细胞7天组.用开胸结扎冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型,将梗死后的兔分两组分别在1天与7天穴住注射相同数量的已经过分离、培养、扩增、标记后的MSCs悬液.采用脱氧核苷酸末端转移酶介导原位缺口标记(TUNEL法)确定细胞凋亡数,免疫组化SABC方法及RT-PCR和蛋白印迹法观察心肌细胞中Fas、FasL、Bcl-2蛋白及mRNA的表达.结果:(1)免疫组化示:梗死区凋亡细胞的表达,模型组高于正常组、穴位注射干细胞1天组和穴位注射干细胞7天组(P<0.05),穴位注射干细胞7天组低于穴位注射干细胞1天组(但无统计学差异P>0.05);Fas蛋白的表迭,模型组高于正常组、穴位注射干细胞1天组和穴位注射干细胞7天组,穴位注射干细胞7天组低于穴位注射干细胞1天组(P<0.05);FasL蛋白的表达,穴位注射干细胞1天组高于正常组、模型组、穴位注射干细胞7天组(P<0.05);Bcl-2蛋白的表达,模型组低于正常组、穴位注射干细胞1天组和穴位注射干细胞7天组(P<0.05),穴位注射干细胞7天组高于穴位注射干细胞1天组(但无统计学差异P>0.05).(2)RT-PCR与Western Blotting均显示:Fas、FasL、Bcl-2蛋白mRNA的表达穴位移植干细胞1天均高于穴位移植干细胞7天组.结论:(1)穴位移植骨髓间充质干细胞可使梗死及周围区心肌细胞凋亡数减少,其机制可能是通过Fas、FasL蛋白的减少、Bcl-2蛋白的增多来调节的.(2)穴位移植骨髓间充质干细胞7天较穴位移植骨髓问充质干细胞1天更能减少凋亡细胞的数量.
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针灸预处理对缺血再灌注大鼠心肌Bcl-2mRNA和BaxmRNA基因表达的影响
目的:为探求针灸预处理与缺血预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2mRNA及BaxmRNA的影响,丰富治未病理论.方法:采用针灸预处理组间,针灸预处理与缺血预处理比较,利用大鼠心肌缺血再灌注模型观察,分正常对照组,假手术组,缺血再灌注组,缺血预处理组,手针预处理日1次组,电针预处理日1次组,艾灸预处理日1次组,手针预处理日2次组,电针预处理日2次组,艾灸预处理日2次组.结果:表明针灸预处理与缺血预处理使bcl-2mRNA增多,使baxmRNA减少,且针灸预处理日2次组比日1次组和缺血预处理更有效,进一步证明了中医针灸"治未病"理论科学价值.
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抗痫灵对戊四氮诱导癫痫大鼠海马区Bcl-2mRNA及其蛋白表达的影响
目的：观察中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠海马Bcl-2mRNA及其蛋白表达的影响。方法：观察大鼠痫性发作行为；采用免疫组化方法检测大鼠脑组织中海马Bcl-2蛋白的表达；采用实时荧光定量(Real timePCR)方法检测大鼠海马组织Bcl-2mRNA的相对表达。结果：经过中药复方抗痫灵治疗6周后，大鼠痫性发作行为明显减少；海马区抑制凋亡基因Bcl-2mRNA及其蛋白表达均升高。结论：抗痫灵能减少癫痫发作次数，上调海马区抑凋亡基因Bcl-2mRNA及其蛋白表达。
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银杏叶黄酮提取工艺及对Hela细胞Bcl-2 mRNA表达的影响
目的银杏叶黄酮提取工艺优化及抗肿瘤作用的研究.方法采用碱液法、乙醇法、丙酮法3种不同的提取方法,设定不同的固液比、提取时间,优化出佳条件,用于银杏叶黄酮类化合物的提取.无血清培养He la细胞,以银杏叶黄酮提取物为诱导剂,24h后用RT-PCR方法检测Hela细胞中癌基因Bcl-2 的表达情况.结果 70%乙醇、固液比1∶3、回流时间为2h的条件下,提取银杏叶黄酮类化合物得率高.采用RT-PCR方法检测显示,银杏叶黄酮类化合物作用Hela细胞 24h后,Bcl-2 mRNA表达水平下降.结论 70%乙醇、固液比1∶3、回流时间为2.5h,为银杏叶黄酮提取佳条件.银杏叶黄酮能下调癌基因Bcl-2 mRNA表达水平,从而可能有抗肿瘤作用.
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松果菊苷对过氧化氢损伤的PC12细胞的保护作用及机制研究
目的 研究松果菊苷(echinacoside,ECH)对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制.方法 用终浓度为0.4 mmol·L-1的H2O2损伤PC12细胞,测定细胞存活率和Na+,K+-ATP酶的活性;用激光共聚焦法(LSCM)检测线粒体膜电位(MMP);用RT-PCR法检测Bcl-2和p53 mRNA表达量的变化.结果 10 mg·L-1松果菊苷可以提高H2O2损伤的PC12细胞存活率和Na+,K+-ATP酶的活力、升高线粒体膜电位、降低p53 mRNA水平但增高Bcl-2 mRNA水平 (P<0.05或P<0.01).结果 松果菊苷可保护H2O2诱导的PC12细胞损伤,升高MMP、下调p53 mRNA和上调Bcl-2 mRNA可能是其作用机制.
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密蒙花总黄酮对去势导致干眼症雄鼠泪腺Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响
目的 观察密蒙花总黄酮对雄激素水平下降所致干眼症雄鼠的泪腺上皮细胞中Bax Mrna、Bcl-2 Mrna表达的影响.方法 将健康1月龄、体质量150～180 g Wistar雄性大鼠150只随机分为A1、B1、C1、D1、E1、A3、B3、C3、D3、E3、A5、B5、C5、D5、E5共15组,每组10只.采用去势的方法建立雄激素水平下降所致干眼症动物模型,分别观察各组Schimer Ⅰ试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色情况,以确定干眼症模型是否建立成功.其中,A代表正常组;B代表假手术组;C代表模型对照组;D代表雄激素对照治疗组(造模成功后,丙酸睾酮1 mg·kg-1大腿肌肉注射,每3 d 1次);E代表密蒙花总黄酮治疗组(造模成功后,密蒙花总黄酮0.045 g·kg-1灌胃,每3 d 1次);1代表饲养1个月;3代表饲养5个月;5代表饲养7个月.用RT-PCR法对各组泪腺组织中Bax Mrna、Bel-2 Mrna的表达进行检测,并比较.结果 Sclaimer Ⅰ试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色结果显示,大鼠均在造模3个月后形成干眼症.D3组、D5组泪腺组织中的Bax Mrna相对含量较C3组、C5组降低,差异均有统计学意义(均为P<0.01);E3组、E5组较C3组、C5组亦降低,差异亦均有统计学意义(均为P<0.01);且E3组(3.787±0.165)与E5组(5.707±0.411)Bax Mrna相对含量差异有统计学意义(P<0.01);D5组(4.610±0.481)与E5组间比较差异亦有统计学意义(P<0.01).D3组、D5组Bcl-2 Mrna的相对含量较C3组、C5组增加,差异均有统计学意义(均为P<0.01);E3组、E5组较C3组、C5组亦增加,差异均有统计学意义(均为P<0.01);D5组(5.713±0.339)与E5组(3.147±0.057)间比较Bcl-2 Mrna表达差异有统计学意义(P<0.01);且E3组(8.427±0.055)与E5组比较差异亦有统计学意义(P<0.01).结论 密蒙花总黄酮可使大鼠泪腺中Bcl-2 Mrna表达增加,降低Bax Mrna的表达,但随病程的延长其作用弱于雄激素.密蒙花总黄酮治疗雄激素水平下降所致干眼症的机制可能与其产生拟雄激素效应后,对凋亡相关基因Bcl-2 mRvNA表达的上调和Bax mrRNA表达的下调有关.
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茅莓总皂苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后凋亡相关基因Bc1-2mRNA,BaxmRNA表达的影响
目的:探讨茅莓总皂苷对缺血性再灌注后凋亡相关基因Bc1-2mRNA,BaxmRNA表达的影响.方法:采用大鼠大脑中动脉阻塞造成局灶性脑缺血再灌注模型,以原位杂交技术观察脑缺血再灌注不同时间点茅毒总皂苷5,10,20 mg·kg-1对凋亡相关基因Bcl-2 mRNA,Bax mRNA的表达.结果:3个剂量的茅莓总皂苷治疗组增加Bcl-2 mRNA阳性细胞的表达,降低Bax mRNA阳性细胞的表达.结论:茅莓总皂苷有明显的抗凋亡作用可能与增加Bcl-2 mRNA阳性细胞的表达,降低BaxmRNA阳性细胞的表达有关.
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牛蒡多糖对K562细胞增殖的抑制及其机制的探讨
目的 研究牛蒡多糖对K562细胞增殖的抑制作用并初步探索其机制.方法 MTT法检测牛蒡多糖对K562细胞增殖的抑制作用,RT- PCR检测BCL-2mRNA、Bax mRNA的表达.结果牛蒡多糖能明显抑制K562细胞的增殖;BCL-2基因表达下调,Bax的基因表达增多.结论 牛蒡多糖对K562细胞增殖有抑制作用,其机制可能与BCL-2基因表达下调,Bax的表达上调有关.
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芒柄花黄素对人肺癌细胞A549增殖与凋亡的影响及其机制
探讨芒柄花黄素对人肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响及作用机制.方法:20,40,80 μmol/L的芒柄花黄素作用于人肺癌细胞A549后,采用MTT法分析芒柄花黄素对A549细胞增殖的影响;流式细胞术检测芒柄花黄素对A549细胞凋亡的影响,采用RT-PCR检测芒柄花黄素对A549细胞Bcl-2 mRNA的表达.结果:经芒柄花黄素作用后,MTT结果显示A549细胞的生长抑制率明显增加,流式细胞术检测显示A549细胞凋亡率升高,此外,RT-PCR检测A549细胞Bcl-2 mRNA表达水平明显降低.结论:芒柄花黄素诱导肺癌细胞A549凋亡,抑制其生长,这可能与其下调Bcl-2 mRNA表达有关.
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预存糖原对肝部分切除术中热缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨预存糖原对肝部分切除术中热缺血再灌注损伤的保护作用.方法 将38 例Child A-B 级拟行肝部分切除的原发性肝癌患者按入院顺序分为试验组及对照组,每组19 例.试验组于术前24 h 内静脉滴注高浓度葡萄糖,对照组不做特殊处理.两组患者均采用阻断第一肝门方法 行病变肝脏切除术.抽血检验所有患者术前及术后第1、5 天的肝功能情况.分别于缺血前、缺血后及再灌注2 h 获取正常肝组织,检测所有患者肝组织糖原含量、缺血前、缺血后及再灌注2 h 肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性.采用实时定量PCR 方法 检测肝门阻断前及再灌注2 h 后肝组织Bcl- 2 mRNA 转录水平.结果 试验组肝组织糖原含量明显高于对照组(P<0.01),术后第1、5 天肝脏功能优于对照组(P<0.05),在缺血后、再灌注2 h 其SOD 活性高于对照组(P<0.05),再灌注2 h 后试验组Bcl-2 mRNA 表达上调高于对照组.结论 术前预存糖原可显著减轻患者肝切除术中因实施肝门阻断所导致的缺血再灌注损伤,其机制可能与预存糖原上调肝脏Bcl-2 mRNA 转录有关.
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中药异位宁对子宫内膜异位症模型大鼠相关凋亡基因作用的实验研究
本文通过研究异位宁对bcl-2mRNA、baxmRNA及其蛋白表达的影响来阐述异位宁治疗子宫内膜异位症的作用机制.实验表明:异位宁具有促进异位内膜细胞凋亡的作用,以高剂量组效果明显.异位宁高剂量组bcl-2蛋白,bcl-2mRNA阳性表达率显著降低,同模型对照组比较有显著差异(P＜0.01);而bax蛋白,baxmRNA的阳性表达率显著升高,与模型组比较有显著差异(P＜0.01).说明在异位宁的作用下,异位内膜细胞通过bcl-2基因的低表达,bax基因的高表达,而增强了异位内膜细胞的凋亡能力,使得异位内膜细胞在宫腔外的种殖与存活受到限制进而使病灶萎缩,从而达到治疗的目的.
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甘草配伍甘遂对大鼠肾脏Bcl-2、Bax表达的影响
目的:以Bcl-2、Bax蛋白及mRNA表达水平为指标,观察甘草与甘遂反药对配伍对大鼠肾脏功能的影响及与甘草比例的关系.方法:大鼠50只,随机分为甘遂组、甘遂配伍甘草1∶0.25组、甘遂配伍甘草1∶0.5组、甘遂配伍甘草1∶1组和正常对照组,各组均ig给予相应药物,给药剂量依次为2、2.5、3、4g/kg,连续给药28天.采用免疫组化法检测大鼠肾脏中Bcl-2及Bax蛋白水平;采用RT-PCR法检测其肾脏中Bcl-2及Bax mRNA水平.结果:各给药组2、2.5、3、4g/kg Bcl-2在蛋白及mRNA表达水平均显著低于正常对照组;各比例甘草配伍甘遂组2.5、3、4g/kg Bcl-2在蛋白及mRNA表达水平显著高于甘隧组4g/kg,且与甘草比例呈正相关.各给药组2、2.5、3、4g/kg Bax在蛋白及mRNA表逸水平均显著高于正常对照组;各比例甘草配伍甘隧组2.5、3、4g/kg Bax在蛋白及mRNA表达水平均显著低于甘隧组4g/kg,且与甘草比例呈负相关.结论:长期应用甘遂可加速大鼠肾脏细胞的凋亡,影响肾脏功能.甘草可抑制甘遂对肾脏的损害,且有明显的剂量依赖关系.
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实验性ARDS时Fas、Bcl-2在肝细胞中表达的动态观察研究
目的:探讨油酸致急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)过程中肝细胞凋亡的动态变化.方法:应用TUNEL法、原位杂交技术及光镜和电镜检测ARDS过程肝组织细胞凋亡及FasmRNA和Bcl-2 mRNA表达的情况.结果:TUNEL法显示阳性结果,注射OA后肝组织细胞凋亡指数均比对照组明显增加(P＜0.01),注射OA 30分钟细胞凋亡指数达顶峰,以后逐渐下降.FasmRNA和Bcl-2 mRNA的表达较对照组均明显上调(P＜0.01),且FasmRNA表达的增加与肝组织细胞凋亡指数的增加一致,OA 30分钟组FasmRAN表达强,而Bcl-2mRNA在OA 60分钟时表达强.形态学结果显示,细胞凋亡主要发生于早期,而后期以坏死为主.电镜下见到实验组30分钟肝细胞体积缩小且皱缩变形,染色质凝结成块并聚集于胞核边缘形成环状.结论:油酸致ARDS过程中早期兔肝细胞发生凋亡,且可能参与早期的肝功能损害.
