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小儿支气管哮喘的家庭干预
支气管哮喘(asthma)是一种以嗜酸细胞、肥大细胞为主的气道变应原性炎症性疾病.[1]表现为反复发作性喘息、呼吸困难、胸闷或咳嗽等表现.目前全世界哮喘患者达1亿,我国已逾千万,儿童哮喘患病率为0.5～2.0%,个别地区高达5%.因此,小儿支气管哮喘的积极防治就显得尤为重要.我科在在收治的支气管哮喘患儿时,注重家属和患儿的家庭健康指导,收到良好效果,现报道如下.
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花生主要过敏原Ara h2的克隆表达、纯化及免疫学鉴定
花生中的Ara h2蛋白是花生的主要过敏原,本研究从化生中克隆出Arah2的基因并表达了该蛋白,该蛋白具有特异的变应原性.
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重组变应原研究开发的新策略
变应性疾病一般指Ⅰ型过敏性疾病,表现为变应性眼鼻炎、变应性哮喘等,影响了世界人口的15%～25%,血清抑制治疗(SIT)是惟一病因治疗.近十几年来,分子生物学技术的发展解决了许多重要变应原DNA的分离、编码、表达和纯化等问题,合成的重组变应原去除了粗制天然变应原提取物中的无关物质,减低了血清抑制治疗的风险,但仍存在免疫效果不理想等问题.近年随着基因工程技术应用于变态反应学,合成高免疫原性而变应原性低的重组低致敏性变应原或衍生物疫苗(hypoallergenic allergy vaccines)成为重组变应原研究开发的新策略[1].本文对近年应用于诊断和治疗的新型重组变应原及衍生物简介如下.
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氨基糖苷类抗生素耳毒性的机理及防治措施
氨基糖苷类抗生素(aminoglycoside antibiotics,AmAn)应用于临床已有半个多世纪,具有性质稳定、抗菌谱广、杀菌力强、使用简便及价格便宜等优点.但该类药物具有个体差异大、剂量依赖性毒性反应等缺点,应用不当,可引起肾毒性、耳毒性、神经肌肉阻滞作用和变应原性作用等不良反应.本文从自由基细胞毒性、线粒体功能失常、细胞凋亡信号传导通路活化等方面就氨基糖苷类抗生素耳毒性的可能机理及临床应用进展作一介绍.
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中国龙虾变应原性组分分析
[目的]对中国龙虾(Panulirus stimpsoni)变应原性组分进行分离和鉴定.[方法]用Coca's液提取法制备龙虾变应原粗浸液,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质组分,并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量;采用蛋白质-印迹(Western-blotting)鉴定龙虾的主要及次要变应原.[结果]中国龙虾变应原粗浸液分离得到14种以上的蛋白质组分,有6种蛋白质能与患者血清特异性IgE结合,其中分子量为23 000、34 000、64 000的蛋白质结合率较高.[结论]中国龙虾分子量为23 000、34 000和64000的蛋白质为主要变应原,分子量26 000和64 000两种蛋白质在粗浸液中含量并不高,但变应原性较强.
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两种尘螨1类变应原嵌合基因的原核表达及生物活性鉴定
目的 原核表达尘螨1类变应原(粉尘螨1类变应原Derfl和户尘螨1类变应原Derpl基因)的嵌合基因R8,并检测其生物活性. 方法 以含嵌合基因R8的pUCm-T重组质粒为模板,用Derfl的特异性引物进行PCR扩增,产物经酶切后与载体pET28a(+)连接,连接产物转入大肠埃希菌(E.coli) BL21感受态细胞,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后纯化,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测；纯化后的蛋白用ELISA检测其与粉尘螨过敏患者血清(IgE)的结合能力,同时以重组rDerf 1和rDerp 1蛋白作为对照.为检验嵌合蛋白R8的免疫原性,将75只BALB/c小鼠随机均分为5组,分别为PBS组(阴性对照组)、rDerf1组、rDerp 1组、R8组和哮喘组(阳性对照组).除PBS组外,其余各组分别于第0、7和14天每鼠腹腔注射(0.1μ/μl)粉尘螨注射液100μl,第21～27天每鼠每天雾化吸入0.5μg/ml粉尘螨注射液悬浊液,30 min/d.rDerf1组、rDerp 1组和R8组于第25～27天雾化前30 min,分别腹腔注射100μg/ml的rDerf1、rDerp 1和R8蛋白各200 μl进行特异性免疫治疗,PBS组用等量PBS进行腹腔注射和雾化吸入.所有小鼠于第27天雾化吸入后24 h气管切开,用1 ml PBS进行肺泡灌洗,收集肺泡灌洗液(BALF),检测γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平. 结果 SDS-PAGE结果显示,R8表达产物的蛋白相对分子质量(Mr)约为35000.ELISA检测结果显示,嵌合蛋白R8与粉尘螨过敏患者血清IgE的结合力为(37.03±12.46) μg/ml,显著低于rDerf1[ (80.44±15.50) μg/ml]和rDerp 1[(90.79±10.38) μg/ml](P＜0.01).动物实验结果显示,R8组IFN-γ水平[(343.43±38.79) pg/ml]与rDerf1组[(322.98±30.36) pg/ml]和rDer p 1组[(314.97±33.89) pg/ml]的相比,差异均无统计学意义(P＞0.05)；与PBS组[(393.93±50.68) pg/ml]和哮喘组[(208.44±46.11) pg/ml]相比,差异均有统计学意义(P＜0.01).R8组IL-4水平显著低于其他各组水平(P＜0.05或0.01). 结论 表达了具有低变应原性和高免疫原性的尘螨1类变应原嵌合基因R8.
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粉尘螨变应原多聚体及其变应原性
目的制备粉尘螨变应原多聚体(PDF).方法用戊二醛与粉尘螨浸液(Df)反应制成PDf,通过凝胶层析分析其稳定性,并用皮肤点制试验测定其变应原性.结果获得相对分子质量在600 000范围内的PDf,并具有低变应原性,且在2年内相当稳定.结论制成的PDf可用于临床免疫治疗,它具有安全性、稳定性和有效性.
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霜天蛾昆虫变应原的变应原性及免疫原性分析
目的 分析霜天蛾主要变应原的变应原性和免疫原性,为进一步制备霜天蛾标准化变应原疫苗和基因工程重组霜天蛾昆虫变应原奠定基础.方法 应用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳对霜天蛾变应原蛋白成分进行分离,对9例霜天蛾过敏患者血清分别进行IgE、IgG免疫印记分析,并对比分析IgE、IgG反应变应原成分.结果 霜天蛾提取液经SDS-PAGE染色后显示出20余种蛋白质成分,相对分子质量12 000～128 000.免疫印迹分析结果显示具有变应原性的蛋白相对分子质量及反应率分别为:74 000(88.9%),66 000(22.2%),49 000(22.2%),36 000(77.8%),25 000(33.3%),具有免疫原性的蛋白相对分子质量及反应率分别为:79 000(33.3%),74 000(66.7%),66 000(22.2%),49 000(22.2%),36 000(44.4%),25 000(55.6%).结论 霜天蛾变应原中具有较强变应原活性的蛋白质相对分子质量为74000和36000,具有较强免疫原活性的蛋白质相对分子质量为74 000和25 000的蛋白质,是霜天蛾过敏患者特异性过敏诊断和治疗的主要成分.
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油菜花粉提取液免疫活性的实验研究
[目的]研究油菜花粉提取液免疫原性及变应原性.[方法]制备油菜花粉提取液,与蒿草花粉作对照.分别免疫豚鼠制备抗血清,采用间接Dot-ELISA检测抗血清中IgG抗体;采用光学显微镜和激光共聚焦扫描显微镜,分别观察经油菜花粉及抗血清孵育作用后的大白鼠腹腔肥大细胞脱颗粒百分数和细胞内游离钙浓度变化.[结果]油菜花粉、蒿草花粉抗原分别能与相应豚鼠抗血清中IgG抗体结合.其中蒿草花粉抗血清滴度1:128;油菜花粉抗血清滴度1:32.同时还发现蒿草花粉抗血清与油菜花粉抗原发生结合,血清滴度1:1 64,而且油菜花粉抗血清也与蒿草花粉抗原发生结合,血清滴度1:4.阴性对照组肥大细胞脱颗粒百分数为12%,细胞内游离钙浓度为26.50±4.770D值;经油菜花粉及抗血清孵育作用后的大白鼠腹腔肥大细胞脱颗粒百分数为38%,细胞内游离钙浓度为158.24±18.100D值.二者P值均<0.05.[结论]油菜花粉提取液具有免疫原性,与蒿草花粉存在交叉反应,可引起肥大细胞脱颗粒.
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葎草花粉变应原的纯化及免疫特性分析
目的 纯化葎草花粉变应原并分析其免疫学活性.方法 粗制葎草花粉提取液经Sephadex G-75Sephacryl S-200HR层析柱纯化,分段收集各组份.SDS-PAGE检测各组分蛋白相对分子质量,ELISA抑制实验及免疫印迹实验分析各组分蛋白质对特异性IgG和IgE的抑制率及与患者血清的反应率.结果 浓缩粗制葎草花粉提取液经SephadexG-75层析柱纯化,得到两个峰,第一峰富含蛋白质,第二峰含有大量色素,蛋白含量甚微,弃之;收集第一峰及其谷段洗脱液(P液),经Sephacryl S-200HR层析柱纯化,分离出4个组份,即第一峰(P1)、谷段(V)、第二峰(P2)和末段(E).电泳结果显示纯化后的蓓草花粉含20多种蛋白质条带,相对分子质量区带为5.0×103～97.4×103,P1段主要是相对分子质量为43×103～97.4×103的蛋白质,P2段和V段主要是相对分子质量为5.0X103～43×103的蛋白质,E段主要是相对分子质量为5.0×103以下的蛋白质;ELISA抑制实验结果显示P1、V、P2、E对sIgG抑制率分别为68%、70%、95%,5%,对sIgE抑制率分别为25%、64%、71%、11%;免疫印迹实验结果显示P1、V、P2、E与患者血清sIgG的反应率分别为65.63%、78.13%、87.50%、6.25%,与患者血清sIgE的反应率分别为25.00%、71.88%、84.38%、15.63%.结论 葎草花粉舍20多种蛋白质成分,相对分子质量在5×103～43×103之间的蛋白质变应原性和免疫原性均较强,为主要变应原;相对分子质量在43×103～94.7×103的蛋白质免疫原性强而变应原性弱,为次要变应原.
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藜草花粉变应原免疫活性分析
目的:分析藜草花粉变应原成分及其变应原性、免疫原性.方法:用Sephacryl S-200HR葡聚糖凝胶层析法分离、纯化藜草花粉变应原,通过十二烷硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电脉法(SDS-PAGE)测定变应原各组分的分子质量;应用免疫印迹法检测各组分蛋白质与藜草花粉过敏性哮喘患者血清中sIgG和sIgE的反应率.结果:藜草花粉经电泳后得到12条蛋白质区带,分子质量依次为92,63.1,61,52,45,43,39.7,38.9,34,31.6,28.4和18.5～12 ku;免疫印迹可见4条sIgE反应带,蛋白分子质量依次为92,34,31.6和18.5～12 ku;与患者血清反应率分别是70%,50%,80%和90%;与血清sIgG结合的反应带有8条,蛋白分子质量为92,61,52,45,43,39.7,31.6和18.5～12 ku;与患者血清反应率分别是80%,40%,10%,20%,80%,10%,10%和100%.结论:藜草花粉变应原主要含12种蛋白质成分,其中分子质量为18.5～12 ku和92 ku的蛋白质变应原活性及免疫原活性均很强,是主要变应原成分;分子质量在34和31.6 ku的蛋白质有较强的变应原性而无或仅有较弱的免疫原性;而分子质量为43,61,45,52和39.7 ku的蛋白质具有一定的免疫原性而无变应原性.
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门诊支气管哮喘患儿的家庭护理指导体会
支气管哮喘(asthma)是一种以嗜酸细胞、肥大细胞为主的气道变应原性炎症性疾病[1].临床以反复发作性喘息、呼吸困难、胸闷或咳嗽为特点,常在夜间与清晨发作,症状可经治疗或自行缓解[2].支气管哮喘是小儿常见的呼吸道疾病之一,也是世界公认的顽症之一,需要规范、长期治疗.门诊雾化吸入是该类患儿辅助治疗手段,通过药物吸入,缓解症状、改善呼吸形态.
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葎草花粉蛋白质抗原的纯化及免疫性活性分析
目的:了解葎草花粉蛋白质变应原的组成并进行纯化,分析其免疫学活性.方法:对葎草花粉变应原皮内试验阳性的支气管哮喘患者,在皮试20min后采静脉血3ml,分离出血清,作为阳性血清.葎草花粉粗制液经sephadex G-75洗脱收集主要蛋白质峰段,再经sephacryl S-200 HR层析柱第2次洗脱,分段收集各组分.用SDS-PAGE法测各组分蛋白质的分子量区带,用ELISA抑制试验测试其对特异性IgG和特异性IgE的抑制率,进一步用IB检测各组分与患者血清的反应率.结果:第1峰段与特异性IgG抑制率为71%、结合率为66%,与特异性IgE抑制率为21%、结合率为25%;谷段与特异性IgG的抑制率为67%、结合率为78%,与特异性IgE的抑制率为61%、结合率为72%;第2峰段与特异性IgG抑制率为95%、结合率为88%,与特异性IgE抑制率为71%、结合率为84%;末段与特异性IgG的抑制率为5%、结合率为6%,与特异性IgE的抑制率为11%、结合率为16%.结论:葎草花粉含20多种蛋白质成分;分子量在5000-43000D的蛋白质变应原性和免疫原性均较强,为主要变应原;分子量在43000-97400D的蛋白质免疫原性强而变应原性弱,为次要变应原.
