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核因子-κB/I-κB在调蛋白促22RV1前列腺癌细胞增殖中的作用研究
细胞的增殖是个复杂的过程，其中涉及诸多因素并有各种机制互相作用。文献［1，2］表明调蛋白（HRG）对依赖雌激素的乳腺癌细胞、卵巢癌细胞有促增殖作用。我们既往的研究证实HRG对22RV1前列腺癌细胞有促进增殖作用［3］，但其作用机制尚未完全明了，本研究即对核因子（NF）-κB/I-κB通道在HRG促22RV1前列腺癌细胞增殖中的作用进行探讨。
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PI3K/AKT通道在调蛋白促22RV1前列腺癌细胞增殖中的作用研究
我们既往的研究证实调蛋白(HRG)对22RV1前列腺癌细胞有促进增殖作用.但其作用机制尚未完全明了,本研究即对磷脂酰肌醇-3羟基激酶 (PI3K)/AKT通道在HRG促22RV1前列腺癌细胞增殖中的作用进行探讨.
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构建survivin shRNA重组载体及靶向下调PC3细胞survivin mRNA的表达
背景:survivin 基因特异性表达于肿瘤和胚胎组织,与肿瘤细胞的分化增殖、浸润转移以及多药耐药密切相关.目的:构建靶向survivin 基因的shRNA 重组质粒表达载体,转染前列腺癌细胞PC3,验证该载体能否下调细胞survivin 基因mRNA 水平.方法:以survivin 基因为靶点设计具有短发夹结构的shRNA 序列,经退火成互补双链后克隆入pENTR/U6 建立重组表达载体pENTR/U6-SUR ;转化E.coli TOP10 菌株,挑取阳性菌落进行菌落PCR 和测序鉴定;将重组质粒转染前列腺癌细胞株PC3 细胞,RT-PCR 检测重组质粒对细胞survivin 基因mRNA 水平的抑制效果.结果与结论:将设计合成的shRNA 序列经退火后克隆至pENTR/U6 载体中,菌落PCR 可扩增出目的条带,测序结果证实插入片段为所需序列;pENTR/U6-SUR 重组质粒转染后PC3 细胞survivin 基因mRNA 表达水平显著下降,且24 h 比48 h 作用更明显.成功构建了靶向survivin 基因的shRNA 质粒表达载体,并证实该载体显著下调了PC3 细胞中survivin 基因mRNA 水平.
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蛇床子素体外对人前列腺癌DU145细胞增殖的抑制作用及机制
目的 观察天然化合物蛇床子素对人前列腺癌DU145细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,为临床应用提供实验基础.方法 用不同浓度的蛇床子素作用于DU145细胞,用四甲基偶氮噻蓝(MTT)法检测细胞增殖;用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测蛇床子素诱导DU145细胞凋亡;用荧光显微镜观察蛇床子素作用于DU145细胞后细胞核的形态变化.结果 MTT法显示,蛇床子素对DU145细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05),并呈现明显的时间浓度依赖性;流式细胞仪法显示,蛇床子素可诱导DU145细胞凋亡,且呈浓度依赖性;荧光显微镜下观察到蛇床子素处理组可见核固缩、核碎裂等典型的凋亡改变.结论 蛇床子素对人前列腺癌DU145细胞的增殖具有抑制作用,机制与其诱导细胞凋亡有关.
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维生素E琥珀酸酯对顺铂抑制LNCaP细胞PSA分泌和诱导细胞凋亡的影响
[目的]从细胞水平研究维生素E琥珀酸酯(VES)对顺铂(CP)引起的前列腺癌(LNCaP)细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并分析其对前列腺特异性抗原(PSA)表达的影响.[方法]VES、CP及二者联合分别作用LNCaP 24 h或48 h,采用MTT法测定其对细胞生长的抑制作用,用荧光染色和透射电镜等形态学方法检测细胞凋亡,并用酶免疫法检测前列腺癌细胞特异性抗原(PSA)的表达情况.[结果]CP、VES和二者合用的IC50 分别为1.92 mg·L-1、16.7 mg·L-1 和1.02 mg·L-1;CP 4 mg·L-1、VES 25 mg·L-1和二者合用的凋亡率分别为37.2 %、57.4%和77.8%;VES 可以加强CP抑制LNCaP细胞分泌PSA的作用.[结论]VES可增强CP抗LNCaP细胞的作用.
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小剂量阿司匹林对前列腺癌细胞的增殖抑制作用研究
前列腺癌（prostate cancer ）是男性生殖系常见的恶性肿瘤之一，发病随年龄的增长而增加，其发病率有明显的地区差异，占男性癌症死亡的第二位［1］。目前，前列腺癌的病因尚未明确，可能与遗传、环境、性激素等因素有关。98％的前列腺癌为腺癌，常从前列腺萎缩的外周部分发生，大多数为多病灶癌［2］。
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苯乙酸钠调控人前列腺癌细胞凋亡的研究
目的为了观察苯乙酸钠(NaPA)对人前列腺癌细胞株(PC-3)的分化诱导作用.方法应用流式细胞术(FCM)、台盼蓝染色计数法和3H-TdR掺入法观察NaPA对人前列腺癌细胞株的细胞周期动力学变化的影响.结果苯乙酸钠对人前列腺癌细胞株的细胞呈剂量依赖性抑制,细胞周期的G0 /G1期升高,S期、G2 /M期相对下降,表明NaPA可抑制人前列腺癌细胞株增殖,主要是S期合成降低.结论提示NaPA通过诱导前列腺癌细胞凋亡治疗前列腺癌具有可期待前景.
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苯乙酸钠诱导人前列腺癌细胞凋亡及其机理的研究
目的探讨苯乙酸钠(NaPA)诱导人前列腺癌细胞株(PC-3)凋亡及其分子机理.方法应用流式细胞术(FCM)观察不同剂量NaPA对PC-3细胞周期改变的影响,通过RT-PCR检测bcl-2和增殖细胞核抗原(PCNA)在mRNA水平的表达.结果 PC-3细胞体外经不同剂量(0 mM/L,1.5 mM/L,3.0 mM/L,6.0 mM/L)NaPA处理后,细胞周期的G0/G1期升高,S期、G2/M期相对下降,G0/G1峰前有明显的亚二倍体峰,即凋亡峰,且随着NaPA浓度的增加,凋亡细胞数逐渐增多(P<0.001);bcl-2和PCNA在mRNA水平随NaPA剂量的增加,表达量下降.结论 NaPA可能通过下调bcl-2和PCNA在mRNA水平的表达诱导PC-3细胞凋亡.
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苦参碱诱导人前列腺癌pc-3m细胞凋亡及对骨桥蛋白表达的影响
目的 探讨苦参碱治疗前列腺癌的可行性及机制.方法 将一定浓度梯度的苦参碱与人前列腺癌细胞株pc-3m孵育后,采用MTT法及流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测pc-3m中骨桥蛋白基因(OPN mRNA)表达水平.结果 苦参碱作用后pc-3m生长明显受抑,且呈时间-浓度依赖性;在流式细胞仪上可见凋亡率增加;pc-3m细胞中OPN mRNA表达阳性,OPN mRNA表达水平明显下调.结论 苦参碱体外能有效抑制pc-3m生长,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调OPN mRNA表达有关.
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姜黄素对前列腺癌细胞C-erbB-2、Bax和Survivin表达的影响
目的:分析姜黄素对前列腺癌细胞Survivin、Bax以及C-erbB-2表达的影响.方法:采用SP免疫组织化学及细胞培养技术对姜黄素影响前列腺癌细胞Survivin、Bax以及C - erbB -2表达的情况进行研究.结果:C - erbB -2和Survivin未加药时的表达为(103.2 ± 11.5)和(120.3 ±22.5),加药后6 h为(175.2 ±18.7)和(197.8 ±25.4),加药后12 h为(252.4 ± 19, 6)和(252.7 ±28.6),加药后24 h为(301.1 ±22.3)和(270.5 ±21.8),对比具有统计学差异(P＜0.05);Bax未加药时的表达为(200.4 ±27.8), 加药后6 h为(160.7 ±25.6),加药后12 h为(122.5 ±21.9),加药后24 h为(120.4 ±20.3),对比具有统计学差异(P＜0.05).结论:姜黄素具有下调前列腺癌细胞C - erbB-2和Survivin、上调前列腺癌细胞Bax的作用,可对前列腺癌细胞DU145的基因蛋白表达进行干扰.
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前列腺癌细胞Transwell小室体外侵袭模型的建立及应用价值研究
目的:建立前列腺癌细胞transwell小室体外侵袭模型,并探讨该侵袭模型在前列腺癌转移研究方面的意义.方法:将200μ12组前列腺癌细胞加入Transwell小室侵袭模型上室分别培养12、24、36、48h,加入侵袭模型上室的细胞取不同浓度(1.0×105、2.0×105、3.0×105、4.0×105/ml)温箱中培养,在不同时间点观察不同浓度的前列腺癌细胞穿过基质膜的细胞数,测定2组前列腺癌细胞系的侵袭能力.结果:穿过ECM胶聚碳酸酯膜的细胞在第12h较少,而随着时间的延长逐渐增多.细胞穿膜在24小时前后显著；同时,穿过人工基底膜的细胞数随着细胞浓度增高而增多,但细胞浓度大于3.0×105/ml时,穿过人工基底膜的细胞数无明显变化.结论:本实验成功建立了前列腺癌细胞Transwell小室体外侵袭模型,其在前列腺癌研究方面具有较高的应用价值.该侵袭模型的建立可间接判断肿瘤的侵袭力并且对探明前列腺癌的转移机制及影响因素具有重要意义.
关键词： 前列腺癌细胞 Transwell小室 肿瘤侵润 -
内皮他丁--治疗前列腺癌的 AR 抑制剂
近日，来自美国的科学家在著名国际期刊PNAS发表一项新研究成果，他们发现血管生成抑制剂内皮他丁（ Endostatin ）除了对血管生成具有抑制作用，还能够抑制前列腺癌细胞中雄激素受体（ AR）的转录活性。这一研究成果为进一步探讨内皮他丁的抗肿瘤作用具有重要意义。
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环六缩酚肽抑制人前列腺癌细胞增殖活性及作用机制
目的:分析环六缩酚肽对人前列腺癌细胞(PC-3)的增殖活性作用,并对其作用机制进行研究.方法:设置空白对照组(加入0.1% 二甲基亚砜)、阳性对照组(加入奥沙利铂)和环六缩酚肽组(加入环六缩酚肽)3组,利用噻唑蓝(MTT)法测定各组人PC-3细胞的增殖率,利用TUNEL法测定各组人PC-3细胞的凋亡率,利用Western blot法测定各组人PC-3细胞Caspase-3、bcl-2及bax蛋白表达的调控情况.结果:培养24h和48h后,阳性对照组和环六缩酚肽组人PC-3细胞增殖率为(35.8±2.78)%、(44.8±3.00)%和(32.3±1.96)%、(38.1±2.12)%,人PC-3细胞凋亡率为(45.2±3.60)%、(48.2±3.71)%和(48.3±3.07)%、(50.1±4.15)%,与空白对照组的(100.0±2.16)%、(100.0±2.61)%和(6.0±0.95)%、(6.3±1.05)%对比具有统计学差异(P<0.05);阳性对照组和环六缩酚肽组前列腺癌细胞中bax和Caspase-3蛋白表达水平增加,bcl-2蛋白表达水平降低,与空白对照组对比具有统计学差异(P<0.05).结论:环六缩酚肽具有抑制人PC-3细胞增殖及凋亡的作用,通过caspase-3和Bax可对PC-3细胞的凋亡进行诱导.
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端粒酶hTERT基因反义核酸对TNF-α诱导前列腺癌PC3细胞凋亡的影响
目的:探讨hTERT基因的两端部分硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)抑制前列腺癌细胞PC3端粒酶活性后,肿瘤坏死因子TNF-α对PC3凋亡的增敏作用.方法:采用端粒重复序列扩增法及TRAP-PCR-ELISA 法检测前列腺癌细胞的端粒酶活性;采用MTT比色试验观察hTERT AS PS-ODN与TNF-α共同作用对前列腺癌细胞PC3生长活力的影响;倒置显微镜观察凋亡细胞的形态变化;通过流式细胞仪测定凋亡细胞的百分率.结果:hTERT基因AS PS-ODN作用于PC3细胞48小时,其端粒酶活性下降,作用72小时,其端粒酶活性受到抑制,与正义寡核苷酸组及空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05).hTERT AS PSODN作用于PC3细胞后加入TNF-α作用48小时,PC3细胞的抑制率与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN 组、TNF-α组及S PS-ODN+TNF-α组相比有显著差异(P＜0.05).hTERT AS PS-ODN作用于PC3细胞后加入TNF-α作用48小时,细胞出现典型的凋亡形态变化.hTERT AS PS-ODN作用于PC3细胞后加入4μg/mL TNF-α作用48小时,凋亡细胞的百分率分别与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN组、TNF-α组及S PS-ODN+TNF-α组相比有显著性差异(P＜0.05).结论:通过hTERT基因AS PS-ODN能降低前列腺癌细胞PC3端粒酶活性;hTERT基因反义核酸对TNF-α诱导前列腺癌细胞PC3凋亡有增敏作用.
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鞘脂激活蛋白C源性神经营养肽NP刺激前列腺癌细胞增殖并上调雄激素受体的表达及转录激活活性
目的:研究鞘脂激活蛋白C(saposin C)活性功能结构域(神经营养肽[NP])对雄激素受体(AR)的表达和转录激活活性的调节.方法:构建含有NP的真核表达载体以及含有TAT蛋白转导结构域和NP的真核表达载体.通过MTT检测异源性表达的NP和TAT-NP对前列腺癌细胞生长的影响.通过RT-PCR、Western blot、转染实验以及荧光素酶报告基因分析方法检测NP对AR基因表达和转录激活活性的影响.结果:NP 能够在缺乏雄激素的情况下刺激雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP的增殖.RT-PCR、Western blot结果显示NP能够诱导AR的基因表达,同时NP与雄激素在上调AR表达方面具有协同增强作用.荧光素酶报告基因分析表明NP能够增强AR的转录激活活性.结论:我们的研究证实,saposin C源性的神经营养肽NP能够以不依赖雄激素的方式上调AR基因的表达和转录激活活性.
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恢复人类前列腺癌PC3细胞中Nkx3.1的表达提高17β雌二醇的抗肿瘤作用
目的:研究恢复同源域结构转录因子Nkx3.1在人类前列腺癌PC3细胞中的表达是否提高17β雌二醇的抗肿瘤作用.方法:构建含人类全长Nkx3.1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1-Nkx3.1-His、pcDNA3.1-Nkx3.1-His与对照质粒pcDNA3.1稳定转染PC3细胞.Nkx3.1在PC3细胞中表达用Western blot方法加以证实,并用MTT方法检测Nkx3.1对PC3细胞增殖的影响.进一步用MTT和流式细胞术检测单独应用17β雌二醇或17β雌二醇结合Nkx3.1对PC3细胞增殖和凋亡影响.我们还用Western blot检测凋亡相关蛋白表达变化.结果:含Nkx3.1cDNA真核表达质粒在PC3细胞中获得了高表达.外源性Nkx3.1表达对PC3细胞增殖无明显影响,但是Nkx3.1明显增强17β雌二醇对PC3细胞的增殖抑制作用.Nkx3.1表达同时增强了17β雌二醇诱导PC3细胞凋亡,这结果在Bcl-2、Bax、caspase-3和PARP等凋亡相关蛋白表达变化得到了进一步证实.结论:结果显示恢复Nkx3.1在PC3细胞中的表达能增强17β雌二醇的抗肿瘤作用.这项体外研究说明在雌激素处理雄激素独立前列腺癌中恢复Nkx3.1的表达是值得考虑的方法.
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9-顺维甲酸对前列腺癌细胞系LNCaP中同源盒基因NKX3.1表达的影响
目的:研究9-顺维甲酸对前列腺癌细胞系LNCaP中同源盒基因NKX3.1表达的调节作用.方法:采用流式细胞术、反转录PCR和Western Blot技术检测9-顺维甲酸对LNCaP细胞周期及NKX3.1表达的影响;构建和转染NKX3.1启动子-报告基因质粒及其缺失突变体,通过报告基因活性测定,鉴定NKX3.1启动子中受9顺-维甲酸调控的区域.结果:通过转染及报告基因检测,发现9-顺维甲酸在LNCaP细胞中可明显提高NKX3.1启动子的活性;RT-PCR和WesternBlot结果显示,9-顺维甲酸可提高NKX3.1 mRNA和蛋白的表达,并呈剂量依赖性;通过启动子缺失突变分析,发现NKX3.1基因上游-936至-921区明显受9-顺维甲酸诱导调节;流式细胞术分析细胞周期的结果显示,9-顺维甲酸可阻止LNCaP细胞于G1期,减少G2/M期细胞.结论:9-顺维甲酸作为诱导分化剂可阻止LNCaP细胞于G1期,减少细胞有丝分裂,并明显上调前列腺特异的抑癌基因NKX3.1的表达.
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外源性一氧化氮对前列腺癌细胞作用的研究
目的研究外源性一氧化氮(NO)对前列腺癌细胞株生长的影响及作用机制.方法以硝普钠(SNP)为一氧化氮供体,不同浓度的SNP作用前列腺癌细胞,采用MTT法测细胞的生存率,Tunel法和流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,通过RT-PCR法检测细胞p21waf1/cip1基因的表达.结果前列腺癌细胞生存率与低浓度的SNP成正比,而与高浓度的SNP成反比.高浓度的SNP可作用于细胞的G1期,诱导细胞凋亡,p21waf1/cip1的表达也随之上调.结论低浓度的SNP促进前列腺癌细胞的生长;高浓度的SNP促进细胞的凋亡,p21waf1/cip1的上调可能是高浓度的SNP诱导前列腺癌细胞凋亡的机制之一.
关键词： 前列腺癌细胞 一氧化氮 一氧化氮供体 p21WAF1/CIP1 凋亡 -
曲古菌素A诱导前列腺癌DU-145细胞有丝分裂的灾变
目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)曲古菌素(trichostatina A,TSA)对前列腺癌DU145细胞有丝分裂的影响,探讨HDACi杀伤肿瘤细胞的新机制.方法:将前列腺癌DC-145细胞分成不加药对照组和不同剂量(100、200、300、400 nmol/L)TSA加药组,药物作用一定时问后,MTT法检测TSA对DU145细胞的杀伤效应,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态的变化,流式细胞术分析细胞周期的改变,免疫荧光染色观察DU145细胞异常的有丝分裂现象,Western blotting检测TSA处理对DU145细胞某些调控蛋白表达的影响.结果:TSA处理诱导DU145细胞发生有丝分裂,TSA处理24h后多核细胞数目由0.24%增加至1.21%.细胞周期计数结果显示,TSA处理后有丝分裂各期细胞比例发生明显改变,表现为有丝分裂前中期细胞所占比例增加,后末期细胞所占比例减少.免疫荧光染色显示,细胞出现多极纺锤体、染色体分离滞后等异常有丝分裂现象.TSA作用于DU145细胞后,能明显抑制Survivin蛋白的表达,增强细胞骨架蛋白Tubulin的乙酰化,并诱导P21蛋白高表达.结论:TSA能够诱使DU145细胞发生有丝分裂灾变,其机制可能与TSA降低Survivin蛋白的表达以及增强微管蛋白的乙酰化有关.
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用RNAi沉默survivin基因表达对前列腺癌细胞系PC3的影响
目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术阻断前列腺癌细胞系PC3中survivin基因的表达,并研究survivin基因沉默后对PC3细胞产生的影响.方法:用真核转录载体pSilencerTM3.1-H1 neo构建针对survivin基因的重组真核转录载体pSilencer 3.1-SVV1、pSilencer 3.1-SVV2和pSilencer 3.1-SVV3,并用脂质体法转染前列腺癌细胞系PC3,通过RT-PCR、蛋白印迹实验检测survivin的表达变化,并用流式细胞术、MTT法检测转染后PC3细胞的凋亡、细胞周期、细胞生长速度、对顺铂的敏感性等方面的变化.结果:重组载体pSilencer 3.1-SVV2和pSilencer 3.1-SVV3有效地阻断了PC3细胞中survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达(P＜0.01).重组载体转染PC3细胞后,与对照组相比,细胞的凋亡增加了10%～15%;细胞生长速度明显变慢,其细胞数在84 h时与对照组相比减少约30%;G1期细胞增加了10%,G2期和S期细胞减少了5%以上.加入顺铂后,pSilencer 3.1-SVV2、pSilencer 3.1-SVV3重组质粒转染的PC3细胞的存活数下降了35%～45%,细胞凋亡则增加了10%～14%.结论:初步证明了survivin基因在前列腺癌细胞分化增殖、抗凋亡等方面所扮演的重要角色,为进一步阐明survivin基因与前列腺癌的关系以及以survivin基因为靶点的前列腺癌基因治疗研究奠定了基础.
