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HPLC-ELSD方法研究不同样品处理方式对益心舒片中人参皂苷Rg1、Re和Rb1含量测定的影响
目的:采用高效液相-蒸发光散射(HPLC-ELSD)方法研究不同样品处理方式对益心舒片中人参皂苷Rg1、Re和Rb1含量测定的影响.方法:采用HPLC-ELSD为检测方法,以人参皂苷Rg1、Re、Rb1分离情况及含量为指标,考察脱脂醇提正丁醇萃取、醇提正丁醇萃取、醇提正丁醇萃取氨试液洗涤3种不同制备方法对益心舒片的影响.采用相同的含量测定方法,比较碱洗处理对不同批次人参药材中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量影响.结果:3种制备方法均能较好地分离益心舒片中人参皂苷Rg1、Re、Rb1成分色谱峰,分离度均大于1.5;氨试液洗涤对人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量有一定的影响,碱洗后人参皂苷Rg1、Re、Rb1总量是未碱洗的1.5-1.8倍.不同批次药材经氨试液洗涤对其含量无影响.结论:益心舒片提取液经氨试液处理后,能促进人参皂苷类其他皂苷转化为人参皂苷Rg1、Re、Rb1.
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“一测多评”法测定腰痹通胶囊中5种皂苷类成分的含量
目的：建立“一测多评”法测定腰痹通胶囊中皂苷类成分含量的分析方法。方法：以腰痹通胶囊为研究对象，建立参照物人参皂苷Rg1与三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的相对校正因子，分别采用外标法和“一测多评”法测定腰痹通胶囊中5种皂苷类成分的含量，并将两种测定方法的结果进行对比分析，以验证“一测多评”法的合理性、可行性和可重复性。结果：腰痹通胶囊中皂苷类成分间的相对校正因子分别为：f 人参皂苷Rg1/三七皂苷R1=0.999、f人参皂苷Rg1/人参皂苷Re=1.228、f人参皂苷Rg1/人参皂苷Rb1=0.990、f人参皂苷Rg1/人参皂苷Re=1.094。“一测多评”法的计算结果与外标法的实测值之间无显著性差异，实验所得的相对校正因子可信。结论：本实验建立的“一测多评”法可行准确，可以更合理、快速地实现腰痹通胶囊中多种皂苷类成分的质量控制。
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人参不同部位中人参皂苷成分的分析
目的：建立UV/HPLC法测定人参不同部位中人参皂苷含量。方法：通过对市场上通行的UV法和HPLC法测得含量进行近似折算比较，以及对根部提取物与茎叶提取物中各人参皂苷成分HPLC出峰比例的分析，建立鉴别不同来源人参皂苷的方法。结果：人参根部提取物中，Re：Rb1：Rc：Rd皂苷比例近似为1：2.20：0.94：0.97；人参茎叶中，该比例近似为1：（0.05~0.07）：（0.10~0.16）：（0.32~0.37）；对比掺混后的人参根部和人参茎叶提取物，Re：Rb1：Rc：Rd理论值在上述两比例之间。结论：该方法简易、稳定、可靠，可作为人参根部和茎叶提取物中人参皂苷的鉴别方法。
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以抑制小胶质细胞活化为靶标的抗神经退行性疾病的天然产物及衍生物的筛选与机制研究
脑内小胶质细胞的活化贯穿了神经退行性疾病的发生、发展全过程.抑制小胶质细胞活化已经成为防治此类疾病的重要策略.本文对近年来本课题组在白藜芦醇及其衍生物、姜黄素及其衍生物、人参皂苷等抑制小胶质细胞活化方面的研究进展进行综述,为防治神经退行性疾病药物的深入研究提供参考.
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冷应激及其药物干预的代谢组学研究
采用衍生化GC/MS的方法分析尿液中内源性小分子代谢物,结合主成分分析、小二乘法等模式识别方法计算峰响应信号,冷应激前后正常大鼠尿液内源性代谢物在主成分分析图上产生显著分离,人参皂苷组则冷应激前后几乎无分离.利用单维统计对差异物质加以检验,发现其中与应激相关的代谢物如酪氨酸、色氨酸等物质的相对含量产生显著变化,据此推测机体对冷刺激的应答以及应激后自我调节的过程,而这些物质中绝大多数在人参皂苷组中变化的显著性降低或者已无显著性.本文从代谢物的角度证实冷应激对动物机体的影响、机体的自我恢复以及人参皂苷的抗应激作用.
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正交试验优选参杞补气颗粒中人参提取工艺
目的：研究参杞补气颗粒中人参提取佳工艺条件。方法：采用正交试验对人参提取工艺进行优选，以乙醇浓度、乙醇量、提取时间和提取次数为考察因素，并采用HPLC法测定浸膏中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量，并以3种皂苷收率为考察指标，确定佳提取条件。结果：参杞补气颗粒中人参提取佳工艺为：加入药材6倍量60%乙醇，提取2次，每次3 h。结论：该提取工艺稳定，提取率高，且合理可行。
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细胞色素P450在人参皂苷生物合成途径中的研究进展
细胞色素P450(CYP450)是一类超基因家族编码的单加氧酶,参与萜类、生物碱和甾醇类等多种次生代谢产物的合成与代谢.CYP450对人参皂苷三萜碳环骨架进行羟基化和氧化等一系列复杂修饰作用,是人参皂苷生物合成途径中的关键酶.近年来利用新一代测序技术及生物信息学分析等方法,从CYP450家族中筛选出参与人参皂苷生物合成的相关CYP450s,并对候选基因(CYP716A47)进行了生物功能验证,进一步阐明了人参皂苷合成途径.本文对人参皂苷生物合成途径做简要介绍,并对近年来CYP450在人参皂苷生物合成途径中的研究进行综述,为阐明人参皂苷合成途径及通过基因工程手段合成人参皂苷提供理论依据.
关键词： 细胞色素P450氧化酶 人参皂苷 生物合成途径 -
人参皂苷的提取及总皂苷纯化工艺的研究进展
人参皂苷是人参重要的有效成分,研究显示人参皂苷具有广泛的药理作用,并可以作用于机体多个系统.人参皂苷的提取是进行人参皂苷活性研究的重要前提,现有多种提取工艺被应用,虽都能够获得人参皂苷,但也导致了人参皂苷质量标准的不同,这为人参皂苷药理活性的基础研究以及人参皂苷的临床应用设置了障碍.联合优化相关工艺发现高效便捷且质量标准统一的高纯度人参总皂苷提取工艺,能够保证人参皂苷相关研究物质基础的一致性,同时在临床应用相关药物时可以根据佳工艺的原理改变剂型或改变药物处理方法增加药物疗效,逆向应用则可以补充完善药物质量控制手段.本文就近年来关于人参皂苷分离纯化工艺和方法作一综述,为发展优化人参总皂苷的分离纯化工艺提供理论依据和参考.
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脑内小分子检测技术及人参皂苷入脑的研究进展
许多中药在治疗中枢神经系统疾病均有疗效,但其作用机制并不清楚.本文简要介绍了血脑屏障(BBB)的生理组成,药物穿透BBB的途径,并介绍了3种主要针对脑内小分子物质的检测技术:高效液相色谱法、免疫组织化学法和放射性同位素标记法.这些技术将有助于小分子入脑的研究,并得出它们在脑组织内的分布以及判断是否能透过血脑屏障,从而探索它们中枢活性的作用模式.综合分析国内外的研究人员针对人参皂苷进行了其入脑的研究可得:人参皂苷可以到达BBB,作用于微血管内皮细胞或星形胶质细胞间接发挥中枢活性,至于是否能透过BBB到达神经元,仍需进一步的研究确认.
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LC-MS/MS法同时测定犬血浆中7种人参皂苷类成分及其在人参提取物药代动力学研究中的应用
目的:建立同时检测Beagle犬血浆中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd、Rc、Rb2/3和Rf的分析方法,并应用混合有机溶剂萃取法提取含药血浆中的成分.方法:采用C18反相柱,流动相为甲醇乙腈等比混合液-0.01％甲酸水溶液梯度洗脱,质谱采用多反应监测(MRM)方式进行正离子检测.结果:定量分析的离子对(m/z)为:1131.8/789.5 (G-Rb1)、1101.7/789.7(G-Rb2/3)、1101.7/789.7 (G-Rc)、823.6/789.5(G-Rd)、969.7/789.7( G-Re)、823.6/643.6( G-Rg1)和823.6/365.3(G-Rf).7种皂苷类成分定量分析可以在14.5 min内完成,且没有离子抑制现象,各成分的低定量限分别为0.03125 μg·L-1( G-Re和G-Rg1)、0.0625 μg· L-1(G-Rf和G-Rd)和0.125 μg·L-1(G-Rb1、G-Rc和G-Rb2/3),该方法的精密度、准确度和稳定性均符合要求.结论:该法选择性强、灵敏度高、操作简便,可用于血浆中7种人参皂苷了成分的药代动力学研究.
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MicroRNA 介导的人参及其活性成分药理作用与机制
人参是五加科植物人参的干燥根及根茎，是中医临床常用药物之一，至今仍在临床中被广泛应用。一种新发现的非编码 RNA - microRNA（miRNA，miR）能够在转录后水平调控基因表达，调节细胞表型，已被用于探索中药药理机制。综合目前研究发现，人参活性成分（人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 Rh2等）的药理作用可由 miRNA（miR -15b、miR -18a、miR -25、miR -27b、miR-128、miR -214等）及相关靶基因介导，涉及氧化应激、血管生成、胶原蛋白合成、细胞凋亡等多个病理生理过程。通过分析文献发现，miRNA 介导的人参药理机制具有靶基因特异性、病理特异性、间接和直接调节可能共存等特点。
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益气复脉口服液质量标准研究
目的:测定益气复脉口服液主要成分红参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量,以便更好进行药品质量控制.方法:采用高效液相色谱法测定红参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量.结果:人参皂苷Rg1在0.197 2～2.958 μg范围内,人参皂苷Re在0.102 1～1.531 5 μg范围内,人参皂苷Rb1在0.253 4～3.80 1 μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.99%、98.92%、99.46%,RSD分别为0.92%、1.15%、0.75%.结论:方法简便易行,重现性好,可以用于益气复脉口服液的质量控制.
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榄香烯乳联合人参皂苷对卵巢癌细胞耐药株A2780/PTX的影响作用
目的:观察榄香烯乳联合人参皂苷方案对卵巢癌细胞耐药株A2780/PTX的影响作用.方法:采用体外培养的卵巢癌细胞耐药株A2780/PTX(进行实验,随机分成4组,空白组:新鲜的全培养液;人参皂苷组:30 μg/mL人参皂苷培养液;榄香烯乳组:20 μg/mL榄香烯乳培养液;联合组:30 μg/mL人参皂苷+20 μg/mL榄香烯乳培养液.通过流式细胞仪检测细胞周期;通过MTT法检测榄香烯乳及人参皂苷单用的细胞毒作用及2者联合应用时的作用;采用Westem-blot观察A2780/PTX细胞内蛋白的表达;采用激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的变化.结果:流式细胞术检测结果显示,与人参皂苷组、榄香烯乳组及空白组比较,联合组在G0/G1期细胞有明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),A2780/PTX细胞被阻止在G1期;MTT法检测结果显示不同浓度的药物剂量可以对卵巢癌细胞产生抑制作用,并呈一定的剂j量依赖性;Western blotting结果显示,A2780/PTX细胞中联合组蛋白表达较空白组、人参皂苷组、榄香烯乳组显著降低(P＜0.05);联合组A2780/PTX细胞株线粒体膜电位下降较人参皂苷组、榄香烯乳组及空白组更为明显(P＜0.05).结论:榄香烯乳联合人参皂苷方案能对卵巢癌细胞耐药株A2780/PTX产生明显的生长抑制作用.2者联合应用可以提高有效率,降低不良反应.
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人参皂苷抗糖皮质激素诱发骨质疏松的效应及机制研究
目的 研究人参皂苷(GSS)对糖皮质激素诱发的骨质疏松大鼠骨生物力学及骨密度的改善作用及其机制.方法 将3月龄的雌性Wister大鼠随机分为5组,即正常对照组、模型组(激素组)和人参皂苷高、中、低剂量组(激素+用药组).皮下注射甲泼尼龙5mg/Kg·d-1,建立骨质疏松症模型.人参皂苷组造模后GSS高(100mg/kg)、中(50mg/kg)、低(25mg/kg),每日2次,其他2组给予等量生理盐水,实验期为9w.9w后测定各组大鼠骨密度(BMD)、骨代谢生化指标及骨生物力学指标等.结果 反映骨形成指标BGP、CT及血清Ca水平,模型组显著低于正常组,人参皂苷高剂量组显著高于模型组(P<0.05),反映骨吸收的TRACP酶活性及血清P水平,各组之间无统计学意义(P>0.05);与正常组比较,模型组大鼠腰椎与股骨骨密度、大载荷及刚度均显著降低(P<0.05),且腰椎骨密度下降更为明显,与模型组比较,人参皂苷高剂量组大鼠腰椎及股骨骨密度、大载荷及刚度均显著增高(P<0.05).结论 人参皂苷GSS可通过改善骨代谢生化指标及骨生物力学性能,拮抗糖皮质激素性骨质疏松大鼠的骨丢失,起到防治骨质疏松的作用.
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基于高效液相指纹图谱检测参苓白术散中人参皂苷的含量测定
目的:通过高效液相指纹图的检测方法测试不同批次参苓白术散中人参皂苷的含量.方法:进样量为10μL,采用250 mm×4.6 mm,5μm的色谱柱(ThermoODS-HYPERSIL柱),选择流动相的条件是在A流动相乙腈和B流动相水中以1 mL/min的流速开展实验,检测波长为203 nm,柱温为30℃,根据高效液相(HPLC)(Agilengt-1100高效液相色谱仪)指纹图谱的梯度洗脱程序进行试验,并在Agilengt-1100色谱工作站上进行指纹图谱分析.分别对HPLC方法学的严谨性进行检测,包括专属性试验、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、线性回归试验、加样回收率试验等逐步建立方法的科学性;而后进一步采用HPLC对参苓白术散中人参皂苷的含量进行具体的检测和记录.结果:1)HPLC的专属性试验结果显示人参皂苷Rg1、Re及Rb1均有良好的专属性.2)人参皂苷Rg1的线性回归方程是Y=352.68119X+6.73850;人参皂苷Re的线性回归方程是Y=292.61086X+3.70323;人参皂苷的线性回归方程是Rb1Y=254.20321X+4.56471;其相关系数均>0.999,结果显示人参皂苷线性关系良好.3)精密度试验结果显示人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1峰面积的RSD在0.22％～0.29％;稳定性试验结果显示人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1峰面积的RSD在0.06％～1.83％;重复性试验结果显示人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1总量的含量平均值为9.86 mg,RSD 2.5％表明HPLC的精密度、稳定性和重复性均良好.4)结果显示人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的加样回收率平均值和RSD分别为95.7％、105.7％、100.4％,3.3％、4.8％、3.1％,表明均HPLC测定参苓白术散加样回收率良好.5)不同批次参苓白术散中人参皂苷总的含量存在较大差别.结论:高效液相指纹图谱检测参苓白术散的操作方法较为简便,其专属性、灵敏度和重复性均较好,而不同批次参苓白术散中人参皂苷总的含量存在较大差别,对临床规范控制参苓白术散的质量有试验基础.
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人参皂苷含量变化及其影响因素
人参皂苷是具有千年药用历史的人参的主要活性成分，因此皂苷含量被认为是评价人参内在质量的重要指标之一。目前已从人参不同部位分离鉴定了数十种的人参皂苷，且不同部位人参皂苷含量有所不同。人参皂苷含量受多种因素的影响，主要包括人参生长环境、皂苷合成相关基因以及蛋白表达变化等，本文就上述三个方面进行归纳整理，以期为人参皂苷含量变化相关的研究提供参考。
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人参皂苷调控转化生长因子-β信号通路的作用机制
2000多年前,人参就被东亚各国视为珍贵药材,用于防治心血管、中枢神经系统、糖尿病、肿瘤和免疫疾病等相关疾病的现代药理作用被逐渐证实,前述药理作用的基础在于以人参皂苷为代表的活性成分.转化生长因子-β可以调节细胞生长、分化、凋亡、侵袭、细胞外基质合成、血管生成、免疫等多种病理生理过程,是药物治疗的重要靶点.目前研究显示,由转化生长因子-β介导的人参药效作用主要表现为对免疫的调节、对中枢神经的保护、对糖尿病及并发症的治疗、对肿瘤的抑制等方面.相关研究从现代药理机制阐释了人参及其主要活性成分的药效特点,具有较一致的研究结论.部分人参皂苷对不同组织转化生长因子-β的调控作用存在相反结果,提示其治疗作用的组织特异性,也可能是中药双向调节理论的又一个例证.通过阐述经由转化生长因子-β信号通路介导的人参皂苷药理作用,不仅能够促进探索传统中药的现代药理机制,利于现代医学和更多地区理解、接受传统药物,也可以在传统药物活性成分基础上研发新药物,同时在一定程度上促进传统中医药理论的发展.
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HPLC-ELSD测定GSSM颗粒中酸枣仁皂苷A和人参皂苷Rb1
目的:建立用HPLC-ELSD同时测定GSSM颗粒中酸枣仁皂苷A和人参皂苷Rb1的方法.方法:采用HPLC-ELSD法,色谱柱SUPELCO Discovery C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,ELSD参数:漂移管温度104℃,载气流速2.8 mL·min-1.结果:该法加样回收率酸枣仁皂苷A为98.67%,人参皂苷Rb1为100.32%.结论:结果准确,重现性好,可作为控制GSSM颗粒质量的方法.
关键词： GSSM颗粒 酸枣仁皂苷 人参皂苷 高效液相色谱-蒸发散射法 -
辐射灭菌对西洋参巴布剂质量的影响
目的:考察不同剂量的60Co-γ射线辐照灭菌对西洋参巴布剂黏附性及主要有效成分含量的影响.方法:建立HPLC测定西洋参巴布剂中3种人参皂苷的含量,比较不同剂量辐照前后西洋参巴布剂的黏附性能及有效成分含量的变化.结果:西洋参巴布剂在不同剂量的60Co-γ辐照前后其黏附性无明显变化,辐照前后西洋参巴布剂人参皂苷Rg1,Re,Rb1含量分别约为8,90,90,22,189 μg·cm-2.结论:不同剂量60Co-γ辐照前后西洋参巴布剂的黏附性及3种人参皂苷含量无明显变化.
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不同蒸制工艺对红参中人参皂苷类成分的影响
目的:考察红参加工过程中温度、时间对人参皂苷类成分含量的影响.方法:采用紫外分光光度法测定总皂苷含量,通过正交试验考察升温时间、蒸制温度、蒸制时间、烘干温度对红参中总皂苷含量的影响.利用HPLC测定人参皂苷Rb1,Rb2,Rc,Rd,Re,Rg1,Rg2,Rg3,Rh1,Rh2的含量,色谱条件为ZORBAX SB-C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5 μm),柱温30℃,流动相水-乙腈梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长203 nm,进样量5μL;通过高分离度液相色谱-四极杆-飞行时间质谱比较不同蒸制温度和烘干温度对人参皂苷类成分种类的影响.结果:人参总皂苷含量高的炮制工艺为升温时间60 min,蒸制温度100℃,蒸制时间6h,烘干温度50℃,蒸制温度和烘干温度对总皂苷含量具有显著性影响.不同蒸制温度和烘干温度下,人参皂苷Rb1,Rb2,Rc,Rd,Re,Rg1,Rg2,Rg3,Rh1,Rh2含量均有显著变化.结论:实际生产中应根据需求不同,调整红参加工方法,实现质量控制,为人参皂苷类成分的工业化生产和新药开发提供参考.
关键词： 红参 人参皂苷 蒸制温度 正交试验 高分离度液相色谱-四极杆-飞行时间质谱
