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锰、铅联合染毒对小鼠肝内部分生化指标的影响
长期暴露于较高浓度的重金属锰、铅,均可造成包括中枢神经系统在内的损害.尽管管理毒理学的危险度评价推测使用MMT代替四乙基铅,环境中锰含量增加不会造成目前技术方法可检查到的机体损害,但也有不少研究结果表明在一定条件下,如铁、镁、锌、硒缺乏,锰、铅联合作用[1]、特殊疾病状态、婴幼儿发育期等均可造成机体对锰毒性的敏感性增加[2,3].我们采用腹腔注射染毒方式,观察了锰、铅联合染毒对小鼠体内部分生化指标的影响.
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甲醛和甲苯联合染毒致小鼠脑细胞DNA损伤的研究
目的 研究甲醛和甲苯联合染毒对小鼠脑细胞的损伤作用,探讨其联合毒性效应的类型.方法 选择健康清洁级雄性昆明小鼠36只,按3×3析因设计,将小鼠随机分为9组,每组4只,即对照组(0 mg/m3甲醛+0 mg/m3甲苯),甲醛组(1、5 mg/m3),甲苯组(400、2 000 mg/m3),联合组(1 mg/m3甲醛+400 mg/m3甲苯、1 mg/m3甲醛+2 000 mg/m3甲苯、5 mg/m3甲醛+400 mg/m3甲苯、5 mg/m3甲醛+2 000 mg/m3甲苯).采用静式吸入染毒,将小鼠暴露于不同浓度的甲醛、甲苯及两者的混合气体中,每天2h,连续14d.染毒结束后通过彗星试验测定小鼠脑细胞DNA损伤情况.结果 甲醛和甲苯单独及联合染毒可致脑细胞彗星尾部DNA含量增高,尾矩增大,差异有统计学意义(P＜0.05),其中低甲醛和低甲苯联合染毒组尾部DNA含量(37.96％)和尾矩(21.38)大；二者联合染毒致小鼠脑DNA损伤存在交互作用(P＜0.05),且表现为协同.结论 甲醛和甲苯可致小鼠脑细胞DNA损伤,二者联合染毒具有一定的协同作用.
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西维因与氰戊菊酯联合染毒对雄性大鼠睾丸细胞凋亡的影响
目的 观察西维因与氰戊菊酯联合染毒对雄性大鼠睾丸细胞凋亡的影响.方法 选择健康成年清洁级雄性SD大鼠40只,按2×2析因设计随机分为4组,分别为阴性对照组(玉米油)、西维因(1/50 LD50,11.2 mg/kg)单独染毒组、氰戊菊酯(1/50 LD5o,9.02mg/kg)单独染毒组和西维因(11.2mg/kg)+氰戊菊酯(9.02 mg/kg)染毒组,每组10只.采用经口灌胃方式进行染毒,染毒容量为5 ml/kg,每天1次,连续染毒8周.采用Annexin- FITC-PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡,区分凋亡与坏死细胞,测定睾丸组织中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,并观察睾丸组织形态的变化.结果 西维因和氰戊菊酯联合染毒对睾丸组织中AKP活力呈现协同作用(P＜0.05),对睾丸细胞早期凋亡率呈现拮抗作用(P＜0.01),对ACP和LDH活力无交互作用.光镜下可见,西维因和氰戊菊酯联合染毒可引起曲细精管外形不规则、萎缩变性,间质增宽,生精小管管腔内可见各级生精细胞脱落,生精小管生精细胞层数和各级生精细胞数量均减少,细胞排列疏松紊乱,管腔内成熟精子数量减少.结论 西维因和氰戊菊酯联合染毒可影响睾丸标志酶活力,促进大鼠睾丸生精细胞凋亡.
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生命早期氟和砷暴露对大鼠空间学习记忆能力的影响
目的 探讨生命早期氟、砷单独及联合暴露对大鼠子代空间学习记忆能力的影响.方法 将48只新出生SPF级SD雄性大鼠随机分为对照(自来水)组、氟(100 mg/L氟化钠)染毒组、砷(75 mg/L亚砷酸钠)染毒组和联合(100mg/L氟化钠+75 mg/L亚砷酸钠)染毒组,每组12只.从受孕第0天至仔鼠生后21 d(postnatal day 21,PND21),孕鼠采用自由饮水方式进行染毒;自PND22(断乳后)～PND42,仔鼠采用自由饮水方式继续染毒.采用Morris水迷宫实验测试PND21和PND42仔鼠的空间学习记忆能力.结果 砷染毒组和联合染毒组PND21和PND42仔鼠逃避潜伏期(第4天)均显著长于对照组(P＜0.05),联合染毒组PND42仔鼠逃避潜伏期(第4天)显著长于氟和砷染毒组(P＜0.05).与对照组相比,氟、砷及联合染毒组PND21和PND42仔鼠的首次达台时间明显延长,目标象限时间明显缩短(P＜0.05),PND42仔鼠穿台次数明显少于对照组(P＜0.05).氟、砷染毒组以及联合染毒组PND21与PND42仔鼠的逃避潜伏期、首次达台时间、目标象限时间、穿台次数比较,差异均无统计学意义.结论 生命早期氟、砷单独及联合暴露可损伤仔鼠空间学习记忆能力.
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西维因与氰戊菊酯联合染毒对雄性大鼠的生殖毒性
目的 探讨西维因与氰戊菊酯联合染毒对雄性大鼠睾丸的脂质过氧化作用以及对精子参数和血清激素水平的影响.方法 选择健康成年清洁级雄性SD大鼠40只,按2×2析因设计随机分为4组,分别为阴性对照(玉米油)组、西维因单独染毒组(1/50 LD50,11.2 mg/kg)、氰戊菊酯单独染毒组(1/50 LD50,9.02 mg/kg)和西维因(11.2 mg/kg)+氰戊菊酯(9.02mg/kg)染毒组,每组10只.采用经口灌胃方式进行染毒,每天1次,每周6d,连续染毒8周.末次染毒24 h后,测量大鼠体重,睾丸和附睾脏器湿重(并计算脏器系数),精子参数(精子计数、精子存活率、精子畸形率),睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽S转移酶(GST)活力和还原性谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量,血清中雄性激素睾酮(T)、黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)水平.结果 西维因和氰戊菊酯联合染毒对大鼠体重、睾丸和附睾的脏器系数均无交互作用(P＞0.05)；对精子存活率和畸形率均存在拮抗作用,对精子计数无交互作用(P＞0.05)；对睾丸组织中SOD活力、MDA含量均存在拮抗作用(P＜0.01,P＜0.05),对GST活力和GSH含量均无交互作用(P＞0.05)；对血清中T、FSH、LH均存在拮抗作用(P＜0.05,P＜0.01).结论 西维因和氰戊菊酯联合染毒对雄性大鼠生殖系统存在联合毒性作用,可能是通过破坏氧化-抗氧化系统的平衡和影响睾丸组织中酶的活力、血清中激素水平和精子发生及成熟过程,干扰下丘脑-垂体-睾丸轴的生理平衡,导致雄性生殖功能的降低.
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西维因与氰戊菊酯联合染毒对大鼠肝脏脂质过氧化的影响
目的 探讨西维因与氰戊菊酯联合染毒对大鼠肝脏脂质过氧化作用的影响.方法 将80只健康成年清洁级SD大鼠按2×2析因设计随机分为4组,分别为阴性对照(玉米油)组、西维因单独染毒组(1/50 LD5o,11.2 mg/kg)、氰戊菊酯单独染毒组(1/50 LD50,9.02 mg/kg)和西维因(11.2 mg/kg)+氰戊菊酯(9.02 mg/kg)染毒组,每组20只,雌雄各半.采用经口灌胃方式进行染毒,每天1次,每周6天,连续染毒8周.末次染毒24 h后,测量大鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽S转移酶(GST)活力和还原性谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量.结果 西维因和氰戊菊酯联合染毒使雄鼠肝脏中SOD活力下降(P＜0.05)、MDA含量升高(P＜0.05),雌鼠肝脏中GSH含量下降(P＜0.05),交互效应均有统计学意义,对SOD、GSH表现为拮抗作用,对MDA表现为协同作用;其它指标交互作用均无统计学意义(P＞0.05).结论 西维因和氰戊菊酯联合染毒对大鼠肝脏存在联合毒性作用,可能是通过破坏氧化-抗氧化系统的平衡,产生氧化损伤作用.
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甲醛和三氯乙烯联合染毒对小鼠免疫系统的影响
目的 探讨甲醛、三氯乙烯单独及联合染毒对小鼠免疫系统的影响.方法 选择健康清洁级昆明小鼠108只(雌雄各半),按3×3析因设计分为9组,即对照组(清洁空气)、甲醛低剂量组(1 mg/m3)、甲醛高剂量组(5 mg/m3)、三氯乙烯低剂量组(1 000 mg/m3)、三氯乙烯高剂量组(5 000 mg/m3)、低甲醛+低三氯乙烯剂量组(1 mg/m3+1 000 mg/m3)、低甲醛+高三氯乙烯剂量组(1 mg/m3+5000 mg/m3)、高甲醛+低三氯乙烯剂量组(5 mg/m3+1 000 mg/m3)、高甲醛+高三氯乙烯剂量组(5 mg/m3+5000 mg/m3).采用静式吸入染毒法,连续染毒14d,每天2h.染毒结束后处死小鼠,通过测定小鼠脾脏、胸腺脏器系数及迟发超敏反应强度、血清免疫球蛋白IgE和IgG水平的变化来观察二者单独及联合染毒对小鼠免疫系统的影响.结果 甲醛单独染毒可降低小鼠脾脏、胸腺的脏器系数(P＜0.05),三氯乙烯单独染毒可降低雌性小鼠胸腺脏器系数(P＜0.05),未见二者联合染毒对小鼠脾脏、胸腺脏器系数的变化存在交互作用(P＞0.05).甲醛、三氯乙烯单独染毒使雌性小鼠迟发超敏反应强度降低(P＜0.05),二者联合染毒对雌性小鼠足垫肿胀度的影响存在拮抗效应(P＜0.05).甲醛、三氯乙烯单独染毒使小鼠血清IgE水平升高(P＜0.05),未见二者联合染毒对小鼠血清IgE水平的变化存在交互作用(P＞0.05);甲醛和三氯乙烯单独及联合染毒对各染毒组小鼠血清IgG水平的影响无统计学意义(P＞0.05).结论 甲醛、三氯乙烯单独及联合染毒对小鼠免疫系统均有一定的抑制作用.
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砷和氟对大鼠睾丸组织caspase-3和caspase-9表达的影响
目的 研究慢性砷染毒、氟染毒及联合染毒大鼠睾丸组织中caspase-3、caspase-9表达的变化.方法 将40只健康清洁级雄性SD大鼠随机分为4组,分别为对照(普通饲料)组、砷染毒(高砷饲料,含砷量为10.000 mg/kg)组、氟染毒(高氟饲料,含氟量为16.844 mg/kg)组和砷氟联合染毒(高砷高氟饲料,含砷量为10.000 mg/kg,含氟量为16.844 mg/kg)组,每组10只.采用自由进食饲料方式连续染毒12周.采用TUNEL染色法测定生精小管细胞的凋亡率;采用免疫组化法测定睾丸间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平.结果 与对照组比较,各染毒组大鼠生精小管生精细胞的凋亡率均较高,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,各染毒组大鼠间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平均较高,差异有统计学意义(P＜0.05).且砷氟联合染毒组大鼠间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平高于氟染毒组高砷染毒组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 砷及氟联合染毒所致大鼠睾丸组织的损伤及凋亡可能通过激活caspase-3或caspase-9等途径实现.
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甲醛和二甲苯联合染毒对小鼠的神经毒性研究
目的 研究甲醛和二甲苯联合染毒对小鼠神经系统的毒性作用及其机制,为综合评价室内装修材料中甲醛和二甲苯对人体健康的危害提供科学依据.方法 选用健康清洁级昆明小鼠72只,按完全随机设计,将小鼠随机分为12组,每组6只,雌雄各半,分别为低剂量(5mg/kg)、中剂量(10mg/kg)、高剂量甲醛染毒组(20mg/kg)和生理盐水对照组,低剂量(50mg/kg)、中剂量(100mg/kg)、高剂量二甲苯染毒组(150mg/kg)和花生油对照组以及低剂量(2.5mg/kg甲醛+25mg/kg二甲苯)、中剂量(5mg/kg甲醛+50mg/kg二甲苯)、高剂量联合染毒组(10mg/kg甲醛+75mg/kg二甲苯)以及生理盐水+花生油(体积比1:1)对照组；采用腹腔注射染毒,连续7d.染毒结束后,采用Morris水迷宫实验和流式细胞凋亡对小鼠进行神经毒性的研究.结果 与相应对照组相比,中、高剂量甲醛、二甲苯以及联合染毒组小鼠逃避潜伏期延长,差异均有统计学意义(P＜0.05)；与相同剂量联合染毒组比较,中、高剂量甲醛、二甲苯联合染毒组雌性小鼠逃避潜伏期缩短,差异均有统计学意义(P＜0.05)；随着染毒时间的延长,各染毒组小鼠总体逃避潜伏期呈缩短趋势.在空间探索实验中,与相应对照组相比,中、高剂量甲醛、二甲苯染毒组以及各剂量联合染毒组小鼠找到平台的时间延长,在原平台象限游泳时间缩短,原平台象限游泳距离占总距离百分比下降,差异均有统计学意义(P＜0.05)；与相同剂量联合染毒组比较,各剂量甲醛染毒组和中、高剂量二甲苯染毒组小鼠找到平台的时间缩短,高剂量甲醛染毒组和二甲苯染毒组雌性小鼠、雄性小鼠以及小鼠总体在原平台象限游泳时间延长,原平台象限游泳距离占总距离百分比上升,差异有统计学意义(P＜0.05).与相应对照组相比,各剂量甲醛、二甲苯以及联合染毒组小鼠海马细胞早期凋亡率以及高剂量甲醛、二甲苯以及联合染毒组晚期凋亡率均升高,差异均有统计学意义(P＜0.05)；且随着染毒剂量的升高,小鼠海马细胞早期、晚期凋亡率呈上升趋势.与相同剂量联合染毒组比较,中、高剂量甲醛、二甲苯染毒组小鼠早期凋亡率均下降,高剂量甲醛、二甲苯染毒组雌性小鼠、雄性小鼠和小鼠总体晚期凋亡率均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 甲醛和二甲苯联合染毒能降低小鼠的学习记忆能力,对神经系统具有一定毒性作用,且二者联合染毒具有一定的协同作用.
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甲醛和三氯乙烯联合染毒对小鼠行为功能的影响
目的 研究甲醛和三氯乙烯联合染毒对小鼠神经行为的影响,为评价室内装修材料中甲醛和三氯乙烯对人体健康的危害提供科学依据.方法 通过Morris 水迷宫实验筛选健康清洁级昆明小鼠108 只(雌雄各半),按照3×3 析因的要求进行随机分组,采用静式吸入染毒,将小鼠暴露于不同浓度的甲醛、三氯乙烯及其二者的混合气体中,每天2 h,连续14 d.染毒结束后,采用Morris 水迷宫实验和旷场实验对小鼠进行神经行为学测试.结果 Morris 水迷宫实验结果显示,在定位导航实验中,单独及联合染毒组小鼠逃避潜伏期随着训练次数的增多均呈缩短趋势、且随着染毒剂量的增加小鼠逃避潜伏期延长,训练天数、甲醛和三氯乙烯对小鼠逃避潜伏期的影响差异均有统计学意义(P＜0.01),同时甲醛和三氯乙烯对小鼠逃避潜伏期的影响存在交互作用(P＜0.05).在空间探索实验中,甲醛和三氯乙烯单独及联合染毒均可致小鼠第一次跨越原平台位置的时间延长.二者联合染毒对小鼠第一次跨越原平台位置的时间和原平台象限游泳距离占总距离百分比的影响存在交互作用(P＜0.05),且表现为协同.旷场实验结果显示,甲醛和三氯乙烯染毒致小鼠在中央区活动时间延长,站立次数下降,中央区活动距离占总距离百分比增大,二者对小鼠在旷场实验中的中央区活动时间、直立次数以及中央区活动距离占总距离百分比的影响均有交互作用(P＜0.01),且表现为协同.结论 甲醛和三氯乙烯能降低小鼠的学习记忆能力,影响神经行为表现,二者联合染毒具有一定的协同作用.
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铅、锌、镉联合染毒及营养干预致大鼠肝脏病理学变化分析
目的 通过动物实验了解铅、锌、镉联合染毒及营养干预对大鼠肝脏病理学变化的影响,为探讨铅锌矿区人群营养干预措施提供理论依据.方法 将实验大鼠按照设计分为对照组、染毒组和干预组,分别采用0.01 ml/g·bw生理盐水、0.01 ml/g·bw铅、锌、镉联合染毒液及119.1mg/kg·bw硫酸亚铁、474mg/kg·bw醋酸钙、14mg/kg·bw核黄素、450 mg/kg·bw Vc营养干预液喂饲28 d和56 d,之后取动物肝脏,用显微镜观察其病理学改变.结果 在实验期间,第1、第2阶段染毒组、干预组大鼠体质量增长分别为(32.0±6.3)、(40.9±6.5),(30.3±9.1)、(35.3±7.4)g,分别低于对照组(68.5±8.7)、(46.7±6.3)g,差异有统计学意义(P＜0.05).各组大鼠肝脏系数比较,差异无统计学意义(P＞0.05).对照组大鼠肝脏病理切片无明显改变；染毒组大鼠肝细胞水肿,肝索排列紊乱,肝小叶及汇管区有中性粒细胞及淋巴细胞浸润；干预组大鼠肝细胞水肿不明显,肝小叶及汇管区有少量炎性细胞浸润,可见点状坏死.结论 铅、锌、镉联合染毒对大鼠肝脏尚未造成明显的器质性病变,但可能引起肝脏形态功能发生改变,综合营养干预对重金属元素染毒有一定的拮抗作用.
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氟硒镉联合染毒对大鼠脂质过氧化的影响
目前,有关氟与硒、镉与硒联合作用效应的研究已有报道[1～3],但对3种以上化学物联合作用效应的研究较少.我们采用氟、硒、镉、氟+硒、镉+硒、氟+镉以及氟+硒+镉分别进行染毒实验,观察大鼠体内脂质过氧化物水平以及抗氧化酶活性变化,以探索氟硒镉3种环境化学物质共存时联合作用的类型.
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苯和甲醛对雄性小鼠睾丸生殖细胞的联合毒性
目的:探讨苯和甲醛对雄性小鼠睾丸生殖细胞的毒性作用.方法:选用纯系雄性小鼠为研究对象,苯加甲醛的联合染毒剂量(mg·kg-1)分别为10+10、50+50、100+100(作为3个实验组),同时设对照组(0 mg·kg-1组)和植物油组(n=10).连续经口染毒8周后处死小鼠,进行睾丸称重、精子计数、精子畸形百分率计算和睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)活力测定.结果:各染毒组小鼠的精子数随苯和甲醛联合染毒剂量的增加而逐渐减少,精子畸形率明显增加,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);各染毒组小鼠睾丸组织SOD活力随苯和甲醛联合染毒剂量的增加而逐渐降低,当联合染毒剂量为(50+50)和(100+100)mg·kg-1时,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);睾丸重量有随染毒剂量的增加而降低的趋势(P＞0.05).结论:苯和甲醛能对小鼠的生殖细胞产生明显联合毒性作用.
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铅锌镉联合染毒及营养干预对大鼠血液系统的影响研究
目的:了解铅锌镉联合染毒对大鼠血液系统的影响及营养干预对其损伤的修复作用.方法:选择SPF级初断乳Wistar大鼠72只,随机分为对照组、染毒组和干预组,分别采用生理盐水、铅锌镉联合染毒液及染毒后以营养干预液灌胃28天和56天之后,检测其血液系统中五元素和血细胞的指标.结果:染毒组较对照组大鼠血铜、血锌含量高,血钙含量低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05)；染毒组血铜含量高于干预组,血钙含量低于干预组,差异均有统计学意义(P＜0.05)；干预组红细胞(RBC)计数、血红蛋白(Hb)、血细胞比容(HCT)均高于染毒组,差异均有统计学意义(P＜0.05)；对照组白细胞(WBC)计数高于染毒组、干预组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:铅镉对大鼠血铜、血钙、血锌水平有影响；综合营养干预对重金属元素造成的血液系统损伤有明显的桔抗作用,对血液系统有一定的保护及修复作用.
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MBP和MEHP联合染毒致小鼠睾丸间质细胞的凋亡作用及其可能机制
[目的]探讨邻苯二甲酸单丁酯(MBP)和邻苯二甲酸单乙基己酯(MEHP)染毒致小鼠睾丸间质细胞的凋亡作用及葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、活化转录因子4(ATF4)与C/EBP同源蛋白(CHOP)参与的可能机制.[方法]培养小鼠睾丸间质细胞(TM-3细胞)并且测出细胞生长曲线,用CCK-8法检测细胞在染毒浓度400 μmol/L状况下的细胞活性变化;用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;应用免疫印迹法检测GRP78、ATF4和CHOP含量的变化.单因素方差分析法分析染毒组与对照组之间的关系,2×2析因设计法判断联合染毒的交互作用,当|(MBP+MEHP组指标-对照组指标)|＜|(MBP组指标-对照组指标)|+|(MEHP组指标-对照组指标)|,可判定交互作用类型为拮抗作用.[结果]细胞在24～60h时间段内处于对数生长期,且细胞正常状态下的凋亡数量比较稳定.细胞活性检测结果显示MEHP染毒对细胞的抑制率比MBP的大,并且MBP+MEHP联合染毒且具有交互作用,其作用方式为拮抗作用[24h:|(53.21±7.68) ％|＜| (42.99±8.23)％|+| (65.46±8.29)％)|,36h:|(79.87±3.76)％|＜| (53.12±4.33)％|+| (74.80±4.96)％|;48h:|(85.97±6.07)％|＜| (38.98±9.59) ％|+|(80.73±4.99)％|]具有统计学意义(P＜0.05);细胞凋亡比例也呈现出MEHP组[早期凋亡(17.44±0.82)％,总凋亡:(44.24±0.89)％]大于MBP染毒组[早期凋亡 (14.58±0.97)％,总凋亡 (29.46±0.58)％],同时出现MEHP+MBP联合染毒组[早期凋亡:(8.58±0.35)％,总凋亡:(32.28±0.41)％]的凋亡比例小于各单独染毒组之和,呈现出拮抗作用;ATF4和GRP78在MEHP染毒组的表达量高于MBP染毒组,MEHP+MBP联合染毒组表达量低于MEHP染毒组但高于MBP染毒组,并且表现出拮抗作用.CHOP的表达量与对照组相比也有变化,MEHP染毒组表达量较MBP染毒组表达量高,在MEHP+MBP联合染毒组表达量低于单独染毒组,并且表现出拮抗作用,但MBP染毒组没有主效应.[结论]MBP、MEHP染毒致TM-3细胞凋亡具有主效应,MBP和MEHP联合染毒致TM-3细胞凋亡具有交互作用,呈现拮抗作用.GRP78-ATF4-CHOP通路可能参与MBP、MEHP染毒致TM-3细胞的凋亡过程.
关键词： 邻苯二甲酸单酯 睾丸间质细胞 凋亡 联合染毒 GRP78-ATF4-CHOP -
氟砷联合染毒对成骨与破骨细胞共培养体系中TRAF-6/NF-κB1/NFATc1/TRAP mRNA表达的影响
[目的]探讨氟、砷及氟砷联合染毒对小鼠颅顶前成骨细胞MC3T3-E1与小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7共培养体系中肿瘤坏死因子相关受体因子6(TRAF-6)、核因子κB1 (NF-κB1)、活化T细胞核因子1(NFATc1)及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)mRNA表达的影响.[方法]用成骨诱导剂诱导后的小鼠颅顶前成骨细胞MC3T3-E1与单核巨噬细胞RAW 264.7细胞建立共培养体系,培养7d后,用TRAP染色鉴定破骨细胞.采用CCK-8法测定氟、砷不同浓度染毒对细胞增殖的影响,从而确定终的实验染毒浓度.在共培养体系中,换用含不同浓度的氰化钠(0、0.1、0.4、1.6 mmol/L NaF,记为F0、F0.1、F0.4、F1.6)、亚砷酸钠(0、0.5、2.5、12.5 μmol/L NaAsO2,记为As0、As0.5、As2.5、As12.5)以及氟砷联合(上述剂量两两组合)的培养基分别培养24 h,实时荧光定量PCR法检测各染毒组TRAF-6、NF-κB1、NFATc1及TRAP mRNA的表达水平.[结果]成骨细胞与RAW 264.7细胞共培养7d后,经TRAP染色可见细胞发生融合,体积变大,多核,说明RAW 264.7细胞已分化为多核的破骨细胞.氟单独染毒,与对照组比较(1.00±0.08、1.00±0.04、1.00±0.02、1.00±0.19),F1.6染毒组的TRAF-6、NF-κB1、NFATc1及TRAP mRNA表达水平均明显增加(1.74±0.16、2.04±0.09、1.33±0.06、3.24±0.29),差异均有统计学意义(P＜0.05).砷单独染毒,As12.5染毒组的TRAF-6和TRAP mRNA表达(1.24±0.06和1.26±0.08)高于对照组(1.00±0.08和1.00±0.19),而NF-κB1和NFATc1 mRNA表达(0.61±0.05和0.60±0.06)在As12.5组均低于对照组(1.00±0.04和1.00±0.02),差异均有统计学意义(P＜0.05).氟砷联合染毒,与F01组相比(0.80±0.02和0.59±0.03),NF-κB1和NFATc1的表达在F01As12.5组增加(1.11±0.02和1.07±0.05,P＜0.05),但均低于氟、砷单独染毒之和;与F04比较(2.85±0.13,1.11±0.04,1.09±0.03),TRAF-6、NF-κB1和NFATc1表达在F0.4As12.5组降低(1.38±0.11,0.87±0.03和0.44±0.03,P＜0.05);与F1.6比较(2.04±0.09和3.24±0.29),NF-κB1和TRAP mRNA表达在F1 6As12.5组均降低(1.24±0.07和2.09±0.22,P＜0.05);与As0.5、As12.5组相比,TRAF-6、NF-κB1、NFATc1及TRAP mRNA在F1.6As0.5组和F16As12.5组表达均增加(P＜0.05),但均低于氟、砷单独染毒之和.氟、砷对TRAF-6、NF-κB1、NFATc1及TRAP mRNA表达均有主效应作用(F=437.22、657.76、321.89及187.11;F=123.08、170.53、78.99及74.08,均P＜0.05);氟砷联合染毒对TRAF-6、NF-κB1、NFATc1及TRAP mRNA表达存在交互作用(F=153.76、97.14、100.31、46.78,均P＜0.05).[结论]高氟可促进成骨细胞与破骨细胞共培养体系中TRAF-6、NF-κB1、NFATc1及TRAPmRNA的表达,从而达到增加破骨细胞分化成熟及骨吸收活性,氟、砷对共培养体系中各基因指标的影响均有主效应作用,氟砷联合染毒对共培养体系中相关基因表达的交互作用主要表现为砷对氟的拮抗作用.
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亚慢性苯并[α]芘和铅联合染毒对小鼠海马组织Ca2+浓度和ATP酶活性的影响
目的 观察亚慢性苯并[α]芘和铅联合染毒对小鼠行为学以及海马组织Ca2+浓度和ATP酶的影响,探讨其联合作用神经行为毒性机制.方法 80只小鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组(植物油)、铅染毒组(54 mg/L醋酸铅)、苯并[α]芘染毒组(5 mg/kg苯并[α]芘)、铅+苯并[α]芘联合染毒组(54 mg/L醋酸铅+5 mg/kg苯并[α]芘),每组16只.以饮水行铅染毒,每星期4次腹腔注射行苯并[α]芘染毒.染毒8星期后,Morris水迷宫实验检测小鼠空间学习记忆能力,化学比色法测定海马组织钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活性,荧光标记法测定海马组织Ca2浓度.结果 Morris水迷宫实验结果显示:铅染毒组、苯并[α]芘染毒组、铅+苯并[α]芘联合染毒组小鼠空间学习记忆能力较空白对照组和溶剂对照组显著下降(P＜0.05),且铅+苯并[α]芘联合染毒组较铅染毒组、苯并[α]芘染毒组显著下降(P＜0.05).与空白对照组和溶剂对照组比较,铅染毒组、苯并[α]芘染毒组和铅+苯并[α]芘联合染毒组海马组织Ca2+浓度显著增高(P＜0.05),钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活性显著下降(P＜0.05);且与铅染毒组和苯并[α]芘染毒组比较,铅+苯并[α]芘联合染毒组小鼠海马组织Ca2+浓度显著增高(P＜0.05),钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活性显著下降(P＜0.05).结论 铅和苯并[α]芘联合作用能降低小鼠的空间学习记忆能力,可能与染毒后小鼠海马组织Ca2+增多以及钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活性下降有关.
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汞、镉、铅联合染毒对小鼠DNA损伤的研究
目的探讨汞、镉、铅对小鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的联合作用及其机制.方法连续2 d给昆明种小鼠腹腔注射不同组合的汞、镉、铅,末次染毒1 h后取血用单细胞凝胶电泳(SCGE)和 3 H-TdR掺入法检测DNA的损伤.结果 SCGE试验时,汞-镉-铅组DNA迁移距离明显高于其相应单独作用组,汞-镉组、镉-铅组分别与镉组比较,差异也有显著性;用 3 H-TdR掺入法同时进行实验,汞-镉组及汞-铅组与其单独染毒组比较,DPM值明显下降,汞-镉-铅三者联合染毒时,DPM值下降更为明显,说明DNA损伤愈加严重.结论汞、镉、铅具联合毒性作用,三者联合染毒对小鼠外周血淋巴细胞DNA损伤更为显著.
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青春期和成年早期铅、镉联合暴露对小鼠雄性生殖功能的影响
目的：观察青春期和成年早期小鼠经饮水暴露铅和镉对雄性生殖功能的影响。方法健康4周龄雄性ICR小鼠被随机分入对照组、铅组、镉组、铅+镉组，每组15只。各组小鼠分别经口饮用纯净水(反渗透水)、醋酸铅水溶液、氯化镉水溶液以及醋酸铅和氯化镉混合水溶液，暴露40 d后摘眼球取血，处死小鼠后取睾丸、附睾，称脏器重量，计算脏器系数，进行附睾尾精子计数。 HE染色观察睾丸组织形态学改变，用酶联免疫吸附法检测小鼠血清睾酮含量。结果与对照组比较，铅组、镉组和铅+镉组小鼠的饮水量、进食量和体重增长差异无统计学意义。染毒40 d后，单纯铅、单纯镉暴露或镉铅联合暴露均未改变小鼠体重、睾丸、附睾重量及其脏器系数。进一步研究表明，与对照组比较，铅组、镉组和铅+镉组小鼠附睾精子浓度和血清睾酮均差异均无统计学意义。结论本实验条件下，青春期和成年早期联合暴露铅与镉未引起小鼠雄性生殖损害作用。
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环境内分泌干扰物DBP与BPA联合染毒对雄性大鼠生殖功能的影响
目的 研究环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二丁酯(DBP)及双酚A(BPA)长期联合作用对雄性机体生殖功能的影响.方法 将32只SD雄性大鼠按随机区组法分为4组,分别为溶剂对照组(予玉米油)、DBP染毒组(1.0 g/kg)、BPA染毒组(0.2 g/kg)、DBP+ BPA染毒组(1.0 g/kgDBP、0.2 g/kgBPA),经口灌胃染毒,隔日1次,90 d后麻醉处死,采集睾丸、附睾,称重并计算脏器系数,光镜下观察精子形态和精子计数,采集心脏血液应用直接化学发光法检测血清中睾酮(T)及雌二醇(E2)的分泌水平.结果 DBP+ BPA染毒组睾丸、附睾重量及其脏器系数均降低,与溶剂对照组、DBP染毒组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).精子形态学检查,染毒组畸形类型以无头、颈扭转、尾折叠、波状尾等为主.与溶剂对照组相比,DBP+ BPA染毒组精子计数显著降低且畸形率明显升高(P＜0.05或0.01),BPA染毒组仅精子畸形率明显升高(P＜0.05).与溶剂对照组、DBP染毒组、BPA染毒组比较,DBP+BPA染毒组大鼠血清中T浓度明显下降(P＜0.05或0.01),E2浓度明显升高(P＜0.05或0.01),BPA染毒组大鼠血清中E2水平升高,与溶剂对照组、DBP染毒组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 在单独暴露未全出现阳性结果的剂量下,DBP和BPA长期联合染毒,对雄性大鼠生殖功能的损害表现为协同效应.
