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MBP和MEHP联合染毒致小鼠睾丸间质细胞的凋亡作用及其可能机制
[目的]探讨邻苯二甲酸单丁酯(MBP)和邻苯二甲酸单乙基己酯(MEHP)染毒致小鼠睾丸间质细胞的凋亡作用及葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、活化转录因子4(ATF4)与C/EBP同源蛋白(CHOP)参与的可能机制.[方法]培养小鼠睾丸间质细胞(TM-3细胞)并且测出细胞生长曲线,用CCK-8法检测细胞在染毒浓度400 μmol/L状况下的细胞活性变化;用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;应用免疫印迹法检测GRP78、ATF4和CHOP含量的变化.单因素方差分析法分析染毒组与对照组之间的关系,2×2析因设计法判断联合染毒的交互作用,当|(MBP+MEHP组指标-对照组指标)|＜|(MBP组指标-对照组指标)|+|(MEHP组指标-对照组指标)|,可判定交互作用类型为拮抗作用.[结果]细胞在24～60h时间段内处于对数生长期,且细胞正常状态下的凋亡数量比较稳定.细胞活性检测结果显示MEHP染毒对细胞的抑制率比MBP的大,并且MBP+MEHP联合染毒且具有交互作用,其作用方式为拮抗作用[24h:|(53.21±7.68) ％|＜| (42.99±8.23)％|+| (65.46±8.29)％)|,36h:|(79.87±3.76)％|＜| (53.12±4.33)％|+| (74.80±4.96)％|;48h:|(85.97±6.07)％|＜| (38.98±9.59) ％|+|(80.73±4.99)％|]具有统计学意义(P＜0.05);细胞凋亡比例也呈现出MEHP组[早期凋亡(17.44±0.82)％,总凋亡:(44.24±0.89)％]大于MBP染毒组[早期凋亡 (14.58±0.97)％,总凋亡 (29.46±0.58)％],同时出现MEHP+MBP联合染毒组[早期凋亡:(8.58±0.35)％,总凋亡:(32.28±0.41)％]的凋亡比例小于各单独染毒组之和,呈现出拮抗作用;ATF4和GRP78在MEHP染毒组的表达量高于MBP染毒组,MEHP+MBP联合染毒组表达量低于MEHP染毒组但高于MBP染毒组,并且表现出拮抗作用.CHOP的表达量与对照组相比也有变化,MEHP染毒组表达量较MBP染毒组表达量高,在MEHP+MBP联合染毒组表达量低于单独染毒组,并且表现出拮抗作用,但MBP染毒组没有主效应.[结论]MBP、MEHP染毒致TM-3细胞凋亡具有主效应,MBP和MEHP联合染毒致TM-3细胞凋亡具有交互作用,呈现拮抗作用.GRP78-ATF4-CHOP通路可能参与MBP、MEHP染毒致TM-3细胞的凋亡过程.
关键词： 邻苯二甲酸单酯 睾丸间质细胞 凋亡 联合染毒 GRP78-ATF4-CHOP
