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食品理化检验标准中对荧光法的实际应用
近些年,国内食品工业化程度日益扩大与迅猛提升,广泛应用了更多新添加剂与工业技术,导致国内屡次发生食品安全事件。食品安全已升级为现阶段全社会重点关注的重点话题。从根本上说,食品安全问题一方面与国民生命安全、身体健康有着直接相关性,另一方面还会对社会长期发展与安全产生直接性影响。荧光检测技术是以辐射跃迁原理为基础的一种特异性检测工艺,该技术的出现和原子、分子结构的相关性极强,而且具有较强的选择性、较高灵敏度以及精准定量等诸多优势,在复杂基质中分析与检测相关化合物较为适用。
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肺结核患者血管内皮细胞生长因子的测定及临床意义
血管内皮细胞生长因子(valscular endothelial growth factor,VEGF)是一种特异性促使内皮细胞激活、增殖及直接参与血管增生的糖蛋白,资料显示血清VEGF与肺结核、结核性脑膜炎的发生、发展亦有关[1,2].我们测定了肺结核病人治疗前与治疗过程中的血清VEGF,并与肺癌患者比较.结果报告如下.
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用肽核酸快速检验、鉴定和计数瓶装水中的铜绿假单胞菌
Stender H.等人在2000年11月美国出版的《微生物方法杂志》上,介绍了一种新的同时检测、鉴定和计数铜绿假单胞菌的CISH (Chemiluminescent in situ hybridization)方法,该方法已经研究成功。这种检验方法用一个工作日就可以完成上述工作。用大豆过氧化酶标记的肽核酸(Peptide nucleic acid,PNA)为探针结合铜绿假单胞菌的种特异性rRNA,单个的铜绿假单胞菌菌落标记5小时后,可直接在滤膜上找到。每种微生物的过氧化酶作用物都会发光,这个现象可以通过胶片或数码相机系统看到。每一个光点都是一个铜绿假单胞菌。通过对28株铜绿假单胞菌和17株其他菌包括种属关系非常相近的菌的实验证实,该方法的灵敏度和特异性均为100%。而且,铜绿假单胞菌可通过发光点进行计数。作者认为PNA CISH发光法与传统的薄膜过滤技术相比,PNA探针特异性技术使实验结果又快又准确。(王晓玲供稿 郑云雁校)
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疏血通注射液治疗外伤性颅内血肿的临床观察
疏血通注射液主要成分为水蛭素,是一种特异性凝血酶抑制剂,能对抗凝血酶诱导的神经毒性作用,已广泛应用于治疗缺血性脑血管病.本科近3年来在常规治疗的基础上加用疏血通注射液治疗外伤性颅内血肿32例,并与常规治疗36例对照,现报告如下.
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JNK激酶抑制剂抑制大鼠肾脏缺血再灌注诱导的肾小管上皮细胞凋亡
肾缺血再灌注(I/R)损伤是临床上导致急性肾衰的常见原因,在肾移植等手术中均可发生不同程度的I/R损伤,后者可能与细胞凋亡密切相关[1].JNK激酶抑制剂是一种特异性JNK激酶抑制剂[2],它是否可以抑制肾小管上皮细胞凋亡保护缺血性肾损伤目前尚不清楚,本文探讨其对肾I/R诱导的细胞凋亡的影响及其机制.
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麻疹病毒属病毒检测基因芯片的建立
目的 建立主要麻疹病毒属病毒(麻疹病毒、犬瘟热病毒、小反刍兽疫病毒、牛瘟病毒、海豹瘟热病毒、海豚瘟热病毒等)种特异性检测基因芯片. 方法 应用生物信息学方法从GenBank获得麻疹病毒属病毒的全部基因组序列,以Primer Premier5.0软件设计针对上述病毒的寡核苷酸探针并制备基因芯片,以上述6种病毒及犬副流感病毒、VERO细胞及健康犬组织等验证寡核苷酸芯片的特异性,以细胞毒和临床病料检测基因芯片的灵敏度、特异性和重复性,芯片制备后低温放置3、6、12个月后检验其检测稳定性. 结果 基因芯片检测到麻疹病毒属病毒种特异性信号,无杂信号及交叉信号,芯片方法的灵敏度为10-2TCID50,是PCR的100倍,病料检测与PCR相符率为100%.结论 初步建立了麻疹病毒属病毒种特异性基因芯片,该方法灵敏度高,特异性强,适用于麻疹病毒属的流行病学调查和种特异性鉴定.
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D-二聚体单克隆抗体制备及其在免疫荧光快速定量检测中的应用
D-二聚体(D-dimer,D-D)是纤维蛋白单体经活化因子 XIII 作用后形成的交联纤维蛋白凝块,再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物,医学应用上将它作为一个特异性的纤溶过程标记物,反映纤维蛋白溶解功能[1].与纤维蛋白破坏有关的疾病,如深静脉血栓形成(DVT)、肺栓塞(PE)和弥漫性血管内凝血(DIC)等,均可导致体内 D-D水平升高[2-6].近年来 D-D 的临床应用范围越来越广,除了以上提及的疾病外,在恶性肿瘤、糖尿病、肝脏疾病、脓毒血症的诊断以及溶栓治疗监测方面均具有重要的参考价值[7-9].
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T细胞交叉反应性研究进展
T淋巴细胞是免疫系统的重要成分,执行特异性细胞免疫应答,在感染、肿瘤以及自身免疫病的免疫过程中发挥着至关重要的作用. 初始T细胞通过其细胞膜表面的T细胞受体( T cell receptor, TCR)与抗原提呈细胞( antigen presen-ting cell, APC)表面的抗原肽-主要组织相容性复合体( major histocompatibility complex, MHC)复合物特异结合后,在其他辅助因素作用下,活化、增殖并分化为效应T细胞,进而完成对抗原的清除,以及对免疫应答的调节. 克隆选择学说[1]提出,每个淋巴细胞都会对某一个抗原特异,识别其他配体是不可能的. 多年来,人们广泛认同这种观点,即TCR以"一个克隆一种特异性"的形式为所有外源肽提供免疫. 然而,有些人对这种观点提出了质疑. 其中著名的就是Don Ma-son,他提出要摈弃这种观点[2]. 为何会出现这种观念的转换? 这是因为基于一个简单的算术,即有效免疫需要识别的潜在外源肽>1015. 事实上,人体只有1012个T细胞,在人初始T细胞池中,不同特异性的TCR种类<108. 因此,TCR的数量与大量潜在的外源肽-MHC复合物相比,是相形见绌的.事实上,1015个T细胞的重量超过500 kg,因此克隆选择学说提出的通过初始池中1015具有单一特异性的TCR来进行免疫覆盖的观点明显是荒谬的[2]. 一个全面的免疫系统要求每个T细胞都能识别大量的肽,因此T细胞具有广泛的交叉反应性.
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功能性TCR Vβ分布的简便快速检测方法的建立
研究T细胞受体基因库(TCR)的分布及其可能抗肿瘤、抗病毒的细胞免疫机制具有重要的理论意义和潜在的临床运用价值.为简便、快速地检测机体TCR基因库的变化,采用流式细胞仪的三标记(PE-,FITC-,PECy5-)直接检测技术,利用不同标记的21种特异性Vβ单抗,科学地分为7组,建立了简便、快速检测人功能性TCR库的试剂盒,该试剂盒可以覆盖60% TCRαβ基因库.tube 1- tube 7在CD3-PECy5窗口下较好地检测了Vβ的分布. 该分组在同一标本中反复检测10次,其检测Vβ值的变异系数CV<0.02.同时,用单抗阻断实验证实了其检测的特异性,即在各组中分别加入(20-50)μg/ml纯化Vβ单抗, 可以分别阻断相应的标记Vβ单抗.
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抗癫痫药物高敏综合征二例并文献复习
抗癫痫药物高敏综合征( anticonvulsant hypersensitivity syn-drome,AHS),也称伴有嗜酸细胞增多及全身症状的药物相关性皮疹( drug related rash with eosinophilia and systemic symptoms , DRESS),是一种特异性体质反应综合征,多系统病变,具有潜在致命性;属于迟发型全身性过敏反应,多由含苯环的芳香族抗癫痫药物引起,如卡马西平( carbamazepine , CBZ )、苯巴比妥( phe-nobarbital,PB)、苯妥英钠(phenytoin,PHT)、扑痫酮/去氧苯巴比妥(primidone,PMD)、拉莫三嗪(lamotrigine,LTG)、奥卡西平(ox-carbazepine,OXC)等,与性别、年龄、药物剂量及血药浓度无关[1-2]。1950年,Chaiken等[3]在新英格兰杂志上首次报道了该综合征,当时他们称之为“Dilantin sensitivity (苯妥英钠过敏)”。1988年, Shear 等[4]首次称之为“AHS”。其发病率估计为1/10000~1/1000[1],但考虑到漏诊及漏报的病例,其发病率可能更高[2,5]。在不同种族之间,发病率有很大不同:在亚洲,尤其是东南亚国家,发病率远高于其他地区[5-6]。死亡率估计约为10%~20%[1]。鉴于以下两个原因:(1)正确及时地诊断治疗该病,主要有赖于对该病的认识程度;(2)近年来发现, HLA-B*1502基因与芳香族抗癫痫药物引起的严重皮肤大疱反应强烈相关[7-13],因此我们介绍2例AHS并文献复习如下。
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三种特异性抗体结合流式细胞术分选母血中胎儿细胞方法的评价
研究证实母血中的游离胎儿细胞可用于无创性单基因病产前诊断[1,2].胎儿细胞仍是检测胎儿染色体异常的惟一来源[3],虽然母血中胎儿有核红细胞(FNRBC)数量很少,但其特异性形态在正常人外周血中极罕见,并可携带完整的胎儿基因.因此,建立富集母血中胎儿细胞的方法则是无创性产前诊断的关键.本研究用3种FNRBC特异性抗体和流式细胞术分选胎儿细胞,并通过计算FNRBC准确率和特异性,以评价分选母血中胎儿细胞的适宜方法.
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自身免疫病患者血清中传染性非典型肺炎冠状病毒抗体阳性原因分析
目的探讨传染性非典型肺炎又称严重急性呼吸综合征(SARS),冠状病毒(SARSCoV)抗体在SARS病原学诊断中的特异性及其在系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、干燥综合征(SS)和混合结缔组织病(MCTD)患者中的假阳性问题.方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量RT-PCR技术检测了111名正常对照和58例SLE、20例RA、10例SS、16例MCTD患者做血清中SARS-CoV抗体的检测.结果在111名正常对照中,IgM抗体均阴性,IgG抗体的阳性率为3.6%;IgG抗体诊断SARS的特异性为96.4%,两种抗体同时阳性诊断SARS的特异性为100%.58例SLE患者中,IgM抗体和IgG抗体阳性率分别为8.6%和32.8%,IgG抗体和IgM抗体同时阳性为19%;在10例SS患者中只有1例两种抗体同时阳性(10%);在16例MCTD患者中,IgG抗体阳性6例(37.5%),两种抗体同时阳性1例(6.3%);在20例RA患者中只有1例IgG抗体阳性(5%).经RT-PCR检测,上述自身免疫病患者中的阳性病例血清SARS-CoV抗体均为阴性.结论用非纯化抗原制备的ELISA试剂盒测定自身免疫病患者的SARS-CoV抗体,可能出现假阳性,两种抗体同时测定可降低诊断的假阳性率,提高诊断的特异性.在自身免疫病患者中出现假阳性的原因可能与包被的抗原有关.
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分离培养在Hp感染诊断中的重要地位
目的:对三种常用幽门螺杆菌感染诊断方法(细菌分离培养、快速尿素酶试验、病理组织切片)进行比较.方法:对312例胃部不适患者的胃窦部活检组织分别使用以上三种方法检测幽门螺杆菌,然后进行阳性检出率的比较.结果:细菌分离培养、快速尿素酶试验、病理切片的Hp检出率分别为60.26%,69.23%及46.15%.快速尿素酶试验、病理切片与细菌分离培养的不符合率分别为14.1%和25.6%.结论:同其他两种方法相比,细菌分离培养是一种特异性高,敏感性强,技术设备要求不高,价廉的好方法.
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糖尿病肾病临床检查
糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)作为糖尿病的一种特异性慢性并发症,其患病率也逐年增加.2009至2012年我国社区的2型糖尿病患者中并发糖尿病肾病的患病率为30% ~50%,在住院患者中为40%左右[1].糖尿病肾病早期缺乏明显的临床症状和有效的预测因子,大量糖尿病肾病患者未能得到及时的早期诊断和有效干预,以致糖尿病肾病逐渐进展至终末期肾衰竭,糖尿病肾病是目前引发糖尿病患者终末期肾功能衰竭(ESRD)的首要原因.
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重症急性胰腺炎患者血浆中D-二聚体及凝血功能变化研究
急性胰腺炎(AP)可分为轻症急性胰腺炎(MAP)和重症急性胰腺炎(SAP),后者常伴有严重并发症,引起多脏器损害,甚至多器官功能障碍综合征(MODS),其中包括患者血液凝血及纤溶系统的改变,而D-二聚体是交联纤维蛋白被纤溶酶水解后产生的一种特异性降解产物,能准确反应体内纤溶功能.有资料证明[1,2],纤维蛋白原、D-二聚体是监测凝血与纤溶系统十分有意义的实验指标.故本文观察了SAP患者早期血浆中D-二聚体、纤维蛋白原、凝血酶原时间及部分活化凝血酶原时间的改变,并对患者进行APACHEⅡ评分,评估病情的严重程度,现报道如下.
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弥漫性泛细支气管炎和大环内酯类药物疗法
弥漫性泛细支气管炎(DPB)是东亚地区所特有的人种特异性疾病,其疾病概念和治疗方法均确立于日本.随着红霉素疗法的发现和确立,DPB的预后有了划时代的变化.近,关于DPB研究的大进步有以下两个方面∶第一,关于DPB的人种特异性和疾病易感基因的研究;第二,关于红霉素及其它14员大环内酯类药物疗法的作用机制的研究.
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产甲胎蛋白胃癌一例
甲胎蛋白(AFP)是一种特异性癌标志物,已经广泛用于肝细胞肝癌和卵黄囊肿瘤的诊断,研究亦发现其他内胚层肿瘤也有AFP产生,如胃肠癌、胰腺癌、胆囊癌、乳腺癌,其中胃癌相对常见,被称为产甲胎蛋白胃癌(AFP-producing gastric carcinoma,AFPGC).我们近期也遇到1例该病人,现报道如下.
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肺水肿形成和消散的新机制
肺内正常的解剖结构和生理机制保持着肺间质的水分恒定和肺泡处于理想的湿润状态,以利于完成肺的各种功能.如果某些原因引起肺血管外液体量过度增多甚至渗入肺泡,则引起生理功能紊乱,即称为肺水肿.在80年代中期以前,人们认为,液体通过肺泡上皮是完全依赖于静力的被动过程,即肺毛细血管静水压和(或)血气屏障通透性增加引起肺间质的液体量超过其容纳能力后,就会出现肺泡水肿.虽然也认识到与肺毛细血管内皮相比,肺泡上皮屏障对蛋白和液体转运的阻力较大,但忽略了肺泡上皮还有主动转运离子清除肺泡内液体的能力.当Matthay等[1]发现,羊肺泡上皮具有主动清除肺泡内液体的作用后,这一认识才受到了观注.近来的研究[2]发现,肺泡内存在4种特异性水转运蛋白或称为水通道蛋白(AQP)1、3、4、5,可加速水的转运.这一发现使人们对肺水肿形成和消散机制的认识达到了分子水平,为进一步提高肺水肿的诊治提供了重要的参考意见.
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RNA干扰及其在心血管疾病诊治中的应用
1998年,Fire等[1]在前人工作的基础上首次将反义RNA、正义RNA以及相应的双链RNA(dsRNA)分别注入秀丽线虫,结果发现:与其他两种单链RNA相比,dsRNA可显著抑制靶基因的表达.他们将这种生物体内的自我保护机制称为RNA干扰(RNA interference, RNAi).这种特异性抑制靶基因转录后表达的现象的发现具有划时代的意义,并被Science杂志评为2001和2002年度十大重要科学成就之一.近年来,RNA干扰已成为分子生物学领域热门的研究课题,其应用领域已经从基因组学研究扩展到医学领域并作为一种基因分析和治疗手段[2,3].现就RNA干扰在心血管疾病中的应用进展作一综述.
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鬼臼苦素对卵巢上皮性癌细胞增殖的影响
卵巢上皮性癌(卵巢癌)是致命的妇科恶性肿瘤,多数晚期患者在初次治疗后2~3年内复发,肿瘤耐药是导致其复发的主要原因,因此,迫切需要寻找新的抗癌药物[1].近年来研究发现,鬼臼苦素(picropodophyllin,PPP)是一种特异性的胰岛素样生长因子l受体(insuhn.1ike growth factor-1recepter,IGF-1R)酪氨酸激酶抑制剂,能有效阻断IGF-1R介导的细胞内信号传导通路,从而抑制肿瘤细胞生长并促进其凋亡,而正常细胞的生长不受影响[2].本研究选用表达IGF-1R的卵巢癌细胞株SKOV3及其顺铂耐药株SKOV3/DDP作为研究对象,通过体外药物实验分析PPP的抗肿瘤作用及机制.