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病例结合式实验教学对学生临床思维能力的影响
自实验诊断学的教学目标被确定为:"会开化验单、会看化验单、会分析和应用化验结果",简称"三会"以来,如何使学生能够将所学知识自觉应用于临床实践,就成为实验诊断教学中难解决的问题.为了攻克这一难点,我们延续理论教学改革的优秀成果[1],将"病例分析讨论"引入临床医学本科专业实验教学,改以往简单的验证式实验模式为直接检测病人标本并分析其病历资料、做出诊断的新模式.该模式使学生既当医生又做检验师,与临床上医生接诊病人后的检查诊断程序相符合,可以给学生以贴近实战的锻炼.经过三年的探索和完善,已比较成熟,在此基础上我们研究了该实验模式对学生临床思维能力的影响.
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应用聚合酶链反应检测蚤体中鼠疫菌
鼠疫菌主要感染啮齿动物,并通过蚤从感染的宿主传播给未感染的宿主,人可通过接触染疫动物或被疫蚤叮咬而感染鼠疫.因此,发现和判定鼠疫菌在这些动物和其寄生蚤中的存在是鼠疫监测的重要组成部分.从蚤体中分离鼠疫菌,通常采用的细菌学方法和动物实验方法,此法虽然可靠,但耗时长,检出率低.近年来,国内外学者应用PCR技术诊断鼠疫菌取得了可喜的进展[1,2].本文应用此技术,直接检测蚤体内鼠疫菌.
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乙肝病毒荧光定量PCR检验过程中的几点体会
乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是全球性的公共卫生问题,估计全世界HBV携带者高达3.5亿.我国是乙型肝炎的高流行区,人群HBV携带率约10%,HBV携带者超过112亿.HBV感染后临床表现呈多样性,可表现为重症肝炎、急性肝炎、慢性肝炎或无症状携带者,其中部分慢性肝炎可演变成肝硬化或肝癌[1].检出HBV DNA是病毒存在和复制的可靠的指标,已被广泛应用于临床诊断和药物效果评价.应用荧光定量PCR技术可以直接检测HBVDNA,特异性强、敏感性高.定量检测HBV DNA对于判断病毒复制程度、传染大小、抗病毒药物疗效等具有重要意义,怎样准确地检测HBV DNA是一个关键.根据工作中的几点体会,与同行们互相探讨.
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荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA观察
乙型肝炎病毒(HBV)感染的实验诊断主要依据血清学标志(HBV-M)和HBV-DNA的检测.以往运用的普通PCR检测只能定性,其后处理过程易导致假阳性污染,且所用的染色剂溴乙锭是强致癌物.因此,普通PCR的应用和推广受到一定限制.我们采用实时荧光定量聚合酶链反应(Fluorescence quantitative ,FQ-PCR)克服了常规PCR的不足[1],直接检测146份血清标本乙型肝炎病毒核酸的拷贝数,并同时与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行对照,现将结果报道如下.
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莱姆病的实验诊断
本文简要地说明一些可供莱姆病实验诊断的方法及其应用价值,包括培养分离和组织中的直接检测、免疫学方法和分子生物学方法,并对各种方法的应用价值进行了评估.
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细胞因子介导的CTL非杀伤性途径
CTL通过穿孔素或FasL-Fas机制杀伤病毒感染的靶细胞,这一途径一直被认为是CTL清除病毒感染的惟一或主要机制.近年转基因小鼠模型及MHC I类分子-肽四聚物方法直接检测局部CTL研究发现:在乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)等感染中,特异性CTL与肝病理损伤无相关性,非特异性淋巴细胞浸润是肝损伤的主要原因.特异性CTL对病毒的有效清除并非通过杀伤靶细胞,而主要通过激活、释放某类细胞因子,以非杀伤性方式清除病毒感染.这一机制的阐明,不仅拓宽了人们对细胞免疫应答抗病毒感染作用及其机制的认识,同时也为某些病毒性疾病的非损伤性免疫治疗提供了可能.
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免疫沉析法检测大肠埃希菌O157: H7抗原
本文作者采用一种免疫沉析法--Meridian IC-STAT法,对两组粪便标本作了大肠埃希菌(大肠杆菌)O157:H7抗原直接检测及从粪便肉汤培养中检测抗原,并与山梨醇麦康凯琼脂平板(SMAC)粪便培养法进行了比较.
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脑血管动力学参数研究与模型临床应用
脑血管病是严重危害人类健康的常见病,传统的诊断方法还无法用无创伤性仪器在体直接检测诸如血管弹性、血液运动阻力等脑血管动力学特性.脑血管血液动力学参数正是直接反映脑血管功能的定量指标.检测脑血管血液动力学参数无论是对于脑血管疾病的早期诊断、脑血管疾病治疗措施疗效的客观评价,还是对于脑循环的生理、病理学研究都有十分重要的意义.
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静脉移植桥血管中血液振荡流的速度和切应力
静脉移植术中被移植到动脉环境下的静脉桥血管的重建问题一直受到人们的广泛关注.手术后在动脉高压环境下,静脉血管段扩张;而在吻合口处则容易由于缝线或者外科损伤引起的急性凝血形成局部的僵硬和狭窄.这都引发血液流动情况异常,使血管所处的力学环境发生特异性变化.力学因素中影响血管重建的主要是粘性血液流动所引起的壁面切应力和血管壁所承受的周向张应力.桥血管中切应力分布的信息对血管病理学研究十分必要.由于至今很难直接检测活体血管壁上的切应力分布,因而本文致力于建立力学模型,用可以无创伤检测的力学参量(近心端动脉血管轴心处的轴向流速波形和管壁径向位移波形、血管壁的几何方程)来获取血管内壁上切应力分布的数值结果.
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MALDI-TOF MS在临床微生物样本直接检测中的应用
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱( MALDI-TOF MS)是近年来发展起来的一项新兴的微生物鉴定技术,与传统的生化表型鉴定方法和分子生物学方法相比,MALDI-TOF MS具有操作简单、快速、准确和经济的特点。鉴于其对培养出的纯菌落鉴定的准确性和稳定性,MALDI-TOF MS也可被应用于临床样本的直接检测,包括阳性血培养瓶、中段尿、脑脊液等。本文主要就MALDI-TOF MS用于直接检测临床样本的原理、流程、鉴定效能及其研究进展等方面做一综述。
关键词: 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 直接检测 微生物鉴定 临床样本 -
评估SDS在MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血培养样本中的应用价值
目的 评价十二烷基硫酸钠(SDS)前处理方法在提高基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定阳性血培养样本准确率中的作用.方法 收集2016年3—9月阳性血培养瓶378瓶,试验前采用分离胶促凝管富集病原菌,试验后期增加SDS的洗涤过程,得到纯化的菌体后采用MALDI-TOF MS直接鉴定.同时对阳性血培养样本进行常规转种培养,获得纯菌落后采用MALDI-TOF MS鉴定,以此为终结果,比较2种不同前处理方法的鉴定准确率.结果 未使用SDS洗涤的血样本87例,其中单种细菌感染的血样本83例,种鉴定准确率为73.5%,有4例为复数菌感染.使用SDS洗涤的血样本286例,其中单种细菌感染的血样本277例,种鉴定准确率为82.7%,有9例为复数菌感染.改良后革兰阳性菌的鉴定准确率从65.7%增加至90.5%,酵母的鉴定准确率从11.1%增加至50.0%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 使用SDS洗涤处理的血培养阳性样本采用MALDI-TOF MS 直接鉴定,可提高血培养中主要病原菌的鉴定准确率,且操作简便、快速,成本低廉,适合在临床微生物实验室中应用.
关键词: 十二烷基硫酸钠 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 血培养 直接检测 -
006埃及血吸虫:用RAPD-PCR方法直接检测其种群遗传学的多态性
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斑点杂交试验直接检测血清HBV DNA在乙型肝炎诊断中的应用
本文用斑点杂交试验直接检测149例不同类型的乙型肝炎血清中HBV DNA,其阳性率为65.8%(98/149),各型间无差异.其中116例检测了DNAP,阳性率为62%(72/116),HBV DNA阳性率为72.4%(841/116).在116例中HBsAg、HBeAg和抗-HBc均阳性者54例,其DNAP和HBVDNA阳性率分别为79.6%(43/54)和92.6%(50/54); HBsAg、抗-HBe和抗-I-IBc均阳性者35例,DNAP和HBV DNA阳性率分别为37.1%(13/35)和60%(21/35);HBsAg和抗-HBc阳性者27例,DNAP和HBV DNA阳性率分别为59.2%(16/27)和 48.1%(13/27).同时有6份供血员血清阴性.结果表明,本法高度特异、敏感、简便,可作为判断病毒复制的手段.
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应用DNA探针直接检测结核分枝杆菌DNA
由于DNA探针杂交反应特异性高,国内外研究者已采用DNA探针杂交技术检测结核分枝杆菌.但该检测方法敏感性较低,通常采用与聚合酶链反应(PCR)扩增相结合的方法.但这样增加了实验的费用和交叉污染的机会.
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应用蛋白芯片技术探索乙型肝炎相关肝癌诊断新方法
表面加强激光解析电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption-ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术可将蛋白质沉析在芯片表面,离子化后用飞行时间质谱进行检测[1].这一技术操作简单,可直接检测体液,具有快速、高通量、准确等优点.
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缺血性卒中的TCD微栓子检测技术进展
主动脉-颅脑动脉粥样硬化斑块的内容物及其发生溃疡时的附壁血凝块的碎屑,可散落在血液中成为微栓子,由此造成局部缺血症状.而微栓子可经酶的作用而分解,或因栓塞致远端血管缺血扩张,使栓子移向末梢而使症状缓解.目前缺乏证实栓子发生的客观指标,临床一般只能依靠发病过程及是否存在栓子来源进行推断,而经颅多普勒(TCD)技术的发展为栓子的直接检测提供了可能.
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放射免疫分析在下丘脑-垂体-甲状腺轴激素与抗体应用中的评价
在甲状腺疾病中,经典的下丘脑-垂体-甲状腺轴激素与免疫抗体的序惯测定,作为对上述部位病变本身的定性、定位诊断仍然具有决定性的意义.促甲状腺释放激素是下丘脑神经内分泌激素,它的直接测定有助于进一步了解和判断由下丘脑控制的甲状腺中枢性功能状态.TRH兴奋试验虽然有被TSH免疫放射分析代替的趋势,但目前仍对能反映TSH的储备功能非常重要;对鉴别继发性下丘脑或垂体性甲减或甲亢、隐匿性或非典型性以及新生儿甲状腺机能亢进等也应具有特殊价值.作者对720例甲亢患者与60例心脏血管神经官能症病人进行了这种试验,结果后者分泌TSH与正常对照组无区别;前者则显示垂体的TSH储备功能减低程度与甲亢的病情程序呈正相关.籍此来鉴别这两种易于在临床上相混淆的疾病.多年来,本科在临床与RIA工作中将一些长期于门诊或住院被认为是“神经官能症”、“植物神经功能紊乱”及“β-受体亢进症”患者进行了TRH与sTSH等直接检测,结果发现了不少病人实际上存在着一定程度的TSH储备功能低下或轻度亢进,进而为更正其原先的错误诊断提供了客观科学依据.对于溢乳和/或闭经的病因分析等,TRH兴奋试验也有重要价值,即可判断究竟属原发性甲减抑或隐匿性甲减所致.
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荧光蛋白在肿瘤的发生和发展方面的研究与应用
荧光示踪技术是激发光通过激发荧光基团到达高能量状态,而后产生发射光,并利用生物荧光影像分析技术直接检测活体生物体内的细胞活动和基因行为。常用的是绿色荧光蛋白( green fluorescent protein ,GFP),随后发现的红色荧光蛋白( red fluorescent protein ,RFP)在灵敏度和信噪比方面均比GFP高,此外还有黄色荧光蛋白( yellow fluorescent protein,YFP)等,这为基于GFP的体内研究提供了一个很好的互补工具。随着荧光蛋白在细胞生物学上的广泛应用,使活体细胞显像问题得以解决,并且获得了空前的发展。尤其是荧光蛋白可以对各种细胞过程进行显像示踪,这些蛋白可作为报告基因,独特的荧光光谱能在体内外对尚未明确的细胞过程进行示踪。比如肿瘤发生发展过程中的各个阶段在细胞水平有何异常?荧光蛋白的活体成像能观察各种肿瘤模型中肿瘤细胞的生长和发展,包括肿瘤初的发生,肿瘤细胞随后的迁移和入侵,转移播种,生成血管以及肿瘤和宿主微环境间的相互作用等。荧光蛋白作为报告基因已被广泛应用于肿瘤各个阶段的研究中,本文就近些年来荧光示踪技术在肿瘤细胞发生和发展过程中的研究和应用作一综述。
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基层常用结核病诊断方法及展望
长期以来,结核病的实验室诊断对结核病的防治起到了很重要的作用.传统的结核杆菌感染的诊断方法有金标法(DICA)结核抗体、抗酸染色涂片(AFS)法及结核菌素纯蛋白衍生物皮试 (PPD)等,但这些方法均存在检测周期长,阳性率低,特异性差等缺点而不能满足临床需要[2].而基因芯片法(GCT)直接检测结核分枝杆菌(MTB)具有简单快速等优点.笔者对基层常用的结核病诊断方法进行了分析.
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核酸检测技术在寄生虫病诊断中的应用
寄生虫病的实验诊断大体可分为两类:一是检测宿主被寄生虫感染后产生的反应,如检测抗体、细胞免疫反应等.二是直接检测受感染的寄生虫病原体、或寄生虫特有的一些分子,如抗原、酶、核酸.抗原和酶都是病原体的基因产物,属表型特征,这些特征受基因表达的影响.寄生虫的不同生活期以及在不同环境下可能发生形态学的改变,有时会影响到直接检测的准确性,但显微镜检查目前仍然是寄生虫病诊断的"金标准".的确,镜检不须特殊的仪器和试剂,具有简单、快速的优点,但对于在形态上非常相似,或体积过小,或虫荷过低、隐性感染、早期感染,或在取材不易的部位寄生的寄生虫,镜检法就显示出明显的局限性.培养法耗时长,一般需要特殊的媒介和实验条件,这在寄生虫病流行的发展中国家是很难实现的.免疫血清学方法在疾病筛检中发挥了重要作用,但一般只作辅助诊断手段而非用于确诊.