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聚合酶链反应直接检测痰中耐甲氧西林葡萄球菌的敏感性
通过聚合酶链反应(PCR)直接检测痰中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),为临床快速诊断MRSA感染提供了新的方法.我们设计定量实验,对这种方法的敏感性进行进一步的探讨,现报道如下.
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噬菌体微孔纸片法直接检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性
为进一步缩短MTB及其耐药性的检测时间,我们采用噬菌体微孔纸片法(简称微孔纸片法)直接检测痰标本中的MTB,同时检测其对异烟肼、链霉素、利福平和乙胺丁醇等4种抗结核药物的耐药性,与传统培养法及经典噬菌体生物扩增法(PhaB)结果进行比较,探讨该方法的临床应用价值.
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T淋巴细胞亚群和病毒感染
细胞免疫功能在人体抗病毒感染中发挥重要作用,各种病毒感染性疾病的转归与细胞免疫功能尤其是与T淋巴细胞功能密切相关.临床上目前缺乏体内直接检测T淋巴细胞功能的手段,主要靠体外间接的方法来评估.如检测外周血中T淋巴细胞及各亚群数量和比例、增殖功能及产生细胞因子的能力,主要方法有ELISA、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)、流式细胞术(FCM),其中FCM鉴于其独特的优势在临床中应用广泛.
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呼出气体中的一氧化氮检测与哮喘
哮喘的病理基础是慢性气道炎症.支气管镜下支气管灌洗液和支气管内膜活检的方法是检测评估气道炎症的金标准,因其有创伤性和较高的花费使其很难成为哮喘儿童常用的检查方法.其他无创伤性的方法如外周血嗜酸细胞计数、尿白三烯E4(leukotriene-E4)的检测、痰诱导细胞分析等也被用来评价气道炎症的程度,但这些方法缺乏敏感性和特异性,操作费时费力.近来,对呼出气体中的成分,尤其是呼出气中一氧化氮浓度(fractional concentration of exhaled nitric oxide, FENO)的测定,常用来评估气道炎症.FENO可以直接检测并立即得出结果.
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β淀粉样蛋白致PC12细胞毒性的自由基机制
本实验采用体外培养的大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞,观察β淀粉样蛋白Aβ25~35作用后细胞中自由基含量的变化,以及抗自由基药物的作用,并探讨自由基机制在培养的PC12细胞死亡中的意义以及抗自由基药物过氧化氢酶(catalase,CAT)的保护作用.方法和结果:将Aβ25~35或CAT加入培养的PC12细胞,24 h后通过MTT法[溴化-3-(4,5-二甲基噻唑基-2)-2,5-二苯基四唑]检测细胞活性,判断Aβ的毒性作用和CAT的保护作用;用激光共聚焦显微镜、KS400图像分析系统及荧光分光光度计直接检测以H2O2为主的自由基的生成.结果显示加药后24 h应用MTT法观察不同浓度Aβ(0.1~40 μmol/L)的毒性作用,发现随着Aβ 25~35浓度的增加,细胞活性下降,IC50大约为20 μm.而应用不同浓度的CAT(100、300、500 U/ml)可以拮抗20 μm Aβ 25~35的毒性,且随着CAT浓度的增加,其保护作用增强.用激光共聚焦显微镜拍照,Aβ组的细胞荧光强度明显高于对照组.用KS400图象分析系统,随机选取若干视野(3~5),检测单个细胞的荧光强度,与选定荧光小球作对比结果显示,Aβ组的细胞平均灰度为21.9±10.7(n=35),对照组细胞平均灰度为6.3±4.2(n=20),而CAT(300 U/ml)组则为13.4±5.5(n=24).Aβ组与对照组及CAT组差异均有显著意义(P<0.01).用荧光分光光度计检测各组的相对荧光强度(%,对照组),结果显示,Aβ组为1.8±0.2(n=6),而CAT(500 U/ml)组0.9±0.4(n=6),t检验示Aβ组与对照组及CAT组差异均有显著意义(P<0.01).
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MR分子成像定量技术在心血管疾病转化医学研究中的应用
近年来,MR技术在提供心脏和大血管疾病的解剖和功能信息方面发挥着日益重要的作用,这类技术又称为心血管MR( cardiovascular MR, CMR)技术[1-4].分子影像( molecular imaging,MI)侧重于在细胞和分子(蛋白)水平定性及定量地探测与重要生理过程和疾病相关的生物标记物(又称分子靶点)的表达[5-7].由于这些分子靶点在活体组织中表达量极低(通常为nmol水平),常规CMR技术缺乏足够的敏感度、对比度和分辨率来直接检测这些分子靶点.
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20例烟雾病的经颅多普勒超声分析
烟雾病(Moyamoya disease,MMD)是先天性颅底血管发育异常或其他疾病导致的颅内血管异常血管网形成.该病的病理改变为颈内动脉终末段、大脑中动脉及大脑前动脉的起始部进行性狭窄或闭塞,早期尤以颈内动脉终末段狭窄多见,病变多数累及双侧.脑血管造影是确诊的金标准,但它是一项有创检查方法,经颅多普勒超声(TCD)以其无创、价廉、重复性好、准确等特点,对颅底血管的血流动力学变化直接检测,目前已广泛作为烟雾病等各种脑血管病的无创检查手段.
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胶体金法检测大便隐血的临床观察
大便隐血实验可提示无症状的消化道肿瘤及评价缺铁性贫血的消化道出血情况,是消化道出血、肿瘤等疾病的重要实验室参考指标.常见检测方法分为化学法和免疫法两类.化学法灵敏性、特异性差,受饮食影响较大,干扰因素多.免疫法是直接检测人体血红蛋白,灵敏性、特异性均高,应用较为广泛.胶体金法是免疫法中的一种,为了观察其灵敏度和检测线性范围,我室对不同浓度血红蛋白便进行了实验观察.
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血液病患者伴发弓形虫感染的临床研究
我们应用PCR/DNA探针技术,直接检测血液病患者外周血中弓形虫病原体DNA,并与正常人及同期住院其它类患者比较,探讨不同血液病患者的易感性.
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PCR与酶联免疫检测乙肝病毒的结果比较
目前,临床上对乙型肝炎病毒(HBV)感染的诊断主要采用酶联免疫吸附法(ELLSA)和放免法(RIA)测定血清中的乙肝标志物(HBVM)由于聚合酶链反应(PCR)直接检测乙肝病毒核酸(HBV DNA)序列,其敏感性高,可达105pg,相当于标本中只要有3个HBV-DNA分子即可检出[1].
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MI-921电解质分析仪常见故障及分析
MI-921电解质分析仪可直接检测K、Na、Cl、Ca、CO2-CP含量,24小时开机用于常规和急诊工作,易出现故障,现将日常保养、操作中常出现的故障及排除方法介绍如下.
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一氧化氮合酶在口腔癌中的研究进展
一氧化氮(Nitric-Oxide,NO)是人体内重要信号传递因子,由一氧化氮合酶(Nitric-Oxide synthase,NOS)催化而成,具有广泛的生物学调节作用,参与体内循环、消化、神经、免疫等多种系统的生理和病理过程.由于NO是一种不稳定、化学性能极活泼的自由基,体内半衰期极短,约5秒,合成后很快被氧化为二氧化氮,以硝酸根和亚硝酸根的形式存在和排出,尚无法直接检测,目前主要通过检测NOS的表达或活性以及NO代谢产物来间接推测NO的生成和研究NO的生物学作用.
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两种仪器检测网织红细胞的结果比较
网织红细胞在外周血液中的数值可反映骨髓红细胞的生成功能,因而对血液病的诊断和治疗反应的观察均有重要意义.目前许多全自动血细胞分析仪都可直接检测网织红细胞,而染色显微镜计数法仍然是结果复核的参考方法.现将我院目前计数网织红细胞使用的2种血细胞分析仪和人工显微镜镜检法进行了比较,现报告如下.
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乙型肝炎病毒血清免疫标志物与病毒载量的相关分析
乙型肝炎病毒(HBV)携带者在全球已高达3.5亿人,其中60%分布在亚太地区,据统计,我国有1.3亿人携带HBV.由于人们的个体差异反应,感染HBV后可出现不同的免疫应答反应,乙型肝炎5项定量检测结果出现不同的免疫模式.荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)是从分子生物学水平直接检测HBV-DNA,具有高度的敏感性和特异性,目前已广泛于HBV感染的研究及诊断治疗.本研究对乙型肝炎5项定量和HBV-DNA检测结果进行分析,以探讨其对乙型肝炎感染患者的诊断和诊治评估的价值.
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原位杂交技术的应用及操作体会
原位杂交技术的原理是依据核酸碱基互补配对原则,利用标记的特定序列探针与待测样本中的原位检测目的基因互补核酸序列杂交,经信号放大显色后镜下观察结果.该方法具有2 个特点:①基因水平的检测,即直接检测DNA 或RNA ;②可以明确定位,在保存组织结构同时揭示组织细胞的异质性,细胞基因表达的异质性和细胞器中的区别定位[1].现根据我科目前开展的DNA 原位杂交人乳头状病毒(HPV)的检测,在日常操作中的方法及体会介绍如下.
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血浆样本中脂肪血的快速检测
为保证血源血的质量,直接检测血源血的乳糜程度,以确定献血者是否适宜献血,我们研究了一种快速简便的筛查脂肪血的方法.现介绍如下.
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磁共振功能成像对脑肿瘤病人脑功能的评估作用
1背景知识1.1定义磁共振功能成像(fMRI)并不能直接检测神经元活动,而是通过MR信号反映脑血氧饱和度及血流量的变化,从而间接反映神经元的能量消耗,在一定程度上反映神经元的活动情况,达到脑功能成像的目的.神经元活动增强时,脑功能区皮质的血流量增加,而细胞耗氧量增加并不明显,二者增加的不成比例导致功能活动区氧合血红蛋白的增加,脱氧血红蛋白的减少.脱氧血红蛋白是顺磁性物质,其铁离子有4个不成对电子,明显地使T2时间缩短,引起T2加权信号减低,故脱氧血红蛋白的减少导致T2弛豫时间延长,信号增强.这就是所谓血氧水平依赖(bloodoxygenleveldependent,BOLD)技术,它是fMRI的基础[1].自从1900年美国贝尔实验室学者Ogawa发现BOLD效应,1991年麻省总医院Belliveau等应用BOLD技术,设计了"闪光试验"(用强光刺激受试者眼睛,在双侧枕叶可以发现MR信号增强)做出了第1例fMRI图像.至今,fMRI技术迅速发展,已广泛应用神经科学的各个领域,特别是应用于神经肿瘤学中.但是并不是所有的磁共振机都能用于脑功能成像研究,理论上磁场强度越大越好,一般来讲1.5T以上可用于脑功能成像研究,目前流行的是3.0T的磁共振机,而1.5T以下者则不能用于脑功能成像研究[2].
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应变率显像技术评价病毒性心肌炎患者左室局部功能异常
病毒性心肌炎是是病毒感染机体后,侵犯心肌所致的、以心肌炎性病变为主要改变的疾病.应用应变率成像技术可直接检测局部心肌的变形能力,准确地评价其整体及局部的舒张、收缩功能,早期发现心肌功能的变化[1].
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抗原特异性T细胞的检测方法及其应用
抗原特异性T细胞(antigen specific T cell,AST)在防御病毒感染,肿瘤发生以及自身免疫性疾病方面都具有重要作用,检测细胞的活动以鉴别淋巴细胞对特异刺激的反应,在研究这些疾病的发病机制及治疗方面都有重要意义.在单细胞水平同时检测相关功能分子的活性状态将有助于更全面的分析细胞的活性状态[1].一些新方法已经建立,这使得抗原反应性T细胞可直接检测而无需通过体外扩增[2],新一代的T细胞分析使得直接定量或鉴定特异性T细胞反应更为方便.本文主要就有关抗原特异性T细胞检测方法及应用状况综述如下.
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PCR-SSCP法检测耐多药结核分支杆菌耐药性
我国是结核病疫情严重的国家之一,其主要原因是耐药和耐多药结核病的广泛分布和迅速传播.异烟肼(INH)和利福平(RFP)均是抗结核的一线药物,对于其作用机理及结核杆菌的耐药机制的研究日益受到重视.据报道认为结核分支杆菌耐与RNA聚合酶的β亚基的编码基因rpoB的突变有关;耐异烟肼的产生是过氧化氢酶-过氧化物酶的编码基因KatG基因的缺失和突变有关,也inhA基因突变也有相关性[1,2].我们采用PCR-SSCP银染法直接检测临床分离株中结核分支杆菌rpoB基因和KatG基因突变,现将结果报告如下.