首页 > 文献资料
-
miR-497抑制结肠癌细胞HCT116炎症相关基因表达的基因芯片研究
目的：采用基因芯片分析miR-497高表达对结肠癌细胞HCT116基因表达谱的影响。方法利用慢病毒感染人结肠癌细胞株 HCT116，建立 miR-497稳定高表达的结肠癌细胞模型HCT116-497细胞及阴性对照HCT116-CON细胞，用全基因组表达谱芯片筛选差异表达基因，利用MAS 3.0生物信息注释系统进行基因本体（gene ontology，GO）和信号通路富集分析（pathway analysis），筛选炎症相关基因。应用实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）对候选基因进行验证。结果筛选出绝对倍数变化（absolute fold change）3.0倍以上的下调基因582个，发现其主要富集于炎症相关细胞因子网络等信号通路。选取下调基因中参与细胞因子网络和MAPK信号通路的15个炎症相关基因进行PCR验证后显示，与 HCT116-CON 细胞相比，HCT116-497细胞中10个基因（CACNB1、FOS、IL-29、RPS6KA2、TNFSF15、IL-11、INHBC、CSF1R、JAK3和IL-2Rβ）表达水平降低，差异均有统计学意义（均P＜0.05），与芯片结果一致。结论 miR-497抑制结肠癌细胞HCT116中炎症相关基因mRNA的表达。
-
miR-497靶向Bcl-2调控肝癌细胞增殖及凋亡的研究
目的：探讨miR-497靶向Bcl-2对肝癌细胞增殖、凋亡的调控作用。方法：选取肝癌组织及相应远癌正常组织，分别采用逆转录PCR（reverse transcriptton PCR，RT-PCR）、Western blot检测组织中miR-497及Bcl-2蛋白表达；选取肝癌细胞系HepG2，分别转染miR-497 mimics及对照寡核苷酸，采用RT-PCR、Western blot检测组织中miR-497及Bcl-2蛋白表达，采用MTT法检测各组细胞增殖活性，采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡，采用双荧光素酶报告基因检测细胞荧光酶活性。结果：1）与远癌正常组织相比，肝癌组织中miR-497表达明显降低（P<0.05），Bcl-2蛋白表达明显增高（P<0.05）；2）与转染对照寡核苷酸相比，转染miR-497可使HepG2中miR-497表达增高（P<0.05），Bcl-2蛋白表达降低（P<0.05）；3）与转染对照寡核苷酸相比，共转染miR-497与Bcl-2-WT可使HepG2荧光素酶活性降低（P<0.05）；4）转染miR-497后，HepG2增殖活性较转染对照寡核苷酸明显降低（P<0.05），而转染miR-497+Bcl-2后，HepG2增殖活性较单纯转染miR-497明显提高（P<0.05）；5）转染miR-497后，HepG2总凋亡比例较转染对照寡核苷酸明显增高（P<0.05）；而转染miR-497+Bcl-2后，HepG2总凋亡比例较单纯转染miR-497明显降低（P<0.05）。结论：miR-497可通过靶向Bcl-2抑制肝癌细胞增殖同时促进细胞凋亡。
-
载蟾毒灵Pluronic-PEI纳米微囊通过抑制miR-497介导的IGF1-R-PI3K-Akt通路抗大肠癌侵袭转移
目的 探讨载蟾毒灵Pluronic-PEI纳米微囊通过抑制miR-497介导的IGF1-R-PI3 K-Akt信号通路对大肠癌Lovo细胞体外及在裸鼠体内生长的影响及其作用机制.方法 利用慢病毒miR-497转染大肠癌Lovo细胞,观察载蟾毒灵Pluronic-PEI纳米微囊对Lovo细胞体外增殖和侵袭转移能力的影响及miR-497介导的IGF1-R-PI3K-Akt信号通路相关基因和蛋白的调控作用.建立裸鼠原位移植瘤模型,8周后处死动物,观测对成瘤的影响.结果 ①与对照组比较,载蟾毒灵的纳米微囊对过表达miR-497的Lovo细胞的抑制率显著并呈时间-剂量依赖性;并使其凋亡率从(28.93 ±0.24)％提高至(75.20±0.29)％,明显高于相同浓度作用的Lovo细胞和Lovo NC细胞(P＜0.01);划痕实验中过表达miR-497的Lovo细胞的迁移率从(0.083±0.019)(25 nmol/L)降低到(-0.242±0.035) (400 nmol/L),呈剂量依赖性;②Transwell结果提示载蟾毒灵纳米微囊在25 nmoL/L就能够显著抑制过表达miR-497的Lovo细胞的侵袭作用;③免疫印迹分析提示载蟾毒灵的纳米微囊和LY 294002作用Lovo NC细胞和过表达miR-497的Lovo细胞,两种细胞的p-AktSer 473和p-Akt Thr 308蛋白表达明显下降,而pan-Akt变化不明显.④体内实验显示载蟾毒灵纳米微囊抑制瘤体转移优于蟾毒灵组.结论 载蟾毒灵Pluronic-PEI纳米微囊可以通过抑制miR-497介导的IGF1-R-PI3 K-Akt信号通路,在体外、体内都可发挥抗结肠癌侵袭和转移的作用.
关键词： 蟾毒灵 纳米微囊 miR-497 IGF1-R-PI3K-Akt 大肠癌 -
术后结合替莫唑胺对神经胶质瘤患者血清miR-181b及miR-497的影响
目的:分析神经胶质瘤患者术后结合替莫唑胺对血清miR-181b及miR-497表达的影响.方法:将收治的76例神经胶质瘤术后患者随机分为A、B两组.其中A组(38例)采用司莫司汀方法治疗,B组(38例)采用司莫司汀联合替莫唑胺的方法治疗.观察比较两组患者的临床疗效,术后1、2、3年生存率,Karnofsky评分.同时收集患者治疗前、治疗后的血清样本,以检测miR-181b及miR-497表达的变化.结果:B组患者的客观有效率明显高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05);B组中位生存期以及术后1、2、3年生存率明显高于A组(P＜0.05);B组术后的Karnofsky评分显著高于A组(P＜0.05).术后血清miR-181b浓度明显提高[术后(162.34±51.79) fmol/L vs.术前(91.37±40.41)fmol/L,P＜0.05];术后血清miR-497明显提高[术后(166.23±53.68)fmol/L vs.术前(88.36±36.72) fmol/L,P＜0.05].结论:术后结合替莫唑胺能够提高神经胶质瘤患者血清miR-181b及miR-497的表达,延长患者生存期.
-
miR-497抑制肝癌细胞的侵袭与转移
目的:检测miR-497/IGF-1R在肝癌中的表达并探讨其在肝癌侵袭与转移中的作用.方法:定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中miR-497的表达,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中miR-497/IGF-1R mRNA的表达水平,免疫组织化学及Western blot检测肝癌与肝癌细胞系中IGF-1R蛋白表达,通过过表达或干扰肝癌细胞系中miR-497的表达,分析其对肝癌细胞侵袭与转移的作用.结果:肝癌组织中miR-497表达水平低于癌旁组织.与无脉管转移组相比,有脉管转移组降低更为明显.同时在肝癌细胞系也有相似的结果,高侵袭性肝癌细胞系MHCC-97H中降低为明显.IGF-1R在肝癌组织及肝癌细胞系中表达增加.过表达miR-497能降低MHCC-97H中IGF-1R的表达,抑制其侵袭和转移;干扰miR-497表达能增加IGF-1R表达,促进SMMC-7721细胞的侵袭和转移.结论:miR-497在肝癌组织中表达降低,过表达miR-497能下调IGF-1R,抑制肝癌的侵袭与转移,miR-497可能为治疗肝细胞肝癌提供新的靶点.
-
miR-497调控SALL4-RIPK1轴促进肝癌MHCC97L细胞坏死
目的:探讨miR-497促进肝癌MHCC97L细胞坏死作用机制.方法:(1)质粒转染miR-497,经H2O2诱导后,Annexin V-FITC/PI双染流式分析肝癌细胞凋亡和坏死;(2)过表达miR-497和SALL4后,western blot分析RIPKI蛋白表达情况;(3)293T细胞共转染miR-497和pMIR-SALL4-Luc质粒后,荧光素酶实验检测其荧光素强度.结果:(1)过表达miR-497,经H2O2诱导后,活细胞明显下降,而细胞坏死增加;(2) western blot分析得出过表达miR-497和SALL4的MHCC97L细胞内的RIPK1蛋白表达均上调;(3)荧光素酶实验证实了miR-497直接靶向SALL4.结论:miR-497通过调控SALL4-RIPK1轴促使肝癌MHCC97L细胞坏死.
-
吉西他滨通过上调miR-497抑制宫颈癌细胞的侵袭迁移
目的 研究miR-497在抑制官颈癌侵袭迁移中的作用.方法 将不同浓度梯度的吉西他滨作用于C33a细胞,MTT法检测细胞存活率计算IC50;给予宫颈癌细胞半数致死剂量的吉西他滨,Transwell及Wound Healing Assay检测吉西他滨对宫颈癌细胞侵袭迁移能力的影响.分别给予C33a细胞3.15mg/L及6.3mg/L的吉西他滨后,qRT-PCR检测miR-497变化及Western blot检测已知miR-497下游蛋白的变化.将miR-497 mimic转入C33a细胞后,Transwell及Wound Healing Assay检测miR-497对宫颈癌细胞侵袭迁移能力的影响.在给予C33a细胞吉西他滨的同时加入anti-miR-497,即在miR-497被抑制的情况下Western blot检测miR-497下游与侵袭迁移相关的靶蛋白的变化,Transwell及Wound Healing Assay检测宫颈癌细胞侵袭迁移能力.结果 吉西他滨可以有效地抑制官颈癌细胞的侵袭迁移;吉西他滨促进宫颈癌细胞中miR-497的表达;miR-497可以抑制宫颈癌细胞的侵袭迁移;在miR-49被阻遏的情况下,吉西他滨不能有效地抑制宫颈癌细胞的侵袭迁移.结论 吉西他滨通过上调miR-497的表达抑制官颈癌细胞的侵袭迁移.
-
缺血性脑卒中患者血清中miR-145、miR-497表达变化及其与Hs-CRP、MMP-9的相关性
目的 探讨miR-145、miR-497在缺血性脑卒中患者血清中的表达水平及其表达变化和超敏C反应蛋白(Hs-CRP)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的相关性. 方法 选择武汉市中心医院自2013年1月至10月收治的126例缺血性脑卒中患者(患者组,包括轻度神经功能缺损28例、中度神经功能缺损61例、重度神经功能缺损37例)和同期107例健康体检者(对照组)为研究对象,采用荧光定量PCR法检测血清中miR-145、miR-497的表达水平,采用免疫比浊法及ELISA法分别检测Hs-CRP和MMP-9的表达水平,采用偏相关分析法探索患者组血清中miR-145、miR-497的表达变化与Hs-CRP、MMP-9的相关性. 结果 (1)患者组血清中miR-145、miR-497及Hs-CRP、MMP-9的表达水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).偏相关分析法结果显示:患者组血清中miR-145的表达水平与miR-497、CRP、MMP-9都存在正相关性(r=0.718,P=0.000;r=0.658,P=0.000;r=0.455,p=0.000),miR-497的表达水平与CRP、MMP-9都存在正相关性(r=0.845,p=0.000;r=0.787,P=0.000).(2)重度神经功能缺损患者血清中miR-145、miR-497及Hs-CRP、MMP-9的表达水平明显高于中度、轻度患者,中度神经功能缺损患者血清中miR-145、miR-497及Hs-CRP、MMP-9的表达水平明显高于轻度患者,差异均有统计学意义(P＜0.05);并且在不同程度神经功能缺损患者血清中,miR-145、miR-497和Hs-CRP、MMP-9的表达水平之间具有不同的相关强度. 结论 患者血清中miR-145、miR-497可能可以作为诊断缺血性脑卒中的分子标志物,并且二者在缺血性脑卒中的发生发展过程中可能具有协同调控作用.
-
miR-497在肝癌中的表达及意义
目的 观察miR-497在肝癌中的表达水平,分析miR-497表达水平与患者预后之间的关联.方法 选取接受肝癌根治术的患者125例,采用Taqman探针法检测miR-497的表达水平,比较不同肝癌临床病理特征下的miR-497表达差异,探讨不同miR-497表达水平对肝癌患者1、3和5年的复发率、生存率的影响.结果 肝癌组织miR-497 mRNA水平显著低于癌旁组织(P＜0.01);miR-497高表达组血管侵袭例数显著低于miR-497低表达组(P＜0.01);miR-497高表达组高TNM分期例数显著低于miR-497低表达组(P＜0.05);miR-497高表达组1、3、5年生存率显著高于 miR-497 低表达组(P＜0.05);miR-497 高表达组1年、3年、5年复发率显著低于miR-497低表达组.结论 miR-497低表达于肝癌组织,miR-497高表达有助于患者的预后,其机制可能与miR-497抑制肝癌血管侵袭有关.
-
miR-497和miR-34a在铂敏感和铂耐药卵巢上皮癌患者中的表达差异及机制研究
目的:探讨微小核糖核酸miR-497和miR-34a在铂敏感和铂耐药卵巢上皮癌(EOC)患者中表达的差异及机制.方法:选取2008年1月-2012年1月于我院妇产科行卵巢癌分期手术或肿瘤细胞减灭术的EOC患者72例,术后均行以铂类药物为基础的规范化疗,并进行随访(时间为2008年7月-2016年7月).根据患者对铂类药物的敏感性将其分为铂敏感组(42例)和铂耐药组(30例).采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测两组患者肿瘤组织中miR-497和miR-34a的表达水平,并考察其与患者总生存时间的相关性;采用巢式降落式甲基化特异性聚合酶链反应法检测患者miR-497和miR-34a启动子区DNA甲基化水平,采用蛋白印迹法考察组蛋白H3第9位赖氨酸残基二甲基化(H3K9me2)水平,采用染色质免疫共沉淀法检测miR-497和miR-34a启动子区H3K9me2水平.结果:铂敏感组患者miR-497和miR-34a的表达水平均显著高于铂耐药组,差异均有统计学意义(P<0.05);72例患者的总生存期为(45.7±17.5)个月,与其miR-497和miR-34a表达水平呈正相关(r2分别为0.2714、0.3782,P<0.01).铂耐药组患者miR-497和miR34a启动子区DNA甲基化水平均显著高于铂敏感组,且其启动子区H3K9me2水平也显著高于铂敏感组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而铂耐药组患者H3K9me2水平虽略高于铂敏感组,但差异无统计学意义(P>0.05).结论:EOC患者肿瘤组织中miR-497和miR-34a的表达水平与铂化疗的敏感性及患者的生存时间有关,启动子区DNA甲基化和组蛋白甲基化可能是其表达变化的机制之一.
-
胃癌组织中miR-497表达及其生物学意义
目的 检测胃癌组织和癌旁组织中miR-497的表达差异,寻找其下游作用靶点.方法 选取2010～2013年期间在中国医科大学附属第一医院胃肠外科手术切除的94例胃癌及其癌旁组织.用RT-PCR法定量检测miR-497在其中的表达;在线软件预测miR-497靶基因,用阴性对照及miR-497-mimics转染SGC-7901细胞系,RT-PCR及Western检测胃癌细胞miR-497过表达后靶点基因mRNA及蛋白水平的改变;MTT法检测miR-497-mimics组(miR-497过表达)细胞株与阴性对照组间对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗的敏感性.结果 ①miR-497表达量在胃癌组织中明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.01).②BCL2L2被预测为miR-497的靶基因,miR-497在胃癌SGC-7901细胞中过表达后BCL2L2蛋白表达在miR-497-mimics组细胞中明显弱于阴性对照组细胞,BCL2L2 mRNA在2组细胞中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).miR-497-mimics组细胞对5-FU的IC50值明显低于阴性对照组细胞(P=0.004 6).结论 miR-497在胃癌组织中低表达,BCL2L2为miR-497的靶基因,miR-497过表达可提高胃癌细胞对5-FU的敏感性,这为进一步研究miR-497与BCL2L2在胃癌中的作用及治疗提供了新的方向.
-
过表达miR-497通过靶向作用于神经调节蛋白受体降解蛋白1(Nrdp1)促进U87胶质瘤细胞的增殖
目的 在U87人脑胶质瘤细胞中过表达miR-497,探讨miR-497对人脑胶质瘤细胞增殖的影响.方法 包装阴性对照(NC)及miR-497慢病毒;构建U87-NC及U87-miR-497细胞系;荧光素酶报告基因实验检测miR-497在U87细胞中与神经调节蛋白受体降解蛋白1(Nrdp1)的靶向关系;集落形成实验检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot法检测Nrdp1、AKT及磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达水平.结果 成功包装pGLV3/H1-NC及pGLV3/H1-miR-497慢病毒;构建稳定的U87-NC及U87-miR-497细胞系;过表达miR-497的U87-miR-497细胞较对照组U87-NC细胞集落形成能力增强;荧光素酶报告基因实验证实miR-497在U87细胞中靶向作用于Nrdp1;在稳定感染细胞中,过表达miR-497后Nrdp1蛋白水平降低,p-AKT蛋白水平增加,而AKT蛋白未见明显改变.结论 过表达miR-497通过靶向作用于Nrdp1促进U87胶质瘤细胞的增殖.
-
miR-497靶向细胞周期蛋白E1抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖
目的 研究miR-497在宫颈癌HeLa细胞中对细胞周期蛋白E1 (CCNE1)的靶向作用及其对HeLa细胞增殖的影响.方法 构建pre-miR-497、CCNE1野生型(WT-CCNE1)和突变型(MT-CCNE1)真核表达载体,采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)验证pre-miR-497载体的有效性,采用MTT法检测miR-497对HeLa细胞增殖的影响,采用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR和Western blot法验证miR-497对CCNE1的靶向关系.结果 测序结果提示pcDNATM6.2-GW-pre-miR-497、pmirGLO-CCNE1野生型和突变型表达载体构建成功,qRT-PCR证明转染pre-miR-497的HeLa细胞miR-497的表达显著升高.MTT法结果显示转染pre-miR-497的HeLs细胞增殖活性显著低于阴性对照miR组(P＜0.05).此外,双萤光素酶法检测共转染pre-miR-497和WT-CCNE1的HeLa细胞,其萤光素酶活性显著低于对照组(P＜0.01),qRT-PCR及Western blot法也分别证实转染pre-miR-497的HeLa细胞其CCNE1的mRNA和蛋白水平显著下调(P＜0.05).结论 miR-497能够通过靶向CCNE1调控宫颈癌HeLa细胞的增殖活性.
-
miR-497靶向调控疾病易感基因EFNB2的分子机制研究
目的 用分子克隆和双荧光素酶报告基因的方法研究miR-497对精神分裂症易感基因EFNB2的靶向调控作用,为miR-497在精神分裂症中的分子功能研究奠定基础.方法 运用生物信息学在线软件预测,发现与精神分裂症相关的miR-497可能直接调控疾病易感基因EFNB2.随后采用分子生物学技术扩增EFNB2基因3'-UTR中包含与miR-497种子序列相结合的片段,将该片段连接入pmirGLO质粒载体构建野生型的重组体(WT),并突变EFNB2基因3'-UTR与种子序列相结合的碱基序列,构建突变型的重组体(MUT).后将miR-497阴性对照(NC)和模拟物(mimics)分组转染HEK293T细胞系,并在24、48 h后分别进行双荧光素酶报告基因活性测定.结果 测序结果表明EFNB2基因3'-UTR的野生型(WT)和突变型(MUT)分别成功构建入pmirGLO载体中,表明WT和MUT的重组体均构建成功.转染24、48 h后的双荧光素酶报告基因活性检测结果表明,miR-497 mimics与NC相比,显著性降低了报告基因的活性.结论 本研究在细胞水平证明了miR-497可直接调控精神分裂症易感基因EFNB2,为后续miR-497在精神分裂症中的功能研究提供了新思路和新线索.
-
miR-145和miR-497在宫颈癌SiHa细胞中的表达及对增殖的影响
目的 研究miR-145和miR-497在宫颈癌SiHa细胞的表达及对增殖的影响.方法 以宫颈癌SiHa细胞为研究对象,转染pre-miR-145和pre-miR-497,采用实时荧光定量PCR和MTT检测miR-145和miR-497在宫颈癌SiHa细胞中的表达及对增殖的影响.结果 采用实时荧光定量PCR检测miR-145和miR-497在宫颈癌SiHa细胞中的表达,结果显示,实验组中miR-145和miR-497的表达量显著高于blank组(P =0.001),MTT结果显示转染miR-145和miR-497的SiHa细胞其增殖活性明显受到抑制(P＜0.05).结论 miR-145和miR-497能够显著抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖.
-
MiR-497的研究进展
本文概述了miR-497的生物学功能以及它在多种肿瘤、缺血性疾病等中的作用.miR-497在细胞分裂、代谢、应激以及大脑不同区域具有非常重要的生物学功能.多项研究证明miR-497在乳腺癌、结肠直肠癌、原发性腹膜癌、肾上腺素皮质癌(ACC)、黑色素瘤、脑颈部鳞状细胞癌等多种肿瘤中低表达,体内外过表达miR-497可以引起肿瘤细胞凋亡,证明miR-497在抗肿瘤方面发挥着重要作用;另外,miR-497在缺血性脑卒中也具有重要作用.因而,miR-497具有良好的临床分子靶向治疗应用前景.
