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大鼠C6胶质瘤模型构建及生长特性的研究
目的 建立Wistar大鼠C6胶质瘤模型,研究C6脑胶质瘤的发生,发展过程,细胞侵袭情况,肿瘤细胞及血管特性,肿瘤自发消退现象,模型佳应用时间段及应用范围.方法 Wistar大鼠各50只,其中9只用于对照.将C6胶质瘤细胞悬液和DMEM培养基立体定向接种于大鼠的右侧尾状核,分别于接种后3,7,14.21,28,35.50 d进行增强MRI扫描及病理切片HE染色,MMP-2,CD31免疫组化染色.同时观察荷瘤鼠的生物学行为.结果 肿瘤模型于接种后7 d可在MRI上见到肿瘤生长,病理切片可见肿瘤细胞沿神经纤维向周边侵袭,成出芽状生长,14～28 d为快速增长期,免疫组化染色显示基质金属蛋白酶MMP-2及新生血管CD31成强阳性表达,肿瘤细胞聚集,血脑屏障严重破坏,并可沿胼胝体向对侧生长.大部分荷瘤鼠死于30 d内,但有2只28d后出现肿瘤自发消退现象,病理切片可见大量炎细胞浸润,肿瘤内部出现软化灶.结论 大鼠C6胶质瘸模型的生长过程,病理性质与人脑间变,胶质母细胞瘤具有相似性,生长稳定.尽管部分荷瘤鼠出现肿瘤自发消退现象,但此模型仍适合大部分抗胶质瘤药物或基因治疗等的临床前期研究.试验研究佳时间窗为14～28 d.
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大鼠C6胶质瘤VEGF表达与MRI对照研究
目的:研究大鼠C6胶质瘤的病理、VEGF表达的免疫组化及MRI表现,探讨肿瘤侵袭性生长的MRI基础及特点.材料和方法:对40只SD大鼠用立体定向法接种C6胶质瘤细胞,对成功模型进行MR扫描,病理及免疫组化检测,并进行对照分析.结果:C6胶质瘤为实质性肿瘤,早期周围脑组织无明显水肿,晚期水肿明显,瘤体中等增强,病理见瘤组织内有大量新生血管、血窦生成,瘤体周围可见新生的扩大血管腔,肿瘤组织内可见大量VEGF表达的血管内皮细胞,呈树根样深入周围组织.结论:C6胶质瘤的侵袭性生长与VEGF高度表达以及肿瘤血管生成有密切的关系.
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L-NAME抗C6胶质瘤细胞增殖的体外研究
一氧化氮(NO)对实体肿瘤具有促进生长作用,但它对离体肿瘤细胞生长、分化作用尚存在争议.该实验通过体外培养C6细胞株检测应用NO合酶(NOS)抑制剂N-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)对其生长的影响.
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胶质瘤多药耐药细胞系C6/adr的建立及其生物学特性的研究
目的 为研究脑胶质瘤的耐药、机理及逆转，建立了C6耐阿霉素细胞株(C6/adr)MDR细胞系。方法 采用逐渐增加药物浓度联合反复短期暴露法建立了C6/adr细胞系，并对其形态学、超微结构及生长特点进行了研究，流式细胞术对细胞周期分布及DNA与RNA含量的变化进行了分析，观察了其克隆形成率，并对染色体进行了分析，用RT-PCR法、免疫组织化学及流式细胞免疫学方法研究了多药耐药基因mdr-1及其表达的P-gp定性、定量研究，用RT-PCR法对端粒酶的活性进行了研究，建立了该耐药株的动物模型，并对其耐药性进行了分析，采用MTT法分析了耐药谱。结果 HE染色C6/adr与C6相似，透射电镜畸形核多见，胞浆内有较多的线粒体、核糖体及滑面内质网；群体倍增时间55.2h；传代2、3天，C6/adrDNA指数及RNA指数无变化；细胞周期分布以G0＋G1期为主，克隆形成率可达55%；染色体众数多集中于40～42条，以亚二倍体居多；mdr-1基因表达阳性，P-gp含量为42.51%±7.82%，P-gp强阳性，主要位于细胞膜上，端粒酶呈强阳性；动物模型其形态学及P-gp含量均无变化；该细胞株对ADM，VM-26，VCR，5-Fu，VP-16，CDDP耐药，对MTX，CCNU无耐药性。结论 该耐药细胞系C6/adr耐药表型主要为MDR-1，为研究脑胶质瘤的耐药、逆转提供了理想的材料。
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重组腺病毒载体介导血管抑素基因治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究
目的 研究以重组缺陷型腺病毒为载体的血管抑素基因治疗脑胶质瘤.方法 RT-PCR法克隆angiostatin基因,构建携带血管抑素(angiostatin)基因的重组腺病毒载体,体外检测angiostatin的重组腺病毒载体对内皮细胞生长的抑制作用.建立皮下及脑胶质瘤大鼠模型,给予体内基因治疗.结果 克隆得到约1.1Kb的angiostatin基因.构建重组腺病毒载体AdhCMV-AGS,体外试验表明,可以强烈抑制内皮细胞的生长.体内试验表明重组腺病毒可以在体内有效表达Angiostatin,并且有效抑制胶质瘤的生长,使荷脑胶质瘤大鼠存活90天以上.结论 以重组腺病毒为载体的血管抑素基因治疗脑胶质瘤效果显著,将是一种基因治疗的新策略.
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大鼠C6胶质瘤分子生物学研究进展
脑胶质瘤是中枢神经系统中常见的恶性肿瘤,随着各种生物治疗方法在肿瘤治疗领域的应用,关于大鼠C6胶质瘤分子生物学方面的研究进展迅速.文章主要对大鼠C6脑胶质瘤血管生成或抑制因子、细胞周期调控因子以及自杀基因的应用等方面予以综述.
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YAP蛋白对C6胶质瘤干细胞特性的影响
背景:YAP蛋白能够促进与干细胞特性相关蛋白基因的活化,因此推测YAP在维持C6胶质瘤干细胞特性中发挥重要作用,且暂无此方面研究报道.目的:探讨YAP蛋白在胶质瘤干细胞干性维持中发挥的作用.方法:使用无血清培养基培养C6胶质瘤细胞获取C6胶质瘤干细胞,细胞免疫荧光染色检测干细胞标志物CD133和Nestin蛋白表达;Western blot、qRT-PCR和细胞免疫荧光染色观察胶质瘤干细胞和胶质瘤细胞YAP表达差异.进一步使用慢病毒转染将C6胶质瘤细胞YAP蛋白过表达,使用shRNA慢病毒转染将C6胶质瘤干细胞YAP蛋白敲低,Western blot检测CD44、Nanog和Oct-4蛋白表达,干细胞克隆球形成实验鉴定细胞成球能力.结果与结论:①C6胶质瘤干细胞同时表达CD133和Nestin;②C6胶质瘤干细胞与C6胶质瘤细胞相比,YAP蛋白和mRNA表达升高;③YAP过表达后C6胶质瘤细胞的干细胞标志物CD44、Nanog和Oct-4表达明显上调,肿瘤干细胞克隆球体积明显增大、数量明显增多;④YAP敲低后C6胶质瘤干细胞的干细胞标志物CD44、Nanog和Oct-4表达明显下调,肿瘤干细胞克隆球体积明显减小、数量明显减少;⑤结果表明,C6胶质瘤细胞中存在肿瘤干细胞,YAP蛋白在胶质瘤干细胞中高表达并且与胶质瘤干细胞特性的维持密切相关.
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小柴胡汤对C6胶质瘤抑瘤作用的实验研究
目的：：探讨不同剂量小柴胡汤对体外培养的C6胶质瘤细胞的抑瘤作用及其作用机理。方法：将C6胶质瘤细胞分别接种于96孔、24孔及6孔培养板中，每种培养板均分为4组：对照组、小柴胡汤低剂量组、中剂量组和高剂量组，待细胞铺满培养板底80%~90%，开始加药，培养24小时后终止培养。采用CCK-8、活体染色、ELISA、免疫细胞化学及流式细胞仪检测细胞增殖活性、细胞存活率、ESM-1和VEGF的蛋白含量及蛋白阳性表达强度和细胞的早期、晚期凋亡状况。结果：CCK-8法检测显示小柴胡汤低、中、高剂量组对C6胶质瘤细胞的生长均有抑制作用； ELISA和免疫细胞化学法显示，小柴胡汤低、中、高剂量组均能降低ESM-1和VEGF的蛋白阳性表达强度及蛋白含量水平；流式细胞仪检测显示小柴胡汤低、中、高剂量组均能促进细胞凋亡；倒置显微镜观察可见随剂量增加细胞排列逐渐松散、萎缩，细胞漂浮死亡数量增多；各种检测法均显示随剂量增加抑制作用增强且具有剂量依赖性，组间差异均有统计学意义( P<0.01)。结论：小柴胡汤对C6胶质瘤细胞的生长具有明显的抑制作用，它可能通过下调ESM-1和VEGF蛋白水平、促进细胞凋亡，从而发挥抑瘤作用。
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光动力疗法对SD大鼠C6胶质瘤照射后单态氧含量的影响研究
目的:本文研究了光动力学疗法对大鼠胶质瘤照射后单态氧(1O2)含量的影响.材料与方法:取56只SD大鼠皮下注射C6胶质瘤细胞,待肿瘤直径达2cm,随机分成7组,每组8只,其中一组为对照组,于肿瘤内注射光敏剂血啉甲醚(HMME,10mg/kg),对照组未注射光敏剂.注射后给予光动力治疗,光动力学疗法以功率为150mW/cm2的He-Ne激光照射15min,将照射后大鼠分别于照射后即刻,15min,30min,60min,8h,24h取出肿瘤样本,液氮冷冻储存,真空冷冻抽干,研磨后用电子自旋磁共振机测量单态氧含量.结果:在所选定的剂量下,照射后单态氧浓度逐渐增加,至60min时达到高峰,照射后8h以后单态氧含量显著减低.结论:光动力治疗作用对肿瘤的抑制途径之一是光动力治疗后单态氧的产生短时间内迅速升高,对肿瘤细胞起DNA光敏作用,作用于细胞膜,线粒体以及核酸,达到杀死肿瘤细胞目的.
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18F-硝基咪唑PET/CT评价大鼠C6胶质瘤放疗增敏研究
目的：了解大鼠C6胶质瘤放疗前后18F-硝基咪唑(18F-FMISO)PET/CT显像的特点，探讨其评估熊果酸(UA)放射增敏疗效的价值。方法：建立32只荷C6胶质瘤大鼠模型，按随机数字表法分成4组：A(对照)组、B(UA)组、C(放疗)组及D(UA+放疗)组，分别于放疗前及放疗后24 h进行两次显像，采集大鼠肿瘤大标准摄取值(SUVmax-T)、同一断层对侧脊柱旁肌肉大标准摄取值(SUVmax-M)，计算两者的比值(T/M)。第2次显像结束后，免疫组化法测定肿瘤细胞乏氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达情况。结果：A、B两组第2次显像T/M值均较首次显像显著升高(t=5.74、4.74，P均<0.01)，C、D两组放疗后显像T/M值均较放疗前显像显著降低(t=2.84、6.05，P均<0.05)。放疗后第2次显像D组T/M值较C组显著降低，差异有统计学意义(P<0.01)。HIF-1α在D组中的表达较其余3组低(P均<0.01)。T/M值与HIF-1α表达呈明显正相关(r=0.78， P<0.01)。结论：UA具有对大鼠C6胶质瘤的放射增敏作用；18F-FMISO PET/CT能反映放疗前后肿瘤内部乏氧状态的改变，并准确评估UA对大鼠C6胶质瘤的放射增敏疗效。
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近皮层大鼠C6胶质瘤模型的建立研究
目的:建立一种便于开骨窗及肿瘤切除的近皮层大鼠C6胶质瘤模型.方法:立体定向下将C6细胞接种于大鼠脑皮层、白质交界处.建立近皮层荷瘤鼠模型.取7只模型鼠,分别于接种的第7、11、15天行头颅MRI检查,了解肿瘤的生长情况.行病理HE切片观察、流式细胞DNA细胞周期分析及GFAP免疫组织化学检测,了解肿瘤的生长特性和病理特征.5只荷瘤鼠及2只正常大鼠经尾静脉注入5-ALA后,取肿瘤组织及脑组织制成细胞悬液行荧光分光光度分析,探讨血脑屏障的破坏情况.取29只荷瘤大鼠,分成开骨窗组、开骨窗加取瘤组及对照组,观察生存期.结果:用本法建立近皮层C6胶质瘤模型54只,52只成功建立模型,成功率96.3%.病理、流式细胞、免疫组织化学显示大鼠C6胶质瘤生长特性和病理特征与人脑胶质瘤相似;对照组、开骨窗组及开骨窗加肿瘤切除组生存期分别为(32.000 0±8.981 5)、(41.888 9±6.461 8)、(59.400 0±14.416 0)d.行组间单向方差分析,生存期比较有统计学差异(P＜0.05).结论:该方法建立的胶质瘤模型稳定,生长特性和病理特征与人脑胶质瘤相似,便于开骨窗及切除肿瘤,是进行胶质瘤研究的较好模型.
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纳米材料介孔硅承载阿霉素在C6胶质瘤中的实验研究
目的:探讨纳米材料介孔硅(MSN)承载阿霉素(DOX)在C6胶质瘤细胞和荷瘤大鼠的体内分布情况及其凋亡诱导作用.方法:将MSN按浓度梯度分别与C6胶质瘤细胞孵育,通过CCK-8细胞活力检测MSN细胞毒性;DOX与MSN/DOX按时间梯度分别与C6胶质瘤细胞共培养,荧光显微镜观察药物吞噬;构建荷瘤大鼠模型,尾静脉分别注射DOX与MSN/DOX后,通过免疫荧光及荧光分光光度计检测大鼠体内主要脏器的药物分布情况,WesternBlot检测胶质瘤细胞凋亡.结果:MSN按浓度梯度1μg/mL、10μg/mL、50μg/mL加入C6胶质瘤细胞后,C6胶质瘤细胞增殖能力随介孔硅浓度递增差异无统计学意义(P＞0.05);50μg/mL浓度梯度组1h、6h、12h、24h酶标仪检测结果分析显示,C6胶质瘤细胞增殖能力差异无统计学意义(P＞0.05).荧光显微镜观察显示MSN/DOX组随时间增加在C6胶质瘤细胞中的DOX药物含量高于DOX组;MSN/DOX组在荷瘤大鼠胶质瘤组织中的DOX药物含量高于DOX组,且凋亡相关蛋白表达明显增加.结论:MSN细胞毒性低,可承载DOX更多地进入C6胶质瘤细胞,并促进C6胶质瘤细胞凋亡.
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中药抑制C6胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的概况
脑胶质瘤目前尚缺乏有效化疗药物,患者预后较差,术后平均生存时间＜2年.因此,除了研究新的靶向分子疗法外,尚需开发更加安全有效的药物或开展中西医结合综合治疗,对于延长胶质瘤患者生存期很有意义.本文就近年中药抑制C6胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的研究进展综述如下.
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18F-FDG PET-CT显像评估大鼠C6胶质瘤放疗早期疗效实验研究
目的 了解大鼠C6胶质瘤放疗前后18F-脱氧葡萄糖正电子发射体层显像-X线计算机断层成像(18 F-FDG PET-CT)显像特点,探讨18F-FDG PET-CT评估大鼠C6胶质瘤早期放疗疗效价值.方法 建立荷C6胶质瘤SD大鼠模型,按随机数字表法分成对照组及放疗组,两组分别于放疗前及放疗后24 h、7d行18F-FDG PET-CT显像,采集不同时期大鼠肿瘤大标准摄取值(SUVmax-T)、对侧脊柱旁肌肉大标准摄取值(SUVmax-M),计算两者比值(T/M)并观察肿瘤体积变化.放疗结束,取两组肿瘤,常规HE染色,免疫组织化学法测定肿瘤细胞增殖指数Ki-67及微血管密度(MVD)表达情况.结果 ①放疗24 h T/M值较放疗前降低(t=5.991,P＜0.01).对照组24 h T/M值较首次显像增高(t=5.196,P＜0.01).②放疗7dT/M值较放疗后24 h(t =3.082,P＜0.05)、放疗前(t=4.822,P＜0.01)显著降低(F=5.902,P＜0.01).对照组7dT/M值较24 h明显增高(t=3.621,P＜0.05).③HE染色示放疗组较对照组坏死明显,放疗组Ki-67与MVD表达水平较对照组明显减低(t=7.201、2.986,P＜0.01).④T/M值与Ki-67表达呈明显正相关(r=0.824,r2=0.679,P＜0.05);T/M值与MVD表达呈正相关(r=0.779,r2=0.606,P＜0.05).结论 18F-FDG PET-CT可评估大鼠C6胶质瘤放疗早期疗效,并可反映胶质瘤的增殖活性和血管生成情况.
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Mn3[Co(CN)6]2@SiO2对鼠C6脑胶质瘤模型3T MR成像及生长规律的研究
目的 利用Mn3[Co(CN)6]2@SiO2对大鼠C6脑胶质瘤模型进行3T MR成像,研究肿瘤的生长规律.方法 收集对数生长期鼠C6胶质瘤细胞,建立鼠C6脑胶质瘤模型,于细胞接种后第7 d行MR扫描,然后鼠尾静脉注射0.5 mL Mn3[Co(CN)6]2@SiO2,于注射后5 min、24 h再行MR扫描,扫描结束后取出肿瘤组织行HE染色.随机抽取脑内成功接种C6胶质瘤细胞的荷瘤鼠10只,接种后第7、9、11、13、15、17、19天行MR扫描,测量肿瘤体积,绘制出肿瘤生长曲线.结果 成功建立了鼠C6脑胶质瘤模型,并且鼠尾静脉注射Mn3[Co(CN)6]2@SiO2后5 min、24 h肿瘤均强化,24 h肿瘤强化较前明显;MRI检测出胶质瘤大小与时间呈正相关关系(rs=0.9944,P=0.000).结论 应用Mn3[Co(CN)6]2@SiO2对鼠C6脑胶质瘤活体示踪MR成像,可以反映肿瘤的生物学特性,适用于肿瘤生长规律的观测.
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2-甲氧基雌二醇对大鼠神经元及C6胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响
目的:探讨2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME)对大鼠神经元及C6 胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法:将神经元及C6胶质瘤细胞分为对照组和实验组,实验组按 2-ME浓度不同分为1、5、10、15 μmol/L 4个亚组.2-ME作用于大鼠神经元及C6胶质瘤细胞不同时间后,采用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,并在光镜及电镜下观察其形态学变化.结果:C6胶质瘤细胞经2-ME作用后细胞活性受到抑制,呈现时间变量依赖性,各亚组与对照组差异具有统计学意义(P＜0.05).2-ME可诱导C6胶质瘤细胞凋亡, 各亚组与对照组差异具有统计学意义(P＜0.05);可使C6胶质瘤细胞G1及S期细胞减少 ,G2期细胞增多,一定范围内呈现剂量依赖性,各亚组与对照组差异具有统计学意义(P＜0.05) .神经元经药物作后,各亚组与对照组细胞活性差异无统计学意义.结论:2-M E可抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导C6胶质瘤细胞凋亡,而对正常神经元无影响.
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鲜壁虎提取物抑制C6胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的研究
目的研究鲜壁虎提取液对C6胶质瘤细胞的致凋亡作用及其方式.方法用不同浓度的鲜壁虎液处理处理C6胶质瘤细胞,用MTT法观察增殖抑制,用透射电镜观察用药后细胞形态的变化,用琼脂糖凝胶电泳观察用药后细胞DNA断裂情况,用流式细胞术定量观察C6细胞凋亡情况.结果经50mg/L鲜壁虎液处理的C6胶质瘤细胞,增殖能力降低;5mg/L,30mg/L,50mg/L鲜壁虎液均可以使C6细胞显示明显凋亡征象,有DNA断裂现象,并有浓度和时间依赖性.结论鲜壁虎液在体外能诱导C6胶质瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖,是一种具有抗肿瘤作用的天然药物.
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苦参碱联合替莫唑胺对大鼠脑胶质瘤MMP2、MMP9、VEGF表达的影响
目的 探讨苦参碱联合替莫唑胺对大鼠脑胶质瘤基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 建立大鼠C6脑胶质瘤模型,采用MRI扫描、HE染色、免疫组织化学确定模型建立成功.将C6脑胶质瘤模型大鼠随机分成4组,每组各20只:①对照组,腹腔注射生理盐水(100 ml/kg);②苦参碱组,腹腔注射苦参碱(20 mg/kg);③替莫唑胺组,腹腔注射替莫唑胺(25 mg/kg);④联合组,腹腔注射苦参碱(20 mg/kg)和替莫唑胺(25 mg/kg);每天给药1次,连续14 d.药物治疗后14 d处死大鼠,取胶质瘤组织,采用免疫印迹法和实时荧光定量PCR检测MMP-2、MMP-9和VEGF蛋白和mRNA表达情况.结果 大鼠注射胶质瘤C6细胞后7 d,MRI扫描可见脑胶质瘤的存在,HE染色发现组织表现出神经胶质瘤的侵袭性生长和细胞核分解,免疫组织化学结果显示也证明大鼠存在脑胶质瘤.与对照组相比,苦参碱组、替莫唑胺组与联合组MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白和mRNA表达水平均显著降低(P<0.05);联合组MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白和mRNA表达水平均显著低于苦参碱组和替莫唑胺组(P<0.05),而苦参碱组MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白和mRNA表达水平均显著低于替莫唑胺组(P<0.05).结论 苦参碱和替莫唑胺均可显著降低大鼠脑胶质瘤MMP-2、MMP-9、VEGF表达水平,而且,二者联用作用更强.
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光动力学治疗后C6胶质瘤血管内皮生长因子的表达
目的 探讨光动力学治疗(PDT)后C6胶质瘤血管内皮生长因子(VEGF)的表达.方法 在不同剂量(5 mg/kg,10 ms/kg,20 mg/kg,30 mg/kg)光敏剂--血卟啉衍生物(HPD)条件下,激光照射裸鼠皮下C6胶质瘤.在治疗后不同时间检测瘤组织中VEGF的表达.结果 在5 mg/kg剂量组VEGF的表达在PDT 24 h后达高峰,与对照组及治疗后3 d、7 d和10 d相应值比,差异显著(P<0.01).其它剂量组VEGF表达亦在治疗后24 h达高峰,但与治疗后其它时间比,相差无显著性(P>0.05).结论 PDT治疗后24 h VEGF表达达高峰,针对VEGF的抗血管治疗应在24 h内进行.
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转染白细胞介素18基因通过下调多药耐药基因表达增强顺铂对C6胶质瘤细胞毒作用
目的 探讨转染白细胞介素18(IL18)基因对大鼠C6胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的影响及可能的作用机制.方法 体外培养转染IL18基因的C6/IL18细胞株和未转染的C6细胞系,MTT法观察顺铂对两类肿瘤细胞的抑制率;流式细胞术检测顺铂作用后转染及未转染肿瘤细胞的凋亡率;反转录PCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测转染细胞内多药耐药基因(Mdr1)和拓扑异构酶Topo Ⅱα的mRNA水平和蛋白质水平的表达变化.结果 顺铂对转染IL18基因的胶质瘤细胞株的抑制率明显高于未转染细胞(P＜0.05),半数抑制浓度分别为29.66μg/ml和55.49μg/ml;流式细胞术显示顺铂作用后的转染细胞凋亡增多(P＜0.05);反转录PCR及Western blot显示转染细胞的Mdr1基因表达显著下降,TopoⅡα基因表达无明显变化.结论 转染IL18基因能够下调多药耐药基因Mdr1的表达,增强顺铂对大鼠C6胶质瘤细胞的毒作用.
