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COX-2基因多态性与服用阿司匹林治疗的大动脉粥样硬化型脑梗死患者临床预后的相关性研究
目的 研究长时间服用阿司匹林治疗的大动脉粥样硬化型脑梗死(LAA)患者的COX-2基因的多态性的临床预后.方法 利用随机法选取2014～2016年确诊为LAA且长期服用阿司匹林的患者580例,并采用多重连接酶检测反应技术来对COX-2基因2个位点的基因型进行分析并记录其主要终点事件的例数,随访1～3年时间.结果 rs20417的小等位基因频率为5.0％,rs52577的小等位基因频率为18.9％.随访1～3年期间,43例(7.41％)LAA患者发生主要终点事件.对比rs20417位点GG型和CC+ CG型的主要终点事件的发生率差异无显著性(P＞0.05);对比rs5257位点AG+ GG型与AA型的主要终点事件的发生率差异无显著性(P＞0.05).男性患者预后较女性患者更好,rs20417和rs5275G等位基因的携带者与LAA的预后无相关(P＞0.05).结论 长期服用阿司匹林的LAA患者的COX-2基因中的rs20417和rs5275G位点与其预后可能无关.
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细胞骨架完整性在流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达中的作用
目的 探讨细胞骨架完整性在流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达中的作用.方法 原代培养BALB/c小鼠颅骨成骨细胞,采用细胞松弛素D(CD)破坏细胞骨架完整性;以12 dyne/cm2的流体剪切力对成骨细胞加载1.5 h;分别应用实时荧光定量巢式PCR和免疫荧光的方法 检测COX-2基因mRNA和蛋白的表达水平,并对结果 进行双因素方差分析.结果 采用CD破坏细胞骨架完整性,可以对流体剪切力诱导成骨细胞COX-2 mRNA和蛋白的表达起拮抗作用(P ＜ 0.05);在无流体剪切力加载条件下,CD处理对COX-2 mRNA和蛋白的表达水平无显著影响(P ＞ 0.05);流体剪切力加载1.5 h能使成骨细胞COX-2 mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P ＜ 0.05);CD处理可显著降低流体剪切力诱导成骨细胞COX-2 mRNA和蛋白的表达水平(P ＜ 0.05).结论 保持细胞骨架完整性是流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达过程中所必需的.
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RNAi沉默LIMK2基因对成骨细胞COX-2基因力学敏感性的影响
目的：采用RNAi技术沉默LIMK2基因来抑制细胞骨架改建，观察其对流体剪切力下成骨细胞COX-2基因力学敏感性的影响。方法；RNAi技术沉默原代小鼠成骨细胞LIMK2基因来抑制细胞骨架改建，分别用实时荧光定量巢式PCR和免疫荧光的方法检测流体剪切力下COX-2基因mRNA和蛋白的表达水平。结果：RNAi抑制细胞骨架改建可以促进流体剪切力诱导的成骨细胞COX-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论：采用RNAi技术抑制细胞骨架改建，可以提高流体剪切力作用下成骨细胞COX-2基因的力学敏感性。
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COX-2基因对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞生长及Notch信号通路的影响及其作用机制
目的 探讨抑制环氧合酶-2(COX-2)基因表达对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞系MRC-5活力、胶原合成和转化及Notch信号通路的影响.方法 将MRC-5细胞分为对照组、TGF-β1组、NC组和COX-2-siRNA组,各组细胞处理48 h,Western blotting检测COX-2、胶原合成相关的COL-Ⅰ和COL-Ⅲ、EMT标志物α-SMA及Notch信号通路受体Notch1及配体Jagged1的蛋白表达;CCK8法检测各组细胞活力.结果 TGF-β1组COX-2的表达显著高于对照组,COX-2-siRNA组COX-2的表达显著低于TGF-β1组(P<0.05),NC组COX-2的表达与TGF-β1组差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,TGF-β1组细胞活力及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、Notch1和Jagged1的蛋白表达均显著升高(P<0.05),与TGF-β1组比较,COX-2-siRNA组细胞活力及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、Notch1和Jagged1的蛋白表达均显著降低(P<0.05).结论 抑制COX-2基因表达中可能通过降低MRC-5细胞活力、抑制细胞胶原合成和转化,并下调Notch信号通路,从而对肺纤维化起保护作用.
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环氧化酶-2基因多态性与胃癌易感性的关联研究
目的:探讨环氧化酶-2基因(COX-2)的两个功能性单核苷酸多态(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)与胃癌易感性的关系.方法:采用病例-对照研究设计,研究对象为254例经组织学确诊的胃癌病例和304例按年龄、性别进行匹配的无肿瘤史的社区对照人群.采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)测定COX-2基因-1195G/A多态,错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PIRA-PCR)测定COX-2基因8473T/C多态的基因型,比较不同基因型与胃癌风险的关系,并探讨不同环境因素在其中所起的影响.结果:COX-2.1195GG、GA和AA三种基因型以及8473TT、TC和CC三种基因型在病例组和对照组间的频率分布无统计学意义.Logistic回归分析也未发现COX-2 SNP-1195G/A以及SNP8473T/C与胃癌的风险度关联有统计学意义(SNP-1195 GA+AA:校正OR=1.09,95%CI=0.70-1.67;SNP8473 TC+CC:校正OR=1.18,95%CI=0.83-1.69).结论:COX-2-1195G/A和8473T/C多态性可能与胃癌易感性无关,尚需进一步大样本量的研究予以证实.
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COX-2基因mRNA在非小细胞肺癌中的表达
目的 检测非小细胞肺癌COX-2基因 mRNA的表达水平并探讨其临床意义.方法 运用两步法RT-PCR技术检测83例非小细胞肺癌组织和24例支良性非癌肺组织中COX-2 基因mRNA的表达水平.结果 83例肺癌组织中检测出44例(53.01%)阳性,24例非癌肺组织中检测出2例(8.33%)阳性,其中在腺癌表达率67.31%显著高于鳞癌表达率35.48%,差异有统计学意义(P=0.005),淋巴结转移组中表达率(65.85%)显著高于无淋巴结转移组(42.86%)(P=0.036).低分化组中表达率(85.00%)显著高于高、中分化组表达率(55.56%)(P=0.018).结论 COX-2基因在肺癌组织与非癌肺组织中mRNA表达差异有统计学意义(P=0.000),COX-2 表达与肺癌病理类型密切相关,揭示了COX-2 可以作为判断病情和预后评价的指标.
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COX-2基因沉默联合奥沙利铂对胃癌细胞的杀伤作用研究
目的 探讨COX-2基因沉默联合奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)对胃癌细胞的杀伤作用,为胃癌治疗提供依据.方法 分别采用COX-2 siRNA、COX-2 siRNA+OXA、OXA处理MGC803胃癌细胞株,以未经处理的MGC胃癌细胞株作为对照组,应用MTT法测定各组细胞抑制率,应用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测各组p链蛋白(β-catenin)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)等基因的表达情况,并通过流式细胞术检测各组MGC803细胞凋亡情况.结果 COX-2 siRNA组和COX-2 siRNA+ OXA组MGC803胃癌细胞抑制率和MGC803胃癌细胞凋亡率均显著高于OXA组(P＜0.05),β-catenin与Bcl-2 mRNA水平和蛋白水平均显著低于OXA组(P＜0.05);COX-2siRNA+OXA组MGC803胃癌细胞抑制率和MGC803胃癌细胞凋亡率均显著高于COX-2 siRNA组(P＜0.05),β-catenin 与Bcl-2 mRNA水平和蛋白水平显著低于COX-2 siRNA组(P＜0.05).结论 COX-2基因沉默能够降低β-catenin和Bcl-2表达,提高胃癌细胞抑制率和凋亡率,有效提高OXA药物敏感性.
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大肠癌和大肠腺瘤COX-2和Bcl-2的基因表达及其意义
目的探讨COX-2及Bcl-2基因在大肠癌和大肠腺瘤组织中的表达及其意义.方法应用免疫组化ABC法检测28例大肠癌、28例大肠腺瘤和10例正常黏膜中COX-2及Bcl-2表达,应用TUNEL法检测细胞凋亡.结果在大肠癌、大肠腺瘤及正常黏膜中COX-2的阳性表达分别为82.1%、85.7%和0.0%.Bcl-2的阳性表达分别为75.0%、78.6%和20.0%.大肠癌与腺瘤的COX-2及Bcl-2表达均无显著性差异(P＞0.05),但均显著高于正常黏膜(P＜0.01).大肠癌中凋亡指数明显高于大肠腺瘤(x2=8.80,P＜0.05),COX-2和Bcl-2的表达均与大肠腺瘤及大肠癌的细胞凋亡指数呈显著负相关(腺瘤P＜0.01;癌P＜0.05),两者均与临床病理特征无相关性(P＞0.05),大肠癌高、中、低分化各组间及不同Dukles分期(A、B期和C、D期)各组间凋亡指数无显著性差异(P＞0.05).结论 COX-2和Bcl-2在大肠腺瘤及大肠癌中表达增强,从而抑制了细胞凋亡,在大肠腺瘤恶变及大肠癌的发生和发展过程中起到重要作用.
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Nono蛋白的原核表达、纯化和多克隆抗体的制备
目的 表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的Nono(non-POU-domain-containing,octamer-binding protein)融合蛋白并制备抗Nono多克隆抗体.方法 构建pET-28a(+)-Nono重组表达质粒,转入Rosetta(DE3)大肠埃希菌,以IPTG诱导6×His-Nono融合蛋白表达,经镍离子金属螯合树脂纯化后,用纯化出的蛋白免疫BALB/C小鼠制备多克隆抗体,并用ELISA检测多克隆抗体的效价,Western印迹检测多克隆抗体的特异性.结果 在大肠埃希菌中诱导出高水平表达的His-Nono融合蛋白,经亲和树脂纯化后免疫小鼠,获得了高特异性的抗Nono抗血清.结论 成功构建pET-28a(+)-Nono原核表达质粒,表达并纯化出高纯度的目标蛋白,制备出高滴度、高特异性的多克隆抗体.
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细胞骨架在流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因和蛋白表达中的作用
目的:探讨细胞骨架在流体剪切力(FSS)诱导成骨细胞COX-2基因和蛋白表达中的作用.方法:将第3代小鼠原代成骨细胞分为4组:对照组、细胞松弛素D(CD)组、FSS组、FSS+CD组.FSS组和FSS+CD组分别施加12 dyne/cm2的FSS 60 min,FSS组只加FSS,而FSS+CD组在加入CD预处理60 min后施加FSS 60 min;对照组不做任何处理;CD组仅加入CD.应用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和激光共聚焦显微镜检测COX-2 mRNA和蛋白的表达以及肌动蛋白细胞骨架的变化,并对结果进行双因素方差分析.结果:FSS组与其他3组相比,COX-2的mRNA和蛋白表达显著增加(P＜0.05);CD组与对照组及FSS+CD组相比,COX-2的mRNA和蛋白的表达水平无显著差异(P＞0.05);FSS+CD组与FSS组相比,COX-2的mRNA和蛋白的表达水平显著降低(P＜0.05).结论:应用FSS能使成骨细胞骨架发生重排、增多、增密且与流体方向保持一致.细胞骨架微丝的完整性与COX-2基因和蛋白表达密切相关,而CD对COX-2基因和蛋白的表达基本没有影响.
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COX-2基因在食管癌中的表达及临床意义
目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)基因在食管癌中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测食管癌组织及癌周正常食管组织中的COX-2基因表达水平,分析其在食管癌中的表达及临床意义.结果 ① 食管癌组织中COX-2基因呈弱阳性、阳性及强阳性表达例数均分别显著高于癌旁组织中的表达例数(P<0.001或P<0.01);②低分化组中COX-2基因强阳性表达例数显著高于中分化组和高分化组(P<0.01或P<0.05),低分化组中COX-2基因阴性表达显著低于高分化组(P<0.05).结论 COX-2 基因的表达与食管癌的发生、发展及分化程度密切相关.
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大肠癌COX-2、bcl-2和caspase-3基因的表达意义
目的探讨COX-2、bd-2和caspase-3基因在大肠癌组织中的表达及其意义.方法应用免疫组化ABC法检测28例大肠癌和10例正常黏膜中COX-2、bcl-2和caspase-3表达,应用TUNEL法检测细胞凋亡.结果在大肠癌及正常粘膜中COX-2的阳性表达分别为82.1%和0.0%,bcl-2的阳性表达分别为75.0%和20.0%,两者在大肠癌组织中的表达率均显著高于正常黏膜(P＜0.01).caspase-3的阳性表达分别为46.4%和90.0%,在大肠癌组织中的表达率显著低于正常黏膜(P＜0.01).COX-2、bcl-2和caspase-3均与大肠癌的临床病理特征无相关性(P＞0.05).COX-2及bcl-2表达与凋亡指数显著负相关(分别为r=-0.563,P＜0.05;r=-0.578,P＜0.01).caspase-3与凋亡指数呈显著正相关(r=0.714,P＜0.01).大肠癌高、中、低分化各组间及不同Dukes分期(A、B期和C、D期)各相间凋亡指数无统计学意义(P＞0.05).结论在大肠癌中COX-2、bcl-2表达增强,细胞凋亡受抑制而caspase-3表达下降,其促凋亡作用减弱,它们参与了肿瘤发生发展的共同通道,在大肠癌的发生和发展过程中起到重要作用.
关键词： 大肠癌 COX-2基因 Bcl-2基因 caspase-3基因 细胞凋亡 -
环氧合酶-2与肝星状细胞增殖的关系
环氧合酶-2(COX-2)属诱导型酶,参与炎性反应、细胞增殖、细胞凋亡等多种病过程.日本Cheng等[1]报道COX-2在肝纤维化发展病程中表达逐渐升高,认为COX-2与肝纤维化有关.肝星状细胞(HSC)在肝炎和肝纤维化的病理中起关键的作用,HSC中有COX-2基因的表达,而且与HSC的增殖有关,COX-2是否是肝纤维化预防或治疗的一个靶点被提出来.现就COX-2与肝星状细胞的增殖关系综述如下.
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Peutz-Jeghers综合征错构瘤性息肉APC,NGAL,COX-2基因表达及意义
目的:研究APC,NGAL,COX-2基因在Peutz-Jeghers综合征(PJS)错构瘤性息肉中表达及在PJS息肉发生、发展中的意义. 方法:24例PJS患者28个PJS错构瘤性息肉,23例大肠癌和20例正常结肠粘膜组织石蜡包埋切片,经免疫组织化学SP法染色,显微镜下观察阳性蛋白表达情况. 结果:APC在正常结肠粘膜表达全部阳性,PJS息肉组表达阳性率89.3%(25/28),大肠癌组为43.5%(10/23),3组间率的差异有统计学意义(P＜0.05). NGAL在正常结肠粘膜组表达阳性率10%(2/20),PJS息肉组表达阳性率71.4%(20/28),大肠癌组阳性率为73.9%(17/23),三组间率的差异有统计学意义(P＜0.05). COX-2在正常结肠粘膜组全部阴性,PJS息肉组表达阳性率67.9%(19/28),大肠癌组为82.6%(19/23),3组间率的差异有统计学意义(P＜0.05). 结论:APC失表达可能未在PJS息肉发生、发展中起主要作用. NGAL,COX-2可能与PJS息肉发生、发展有关.
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红景天对大鼠胃粘膜Cox-2表达的影响及其机理探讨
目的: 研究红景天加维甲酸对大鼠胃粘膜癌变DNA 含量、Cox-2 mRNA 表达及细胞凋亡的影响.方法: 采用MNNG、酒精及10 %NaCl 混合液建立大鼠胃癌模型,设立正常空白组、模型组、维甲酸治疗组和红景天加维甲酸治疗组,分别采用Feulgen 染色、免疫组化、Western blotting 及TUNEL 法检测大鼠胃粘膜DNA 含量、Cox-2基因表达及细胞凋亡.结果: 红景天加维甲酸治疗组癌变发生率低于模型组和维甲酸治疗组.Cox-2基因表达与细胞凋亡受抑制和胃粘膜癌变的发生,呈递增趋势,并且两者具有一定的相关性.结论: 红景天加维甲酸抗癌,下调Cox-2基因表达,促进细胞凋亡是其重要机制之一 .
