首页 > 文献资料
-
TLR5在感染性疾病中的作用
Toll样受体5(TLR5)是一种模式识别受体,能够识别细菌的鞭毛蛋白,激活固有免疫,诱导下游一系列细胞因子的释放,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁.研究表明TLR5在一些感染性疾病的发生、发展中起到重要作用.本文总结并讨论了TLR5与感染性疾病发生发展的关系以及可能的致病机制.
-
TLR4、5、9的表达与宫颈病变的关系
目的 探讨TLR4、5、9在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中表达及相关性.方法 采用免疫组织化学方法检测正常、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌患者的宫颈组织病理石蜡切片中TLR4、5、9表达情况.结果 TLR4、5、9在宫颈细胞的细胞膜和胞浆中均有表达,随着宫颈病变程度增加,TLR4、5、9的表达逐渐增强,正常宫颈＜宫颈低度病变＜宫颈高度病变＜宫颈癌(P＜0.05).结论 TLR4、5、9与宫颈癌的发生发展相关,宫颈TLR4、5、9的表达随宫颈病变级别升高而增加.
-
TLR4、5、9的表达与宫颈病变的关系
目的 探讨TLR4、5、9在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中表达及相关性.方法 采用免疫组织化学方法检测正常、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌患者的宫颈组织病理石蜡切片中TLR4、5、9表达情况.结果 TLR4、5、9在宫颈细胞的细胞膜和胞浆中均有表达,随着宫颈病变程度增加,TLR4、5、9的表达逐渐增强,正常宫颈＜宫颈低度病变＜宫颈高度病变＜宫颈癌(P＜0.05).结论 TLR4、5、9与宫颈癌的发生发展相关,宫颈TLR4、5、9的表达随宫颈病变级别升高而增加.
-
CBLB502对放射性肺炎和肺纤维化的防护作用研究
目的：研究CBLB502对放射性肺炎和放射性肺纤维化的防护作用，从而证实CBLB502作为临床抗放射药物的可行性。方法 C57BL/6J小鼠20 Gy单次照射后24 h、1个月、3个月和5个月取肺组织用TUNEL方法对肺泡上皮细胞和血管内皮细胞的凋亡进行检测，HE染色观察纤维化病理变化，免疫组织化学方法检测特异性指标表达，以及受照部位皮毛和皮肤的病理变化。结果 CBLB502抑制了照射后小鼠肺泡上皮细胞和血管内皮细胞的凋亡，减缓了肺纤维化进程，同时减少层黏连蛋白表达，维持表面活性蛋白B表达量，受照皮肤的炎症反应也明显减轻。结论 CBLB502对照射后放射性肺炎和放射性肺纤维化的发生和进程有防护作用。
-
CBLB502蛋白原核表达及辐射防护作用验证
目的 原核表达并纯化TLR5受体的激动剂CBLB502蛋白,验证其辐射防护作用.方法 采用pET28b原核表达系统表达CBLB502蛋白,利用Ni-NTA亲和层析柱亲和层析纯化CBLB502蛋白,经报告基因检测方法结合动物实验评价纯化蛋白活性.结果 成功表达并纯化CBLBS02蛋白,纯度可达95%以上,能够激活NF-KB报告基因,可以提高9 Gy照射小鼠存活率,对照组小鼠全都死亡.CBLB502蛋白预防组全部存活.结论 成功表达并纯化CBLB502蛋白,并验证其对小鼠的辐射防护作用.
-
基于TLR5-NF-κB通路筛选四物汤中的活性成分
目的 基于TLR5-NF-κB通路建立报告基因系统筛选四物汤中的有效成分.方法 利用脂质体转染试剂Li-pofectin 2000将含有hTLR5基因和NF-κB Luc 报告基因的质粒转染人人胚肾细胞(HEK293细胞),加入药物刺激后再检测细胞荧光素酶表达水平,筛选出能够激活TLR5受体及其下游NF-κB通路的有效成分.结果 果糖、腺嘌呤能够显著激活此通路,且随果糖、腺嘌呤作用浓度的增加对细胞膜表面TLR5受体及其下游的NF-κB通路激活作用也随之增强,叶酸、东莨菪内酯、芍药苷、盐酸川芎嗪、β-谷甾醇、阿魏酸也能一定程度激活此通路.结论 通过TLR5受体介导NF-κB通路激活剂筛选模型,筛选出四物汤内果糖、腺嘌呤、芍药苷、盐酸川芎嗪、叶酸、东莨菪内酯、β-谷甾醇、阿魏酸8种单体在一定浓度范围内能够激活TLR5受体及其下游的NF-κB通路.
-
TLR5在变应性鼻炎患者鼻黏膜组织中的表达
目的：检测变应性鼻炎患者鼻黏膜组织中TLR5的表达。方法采用免疫组织化学SABC法检测30例变应性鼻炎患者（试验组）和25例非变应性鼻炎患者（对照组）鼻黏膜组织中TLR5的表达。结果 TLR5在试验组的阳性表达率（83.3%）明显高于对照组（8.0%），x2=30.965，P＜0.05。结论 TLR5在变应性鼻炎患者鼻黏膜组织中高表达。
-
不同乳腺癌细胞系中TLR5和NLRC4受体的表达和定位
目的：：探究TLR5和NLRC4受体在不同乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-435中的表达和定位情况,并探讨重组鞭毛素蛋白对乳腺癌细胞TLR5受体的激活情况。方法：利用Real-time PCR法检测MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-435细胞TLR5和NLRC4 mRNA表达水平,用流式细胞仪检测MDA-MB-231、MCF-7细胞TLR5受体的表达和定位。纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白FliC(同时激活TLR5和NLRC4两条通路)、FliC△90-97(不能激活TLR5通路)、FliC-L3A(不能激活NLRC4通路)、FliC△90-97：L3A(两条通路都不激活)。用1μg/ml重组鞭毛素蛋白刺激MCF-7细胞,12 h后, ELISA法检测IL-8的分泌。结果：MCF-7细胞TLR5 mRNA表达水平高,约是MDA-MB-435细胞的1700倍,MDA-MB-231细胞TLR5表达水平是MDA-MB-435的约200倍。 TLR5在MCF-7细胞浆和胞膜上均有表达,而MDA-MB-231细胞只在胞浆中表达。激活TLR5通路的FliC和FliC-L3A能够刺激MCF-7细胞分泌IL-8,而不激活TLR5通路的FliC△90-97和FliC△90-97：L3A则不能。结论：不同乳腺癌细胞系都表达 TLR5和 NLRC4,但是表达部位和表达水平不同。 MCF-7细胞 TLR5和NLRC4表达高于其他乳腺癌细胞系。乳腺癌细胞系表面的TLR5受体可以被鞭毛素蛋白激活,为进一步探讨TLR5通路的激活在乳腺癌细胞增殖中的作用提供实验基础。
-
激活TLR5和NLRC4通路对小鼠先天免疫细胞的影响
目的：探讨用重组鞭毛素蛋白同时或者分别激活C57BL/6小鼠模型TLR5和NLRC4通路对小鼠先天免疫细胞的影响。方法：首先，表达和纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白FliC（同时激活TLR5和NLRC4两条通路)； FliCΔ90-97（不能激活TLR5通路)；FliC-L3A（不能激活NLRC4通路)；FliCΔ90-97：L3A（两条通路都不激活)。将小鼠分为5组，分别为：PBS组、FliC组、FliC-L3A组、FliCΔ90-97和FliCΔ90-97：L3A组。分别用PBS和10μg重组鞭毛素蛋白腹腔注射C57BL/6小鼠，每组3只。12 h后收集腹腔灌洗液，流式抗体染色检测腹腔灌洗液中的中性粒细胞和NK细胞的比例。同时，取小鼠脾脏制成脾细胞悬液，流式抗体染色检测DC表面共刺激分子CD80和CD86的表达情况及脾细胞中调节性T细胞（ Treg)的比例。结果：激活TLR5（FliC组和FliC-L3A组)和NLRC4通路（FliCΔ90-97组)小鼠的腹腔灌洗液中中性粒细胞和NK细胞的比例都显著高于PBS组和FliCΔ90-97：L3A组（P<0．01)。激活TLR5通路的FliC组和FliC-L3A组的DC表面CD80和CD86表达水平显著高于 PBS 组、FliCΔ90-97和 FliCΔ90-97：L3A 组（P<0．01)。 FliC-L3A 组调节性 T 细胞的比例高于其他组（P<0．05)。结论：激活TLR5和NLRC4通路可以趋化中性粒细胞、NK细胞，两条通路激活对中性粒、NK细胞有相同的趋化能力。鞭毛素蛋白只有激活TLR5通路才可以上调DCs表面共刺激分子CD80和CD86，促进DCs的成熟。
-
云芝糖肽对人PBMC中TLR5信号通路调控机制的研究
目的:研究云芝糖肽(PSP)对人外周血单个核细胞(PBMC)中TLR5信号通路的调控作用,探索PSP对Toll样通路的免疫调节机制.方法:体外分离、培养人PBMC,分为对照组和PSP处理组,采用实时荧光定量PCR (Q-PCR)技术对PSP处理人PBMC前后,PBMC中的TLR5信号通路中相关基因的表达差异情况进行定量分析.结果:PSP处理的实验组与对照组相比较,TLR5信号通路中的TLR5、IRAK4、TRAF6、IRF5和NF-κB基因的表达水平均显著增高(P＜0.05),但AP-1基因的表达降低(P＜0.05).结论:PSP对PBMC中TLR通路的调控可能主要通过NF-κB和IRF5调控终端效应因子来发挥免疫调节作用,这些为进一步探讨PSP的免疫调节作用机理提供了实验依据.
-
激活TLR5和NLRC4通路的重组鞭毛素蛋白对不同乳腺癌细胞系增殖的抑制作用
目的:探究激活TLR5和NLRC4通路的重组鞭毛素蛋白对不同乳腺癌细胞系增殖的抑制作用.方法:表达和纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白FliC(同时激活TLR5和NLRC4两条通路)、FliC△90-97(不能激活TLR5通路)、FliC-L3A(不能激活NLRC4通路)和Flic△90-97:L3A(两条通路都不激活).用不同浓度的重组鞭毛素蛋白刺激MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞,72 h后,利用CCK8法检测其对肿瘤细胞增殖的影响,并计算抑制率.软琼脂形成实验:每孔细胞数为1 000个MCF-7细胞铺于6孔板中,重组鞭毛素蛋白浓度为1μg/ml,培养14 d后,结晶紫染色,显微镜下计数克隆数,计算克隆形成率.结果:四种鞭毛素蛋白在0.1μg/ml的浓度刺激下,对MCF-7细胞的抑制率达到30％,FliC△90-97对MCF-7的抑制作用是剂量依赖的.在lμg/ml时单独激活TLR5的FliC-L3A鞭毛素蛋白的抑制率高于全长的FliC和单独激活NLRC4的FliC△90-97.FliC△90-97:L3A也对MCF-7细胞有抑制作用.四种鞭毛素蛋白对MDA-MB-231细胞在加转染试剂之后才表现出抑制效应.结论:鞭毛素蛋白可以抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖,其机制可能是由于分别激活胞膜和胞内的除TLR5和NLRC4以外的其他通路.
-
TLR5在华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠肝脏中表达的初步分析
目的 分析小鼠华支睾吸虫感染后小鼠肝脏中Toll样受体5(TLR5)的表达情况.方法 随机选取C3H/HeN雌性小鼠,经口感染35个华支睾吸虫囊蚴建立感染模型.分别在感染0(对照组)、1、7、28、56、84天处死小鼠,取肝脏组织行如下处理:①苏木精-伊红(H-E)染色观察小鼠肝脏病变;②采用免疫组织化学染色观察小鼠肝脏组织TLR5表达情况;③采用逆转录聚合酶链反应(RT-PC R)检测肝脏中TLR5的表达水平.结果 ①肝脏病理结果显示,与对照组小鼠相比,感染第1、7天小鼠肝脏汇管区出现炎症细胞浸润,第28天可观察到肝细胞排列紊乱,出现纤维组织增生和胆管增生;②免疫组织化学染色显示,TLR5在感染华支睾吸虫第1天、7天、28天的小鼠肝内表达增高,其主要表达于汇管区肝细胞、肝胆管上皮细胞和纤维化区域的成纤维细胞;③RT-PCR结果显示,小鼠肝脏中TLR5 mRNA表达量在感染第1天、7天、28天明显高于对照组.结论 C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫可上调肝脏组织TLR5的表达,提示TLR5可能在宿主抵抗华支睾吸虫感染中起着一定的作用.
-
沙门菌鞭毛蛋白与其受体相互作用的研究
沙门菌鞭毛蛋白是其鞭毛丝状部组成元件,参与一系列生理及病理过程.鞭毛蛋白通过结合细胞表面TLR5和胞质NLRC4,激活下游信号通路从而激发固有免疫应答和获得性免疫应答.此外,鞭毛蛋白可促进针对外源抗原的获得性免疫应答,因此可作为佐剂用于疫苗研制,而鞭毛蛋白与TLR5和NLRC4的相互作用也被用于研究其佐剂效应机制.
-
TLR5在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义
目的：探讨Toll样受体5（Toll like receptor 5，TLR5）在非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer， NSCLC）组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法检测和比较109例NSCLC组织及60例癌旁正常肺组织中TLR5蛋白的表达，并分析NSCLC组织中TLR5的表达与患者年龄、性别、吸烟史、组织学类型、淋巴结转移以及分化程度的关系。结果 NSCLC组织中TLR5蛋白的阳性表达率为65.1％(71/109)，显著高于癌旁正常肺组织的16.7％(10/60)，差异有统计学意义(P<0.001)。NSCLC组织中TLR5蛋白阳性表达率与NSCLC患者的组织学分型及吸烟史有显著相关性(P<0.05)。结论 TLR5蛋白在NSCLC组织中的表达增加，可能在NSCLC的发生发展中起重要作用。
-
溃疡性结肠炎小鼠结肠中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达
目的 通过研究溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠结肠组织中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达随时间变化的关系,探讨Toll样受体家族在UC致病机制中的作用.方法 60只BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予处理,第2组予5％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液自由饮用7d造模,第3组予5％ DSS溶液自由饮用14 d造模.取各组小鼠的结肠标本,用RT-PCR和Western blotting的方法半定量检测TLR2、TLR3、TLR5、TLR9的表达.结果 ①正常小鼠结肠中无TLR2、TLR3、TLR5和TLR9表达；②造模7d小鼠结肠中无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9出现明显表达；③造模14d小鼠结肠中仍然无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9的表达则继续增加.结论 TLR2和TLR9可能参与了溃疡性结肠炎的致病机制,而TLR3和TLR5可能未参与UC的致病机制.
-
TLR5rs5744168基因多态性与抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎的相关性
目的：探讨基因 TLR5 R392X（C ＞ T）（rs5744168）多态性与抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎（ANCA 相关性小血管炎，AAV）的相关性。方法：利用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析法（PCR-RFLP）来鉴定120例AAV患者和212例正常人的TLR5 R392X基因型，并收集资料进行分析。结果：（1）两组TT型均缺失，AAV 组 CC、CT 型频率分别为82．50％、17．70％，对照组分别为88．68％、11．32％，C 和T 等位基因分布频率AAV组为91．25％、8．75％，对照组为94．34％、5．66％，两组基因型及等位基因分布频率比较差异无统计学意义（P ＜0．05）。（2）AAV组中两种基因型血沉、尿蛋白定量等水平比较差异有统计学意义（P ＜0．05），CC 型较高。（3）将单因素进行二元Logistic 回归分析，发现TLR5 R392X基因多态性对 AAV患病风险无关联，总胆固醇与AAV发病有关联。结论：TLR5 R392X基因可能与广西AAV 患者的遗传易感性不相关，可能与其血沉、尿蛋白定量等水平存在关联。
关键词： 抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎 TLR5 单核苷酸多肽性 基因 -
TLR2、TLR4、TLR5和TLR9在小鼠Hp感染模型中的表达
目的:研究BALB/c小鼠在幽门螺杆菌(Hp)感染前后和用抗生素治疗后胃黏膜组织中Toll样受体(TLR)2、TLR4、TLR5、TLR9、IL-1β的表达,探讨Toll样受体家族在Hp感染机制中的作用.方法:60只BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予处理(正常组),第2组予感染Hp(Hp感染组),第3组感染Hp后予抗生素治疗(抗生素治疗组).RT-PCR和Western blotting法半定量检测小鼠胃内TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、IL-1β的表达,Giemsa染色切片计数Hp定植数量,HE染色切片判断黏膜炎症水平.结果:(1)TLR5、TLR9在各组小鼠胃黏膜组织中均无表达.(2)TLR2在Hp感染组胃黏膜组织中表达(PCR:0.13 ± 0.025;Western:1.32 ± 0.27)高于抗生素治疗组(PCR:0.04 ± 0.011;Western:0.43 ± 0.08),正常组无表达.(3)TLR4在Hp感染组胃黏膜组织中表达(PCR:0.22 ± 0.051;Western:0.72 ± 0.17)高于抗生素治疗组(PCR:0.06 ± 0.009;Western:0.21 ± 0.04),正常组无表达.(4)IL-1β在Hp感染组胃黏膜组织中有表达(PCR:0.27 ± 0.038;Western:0.58 ± 0.14),抗生素治疗组和正常组无表达.结论:TLR2、TLR4可能参与了Hp的致病机制,TLR5、TLR9可能未参与Hp的致病机制.
-
TLR5在不同非小细胞肺癌细胞株的表达及其活化机制的初步探讨
背景与目的已有的研究表明：Toll样受体5（toll-likereceptor5,TLR5）在肿瘤起始和发展中发挥重要作用。我们前期研究发现，TLR5在非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer,NSCLC）组织中高表达，但其在NSCLC高表达后的信号通路活化情况的研究并不多见。本研究旨在探讨TLR5在不同NSCLC细胞株上的表达，及其在NSCLC细胞中活化的机制。方法用免疫荧光、RT-PCR和Westernblot方法检测TLR5在三种不同NSCLC细胞株中的表达。分别用0μg/mL、0.01μg/mL、0.1μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL的鞭毛蛋白刺激，用NF-κB荧光素酶报告基因质粒瞬时转染后，检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性。选择TLR5表达高的SPC-A-1细胞株为实验对象，选择0.1μg/mL的鞭毛蛋白，分别用0μg/mL、0.01μg/mL、0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的TLR5抗体抑制通路活化，检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性，验证TLR5活化通路。构建TLR5-shRNA，转染SPC-A-1细胞48h后，以0.1μg/mL浓度鞭毛蛋白分别刺激SPC-A-1细胞及转染的SPC-A-1细胞，在刺激0min、10min、30min、60min，用Westernblot方法比较TLR5信号通路因子p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK、IKBα、ERK1/2的变化。结果TLR5在肺腺癌细胞株SPC-A-1中呈高表达，且主要表达在细胞膜上。三种细胞株中SPC-A-1细胞NF-κB荧光素酶的活性高，呈浓度依赖性，0.1μg/mL鞭毛蛋白即可明显增强NF-κB荧光素酶的活性（P<0.05）；而SPC-A-1细胞内NF-κB荧光素酶的活性可被TLR5抗体抑制，与TLR5抗体浓度负相关（P<0.05）。与0min相比较，SPC-A-1细胞内p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK水平在鞭毛蛋白刺激10min即明显增高，30min达到高峰，60min开始下降（P<0.05），且与10min和60min组相比，p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK水平在30min增高（P<0.05）；而IKBα、ERK1/2的水平无明显变化（P>0.05）。以适合浓度鞭毛蛋白刺激转染的SPC-A-1细胞，p-IKBα、p-JNK蛋白均未检出，IKBα、ERK1/2蛋白的水平无明显变化（P>0.05）， p-ERK1/2蛋白水平随着时间延长明显增高（P<0.05）。结论外源性配体鞭毛蛋白可激活NSCLC细胞株TLR5蛋白，启动下游信号通路，可能与NSCLC的发生发展有关。
-
Rapamycin和cyclosporin A对同种排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响
目的:研究雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)和环孢素A(cyclosperin A,CsA)体内处理对同种移植小鼠急性排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响.方法:建立同种皮肤移植模型,术后给予RAPA或CsA,1次/d,连续14 d,同时设生理盐水对照组.每日观察移植物存活状况.术后选取1、7、10、14、21 d共5个时间点,提取受体小鼠脾细胞,RT-PCR检测TLR5及Foxp3 mRNA表达,探讨不同处理组基因表达与移植物生存的相关性.体外实验利用鞭毛蛋白(flagellin)联合RAPA和CsA处理正常小鼠T细胞6 h,RT-PCR检测TLR5表达.结果:RAPA和CsA可明显延长小鼠同种移植皮片存活期.RAPA可促进脾细胞TLR5 mRNA表达升高,停药后的第21天仍明显高于CsA组和对照组(P＜0.05);CsA组在第7、10天有显著升高,第21天降低(P＜0.05);3组中高表达的时间点为移植后第10天,此时正值排斥高峰期.RAPA可引起Foxp3 mRNA的表达升高(P＜0.05),停药后仍维持较高水平;CsA组仅在移植后第7、10天短暂升高,第14天低于对照组(P＜0.05).移植后1、7、10、21 d 3组的TLR5与Foxp3 mRNA变化趋势正相关.体外实验中,RAPA或CsA与flagellin联合使用,可促进TLR5的表达,以前者的作用更为明显.结论:RAPA和CsA在同种移植急性排斥高峰期可引起TLR5和Foxp3表达的协同升高,且RAPA的作用更加明显和持久,鞭毛蛋白体外可以增强这种作用效果.
-
我国地方品种姜曲海猪TLR5基因的克隆、表达及鉴定
目的:克隆我国地方品种姜曲海猪TLR5基因,构建该基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白并鉴定其免疫特性,为进一步研制TLR5单克隆抗体(mAb)提供免疫原.方法:从全血中提取姜曲海猪的基因组,设计特异性引物,利用PCR方法扩增得到TLR5基因片段,PCR产物克隆到原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达质粒pET-TLR5,将重组表达质粒转化E.coli BL21,0.5 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定蛋白活性.结果:成功扩增出猪TLR5基因片段,大小为2571 bp.酶切鉴定结果表明,猪的TLR5基因成功克隆入原核表达载体pET30a(+)中,重组质粒pET-TLR5在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE结果显示出相对分子质量(Mr)大小约95 200；Western blot结果表明,表达产物与兔抗小鼠TLR5 mAb具有良好的反应性.结论:成功克隆并表达具有较好免疫原性的猪TLR5分子,为其mAb的制备提供生物材料.
