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denosumab治疗后骨巨细胞瘤的临床、影像学及病理学特征分析
目的 探讨核因子 κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)抑制剂denosumab治疗前后骨巨细胞瘤的临床影像学特征、组织学形态、诊断及鉴别诊断要点.方法 回顾性分析2015年3月至2017年6月11例就诊于北京积水潭医院、术前经denosumab治疗的骨巨细胞瘤病例资料,分析治疗前后影像学及组织学形态改变.结果 女性5例,男性6例,年龄20～62岁,平均年龄35岁.骶骨6例,股骨2例,桡骨、胫骨及髌骨各1例.经denosumab治疗3～6个月后,肿瘤组织学上表现为巨细胞减少甚至消失;单一性的梭形细胞增生伴不同程度的纤维化或新骨形成,骨的形态可以是幼稚的骨样基质、编织状骨及较成熟的板层骨.影像学上显示显著的骨硬化,病变周边的硬化缘形成.3例发生于骶骨的患者分别于术后5、6、11个月复发,其余术后经随访1～14个月未见复发.结论 经denosumab治疗后,骨巨细胞瘤组织形态与原病理表现截然不同,应与一些良性及恶性的骨肿瘤及肿瘤样病变相鉴别.denosumab治疗时间与形态学表现及复发情况的关系仍需进一步观察.
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地诺单抗联合手术治疗骶骨骨巨细胞瘤效果分析
目的 评估骶骨骨巨细胞瘤(GCTB)患者在术前、术后接受地诺单抗治疗后疗效及骶神经功能的改善情况.方法 回顾性分析2014年4月至2016年7月北京大学人民医院骨与软组织肿瘤治疗中心收治的30例骶骨GCTB患者临床资料,根据地诺单抗的用药时机分为对照组(10例)、术后用药组(9例)和新辅助治疗组(11例).所有接受地诺单抗治疗的患者每4周接受120mg地诺单抗皮下注射,第8天和第15天增加2次负荷剂量.结果 对照组中3例(3/10)术后复发,术后用药组无复发(0/9),新辅助治疗组3例(3/11)术后复发.3组无事件生存率比较,差异无统计学意义(P=0.133).新辅助治疗组用药后依据实体瘤的疗效评价标准(RECIST 1.1)评估,客观反应率为63.6%(7/11).新辅助治疗组中5例患者术前应用地诺单抗后疼痛明显改善(骶神经功能评分下降≥2分),同时大小便困难、失禁及麻木感减轻,4例术前留置尿管的患者中2例使用地诺单抗后拔除尿管.结论 地诺单抗可缓解骶神经压迫造成的疼痛和大小便障碍,新辅助用药方式可部分减少术中出血,但手术清除肿瘤仍为治疗骶骨GCTB的基本手段.
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牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞NF-κB受体激活蛋白配体及护骨因子表达的影响
目的 研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)超声提取物在人牙周膜细胞NF-κB受体激活蛋白配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)和护骨因子表达中的作用,探讨Pg在牙周炎患者牙槽骨吸收中的作用.方法 用含有不同质量浓度(25、50 mg/L) Pg超声提取物的培养液培养人牙周膜细胞6h(分别为25、50 mg/L实验组),以未做处理的人牙周膜细胞作为空白对照组,运用实时定量聚合酶链反应检测细胞中RANKL及护骨因子mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中RANKL及护骨因子的蛋白表达,酶联免疫吸附测定法检测细胞培养液中护骨因子蛋白的表达,应用SPSS 13.0统计软件对各组结果进行单因素方差分析,检验水准为双侧α=0.05.结果 Pg超声提取物干预人牙周膜细胞后,25、50 mg/L实验组细胞中RANKL mRNA(分别为0.253±0.033、0.350±0.075)和蛋白的相对表达量(分别为0.782±0.008、1.281 ±0.072)均显著高于空白对照组(分别为0.126 ±0.035、0.240±0.019)(P ＜0.05)；50 mg/L实验组护骨因子mRNA的相对表达量(0.087±0.021)显著低于空白对照组(0.240 ±0.019)(P＜0.01),25、50 mg/L实验组护骨因子蛋白的相对表达量(分别为0.813±0.007、0.398±0.009)与空白对照组(1.131±0.005)相比均显著降低(P＜0.01),培养液中护骨因子蛋白的表达与空白对照组相比差异无统计学意义.结论 Pg超声提取物作用6h后能促进人牙周膜细胞RANKL的表达,抑制护骨因子的表达,从而影响骨代谢.
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核因子κB受体激活蛋白配体与护骨因子在非负荷期种植体周围骨改建中的表达
目的 动态观察种植体植入后非负荷期不同时间种植体周围核因子κB受体激活蛋白配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)与护骨因子的表达规律.方法 建立Beagle犬牙种植动物模型,分别观测种植体植入后第3、7、15、30、60和90天种植体周围的骨改建情况.取种植体周围组织进行实时荧光定量聚合酶链反应,对硬组织切片进行形态学观察及定量组织学分析.结果 骨改建的活跃期为种植体植入后的第7天,种植体周围软组织及骨组织中的两种因子水平均随植入时间增加,第7天达高峰(护骨因子/RANKL mRNA 2.15±0.01),而后均逐渐降低.结论 RANKL与护骨因子在种植体周围组织中均有表达,其变化规律与骨组织改建过程一致；非负荷期种植体周围骨改建的活跃期大约在种植体植入后第7天.
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类风湿关节炎患者外周血B10细胞高表达核因子κB受体活化因子配体
目的:检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血B10细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)的表达,并分析其与RA患者临床和实验室指标的关系,探讨B10细胞在RA发病中的作用及其免疫调节功能缺陷的潜在机制.方法:选取RA患者25例(近半年未使用糖皮质激素、免疫抑制剂及生物制剂)和20名健康对照者(healthy controls,HC),利用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测RANKL在健康对照组和RA患者外周血B10细胞及非B10细胞中的表达,分析表达RANKL的B10细胞比例与RA患者临床特征和实验室指标的相关性,体外刺激实验评价肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)对B10细胞表达RANKL的影响.数据分析采用独立样本t检验、Pearson和Spearman相关分析.结果:健康人外周血B10细胞能表达低水平RANKL,RA患者外周血表达RANKL的B10细胞比例较健康对照组显著升高(3.65％±1.59％ vs.2.25％±0.68％,P＜0.01).RA患者表达RANKL的B10细胞比例与关节压痛数、关节肿胀数及28-关节疾病活动度分值(disease activity score in 28 joints,DAS28)呈正相关(分别为r=0.479,P=0.035;r =0.519,P=0.008;r=0.526,P=0.019),与年龄、病程、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)及抗环瓜氨酸多肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,A CPA)无显著相关性.TNF-α能促进B10细胞高表达RANKL(P＜0.01).结论:RA患者外周血表达RANKL的B10细胞比例升高,与关节肿痛数及疾病活动度正相关,提示RA患者B10细胞免疫调节功能受损的同时可能参与了RA的发病及骨破坏.
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正畸保持期龈沟液骨保护素/核因子kappa B受体活化因子配体水平对牙槽骨改建状态的意义
目的:探讨正畸保持期牙周龈沟液中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子kappa B受体活化因子配体水平(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)的变化及相应牙周组织OPG和RANKL表达的变化,为预测保持期牙周骨组织状态是否稳定提供依据.方法:选择6周龄雄性Wista大鼠15只,按时间点(T1:基线,T2:加力14 d,T3:停止加力14 d)分为3组,每组5只.在每个时间点先采集龈沟液样本,应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测OPG和sRANKL( soluble receptor activator of nuclear factor kappa B ligand)浓度,然后处死大鼠,采用免疫组织化学检测牙周组织中OPG和RANKL表达.结果:龈沟液中sRANKL浓度在T2期明显上升(P＜0.05),T3期则显著下降(P＜0.05),与T1期几乎相当.龈沟液中OPG浓度在3个时间点的变化差异均无统计学意义(P＞0.05)；龈沟液中sRANKL/OPG的比值和牙周组织RANKL/OPG的比值变化近似,均在T2期明显增大(P＜0.05和P＜0.01),在rT3期显著减小(P＜0.05).结论:在正畸加力至保持期,龈沟液中sRANKL/OPG的比值可以在一定程度上反映牙周组织中骨改建的状态.
关键词： 正畸学 骨保护素 核因子kappa B受体活化因子 RANK配体 龈沟液 -
痛风性关节炎患者关节超声不同表现下骨破坏指标的比较
目的 观察痛风性关节炎患者关节超声不同表现与骨破坏指标(Dickkopf-1、RANKL)的相关性,从而进一步探讨肌肉骨骼超声对痛风性关节炎的诊断和监测的作用.方法 选择2016年7月至2017年6月就诊于北京大学人民医院风湿免疫科门诊的160例痛风性关节炎患者为研究对象,进行关节超声检查(双足第一跖趾关节、双踝关节及双膝关节).根据超声检查结果分为以下3组,A组为无聚集体组,B组为聚集体及“双轨征”组,C组为痛风石及骨侵蚀组.检测患者血清中Dickkopf-1、RANKL浓度,分析Dickkopf-1、RANKL及其他临床和实验室指标的关系.结果 (1)Dickkopf-1浓度在3组之间差异有统计学意义(P＜0.001).并且C组[(1 722.2±482.7)ng/L]高于B组[(1 309.3 ±496.4) ng/L](t=4.418,P＜0.001),B组高于A组[(807.9±373.8)ng/L](t=6.137,P＜0.001).(2)RANKL浓度在3组之间差异有统计学意义(P ＜0.001).并且C组[(0.78±0.47) ng/L]高于B组[(0.35±0.29) ng/L](t=5.456,P＜0.001),B组高于A组[(0.10±0.09)ng/L](t=6.923,P＜0.001).(3)病程越长,血清Dickkpof-1浓度越高(r=0.430,P＜0.001),血清RANKL浓度也越高(r=0.359,P＜0.001).结论 痛风性关节炎患者关节超声检查可以观察到聚集体、双轨征、痛风石及骨侵蚀等表现.并且病程越长,骨破坏的程度有可能越严重.骨骼肌肉超声检查可以成为痛风性关节炎患者关节受累程度的首选影像学检查方法.
关键词： 关节炎 痛风性 超声检查 胞间信号肽类和蛋白质类 RANK配体 -
碳酸饮料对乳恒牙更替期牙齿健康的影响
目的：研究碳酸饮料对乳恒牙更替期牙齿健康的影响作用及机制。方法40颗犬牙釉质样本分别采用15μL可口可乐（可口可乐组）、雪碧（雪碧组）、纯苏打水（苏打水组）和生理盐水（生理盐水组）浸泡，各10颗。测定处理后饮料中钙、磷溶出浓度；分离牙乳头干细胞，以添加可口可乐、雪碧、苏打水和生理盐水的条件培养基进行细胞培养，采用PCR法和Western blot法检测核因子-κB受体活化剂配体（RANKL）、骨保护素（OPG）和维生素D受体（VDR）的mRNA和蛋白表达水平。结果各组钙、磷溶出浓度（mmol/L）由高到低均依次为：雪碧组（3.679±0.114、0.089±0.008）、可口可乐组（2.217±0.109、0.036±0.005）、生理盐水组（0.021±0.004、0.009±0.001）和苏打水组（0.007±0.001、0.002±0.000）。各组RANKL的mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义。苏打水组和生理盐水组OPG的mRNA和蛋白表达水平均高于可口可乐组和雪碧组（均P<0.05），雪碧组与可口可乐组、生理盐水组与苏打水组间差异均无统计学意义。生理盐水组VDR的mRNA和蛋白表达水平低于可口可乐组和雪碧组，高于苏打水组（均P＜0.05）。结论碳酸饮料可能通过调控成骨相关基因表达及维生素D受体家族共同影响乳恒牙更替期的牙齿健康。
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1,25（OH）2D3在牙乳头干细胞成骨分化中的作用
目的：研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在牙乳头干细胞向成骨细胞分化过程中的作用。方法分离培养儿童牙乳头干细胞，培养基中添加1,25(OH)2D3，使其终浓度分别为1、10和100 nmol/L，另设对照组加入等体积生理盐水。采用噻唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线，流式细胞术检测细胞增殖周期变化，Western blot法检测维生素D受体（VDR）、核因子-κB受体活化剂配体（RANKL）及骨保护素（OPG）蛋白表达水平。采用siRNA技术沉默VDR表达后（siR-VDR组），检测其对RANKL和OPG蛋白表达的影响。结果对照组及1、10、100 nmol/L 1,25(OH)2D3组增殖指数（PIx）分别为49.78±2.03、50.14±1.55、48.81±1.91和48.56±2.15，不同浓度1,25(OH)2D3对牙乳头干细胞的增殖无明显作用（F=3.174，P＞0.05）。对照组牙乳头干细胞中可见一定水平VDR、RANKL和OPG的蛋白质表达；加入1,25(OH)2D3后，VDR、RANKL和OPG蛋白表达水平均有不同程度升高，其中以VDR上升趋势为显著；转染siR-VDR后，VDR、RANKL和OPG的蛋白质表达水平下降。结论1,25(OH)2D3通过调节VDR水平影响牙乳头干细胞向成骨细胞方向的分化过程。
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狄诺塞麦靶向干扰RANK配体通路治疗类风湿关节炎的研究进展
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种系统性自身免疫病,以关节损害和病理性骨量丢失为特征.近年来研究表明,核因子κB受体激活蛋白(receptor activator of nuclear factor κB,RANK)配体(RANK ligand,RANKL)-RANK通路在RA骨损害中起关键作用.人源化单克隆抗体狄诺塞麦(Denosumab,DMab)可特异性结合RANKL,阻断RANKL-RANK通路,起到骨保护作用.DMab作为一种新的治疗手段,对RA患者的局部骨侵蚀和全身性骨质疏松治疗具有明确的理论基础.此文对近5年国内外使用DMab治疗RA的研究进展做一综述.
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血清胰岛素样生长因子Ⅰ与健康妇女护骨素、RANKL以及骨量的关系
目的研究血清胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)和健康女性护骨素(OPG)、核因子κB受体活化子配体(RANKL)、以及骨量之间的关系.方法 504名健康女性参加本研究,采用双能X线骨密度仪测定腰椎和股骨颈骨密度,同时测定血清IGF-Ⅰ、OPG、RANKL水平.结果在健康妇女中,血清IGF-Ⅰ水平与年龄呈明显的负相关(r=-0.702,P＜0.01),血清IGF-Ⅰ与OPG(r=-0.24,P＜0.01)、OPG/RANKL比值(r=-0.15,P＜0.01)呈明显的负相关,而与RANKL呈正相关(r=0.12,P＜0.05).校正年龄因素的影响后,IGF-Ⅰ与健康妇女骨密度之间不存在相关性.在绝经后妇女中,骨质疏松组的IGF-Ⅰ水平低于正常组(P=0.056),但OPG、RANKL和OPG/RANKL比值两组间无明显差异.在IGF-Ⅰ五分位组比较中,高IGF-Ⅰ组的OPG明显低于低IGF-Ⅰ组,RANKL则无明显差异,多元回归结果显示停经和血清IGF-Ⅰ水平是影响健康女性骨量变化的主要因素.结论血清IGF-Ⅰ水平与健康妇女骨密度之间的关系受年龄的影响,IGF-Ⅰ作为偶联因子在骨重建中的作用(骨吸收)可能是由OPG-RANKL系统介导的.
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链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠骨转换变化及其分子机制的研究
目的 探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠骨转换变化及其分子机制.方法 单次尾静脉注射STZ制造糖尿病大鼠模型.成模后与正常对照组大鼠同步饲养8周,处死后测定两组大鼠血钙、磷、碱性磷酸酶、骨钙素、24 h尿钙水平和尿I型胶原氨基末端交联肽(NTx)/肌酐(Cr)比值,双能X线吸收法(DEXA)测定大鼠离体腰椎和股骨骨密度.骨形态计量学方法分析大鼠骨量和骨转换变化情况,并用实时荧光定量RT-PCR方法检测骨组织中标志骨吸收的NF-κB受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素mRNA比值和标志骨形成的骨钙素以及调控成骨的核结合因子1(Cbfa1)、osterix(OSX)mRNA表达水平.结果 与正常对照组相比,糖尿病大鼠血钙、磷、碱性磷酸酶水平无显著差异,骨钙素水平显著减低[(3.03±0.52)对(6.18±0.71)ng/ml,P<0.01],24 h尿钙水平显著增加[(16.84±0.71)对(4.98±0.58)mg/24 h,P<0.01],尿NTx/Cr比值显著下降[(5.67±0.86)对(5.23±0.98)nmol/g Cr,P<0.05].糖尿病大鼠腰椎骨密度显著减低[(0.107±0.011)对(0.149±0.009)g/cm~3,P<0.01],股骨骨密度亦显著减低[(0.099±0.013)对(0.139±0.013)g/cm~3,P<0.01].骨形态计量学分析提示糖尿病大鼠骨小梁骨量减少,骨小梁矿化表面减少,骨形成速率减低[(0.44±0.11)对(0.78±0.14)μm/d,P<0.01].实时荧光定量RT-PCR提示糖尿病大鼠骨组织中RANKL/骨保护素mRNA比值[(0.57±0.11)对(0.89±0.13),P<0.01]、骨钙素[(2.25×10~(-4)±1.19×10~(-4))对(3.43×10~(-4)±1.63×10~(-4)),P<0.01]、Cbfa1[(26.68×10~(-4)±6.53×10~(-4))对(37.21×10~(-4)±7.14×10~(-4)),P<0.01]、OSX[(1.93×10~(-4)±0.65×10~(-4))对(4.19×10~(-4)±0.71×10~(-4)),P<0.01]mRNA水平均较正常对照组显著减低.结论 糖尿病大鼠是一种低转换型骨量减少,其骨组织中调控破骨的RANKL/骨保护素mRNA水平和调控成骨的Cbfa1、OSX、骨钙素mRNA水平均下降.
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鲑鱼降钙素对磨损颗粒诱导后人巨噬细胞RANK/RANKL/OPG骨溶解通路的影响
目的 通过检测经磨损颗粒刺激诱导后的人巨噬细胞在鲑鱼降钙素干预下骨溶解信号通路中核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)的mRNA表达,探讨鲑鱼降钙素对人巨噬细胞骨溶解通路的影响.方法 从一例髋关节假体松动患者的髋臼侧假体周围界膜组织中提取聚乙烯磨损颗粒,MTT法测出人巨噬细胞对聚乙烯磨损颗粒(浓度为0.1 mg/ml)的佳反应细胞浓度并用于实验.用磨损颗粒刺激人的巨噬细胞,并用不同药物浓度的鲑鱼降钙素干预,将磨损颗粒及巨噬细胞随机分成五组,每组六份:A组为对照组;B组为颗粒组;C组为颗粒+鲑鱼降钙素(10-8mol/L)组;D组为颗粒+鲑鱼降钙素(10-10 mol/L)组;E组为颗粒+鲑鱼降钙素(10-12 mol/L)组,共同培养48 h后,qPCR方法检测巨噬细胞RANK、RANKL、OPG的mRNA表达.结果 (1)RANK表达:颗粒刺激后B组较A组表达升高,鲑鱼降钙素干预后,C、D组RANK表达量下降.(2)RANKL表达:颗粒刺激后B组表达较A组升高,药物干预后C、D、E组皆明显低于B组.(3)OPG表达:A组表达高,颗粒刺激后B组表达下降,药物干预后C、D、E组表达有所上升.(4)RANKL/OPG:B组的RANKL/OPG比率大,药物干预后,C、D、E组比率皆下降.结论 (1)磨损颗粒刺激诱导前后的人巨噬细胞有RANK、RANKL、OPG表达;(2)磨损颗粒有诱导巨噬细胞向破骨细胞转化的作用;(3)鲑鱼降钙素干预后,可影响骨溶解通路各因子(RANK/RANKL/OPG)mRNA表达,阻止向破骨细胞转化.
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白细胞介素-17对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL、OPG的影响
目的 研究白细胞介素17(IL-17)水平对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)表达的影响,探讨IL-17与正畸牙根吸收的相关性.方法 采用组织块培养法,在体外建立人牙周膜成纤维细胞系.以不同水平(0、5、10、20、40 ng/mL)的IL-17作用HPDLF 24 h.采用RT-PCR和ELISA法,分别检测RANKL和OPG的mRNA、蛋白的表达.结果 (1)在0 ng/mL组中,HPDLF表达RANKL、OPG.(2)0～20 ng/mL各组中,HPDLF中RANKL的mRNA、蛋白表达量与IL-17水平呈正相关性.(3)5～20 ng/mL各组中,OPG的mRNA、蛋白表达量与IL-17水平呈负相关性.(4)0～20 ng/mL组中,RANKL/OPG的mRNA、蛋白的比值与IL-17水平呈正相关性.结论 在无IL-17刺激时,HPDLF可表达RANKL、OPG.IL-17能够促进HPDLF表达RANKL,同时抑制HPDLF表达OPG,上调RANKL/OPG的比值.
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酒续断对骨质疏松型大鼠OPG/RANK/RANKL轴系统的调控研究
目的 比较生、酒续断灌胃给药对骨质疏松大鼠骨保护素(OPG)/细胞核因子-κB受体活化因子(RANK)/RANK配体(RANKL)轴的调控差异.方法 将30只购于上海杰思捷实验动物有限公司的SPF级SD大鼠通过去势法造成骨质疏松大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、雌二醇组、生续断组和酒续断组,每组5只,灌胃给药12周后,麻醉主动脉取血,采用全自动生化分析仪对给药12周后大鼠血清中钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶、骨钙素4项基本指标进行分析,同时使用酶联免疫吸附试验法检测血清OPG、RANK和RANKL 3项骨代谢指标水平,并进行组间对比分析.结果 与模型组比较,雌二醇组、生续断组和酒续断组大鼠的碱性磷酸酶、骨钙素和RANKL水平均显著降低,OPG和RANK水平均显著升高,酒续断组大鼠的Ca水平显著降低,P水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与雌二醇组比较,生续断组大鼠的碱性磷酸酶和骨钙素水平显著升高,酒续断组大鼠的Ca水平显著降低,P和骨钙素水平显著升高,生续断组和酒续断组大鼠的OPG和RANK水平均显著降低,RANKL水平均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与生续断组比较,酒续断组大鼠的Ca、碱性磷酸酶、骨钙素及RANKL水平均显著降低,OPG和RANK水平均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 续断对骨质疏松大鼠的治疗作用与其调控OPG/RANK/RANKL轴有关,酒续断的调控能力强于生续断.
