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类风湿关节炎患者外周血B10细胞高表达核因子κB受体活化因子配体
目的:检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血B10细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)的表达,并分析其与RA患者临床和实验室指标的关系,探讨B10细胞在RA发病中的作用及其免疫调节功能缺陷的潜在机制.方法:选取RA患者25例(近半年未使用糖皮质激素、免疫抑制剂及生物制剂)和20名健康对照者(healthy controls,HC),利用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测RANKL在健康对照组和RA患者外周血B10细胞及非B10细胞中的表达,分析表达RANKL的B10细胞比例与RA患者临床特征和实验室指标的相关性,体外刺激实验评价肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)对B10细胞表达RANKL的影响.数据分析采用独立样本t检验、Pearson和Spearman相关分析.结果:健康人外周血B10细胞能表达低水平RANKL,RA患者外周血表达RANKL的B10细胞比例较健康对照组显著升高(3.65％±1.59％ vs.2.25％±0.68％,P＜0.01).RA患者表达RANKL的B10细胞比例与关节压痛数、关节肿胀数及28-关节疾病活动度分值(disease activity score in 28 joints,DAS28)呈正相关(分别为r=0.479,P=0.035;r =0.519,P=0.008;r=0.526,P=0.019),与年龄、病程、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)及抗环瓜氨酸多肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,A CPA)无显著相关性.TNF-α能促进B10细胞高表达RANKL(P＜0.01).结论:RA患者外周血表达RANKL的B10细胞比例升高,与关节肿痛数及疾病活动度正相关,提示RA患者B10细胞免疫调节功能受损的同时可能参与了RA的发病及骨破坏.
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B10细胞在器官移植术后免疫耐受中的研究现状和前景
器官移植术后的理想目标是达到移植物的免疫耐受状态,相关研究显示调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)在诱导器官移植术后免疫耐受中有积极作用,但起主导作用的细胞表型和具体机制尚无共识.近年来B10细胞的发现进一步揭示了调节性B细胞诱导器官移植术后免疫耐受的相关机制,并有望终诱导免疫耐受状态.本文就B10细胞的研究现状及其在器官移植免疫耐受中的作用、前景进行综述.
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B10细胞的研究现状
B 细胞中存在对免疫应答具有负向调节作用的调节性B 细胞（ Bregs）。 Bregs具有抗原特异性并可通过白细胞介素10（IL－10）显著影响T细胞的活性和其介导的炎症反应。而B10细胞所产生的IL－10是B细胞产生IL－10的主要来源。因此，B10细胞在炎症、自身免疫病、肿瘤等疾病的发生发展过程中均有重要的免疫调节作用。 B10细胞的表型和功能上的研究将是免疫学领域中的重要的进步。
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调节性B细胞与风湿免疫性疾病
人类B淋巴细胞主要通过分泌特异性抗体及细胞因子发挥免疫调节功能.调节性B细胞拥有正向和负向免疫调节作用,通过分泌不同的细胞因子或细胞接触等机制,完成下调免疫反应的作用.调节性B细胞在风湿免疫性疾病发生、发展中起着重要的免疫抑制作用,可能为风湿免疫病的治疗带来新希望.
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不同体外刺激对小鼠腹腔产生IL-10的B细胞的影响
目的:探索不同体外刺激对小鼠腹膜腔B细胞产生IL-10的影响.方法:在不同刺激剂作用下,体外培养小鼠腹腔细胞5或48小时,流式细胞仪分析CD19+IL-10+ B细胞比例.结果:PIM刺激5小时后,小鼠腹腔CD19+IL-10+ B细胞比例明显升高至14.69%(P<0.01),在PIM刺激的基础上加入anti-IgM F(ab′)2或anti-CD40均不能进一步提高腹腔B细胞IL-10的表达(P>0.05),而加入IPS后,CD19+IL-10+ B细胞比例升高至平均26.53%(P< 0.01).LPS、anti-CD40刺激48小时可明显升高CD19+IL-10+ B细胞比例,但能够产生更强BCR信号的coated anti-IgM刺激抑制小鼠腹腔B细胞IL-10的表达.结论:体外刺激5小时,LPS+PIM是腹腔产生IL-10的B细胞活化的佳刺激,刺激48小时,LPS和anti-CD40可进一步促进腹腔B细胞IL-10的表达,这一作用可能是通过诱导腹腔B10前体细胞成熟实现的.而anti-IgM刺激对腹腔B细胞产生IL-10的影响依赖于刺激时间和信号强度.
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B10细胞与非肥胖型糖尿病小鼠自身免疫性糖尿病发生的关系研究
目的：研究B10细胞与非肥胖型糖尿病小鼠自身免疫性糖尿病发生的关系。方法：选择20只6周龄NOD/LT雌性小鼠进行常规培养至30周龄，根据小鼠血糖、血肌酐和体重情况将小鼠分为自身免疫性糖尿病未发生组和发生组。利用酶联吸附反应检测两组小鼠脾脏组织中IL-10水平。利用流式细胞分选术检测两组小鼠脾脏组织汇总B10细胞比例。将40只6周龄NOD/LT雌性小鼠分为对照组和B10组，B10组小鼠接种分离得到的B10细胞，每周一次，对照组接种同等体积生理盐水，分别于第10、15、20、25、30周龄时检测小鼠自身免疫性糖尿病发生情况。结果：发生组小鼠血糖和血肌酐水平显著高于未发生组（P<0．05)，体重水平显著低于未发生组（P<0．05)。发生组小鼠脾脏组织中IL-10水平显著高于未发生组。自身免疫性糖尿病发生组小鼠脾脏组织中B10细胞含量显著高于未发生组。当小鼠处于第10、15周龄时，B10组小鼠中自身免疫性糖尿病发生率显著低于对照组，但第20、25、30周时，B10组小鼠中自身免疫性糖尿病发生率显著高于对照组。结论：B10细胞的过度积累，可能是进一步诱发NOD小鼠自身免疫性糖尿病发生的原因之一。
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调节性B细胞的特性及在疾病中发挥的作用
B淋巴细胞通过分泌抗体和抗原递呈等在机体免疫应答中一直发挥着重要作用.近来研究发现了一群具有调节功能的B淋巴细胞亚群——调节性B细胞(Breg).根据Breg分泌细胞因子不同,Breg分为3种不同亚型:分泌IL-10的B10,分泌TGF-β的Br3和表达FoxP3的FoxP3+ Breg.Breg在多种自身免疫性疾病、寄生虫感染和肿瘤等疾病中发挥着重要的免疫抑制作用.研究Breg的分类、起源与分化发育、分化发育相关的信号通路、表型特征及其在不同种类疾病中的作用可以全面深入地了解Breg的特征和相互作用的机制,因而具有重要意义.
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日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导B10细胞产生的研究
目的 观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)与成虫抗原(SWAP)是否能够诱导小鼠调节性B细胞的产生.方法 SEA、SWAP和脂多糖(LPS)分别体外刺激小鼠脾脏单个核细胞和磁珠分选后的脾脏CD19+B细胞,72 h后用流式细胞术分别检测CD19+ IL-10+细胞比例,和细胞表面CD80、CD86及CD40的表达,用ELISA法检测培养上清中IL-10的水平.体内实验用SEA、SWAP、PBS分别和不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠,1次/周,共3次,末次免疫后7d取小鼠脾脏,流式细胞术检测CD19+ IL-10+细胞比例,用ELISA法检测培养上清中IL-10的水平.结果 LPS与SEA体外均能显著诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL-10+细胞,两者无显著差异,而SWAP组不能诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL-10+细胞；SEA与LPS能够诱导脾脏CD19+B细胞表面高表达CD80、CD86和CD40,而SWAP不能诱导脾脏CD19+B细胞活化；SEA与LPS诱导脾脏CD19+B细胞分化为IL-10+细胞的比例也显著升高,同时能刺激脾脏CD19+B细胞分泌高水平的IL-10,两者无显著差异；而SWAP不能诱导小鼠脾脏CD19+B细胞分化为IL-10+细胞并分泌IL-10.SEA体内免疫小鼠后,小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL-10+细胞比例显著升高,并且能够分泌高水平的IL-10,而SWAP和PBS免疫组均不能诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL-10+细胞并分泌IL-10.结论 SEA体外体内均能诱导小鼠产生分泌IL-10的B10细胞,并且在体外不依赖于脾脏其他免疫细胞的参与,而SWAP体外体内均不能诱导B10细胞的产生.
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类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中B10细胞比例及临床意义
目的 观察类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中B10细胞比例,并探讨其临床意义.方法 选取疾病活动期RA患者56例(RA组)和体检健康者25例(对照组),取外周静脉血,采用流式细胞术检测两组PBMC中的B10细胞(表达CD19+ CD5+ CD1dhi并分泌IL-10的细胞亚群),分析其与RA患者临床指标的关系.结果 RA组PBMC 中B10细胞比例为0.46 %±0.24%,低于对照组的1.98%±0.45%(P<0.05).PBMC中B10细胞比例与RA患者病程、压痛关节数、肿胀关节数、C反应蛋白、红细胞沉降率、病情活动程度DAS28评分、类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体均呈负相关(r分别为-0.73、-0.46、-0.52、-0.44、-0.61、-0.58、-0.72、-0.66,P均<0.05).结论 RA患者PBMC中B10细胞比例降低,且其水平可反应病情活动及炎症反应程度.
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B10细胞的鉴定及生物学研究进展
一般认为,B细胞通过分泌抗体、提呈抗原、提供协同刺激信号以及分泌细胞因子等发挥免疫正调节功能,但近年来,B细胞的负向免疫调节功能越来越引起人们的关注,已在自身免疫性脑脊髓膜炎( Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)、胶原诱导的关节炎( Collagen-induced arthritis,CIA)、接触性超敏反应(Contact hypersensitivity,CHS)、非肥胖型糖尿病( Nonobese diabetic,NOD)、系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)等多种自身免疫性疾病和炎症性疾病的动物模型中验证了B细胞的负向免疫调节功能[1],尤其是B10细胞的鉴定及对其生物学功能的研究大大拓展了临床对免疫调节的认识.
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B淋巴细胞的分化发育与自身免疫性疾病
B淋巴细胞起源于骨髓中的造血干细胞,骨髓(禽类为法氏囊)是B淋巴细胞发育和成熟的场所.B淋巴细胞在骨髓内的发育,经历了祖B淋巴细胞、前B淋巴细胞、未成熟B淋巴细胞及成熟B淋巴细胞几个阶段.B淋巴细胞的分化过程可分为抗原非依赖期和抗原依赖期.在B淋巴细胞亚群中,CD5+ B1细胞和分泌IL-10的B调节细胞(B10细胞)与自身免疫性疾病的发生发展可能相关,前者可能促进炎性反应发生,后者可能有下调和抑制自身免疫性炎症的作用.
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micro RNA-98干扰肺癌患者外周血B细胞IL-10的表达
目的 验证miR-98可抑制肺癌患者B10细胞IL-10的表达.方法 收集肺癌组和对照组外周血各10例,分离培养CD19B淋巴细胞,流式细胞检测B10细胞数,RT-PCR检测B10细胞miR-98和IL-10mRNA的表达,制备miR-98脂质体及建立肺癌小鼠模型,观察miR-98脂质体对小鼠瘤体生长的抑制作用.结果 肺癌组外周血B10细胞miR-98显著低于对照组,IL-10 mRNA水平显著高于对照组,B10细胞miR-98与IL-10 mRNA间存在负相关.结论 在miR-98高表达的环境下,B淋巴细胞IL-10表达降低,对荷瘤小鼠应用脂质体包埋miR-98能减慢肺癌生长.
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ICOS+Treg与B10细胞在AD患者发病机制中的作用
目的 研究特应性皮炎(Atopic Dermatitis,AD)患者外周血中B10细胞与ICOS阳性调节性T细胞(ICOS+Treg)比例变化,探讨它们在AD发病机制中的作用.方法 收集35例AD患者外周血,流式细胞仪(FCM)检测B10细胞、ICOS+Treg、ICOS-Treg细胞的数量及ICOS+Treg/ICOS-Treg,用FCM测定外周血单核细胞(PBMC)培养后分泌IL-10、TGF-β、IL-17水平,与同期对照组比较并与患者的病情进行相关分析.结果 AD活动期患者PBMC中B10细胞、ICOS+Treg细胞与ICOS+Treg/ICOS-Treg均低于对照组[(0.64±0.22)％Vs(1.62±0.47)％,P＜0.05;(1.42±0.45)％ Vs (3.32±1.5)％,P＜0.05;(0.18±0.06) Vs (0.59±0.15),P＜0.01];ICOS-Treg与对照组比较无明显变化(P＞0.05),B10细胞的数量和ICOS+Treg/ICOS-Treg与疾病程度呈负相关(P＜0.05);AD患者PBMC分泌内因子IL-10、TGF-β下降,而IL-17水平升高.结论 B10细胞与ICOS+Treg及相关细胞因子的变化可能与AD的免疫机制及疾病状态有关.
关键词： 特应性皮炎 B10细胞 ICOS+Treg细胞 -
B10细胞及相关因子异常在CITP免疫紊乱中的作用
目的 检测慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)患者外周血新型调节性B细胞(B10)数量与相关细胞因子的变化,分析患者B10细胞与血小板计数及血小板抗体的相关性,探讨B10在CIT免疫紊乱中的作用.方法 选择40例CITP患者,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞术(FCM)检测B10细胞亚群的比例变化;用EUSA法检测培养液上清中细胞因子IL-10与TGF-β1的水平,FCM法检测患者血小板抗体阳性率的变化,与健康对照组比较分析.结果 CITP患者外周血中CD19+B、CD5+CD19+B细胞亚群的比例均升高,而调节性B10的比例降低(t=5.52,P＜ 0.05),并与血小板计数呈正相关(r=0.621,P＜0.05),与血小板抗体的水平呈负相关性(r=-0.518,P＜0.05);患者PBMC培养液上清IL-10、TGF-β1的水平低于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);患者B10的比例变化与IL-10表达水平呈正相关(r=0.687,P＜0.05),而与TGF-β1的变化无相关性(r=0.053,P0.05).结论 B10细胞及相关细胞因子IL-10的下调参与CITP的免疫紊乱机制,这将可为CITP的临床诊断与治疗提供新靶点.
关键词： 慢性特发性血小板减少性紫癜 B10细胞 细胞因子 血小板相关抗体 -
Balb/c小鼠脾脏B10细胞分析
目的 分析年龄、性别和环境因素对Balb/c小鼠脾脏B10细胞的影响.方法 以年龄、性别和不同环境对小鼠进行分组,流式细胞仪分析小鼠脾脏CD5+CD1d(hi) B细胞的比例.体外培养小鼠脾细胞,在不加任何刺激或LPS+PIM刺激5h后,流式细胞仪分析CD19+IL-10+B细胞比例.结果 6月龄小鼠脾脏中CD5+CD1d(hi)B细胞比例平均为2.9％,明显高于2月龄小鼠的2.28％(p＜0.05)；在不加任何刺激的情况下,两组小鼠脾脏中IL-10+B细胞的比例均很低且无统计学差异(P＞0.05)；加入LPs+PIM刺激5h后,6月龄小鼠脾脏中IL-10+B细胞的比例平均为1.93％,高于2月龄小鼠的1.25％(P＜0.05).细胞表型和细胞内IL-10染色分析均显示年龄匹配的雌性和雄性小鼠脾脏B10细胞的表达无明显差异(P＞0.05).普通级和SPF级小鼠CD5+CD1d(hi)B细胞和LPS+PIM诱导的IL-10+B细胞比例无明显差异(P＞0.05),而在不加任何刺激的情况下,普通级小鼠脾脏IL-10+ B细胞比例平均为0.87％,明显高于SPF小鼠的0.38％ (P＜ 0.01).结论 脾脏B10细胞可随Balb/c小鼠年龄增大而扩增,B10细胞的表达与性别差异无明显关系,微生物环境可促进B10细胞的活化,但对B10细胞总数无明显影响.
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IL-10+B细胞对儿童过敏性紫癜Th17/Treg免疫平衡紊乱的影响
目的 探讨IL-10+B细胞(B10)水平及功能异常可能通过影响Th 17/Treg的免疫平衡,参与过敏性紫癜(Henoch-Sch(o)nlein purpura,HSP)的发生发展.方法 选取HSP患儿和健康体检儿童共58例,HSP患儿根据肾脏累及情况分为3组:无肾脏累及组15例(A组)、纯血尿组12例(B组)、蛋白尿组15例(C组);另设正常对照组16例.采用流式细胞术检测患儿外周血中Th17细胞、Treg细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞和CD19+CD24hiCD27+B细胞的百分比,以及B10细胞及其亚类(CD19+CD24hiCD38hiB细胞和CD 19+ CD24hiCD27+B细胞)的IL-10的表达水平.结果 与对照组相比,B、C组中Th17细胞的比例和Th17/Treg的比值逐渐升高2,Treg细胞和CD19+CD24hiCD38hiB细胞的比例以及总的B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞和CD19+CD24hiCD27+B细胞分泌IL-10的水平逐渐降低,且均有统计学差异(P＜0.05);而CD19+CD24hiCD27+B细胞只在C组中显著降低(P＜0.05);HSP患儿B10细胞、CD19+CD24hCD38hiB细胞和CD19+CD24hiCD27+B细胞与Th17细胞以及Th 17/Treg的比值呈显著负相关(P＜0.05),B10细胞和CD19+CD24hiCD38hiB细胞与Treg细胞呈显著正相关(P＜0.05).结论 B10细胞参与HSP的发生发展可能与其分泌IL-10的能力降低,从而对Th17/Treg免疫平衡的调节障碍有关.且相较于CD19+CD24hiCD27+B细胞,CD19+CD24hCD38hB细胞亚群可能是预测HSP发生发展以及肾脏累及严重程度的相对敏感指标.
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银屑病患者调节性B细胞检测及意义
目的:检测与分析银屑病患者外周血调节性B细胞的数量(即B10细胞),探索B10细胞与银屑病的相关性.方法:收集初发男性银屑病患者并分离其外周血单核细胞(PBMC),以年龄性别相匹配的正常人外周血单个核细胞( PBMC)为对照,体外培养中添加离子霉素、佛波酯、CD40配体等作用5h,流式细胞术检测CD19+ IL-10+细胞比例以分析B10细胞数量,体外刺激48 h分析CD19+ IL-10+细胞比例以评估B10前体细胞数量.结果:银屑病患者外周血中B10细胞数量低于正常对照,B10前体数量明显高于正常对照.结论:银屑病患者外周血B10前体细胞增加,B10细胞减少,B10细胞可能对银屑病有保护作用.
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脂多糖体外刺激对小鼠B10细胞的影响
目的:探索脂多糖(LPS)体外刺激对小鼠B10细胞的影响.方法:在LPS刺激下,体外培养小鼠脾脏和腹腔细胞5h或48h,流式细胞仪分析CDI9+IL-10+B细胞比例.结果:PIM刺激5h,小鼠脾脏和腹腔CD19+IL-10+B细胞比例分别升高至1.22％和14.82％(P＜ 0.01),在PIM刺激的基础上加入LPS,小鼠脾脏和腹腔中CD19+IL-10+B细胞比例分别升高至平均2.35％和26.58％(P＜0.01).LPS刺激48h可进一步升高CD19+IL-10+B细胞比例,脾脏和腹腔分别为6.42％和38.38％,明显高于PIM48 h刺激组(P＜0.01)和L+PIM5 h刺激组(P＜0.05),但LPS刺激48 h不改变CD5、CDId的表达水平.结论:体外刺激5h时,L+PIM刺激可促进小鼠B10细胞活化;刺激48 h时,LPS可进一步促进B10细胞IL-10的表达,这一作用可能是通过诱导B10前体细胞成熟实现的.
