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无血清脐血巨核系祖细胞体外扩增的研究
脐血造血干细胞移植后血小板恢复延迟是一大难题,目前认为这主要与脐血中巨核系祖细胞数量不足及脐血巨核细胞分化成熟延迟有关,而将部分脐血进行巨核系祖细胞体外扩增后输注受者体内是有望解决这一难题的重要途径,但适用于临床应用的扩增条件至今仍未确立.本课题采用人脐血单个核细胞(MNC)在无血清培养体系中使用TPO,IL-3,SCF,IL-6等细胞因子进行不同的组合,在培养的0,6,10,14天进行MNC、CD41+细胞及CFU-MK数的检测,以寻找佳的细胞因子组合及佳的收获时机.结果表明:无血清条件下TPO与IL-3,SCF,IL-6等细胞因子联用可实现脐血巨核系祖细胞有效的体外扩增,各因子组中以TPO+IL-3+SCF+IL-6组扩增效果为佳,其CFU-MK数于第10天多,扩增达6.8倍,CD41+细胞扩增达8.8倍.结论:在人脐血MNC无血清培养条件下,TPO+IL-3+SCF+IL-6组为巨核系祖细胞体外扩增较佳的因子组合.由于TPO+IL-3+SCF+IL-6组的CFU-MK数于第10天多,CD41+细胞数亦为同期高,故培养后收获时间宜控制在其体外培养的第10天.
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脐血CD133+细胞体外扩增巨核系祖细胞的研究
本研究探讨脐血CD133+(UCB-CD133+)细胞体外扩增巨核系祖细胞的能力和佳收获时间.采用免疫磁珠激活细胞分选系统(MACS)分选UCB-CD133+细胞,将纯化的UCB-CD133+细胞接种于含TPO、IL-3和SCF的无血清液体培养体系中体外扩增巨核系祖细胞,在培养第7、10和14天进行细胞计数,流式细胞仪检测扩增过程中CD133、CD34、CD41抗原表达的动态变化,并采用半固体法对不同扩增阶段的细胞进行巨核祖细胞集落形成单位(CFU-MK)培养.结果表明:培养至第7天时,UCB-CD133+细胞扩增效果佳,扩增了8.2±2.2倍;培养至第14天,细胞总数扩增了116倍;培养至10天时,平均1个CD133+细胞所产生的CD133+ CD41+和CD34+CD41+细胞数多,分别为2.5±0.9和2.6±0.5个,所产生的CD41+ 细胞为20.3±5.9个;扩增前后的UCB-CD133+ 细胞均能形成CFU-MK,扩增第10天的UCB-CD133+细胞所形成的CFU-MK总数多,CFU-MK扩增倍数为59.5±11.8倍.巨核细胞免疫组织化学染色显示,扩增后的巨核系细胞多呈幼稚状态,未见血小板形成.结论:UCB-CD133+ 细胞具有较强的体外扩增巨核系祖细胞的能力,培养第10天扩增效能佳.
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重组人白细胞介素11对两种血小板减少症患儿骨髓巨核系祖细胞的作用
目的 研究重组人白细胞介素11(recombinant human interleukin 11,rhIL-11)对慢性特发性血小板减少性紫癜(chronic idiopathic thrombocytopenic purpura,CITP)与再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患儿骨髓巨核系祖细胞(megakaryocyte progenitor)体外生长的影响.方法 收集17例CITP患儿及14例AA患儿骨髓,对照组为骨髓检查三系造血功能正常、排除血液系统疾病儿童10例.无血清培养各组骨髓单个核细胞(mononuclear cells,MNC),培养体系中包含血小板生成素(TPO)、可溶性补体结合(SCF),IL-3,rhIL-11,或TPO,SCF,IL-3.培养第14天,用流式细胞仪测定CD41+细胞率,CD41结合的碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(alkaline phosphatase-anti-alkaline phosphatase,APAAP)桥联酶标技术鉴定半固体培养的巨核细胞集落形成单位(megakaryocyte colony forming unit,CFU-MK)和巨核细胞爆式集落形成单位(megakaryocyte burst forming unit,BFU-MK).结果 rhIL-11联合TPO等细胞因子,可促进对照组、CITP组CFU-MK和BFU-MK生成(P＜0.01),提高CD41+细胞率(P＜0.01);但对AA组,CFU-MK和CD41+细胞率无明显的作用(P＞0.05).结论 rhIL-11联合TPO等细胞因子,可促进CITP患儿骨髓巨核系祖细胞在体外无血清培养条件下的增殖,提示rhIL-11具有治疗CITP的潜在价值,但对AA患儿的骨髓巨核系祖细胞生成并无明显的效果.
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血小板异常的临床解读
血小板是人体血液系统中的一种重要成分,它在人体的出凝血、血栓形成、反映全身状况中有着极其重要的意义.血小板同其他血液细胞一样也是来源于骨髓,由骨髓中的全能干细胞→骨髓干细胞→巨核系祖细胞→幼巨核细胞→颗粒型巨核细胞→产血小板型巨核细胞,后生成为血小板(即为有巨核细胞的胞浆分离之膜片段所形成).
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人巨细胞病毒抑制人巨核系祖细胞增殖的体外研究
目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)对人巨核系祖细胞增殖的影响。方法收集20份脐血标本，采用巨核系祖细胞体外半固体培养技术，观察HCMV AD169株对巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)生长的影响，分别用原位聚合酶链反应(IS-PCR)和RT-PCR检测集落细胞中的HCMV DNA与即刻早期抗原(IEA)mRNA。结果HCMVAD169株在体外能明显抑制CFU-MK生长，抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系；经IS-PCR检测发现病毒感染组CFU-MK细胞中有HCMV DNA存在；RT-PCR检测发现病毒感染组CFU-MK细胞中有IEA mRNA的表达。结论 HCMV AD169株可直接感染巨核系祖细胞，并抑制其增殖与分化；HCMV对巨核系祖细胞的直接抑制作用可能是该病毒感染后引起血小板减少的原因之一。
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海藻多糖对辐射小鼠骨髓造血功能的影响
海藻多糖(seaweed polysaccharides,SP)是从海洋褐藻类植物中分离得到的一种植物多糖.研究表明,海藻多糖具有明显的免疫促进活性、清除自由基以及抗肿瘤等功能[1～3],有关海藻多糖抗辐射作用的研究近年来也逐步开展.本研究用内源性脾结节法和体外琼脂培养法,观察了海藻多糖对辐射损伤小鼠骨髓造血干细胞和粒-单核细胞系以及巨核系祖细胞的影响.
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重组人血小板生成素治疗免疫性血小板减少症的临床观察
免疫性血小板减少症（immune thrombocytopenia， ITP）是一种自身免疫性疾病，首选激素治疗，激素无效采用二线治疗方案，如硫唑嘌呤、达那唑、长春新碱、重组人血小板生成素、切脾等。重组人血小板生成素（recombinant human thrombopoietin，rhTPO）是特异性造血调控因子，具有刺激巨核系祖细胞增殖与分化，促进巨核细胞成熟的活性，可增加血小板的生成。作者对国产注射用rhTPO治疗ITP患者血小板减少的有效性和安全性进行了评估。报道如下。
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人巨细胞病毒对人巨核系祖细胞体外生长的影响
目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)对人巨核系祖细胞(CFU-MK)的抑制作用及其机制.方法:采用体外半固体培养技术,观察4种不同浓度HCMV AD 169株对CFU-MK集落生长和成熟的影响,分别用PCR和RT-PCR检测集落细胞中HCMV即刻早期(IE)蛋白DNA与即刻早期(IE)蛋白mRNA.结果:HCMV AD 169株在体外能明显抑制CFU-MK集落生长,3个感染组的CFU-MK集落数均减少,与灭活病毒组比较,集落数减少程度分别为21.6%、33.8%、46.3%(P＜0.05),显示抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系; RT-PCR检测发现HCMV感染组CFU-MK细胞有IE蛋白mRNA的表达;PCR检测发现HCMV感染组CFU-MK细胞中有IE蛋白DNA.结论:HCMV AD 169株在体外能抑制CFU-MK的分化和增殖,提示HCMV感染引起的血小板减少与CFU-MK受HCMV抑制有关;并证实HCMV感染的CFU-MK集落细胞中存在HCMV IE蛋白的早期转录.
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人巨细胞病毒对脐血巨核系祖细胞集落生长的影响
目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）对巨核系祖细胞（CFU-MK）的分化和增殖的影响。方法：收集20例脐血标本，采用体外甲基纤维素半固体培养技术，观察3种不同浓度HCMV AD169株对CFU-MK集落形成的影响。结果：3个感染组的CFU-MK集落数均减少，与灭活病毒组比较，分别为24.0%、35.8%和48.6%（P<0.05），显示抑制程度与病毒感染滴度呈剂量-浓度依赖关系。结论：HCMV在体外能抑制CFU-MK的分化和增殖，提示巨细胞病毒感染引起的血小板减少与CFU-MK受该病毒抑制有关。
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人巨细胞病毒对巨核细胞生长的影响及其反义寡核苷酸的抗病毒活性
目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)对人巨核系祖细胞的抑制作用及其机制,初步研究HCMV反义寡核苷酸(ASON)的抗病毒感染作用.方法 采用体外悬浮培养巨核系细胞,观察HCMV AD169株对巨核系祖细胞生长的影响.用流式细胞术检测HCMV感染巨核系细胞上HCMV pp65抗原的表达.用HCMV感染经ASON预处理的巨核细胞,计数存活巨核细胞数,用FACS检测巨核细胞上HCMV pp65蛋白表达,并用MTT法测定ASON的细胞毒性.结果 HCMV AD169株在体外能明显抑制巨核系祖细胞的增殖,悬浮培养第12天,与对照组相比,HCMV感染组的巨核细胞数减少了67.86%(P＜0.05).HCMV感染的巨核系细胞有HCMV pp65抗原的表达,其表达率为(24.5±3.1)%.0.08 μmol/L的UL36反义寡核苷酸(UL36Anti)能对抗HCMV的作用,使巨核细胞数保持在未被感染时的水平,与HCMV感染组巨核细胞数比较有显著差异(P＜0.05).UL36Anti组巨核细胞上几乎无HCMV pp65蛋白的表达.MTT结果表明UL36Anti显著影响细胞生长的浓度为90/μmol.L.结论 HCMV感染引起的血小板减少与其抑制巨核系祖细胞增殖有关.特异的ASON有一定的抗HCMV活性,有可能作为一种新的手段用于HCMV感染引起的血小板减少症的防治.
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人巨细胞病毒对人脐血巨核系祖细胞生长的影响及作用机制研究
[目的]探讨人巨细胞病毒(HCMV)对巨核系祖细胞生长的影响及其机制.[方法]采用造血祖细胞体外半固体培养技术,用HCMVAD169株分别感染去除T细胞和未去除T细胞的脐血单个核细胞.观察CFU-MK集落数;用原位聚合酶链反应(IS-PCR)检测集落细胞中的HCMVDNA.[结果]2个感染组的CFU-MK集落数均减少,与灭活病毒组比较,分别为29.5%和48.6%(P<0.05),未去除T细胞组CFU-MK集落数减少比去除T细胞组明显(P<0.05),经IS-PCR检测发现各病毒感染组CFU-MK细胞中有HCMVDNA存在.[结论]HCMV在体外能抑制CFU-MK的分化和增殖,HCMV感染引起的血小板减少可能与该病毒对巨核系祖细胞的直接抑制以及免疫因素有关.
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病毒相关性血小板减少性紫癜的发病机制研究
目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)对骨髓巨核系祖细胞(CFU-MK)的直接感染.方法:采用合并HCMV感染的血小板减少性紫癜骨髓巨核系祖细胞体外培养技术,收集集落细胞后运用RT-PCR检测HCMV晚期抗原基因mRNA.结果:在32例外周血HCMV-DNA PCR阳性及血清HCMV-IgM阳性的血小板减少性紫癜骨髓CFU-MK集落细胞HCMV晚期抗原基因mRNA阳性12例.结论:HCMV可以感染CFU-MK并复制,这可能是该病毒感染后引起血小板减少的原因之一.
