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干扰素-γ对脐血造血干/祖细胞细胞周期蛋白D各亚型表达的影响
体外观察干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)对脐血造血干/祖细胞细胞周期蛋白D(cyclin D)不同亚型表达的影响,以探讨IFN-γ造血抑制的机制.用免疫磁珠阳性分选的方法分离脐带血CD34+细胞,并进行体外扩增;用甲基纤维素半固体培养方法,观察IFN-γ对脐血造血干/祖细胞CFU-GM形成的影响;用半定量RT-PCR检测IFN-γ 对脐血造血干/祖细胞cyclinD不同亚型表达的影响.结果显示IFN-γ可以显著抑制脐血CFU-GM的形成,并可以从mRNA水平抑制cyclin D2和Cyclin D3亚型的表达.由此得出结论,IFN-γ可以显著抑制cyclin D的表达,这可能是IFN-γ介导造血抑制的一种机制.
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cyclin D1过表达对子宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞增殖及上皮间质转化的影响
目的 探讨cyclin D1过表达对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、分化的影响及其他信号分子的变化情况.方法 采用PCR法扩增cyclin D1基因全长,构建cyclin D1-pcDNA3.1质粒转染人乳头状瘤病毒16阳性的SiHa细胞,筛选cyclin D1稳定过表达细胞株.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot分别检测转染细胞cyclin D1 mRNA和蛋白表达.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,采用RT-PCR法和Western blot检测转染细胞CK7、E-cadherin、波形蛋白、Snail基因的mRNA和蛋白表达;采用RT-PCR法检测增殖分化相关基因CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E、Rb、E2F、E6/E7、Ki-67基因的mRNA表达水平.对细胞同步化处理,用RT-PCR法检测细胞周期不同时间点cyclin D1及p21基因的mRNA表达情况.结果 成功构建cyclin D1稳定过表达的G-3细胞株.生长曲线及Ki-67 mRNA升高(P<0.05)提示G-3细胞增殖速度加快,G-3细胞中波形蛋白、Snail基因和蛋白表达明显增加(均P<0.05),E-cadherin、CK7基因和蛋白表达明显降低,提示转染细胞发生了上皮间质转化.cyclin D1过表达后,CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E表达增加,Rb、E2F、E6/E7、p16表达无明显改变,p21与cyclin D1表达趋势基本一致,在细胞周期不同时间点表达存在波动性.结论 转染诱导cyclin D1过表达可促进SiHa细胞增殖和上皮间质转化,这一过程中伴随着CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E基因表达的上调.cyclin D1过表达时,p21表达量也增高,可能通过影响波形蛋白表达参与了对SiHa细胞上皮间质转化的调控.
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子宫颈上皮内瘤变及鳞状细胞癌组织cyclin D1表达特征及其与HPV16 E7表达的相关性分析
目的 探讨cyclin D1在宫颈上皮内瘤变及鳞状细胞癌中的表达及其与HPV16 E7基因表达的相关性.方法 SiHa、Hcc94细胞均为宫颈上皮来源的鳞癌细胞,其中Hcc94细胞的E6/E7基因缺失.采用即时荧光定量PCR、免疫组织化学法检测cyclin D1在子宫颈上皮内瘤变(CIN)及鳞状细胞癌组织中基因及蛋白的表达情况;采用逆转录PCR(RT-PCR)、Western blot、免疫组织化学方法检测cyclin D1在不同E7表达状态的鳞状细胞癌细胞系的表达情况;设计靶向HPV16 E7基因启动子区的siRNA序列,构建质粒转染SiHa细胞,筛选稳定沉默E7基因的细胞系命名为cm-16细胞株;将空质粒转染SiHa细胞,获得空质粒细胞系命名为B3细胞株.用RT-PCR和Western blot检测E7沉默cm-16细胞cyclin D1基因及蛋白表达情况.结果 cyclin D1仅在正常宫颈鳞状上皮副基底细胞中表达,在CIN1、CIN2、CIN3表达降低,在HPV阳性的宫颈鳞状细胞癌中阴性或少量点灶状表达;cyclin D1在E7阳性SiHa细胞中的表达水平较cm-16及Hcc94细胞减低(均P＜0.05).结论 E7高表达的子宫颈癌组织及细胞中cyclin D1低表达,HPV E7基因抑制子宫颈癌cyclin D1表达.
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PAK5和CyclinD1在肝细胞肝癌中的表达及预后意义
目的 探讨P21活化激酶5(P21-activated kinase 5,PAK5)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在肝细胞肝癌中的表达特点及其与临床病理因素和预后的关系.方法 采用免疫组化法检测76例肝癌组织及31例癌旁组织中PAK5、CyclinD1的表达情况,并分析PAK5、CyclinD1与肝癌患者临床病理因素及预后的相关性.结果 PAK5在肝癌组织和癌旁组织的表达阳性率分别为86.8％(66/76)、54.8％(17/31),差异有统计学意义(x2=12.962,P＜0.05);CyclinD1癌组织和癌旁组织阳性表达率分别为73.7％(56/76)、41.9％(13/31),差异有统计学意义(x2=9.691,P＜0.05).PAK5表达与性别(x2=5.063,P=0.024)、肿块直径(x2=9.159,P=0.002)、门静脉癌栓(x2=4.469,P=0.035)相关;CyclinD1表达与门静脉癌栓(x2 =4.842,P=0.028)、TNM分期(x2=7.930,P=0.005)相关.PAK5表达与CyclinD1表达呈正相关(γ=0.284,P=0.033).PAK5阳性患者术后生存时间显著低于阴性患者(x2=7.104,P=0.008).Cox多因素分析显示PAK5是影响肝癌患者预后的独立影响因素(RR =0.186,P=0.012).结论 PAK5阳性表达的肝细胞肝癌患者预后不良.
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cyclinD1在上皮性卵巢癌3AO细胞中的表达及意义
目的 探讨细胞周期素D1( cyclinD1)在上皮性卵巢癌3AO细胞中的表达,分析其表达与3AO细胞生长、增殖的关系.方法 将人正常卵巢上皮细胞及卵巢癌3AO细胞进行体外培养,用逆转录酶多聚酶链式反应(RT-PCR)及流式细胞术(FCM)方法检测受不同浓度顺铂作用前后,细胞中cyclinD1基因及蛋白的表达情况,并观察细胞凋亡及细胞周期的变化.结果 人卵巢上皮细胞中未检测到cyclinD1基因及蛋白的表达,而3AO细胞中存在cyclinD1基因的异常扩增及过表达；受顺铂作用后,3AO细胞琼脂糖凝胶电泳显示cyclinD1基因的mRNA显带由明变暗,逐渐变模糊,并且显带变暗程度与顺铂细胞作用浓度呈正比.流式细胞术直标单抗分析,3AO细胞中cyclinD1蛋白呈阳性过表达；受顺铂作用前后,cyclinD1蛋白表达水平不同,平均值分别是105.9、15.42、8.59;细胞凋亡率不同,分别是0.63％,9.08％,27.41％；细胞周期发生了改变,细胞增殖指数分别是38.83％,44.54％,37.31％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 卵巢癌3AO细胞中存在cyclinD1基因的异常扩增及过表达,cyclinD1基因及蛋白的阳性表达下降程度与顺铂细胞作用浓度呈正比；cyclinD1的表达与卵巢癌细胞的生长及增殖活性密切相关.
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膀胱癌组织中细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶2的表达及与临床病理特征的关系
目的：探讨膀胱癌组织中细胞周期蛋白（ cyclin） D1和基质金属蛋白酶（ MMP）-2的表达及与临床病理特征的相关性。方法2010年7月至2015年1月来该院就诊的膀胱癌患者的膀胱癌组织及癌旁组织各62例，另取同期的膀胱囊肿患者术后正常膀胱组织60例进行对照，检测cyclin D1和MMP-2在各组的表达，记录并对比结果后分析二者的表达与其病理特征关系。结果膀胱癌组织的cyclin D1 mRNA与MMP-2 mRNA表达显著高于正常组织及癌旁组织的表达（P＜0.05）。癌症分期为T2～T4期的cyclin D1及MMP-2基因的表达水平显著高于Tis～T1期，癌症分级为Ⅲ级的cyclin D1及MMP-2基因的表达水平显著高于Ⅰ～Ⅱ级（ P＜0.05）。肿瘤直径＞3 cm的cyclin D1 mRNA表达显著高于≤3 cm者，肿瘤分级为Ⅲ级的cyclin D1 mRNA及MMP-2 mRNA显著高于Ⅰ～Ⅱ级者，肿瘤分期为T2～T4期的cyclin D1 mRNA及MMP-2 mRNA 显著高于Tis～T1者，有淋巴结转移的cyclin D1 mRNA及MMP-2 mRNA 显著高于无转移者（ P＜0.05）。相关性分析发现，膀胱癌组织cyclin D1 mRNA表达与肿瘤直径、分级、分期以及淋巴结呈正相关，MMP-2 mRNA表达与肿瘤分级、分期以及淋巴结转移呈正相关。结论膀胱癌组织中cyclin D1和MMP-2的表达及其与临床病理特征具有紧密的联系，因此在临床可考虑通过监测二者的表达以掌握患者的病情进展。
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细胞周期蛋白D1在胆汁反流性胃炎和胃癌中的表达及其意义
背景:胆汁反流性胃炎是由过多的十二指肠胃反流引起的胃黏膜化学性炎症,与萎缩、肠化生等胃黏膜癌前病变有关.细胞周期蛋白D1(cyclin D1)是细胞周期调节因子,研究显示其与胃癌的发生关系密切.目的:探讨cyclin D1在胆汁反流性胃炎和胃癌中的表达及其意义.方法:收集胃癌组织标本、癌旁非癌组织标本、胆汁反流性胃炎组织标本各50例,以50例正常胃黏膜组织标本作为正常对照.观察胆汁反流性胃炎胃黏膜病变情况;以免疫组化法检测cyclin D1表达.结果:胆汁反流性胃炎组肠上皮化生和异型增生的比例显著高于正常对照组(P＜0.05).Cyclin D1阳性率在正常对照组、胆汁反流性胃炎组、癌旁非癌组和胃癌组中逐渐升高,胃癌组显著高于其余三组(P＜0.05),胆汁反流性胃炎组显著高于正常对照组(P＜0.05),癌旁非癌组与胆汁反流性胃炎组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:Cyclin D1在胃癌的恶性演变过程中发挥重要作用,且可能参与了胆汁反流性胃炎发展为胃癌的过程.
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50例恶性神经胶质瘤中细胞周期蛋白D基因扩增检测分析
[目的]探讨人恶性神经胶质瘤中细胞周期蛋白D基因扩增的生物学意义.[方法]采用实时荧光定量PCR技术检测50例人恶性神经胶质瘤及对应正常脑组织中CCND1、CC-ND2、CCND3基因的扩增水平.[结果]50例胶质瘤标本有36例(72.%)cyclinD1扩增、34例(68.0%)cyclinD3扩增、23例(46.0%)cyclinD2扩增,正常脑组织均无扩增.CCND基因扩增在胶质瘤与正常脑组织中差异有显著性(P<0.01).随着胶质瘤恶性程度升高,CCND1和CCND3基因扩增阳性率增高,且两者之间存在显著性正相关.[结论]人恶性神经胶质瘤中细胞周期蛋白D基冈过度扩增,CCND1和CCND3随胶质瘤病理分级增加而升高,提示CCND基因的异常扩增在胶质瘤的发生与发展中起着重要的促进作用.
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没药倍半萜抑制前列腺癌细胞的增殖活性初探
目的 初步探讨没药两个倍半萜单体化合物抑制前列腺癌细胞增殖的作用机制.方法 用倍半萜单体化合物处理人前列腺癌细胞株LNCaP后,MTT检测化合物对细胞增殖的影响;流式细胞术进一步分析细胞周期时相的变化;反转录PCR(RT-PCR)检测细胞周期相关蛋白p21WAF/CIP1(p21)和cyclinD的表达水平.结果 两个没药倍半萜单体化合物对前列腺癌细胞均有显著的抑制活性(P＜0.001),使细胞停滞于G0/G1期;并且能在mRNA水平诱导p21的表达,同时降低cyclinD的表达.结论 没药倍半萜化合物抑制前列腺癌细胞增殖,可能是通过上调p21的表达、下调cyclinD蛋白的表达来实现的.
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鼻息肉组织中cyclin D1的表达及临床意义
目的 探讨鼻息肉组织中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达及其在鼻息肉发生与发展中的作用.方法 采用免疫组织化学S-P法,分别检测38例初发鼻息肉及24例下鼻甲黏膜(对照组)组织中cyclin D1的表达情况.结果 鼻息肉组及对照组cyclin D1的表达阳性率分别为76.3％(29/38)、33.3％(8/24),两组表达阳性率及表达强度比较差异均有统计学意义(x2=11.293,Z=2.689,P＜0.05).结论 cyclin D1高表达可能在鼻息肉的发生发展中起重要作用.
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脐带血造血干/祖细胞关键细胞周期蛋白D亚型的鉴定
目的确定控制脐带血造血干/祖细胞增殖的细胞周期蛋白D(Cyclin D)关键亚型.方法用Midi-MACS免疫磁珠阳性分选的方法分离出脐带血CD34+细胞,在体外扩增以后,用RT-PCR和Western Blot 分别在mRNA水平和蛋白水平检测Cyclin D不同亚型的表达.结果 mRNA在Cyclin D1无表达,Cyclin D2、Cyclin D3有表达;蛋白在Cyclin D1无表达,Cyclin D2弱表达,Cyclin D3高表达.结论控制脐带血造血干/祖细胞增殖的Cyclin D关键亚型是Cyclin D3.
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细胞周期蛋白D与细胞周期调控研究进展
细胞周期是细胞生命活动中一个重要的过程,在细胞周期的4个时相中,G1期是启动细胞周期循环的关键.细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)和CDK抑制蛋白(CDKIs)是参与细胞周期调控的主要因子.而cyclin D作为细胞周期的启动因子,作用于G1期,在细胞增殖中发挥着重要作用.综述了cyclin D的结构、功能,cyclin D与CKI蛋白的相互作用及其表达失调与某些疾病的关系.
关键词： 细胞周期蛋白D 细胞周期蛋白依赖性激酶 细胞周期 -
凋亡抑制因子livin和细胞周期蛋白D1在鼻内翻性乳头状瘤中的表达及意义
目的 探讨凋亡抑制因子Livin和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在鼻内翻性乳头状瘤(NIP)中的表达及其在该病发生、发展中的意义.方法 采用免疫组织化学方法检测38例鼻内翻性乳头状瘤、18例正常鼻腔黏膜(NM)、15例鼻鳞状细胞癌(NSCC)组织中Livin和Cyclin D1的表达.结果 Livin和Cyclin D1在NM、NIP、NSCC中的表达呈递增趋势,两两对比,其差异均有极显著性(P<0.01).NIP中Livin和Cyclin D1的表达呈显著正相关(P<0.01).结论 凋亡抑制因子Livin和Cyclin D1均参与NIP的发生、发展过程,并且两者之间存在反馈调节机制,在NIP的发生、发展过程中起协同作用.
关键词： 鼻内翻性乳头状瘤 凋亡抑制因子Livin 细胞周期蛋白D 免疫组织化学 -
中华眼镜蛇毒对K562/ADM和难治性急性髓性白血病细胞作用研究
目的:探讨中华眼镜蛇毒(NNAV)对人红白血病/阿霉素细胞(K562/ADM细胞)及原代难治性急性髓性白血病细胞的作用.方法:以K562/ADM细胞及10例急性髓性白血病(AML)患者的原代初发难治性急性髓性白血病细胞为研究对象进行实验,应用不同剂量的NNAV作用于细胞后,采用噻唑蓝实验法(MTT)测定细胞增殖情况,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白Bcl2表达,流式细胞仪测定凋亡率,蛋白质印迹法检测Caspase-3表达.流式细胞仪检测NNAV对细胞周期的影响,检测原代初发难治性急性髓性白血病细胞细胞周期蛋白D(Cyclin-D)的表达情况；观察以上指标在Cyclin-D阳性表达组和阴性表达组有无差异.结果:经过不同浓度的NNAV处理后,无论是K562/ADM细胞还是初发难治性急性髓性白血病细胞,Bcl-2表达下调,Caspase-3表达上调；细胞增殖抑制明显,并具有时间依赖性及剂量依赖性.流式细胞仪检测证实0.8 mg/L和1.0 mg/L的NNAV均能够使原代初发难治性细胞阻滞于细胞周期的G0/G1期,而处于G2/M期的细胞含量减少.10例原发难治性急性髓性白血病细胞中Cyclin-D表达阳性7例,Cyclin-D表达阴性3例,但以上指标在Cyclin-D阳性表达组和阴性表达组无显著差异.结论:NNAV在体外可明显抑制K562/ADM细胞和原代初发难治性AML细胞增殖；调节细胞周期停滞于G0/G1期,减少G2/M期的细胞含量,提示NNAV有可能通过干预Bcl-2、Caspase-3表达而诱导细胞凋亡,细胞周期进程可能是中华眼镜蛇毒组分对原发难治性AML细胞的发挥增殖抑制作用的机制.
关键词： 中华眼镜蛇毒 白血病 K562/ADM细胞 细胞周期蛋白D -
细胞周期蛋白D与白血病
细胞无限制的生长和分裂是肿瘤发生的基础,细胞周期失控是癌变的重要原因.细胞周期调节因子有两种,一种是细胞周期正控蛋白,分为细胞周期蛋白(cyclins)、细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)、视网膜母细胞瘤蛋白(retinblastoma protein,pRb).
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细胞周期依赖性蛋白激酶及细胞周期蛋白D在血液系统恶性肿瘤中的作用
血液系统恶性肿瘤系突变的造血干细胞或前体祖细胞过度增殖,而正常造血系统被破坏的一组恶性肿瘤.正常细胞增殖受细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)严格调控,这些激酶不仅在细胞周期中发挥重要作用,还参与造血干细胞的自我更新与分化、表观遗传调节及DNA损伤修复等细胞活动.对于CDK基因敲除小鼠的研究发现,CDK表达缺失与肿瘤发生相关,而其染色体易位、基因突变引起的CDK表达改变均在肿瘤发生、发展中起作用,这也使更多的肿瘤研究聚焦在CDK及其靶向药物抑制剂的研究方面.细胞周期蛋白(cyclin)D可以与CDK形成CDK4/6-cyclin D复合体,参与造血干细胞细胞周期的调控.笔者拟就CDK、cyclin D及CDK4/6-cyclin D复合体在正常造血及血液系统恶性肿瘤的作用机制,以及CDK4/6靶向抑制剂在血液系统恶性肿瘤治疗中的应用的新研究进展进行综述.
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T细胞型急性淋巴细胞白血病靶向治疗的研究进展
T细胞型急性淋巴细胞白血病(T-ALL)为分子生物学特点与预后异质性大的恶性疾病,其侵袭性强,复发率高.尽管随着高强度联合化疗及造血干细胞移植(HSCT)应用于临床,T-ALL预后得到较大改善,但疗效仍不够理想.因此,深入研究T-ALL发病机制,探索新治疗靶位对于提高T-ALL疗效具有重要意义.随着对T-ALL分子生物学研究进展,T-ALL治疗的多个新型靶点被逐一发现.笔者拟就T-ALL靶向治疗新型靶点进行综述.
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舌癌组织及细胞系中细胞周期蛋白D基因的转录与蛋白的合成
目的: 研究舌部鳞状细胞癌的细胞系以及根据不同的分化程度和是否有淋巴结转移来分类的舌癌组织中细胞周期蛋白D(cyclin D)的基因转录和蛋白合成情况.方法:应用免疫组织化学ABC法检测cyclin D蛋白合成;原位杂交技术检测cyclin D 基因的转录.结果:①cyclin D单克隆抗体标记后,经免疫组织化学染色78.6%(33/42)显示cyclin D蛋白过度表达;②cyclin D探针随机引物标记,经原位杂交后显示,cyclin D mRNA的阳性表达率为66.7%(28/42);③cyclin D的表达与是否有淋巴结的转移有相关性,12例有转移的舌癌组织中通过免疫组织化学染色和原位杂交染色后分别有10例(83.3%)和9例(75%)有cyclin D的表达,而在30例无淋巴结转移的舌癌组织中,分别仅有13例(43.3%)和11例(36.7%)出现cyclin D的表达.结论:cyclin D在舌癌中有高水平的表达,且临床分期越晚,恶性程度越高,其表达率也较高,提示cyclin D的过度表达与舌癌的特性密切相关;cyclin D标记指数与舌癌是否有淋巴结转移呈正相关.cyclin D阳性检出率有助于判断舌癌恶性程度及预测肿瘤的转移,在基因诊断方面确定肿瘤生物学特性的诊断标准.
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生血胶囊对免疫介导的再生障碍性贫血小鼠骨髓Cyclin D3表达的影响
目的探讨生血胶囊对免疫介导的再生障碍性贫血(再障)小鼠骨髓增殖及细胞周期蛋白D3(Cyclin D3)表达的影响。方法建立免疫介导的再障模型。造模当日开始胃饲生血胶囊水提液，每次0.1 mL/10 g体重，2次.d，连续9 d，以生血丸为对照。第10天处死动物，采用流式细胞仪检测小鼠骨髓有核细胞(BMNC)G0/G1期细胞百分率，免疫组织化学超敏S-AP法检测股骨中段骨髓Cyclin D3表达水平。结果生血胶囊组与再障模型组比较，G0/G1期细胞百分率显著降低(P＜0.01)，而Cyclin D3表达水平明显升高(P＜0.01)，与生血丸组比较各项指标均无显著差异(P＞O.05)。结论生血胶囊能提高免疫介导的再障小鼠骨髓Cyclin D3的表达水平，促进骨髓造血细胞由G0/G1期进入增殖期，其作用强度与生血丸相当。
