MicroRNA-630对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制研究

目的 研究MicroRNA-630(miR-630)是否通过下调Sox4影响三阴性乳腺癌细胞系(MDA-MB-231)细胞的增殖.方法 转染miR-630mimic和miR-NC至离体培养的MDA-MB-231细胞中,Western blot检测MDA-MB-231细胞中P27、Ki67、Sox4的表达情况,MTT法检测细胞增殖情况,利用荧光素酶素实验验证Sox4是miR-630的靶基因;再通过转染过表达Sox4的质粒至MDA-MB-231细胞,检测MDA-MB-231细胞中P27、Ki67、Sox4的表达情况,MTT法观察细胞增殖情况.结果 相比于空质粒组,转染miR-630-mimic后,MDA-MB-231细胞中Ki67、Sox4的表达减少(P＜0.05),P27表达增加(P＜0.05),MDA-MB-231细胞的增殖减少(P＜0.05);荧光素酶试验结果显示,miR-630能够降低Sox4-3’-UTR质粒的荧光素活性(P＜0.05);相比于miR-630+空质粒组,转染过表达Sox4质粒后,MDA-MB-231细胞中Ki67表达增加(P＜0.05),P27表达减少(P＜0.05),细胞的增殖增加(P＜0.05).结论 miR-630可以通过下调Sox4从而抑制MDA-MB-231的增殖.

SOX4基因的表达与肝癌术后早期复发及其临床意义

目的 探讨SOX4基因的表达与肝癌术后早期复发及其临床意义.方法 应用免疫组化技术研究SOX4基因在30例术后早期复发肝癌、30例非术后早期复发肝癌和30例正常肝脏组织的表达.结果 SOX4基因在肝癌中的表达高于正常肝组织(41.7%v 16.7%,P<0.05),SOX4基因在术后早期复发肝癌的表达高于非术后早期复发肝癌(56.7%vs26.7%,P<0.05),SOX4基因的表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径、乙肝表面抗原、Edmonson分级无关(P>0.05).结论 SOX4基因与肝癌的术后早期复发密切相关,SOX4基因高表达有可能促进了肝癌的早期复发,并可以作为肝癌判断预后的分子指标之一.

SOX4和P53在卵巢浆液性乳头状癌中的表达及意义

目的 观察SOX4和P53在卵巢浆液性乳头状癌中的表达,初步探讨其生物学行为及临床意义.方法 应用免疫组化EnVision法检测SOX4和P53在60例卵巢浆液性乳头状癌(卵巢癌组)和10例卵巢浆液性乳头状瘤(对照组)中的表达,并分析它们之间的关系以及与肿瘤的临床分期、细胞分级和预后之间的关系.结果 卵巢癌组中SOX4的表达显著低于对照组(P＜0.01),而P53的表达则显著高于对照组(P＜0.05),但两者在肿瘤不同临床分期和细胞分级间表达差异均无统计学意义(P＞0.05).卵巢癌组中SOX4与P53的表达存在负相关(rs＝-0.28,P＜0.05);P53的表达与肿瘤的细胞分级呈正相关(rs＝0.29,P＜0.05).患者的中位生存时间为31.84个月,5年无瘤生存率为26.05%;患者的年龄、临床分期和术后化疗与预后存在明显相关(P＜0.05);而P53、SOX4的表达和肿瘤的细胞分级与预后均未见明显相关(P＞0.05).结论 P53基因突变与卵巢浆液性乳头状癌的发生密切相关,与肿瘤的细胞分级明显相关;卵巢浆液性乳头状癌中SOX4的表达下调,与P53的高表达呈负相关,SOX4参与了P53基因突变通路的调控,为进一步研究卵巢浆液性乳头状癌的发生机制提供了新思路.

TE与FEC新辅助化疗对局部晚期乳腺癌患者癌组织SOX4及CBX7表达的影响

目的:探讨TE与FEC新辅助化疗对局部晚期乳腺癌(LABC)患者癌组织SOX4及CBX7表达的影响.方法:选取2015年1月至2017年1月海南医学院第二附属医院东湖分院收治的LABC患者100例,按随机数字表法分为FEC辅助化疗组和TE辅助化疗组,每组50例.比较两组临床疗效、癌组织SOX4和CBX7表达情况以及不良反应发生率.结果:TE辅助化疗组有效率为86.00％,明显高于FEC辅助化疗组(62.00％)(P<0.05).治疗前,两组患者癌组织中SOX4 mRNA、CBX7 mRNA表达量及SOX4蛋白、CBX7蛋白表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05).治疗后,两组SOX4 mRNA及其蛋白阳性率下降,而CBX7 mRNA及其蛋白阳性率升高,且以TE辅助化疗组治疗后上述指标变化更为显著(P<0.05).两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:TE方案新辅助化疗治疗LABC的疗效显著,癌组织中SOX4表达下调及CBX7表达上调,且并未增加不良反应的发生率.

The expression of Sox4in female lung cancer patients and its clinical significance

乙型肝炎病毒对SOX4表达的影响及其机制探讨

目的 观察乙型肝炎病毒(HBV)对SOX4表达的影响,并探讨其机制.方法 RT-PCR和Western印迹法检测HepG2和HepG2.2.15细胞中SOX4 mRNA和蛋白表达的差异,将HBV感染性克隆pHBV1.3及其空载体分别与含SOX4基因启动子的报告质粒pGL3-SOX4共转染HepG2细胞,测定荧光色素酶的活性,RT-PCR和Western印迹法分别检测SOX4 mRNA和蛋白表达的情况.结果 HepG2.2.15细胞中SOX4 mRNA和蛋白的表达水平明显高于HepG2,HBV能够激活SOX4基因启动子的活性,并在mRNA和蛋白水平上调SOX4的表达.结论 HBV能够在转录和翻译水平上调SOX4的表达.

去甲肾上腺素通过PI3K/Akt信号通路上调Sox4表达促进肝癌细胞增殖

目的 探讨去甲肾上腺素对肝癌细胞自我更新能力的影响及其分子机制.方法 实时荧光定量PCR和Western blot检测去甲肾上腺素对肝癌细胞(Huh7、PLC)中CD133表达水平的影响;肿瘤细胞球形成实验以及克隆形成实验检测去甲肾上腺素和哌唑嗪对肝癌细胞自我更新能力的作用;实时荧光定量PCR和Western blot检测去甲肾上腺素(10 μmol/L)和哌唑嗪(5μmol/L)对肝癌细胞中干性相关基因表达的影响,并检测相关的信号通路.结果 去甲肾上腺素使Huh7和PLC肝癌细胞中的CD133表达升高;去甲肾上腺素处理Huh7和PLC肝癌细胞后的成球率较对照组明显上升,哌唑嗪处理后明显降低(P＜0.05);在克隆形成实验中,去甲肾上腺素处理Huh7和PLC肝癌细胞的后,克隆形成率高于哌唑嗪组和对照组(P＜0.05);与对照组和哌唑嗪组相比,去甲肾上腺素组中Sox4基因表达明显升高,同时p-Akt表达相较于哌唑嗪和对照组相比也明显上调(P＜0.05).结论 去甲肾上腺素激动肝癌细胞中α肾上腺素能受体,通过激活PI3 K/Akt信号通路上调肝癌细胞中Sox4基因表达,从而提高肝癌细胞自我更新的能力.

miR-630对三阴性乳腺癌细胞侵袭的影响及其机制研究

目的 研究miR-630在人体三阴性乳腺癌组织中的表达情况,探讨miR-630是否通过下调Sox4影响三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的侵袭.方法 收集157例行乳腺癌根治术患者癌组织标本及癌旁正常乳腺组织,其中三阴性乳腺癌36例,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组(正常乳腺组、非三阴性乳腺癌组、三阴性乳腺癌组)组织中与乳腺癌相关的miR-630、miR-21、miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达情况;蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测3组标本中细胞侵袭相关蛋白COL1 A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9的表达情况;进一步在细胞实验中,通过转染miR-630mimic或空质粒后,再转染过表达Sox4的质粒或空质粒至离体培养的细胞中,Western blot检测细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达情况,划痕实验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,利用荧光素酶实验验证Sox4是miR-630的靶基因.结果 相比于正常乳腺组,miR-630、miR-21在三阴性乳腺癌组织中的表达降低(P＜0.01);miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达在3组间差异无统计学意义(P＞0.05);相比于正常乳腺组及非三阴性乳腺癌组,三阴性乳腺癌组织中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达增多(P＜0.05).在细胞实验中,相比于空质粒组,转染miR-630 mimic后,MDA-MB-231细胞中COL1 A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达减少(P＜0.05),MDA-MB-231细胞的迁移侵袭能力减弱(P＜0.01);荧光素酶实验结果显示,miR-630能够显著降低Sox4-3’-UTR质粒的荧光素活性(P＜0.05);相比于过表达miR-630+空质粒组,转染过表达miR-630+过表达Sox4组,MDA-MB-231细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2和MMP-9表达增加(P＜0.05),细胞的迁移侵袭能力增强(P＜0.01).结论 在三阴性乳腺癌组织中,miR-630低表达;miR-630可以通过下调Sox4从而抑制MDA-MB-231的迁移和侵袭.

人 MicroRNA335的预测靶基因 CCL11 CCL26及 SOX4的鉴定

目的：验证人 MicroRNA335(hsa-miR-335)与嗜酸细胞趋化因子1(CCL11)、嗜酸细胞趋化因子3(CCL26)、SOX4的靶向调控关系。方法选择网络在线的生物信息学软件 miRanda 和 TargetScan 共同预测为 hsa-miR-335靶基因的 CCL11、CCL26、SOX4作为研究对象。构建 CCL11、CCL26、SOX4基因3′端非翻译区(3′UTR)双荧光素酶报告基因载体 pMIR-RE-PORT-CCL113′UTR、pMIR-REPORT-CCL263′UTR、pMIR-REPORT-SOX43′UTR；采用 Lipofectamine 2000将真核表达质粒pMIR-REPORT-CCL113′UTR、pMIR-REPORT-CCL263′UTR、pMIR-REPORT-SOX43′UTR、阳性对照质粒分别与 Pre-miRTM miRNA335 Precursor 或阴性对照质粒共转染到293 T7/17细胞；双荧光素酶报告基因检测系统检测 CCL11、CCL26、SOX4基因3′UTR 与 Hsa-mir-335共转染萤火虫(Firefly)和海洋腔肠(Renilla)荧光素酶活性,并与阴性对照对比。结果hsa-miR-335对SOX4的荧光表达有显著的抑制作用(P <0.01),但并不影响 CCL11、CCL26荧光素酶活性(P >0.05)。结论hsa-miR-335可靶向调控 SOX4,而对 CCL11、CCL26的表达无影响。

SOX4和E-cadherin在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究转录因子SOX4(SRY-related HMG-box 4)和EMT相关蛋白上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)和正常人口腔黏膜(NOM)中的表达及相关性,为临床的诊断和治疗提供依据.方法:利用免疫组化S-P法,检测50例口腔鳞状细胞癌、20例正常组织中SOX4和E-cadherin蛋白的表达,并与组织学分级、淋巴结转移和临床分期等生物学行为参数进行相关性分析.结果:在OSCC组织中,SOX4和E-cadherin的阳性率分别为56.0％ (28/50)和42.0％ (21/50);结合OSCC组织的临床病理特征发现,SOX4和E-cadherin与口腔鳞癌的病理分级、临床分期和是否有淋巴结转移密切相关,差异具有统计学意义(P ＜0.05);SOX4的表达与E-cadherin的表达呈负相关,差异具有统计学意义(r=-0.552,P＜0.05).结论:SOX4和E-cadherin的异常表达可能与口腔鳞癌的发生、发展、侵袭和转移密切相关,二者的联合检测可为口腔鳞癌的早期诊断、治疗和预后提供参考.

SOX4抑制凋亡介导食管癌顺铂耐药的实验研究

目的:探讨SOX4与食管癌顺铂耐药的关系及其耐药机制.方法:采用递增药物浓度、间歇冲击作用的方法构建顺铂食管癌耐药细胞株KYSE30/DDP;流式细胞仪检测KYSE30及KYSE30/DDP细胞凋亡情况;Western blot检测SOX4及凋亡相关指标在KYSE30及KYSE30/DDP细胞中的变化;CCK8检测干扰SOX4对KYSE30和KYSE30/DDP细胞顺铂敏感度的影响;流式细胞仪及Western blot检测干扰SOX4对KYSE30/DDP细胞凋亡及相关指标的影响.结果:成功构建了生长状态良好的KYSE30/DDP细胞株,其耐药指数为4.1;KYSE30/DDP细胞凋亡较其亲本细胞KYSE30明显降低(t=-8.414,P<0.05);Western blot结果显示,SOX4在顺铂耐药细胞KYSE30/DDP中的表达高于其亲本细胞KYSE30,KYSE30/DDP细胞中凋亡相关指标Cleaved caspase-3及Cleaved PARP表达低于KYSE30;在KYSE30/DDP细胞中干扰SOX4,其对顺铂的敏感性及凋亡细胞增加(F=625.423,P<0.05),凋亡相关指标Cleaved caspase-3及Cleaved PARP表达增加.结论:SOX4在食管癌顺铂耐药细胞KYSE30/DDP中高表达,并可通过抑制凋亡介导食管癌顺铂耐药.

SOX4对非小细胞肺癌细胞A549的顺铂耐药作用的影响

背景与目的 肺癌是严重的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌发病率在肺癌中居首位.部分患者对顺铂耐受是导致化疗失败的主要原因.SOX4是转录调节因子,在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用,通过调控β-catenin的表达对Wnt信号通路进行调控.本研究旨在探讨SOX4对非小细胞肺癌细胞A549的顺铂耐药作用的影响.方法 体外诱导法建立顺铂耐药的肺癌细胞株A549/DDP,CCK8法检测A549及A549/DDP细胞对顺铂的耐药性.绘制A549与A549/DDP细胞生长曲线.Western blot检测耐药细胞株中SOX4的蛋白表达水平.CCK8法检测敲减SOX4后耐药细胞株A549/DDP对顺铂耐药性.实时定量PCR和免疫印迹法检测敲减SOX4后A549/DPP细胞中β-catenin和Survivin蛋白的表达.结果 成功构建非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP,其耐药性是亲本细胞的13.7倍,差异有统计学意义(P<0.001).生长曲线显示耐药细胞株与亲本细胞增殖速度没有统计学差异(P<0.05);与A549细胞相比,耐药细胞A549/DDP细胞中SOX4的表达显著增高(P<0.001).敲减SOX4后,A549/DDP细胞的耐药性显著降低;敲减SOX4后,A549/DDP细胞中β-catenin和Survivin的mRNA和蛋白表达水平显著降低.结论 SOX4的表达水平影响非小细胞肺癌细胞A549对顺铂的耐药性.

SOX4、BRMS-1等基因mRNA在乳腺癌中的表达的关系

目的 比较癌组织与正常组织中SOX4、BRMS-1、CYTB、P53表达的差异,了解乳腺癌与表达的关系.方法 通过SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中SOX4、BRMS-1的含量.结果 (1) SOX4和CYTB在乳腺癌组织中表达升高(P＜0.05),而BRMS-1在乳腺癌组织中表达降低(P＜0.05);(2)在癌组织中SOX4和BRMS-1的表达存在正相关关系(r=0.57,P＜0.05);在正常组织中SOX4和CYTB的表达存在负相关关系(r=-0.64,P＜0.05).结论 SOX4在乳腺癌组织中处于高表达状态,并与BRMS-1和CYTB基因表达有关.

转录因子C/EBPα和SOX4在白血病中的研究进展

白血病是常见的恶肿瘤,药物治疗是其传统治疗方法.由于基因突变导致耐药使其发病率和死亡率逐年升高.近来针对基因靶向治疗为白血病开辟了道路,在临床上有着良好应用前景.C/EBPα基因在调节细胞增殖与分化平衡中至关重.SOX4主参与胚胎发育、分化及器宫形成.研究发现在白血病中,C/EBPα表达降低,SOX4表达升高,且SOX4是C/EBPα下游靶基因.C/EBPα和SOX4能够与多种因子相互作用参与白血病发病,且C/EBPα通过多种方式抑制SOX4表达,这可能为白血病靶向治疗以及延缓白血病发展进程提出了新思路.本文就两者在白血病发生发展中的机制及其关系作一综述.

miR-369靶向调节SOX4表达对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:观察微小RNA(miRNA,miR)-369通过调节SOX4对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响.方法:miR-369体外模拟物(mimics)转染,构建miR-369上调表达模型,以转染阴性对照链为对照组,CCK-8法和流式细胞技术分别检测细胞增殖率和凋亡率变化;Real-time PCR法检测SOX4 mRNA表达水平;双荧光素酶活检检测证实miR-369与SOX4相互作用关系;Western-blot法检测不同组间SOX4及Bcl-2家族相关蛋白表达水平变化.结果:miR-369 mimics转染后,MG-63细胞中miR-369表达水平较对照组明显提高(P=0.009);miR-369 mimic转染后24 h及48 h后细胞相对存活率均明显低于对照组;流式细胞仪结果显示mimic组细胞凋亡率较对照组明显提高(P=0.031);Real-time PCR和Western blot实验分别证实miR-369 mimic转染后,SOX4在mRNA和蛋白水平表达均明显抑制;而Bcl-2家族相关蛋白表达水平发生明显变化.结论:miR-369表达上调可以抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡,这些作用与靶向下调SOX4表达有关.

SOX4在肿瘤中的研究进展

SOX4属于 SOX 转录因子家族，对胚胎发育过程中心脏的形成、T／B 淋巴细胞的发育和分化、胰腺的发育、骨骼的发育等具有重要的作用。近年来，越来越多的研究表明 SOX4在人类许多肿瘤中表达升高并且与肿瘤的发展密切相关。在不同类型肿瘤或肿瘤的不同阶段，SOX4通过参与肿瘤细胞的增殖、凋亡或分化的过程从而具有双重的作用：促癌作用和抑癌作用。产生这种差异的具体机制尚不清楚，因此深入研究SOX4基因与肿瘤的关系对肿瘤的治疗和预后判断具有重要意义。

转录因子SOX4及C／EBPα在慢性粒细胞白血病中的表达及其意义

目的：研究转录因子SOX4和C／EBPα在慢性粒细胞白血病（CML）患者中的表达水平及其临床意义。方法收集68例CML患者骨髓标本，包括57例初诊患者及11例应用伊马替尼治疗患者，以30名健康体检者的外周血单个核细胞作为健康对照。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot技术检测SOX4和C／EBPα的表达情况，分析两者表达水平的相关性及应用伊马替尼对二者表达水平的影响。结果与健康对照组相比，SOX4 mRNA在初诊CML患者中的表达水平升高（6.5455±1.4952比0.0596±0.0188，t＝3.139，P＝0.0023），而C／EBPα表达水平降低（0.2388±0.0338比0.8105±0.0562，t＝9.240，P＜0.0001）。两者的表达水平与初诊患者的年龄、性别、白细胞计数和bcr-abl均无相关性（均P＞0.05）。伊马替尼治疗的11例患者中，5例治疗后SOX4表达水平较治疗前降低（0.1206±0.0449比0.5579±0.1448，t＝2.885，P＝0.0204），C／EBPα表达水平升高（0.3303±0.0424比0.1505±0.0465，t＝2.855，P＝0.0213）；6例治疗中发生急变，其SOX4表达水平高于治疗前（0.4699±0.1230比0.0502±0.0366，t＝2.370，P＝0.0393），C／EBPα表达水平降低（0.1979±0.0647比0.3787±0.0429，t＝2.327，P＝0.0423）。初诊CML患者SOX4与C／EBPαmRNA的表达水平呈负相关（r＝-0.5546，P＝0.0028）。结论初诊CML患者中SOX4表达水平明显升高，而C／EBPα表达水平明显降低，两者表达呈负相关；伊马替尼治疗的急变患者SOX4表达水平比治疗前升高，而C／EBPα比治疗前降低。提示C／EBPα-SOX4信号轴可能参与了CML的发生、发展，且其与预后相关。 SOX4为CML的靶向治疗提供了一个新方向。