首页 > 文献资料
-
大黄素和叠氮胸苷对Egr-1 siRNA转染的KG-1a细胞的增殖和凋亡的影响
目的:本研究旨在观察Egr-1基因KG-1a细胞转染后,大黄素联合AZT对KG-1a细胞增殖的影响及其作用机理.方法:采用电转法瞬时转染Egr-1 siRNA,细胞分为空白对照、非特异对照(转染非特异序列)和目的siR-NA(转染Egr-1 siRNA)3组.流式细胞术测定转染效率,MTT法检测各组细胞增殖率,实时荧光定量PCR检测Egr-1基因的表达水平.各组细胞经大黄素10 μmol/L或/和AZT 3200、1600 μmol/L作用后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:电转染Egr-1 siRNA转染效率可达59.21％以上,目的siRNA组与空白对照和非特异性对照组相比,细胞增殖明显增加,Egr-1 mRNA的表达水平显著下降(P＜0.001);大黄素和AZT联合对空白对照和非特异性对照组细胞的增殖抑制均呈现协同作用,联合作用指数(CI)均小于1,而对目的siRNA组细胞的CI大于1,增殖抑制作用与单用AZT相似(P＞0.05).目的siRNA组细胞凋亡率较空白对照降低(P ＜0.001).结论:大黄素联合AZT协同抑制KG-1a细胞增殖和促进凋亡的作用与Egr-1基因有关.
-
Egr-1基因表达及其在射线诱导的肝癌细胞凋亡中的作用
目的:研究Egr-1基因的表达在放射诱导的细胞凋亡中的作用.方法:选择肝癌细胞系HepG2,SMMC-7721和正常肝细胞系HL-7702培养;培养细胞接受4Gy X射线照射;收获受照前和受照后1,2,4,6,12和24 h的细胞,采用荧光定量PCR(FQPCR)检测0,1,2和4 h Egr-1基因的表达,采用流式细胞术(FCM)检测0,6,12和24 h细胞周期和细胞凋亡.结果:随HepG2,SMMC-7721和HL-7702在4Gy X射线照射后1 h即诱导了Egr-1基因表达增高,4 h均未达峰值,分别为△EgrHepG2(12.9629±1.0649)、△Egr7702(0.0096±0.0008)和△Egr7721(0.0017±0.0003),HepG2显著高于HL-7702和SMMC-7721(P＜0.01).照射后6 h射线诱导的3株细胞凋亡均不明显,但在12 h均诱导了明显的细胞凋亡,而且HepG2(41.16%)和HL-7702(27.45%)已达峰值;SMMC-7721诱导的细胞凋亡水平较低,24 h仅为24.94%,且未达峰值.在射线诱导的细胞周期变化中,HepG2和SMMC-7721S期的变化与细胞凋亡变化在6-12 h走势相反.结论:在HepG2,SMMC-7721和HL-7702细胞中,射线通过诱导Egr-1基因表达而诱导了细胞周期和细胞凋亡的变化;射线诱导的Egr-1基因表达水平可能与射线诱导的细胞凋亡成正相关;S期肿瘤细胞可能易发生射线诱导的细胞凋亡.
-
中国人群中Egr-1基因多态性与胶质瘤的相关性研究
目的 分析我国人群中Egr-1基因在胶质瘤患者中多态性的表达.方法 选取231例胶质瘤患者为病例组,121例非肿瘤患者为对照组,应用Taqman技术检测两组患者Egr-1基因多态性,应用SPSS 15.0统计软件对Taqman技术成功检测分型结果进行统计学处理,分析该位点多态性.结果 统计学分析结果显示:病例组中T/T+C/C基因型频率、T等位基因频率分别为29.9%、47.6%,均小于对照组的37.2%、52.1%,但差异均无统计学意义(P>0.05).结论 Egr-1基因多态性与胶质瘤的发病风险之间无明显关联.
-
Egr-1基因与肿瘤及放射治疗研究进展
目的:总结关于早期生长反应-1(Egr-1)基因在肿瘤和放射治疗中的研究进展.方法:应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“Egr-1基因、肿瘤、放射治疗、细胞凋亡”为关键词,检索1993-01-2012-03的相关文献,共检索到英文文献691篇,中文文献129篇.纳入标准:1)Egr-1基因的结构；2)Egr-1基因在肿瘤中的表达；3)Egr-1基因对肿瘤的作用；4)Egr-1基因与放射治疗.根据纳入标准符合分析文献41篇.结果:Egr-1基因的表达存在于绝大多数的肿瘤中,对肿瘤的发生和发展具有抑制或促进作用；肿瘤细胞放射后可诱导Egr-1基因表达,并可引起下游基因表达及细胞凋亡；放射后的Egr-1基因表达水平与肿瘤细胞凋亡有关.结论:Egr-1基因在肿瘤中具有重要作用,对其不断深入研究可为肿瘤的治疗尤其是放疗提供更多新的依据.
-
重组质粒p-Egr-p16的构建及在SMMC-7721细胞中的辐射诱导表达
目的构建重组质粒p-Egr-p16并探讨在SMMC-7721细胞中的辐射诱导表达及抗肝癌的作用.方法用双酶切、粘端连接的方法构建了含有辐射诱导特性的早期反应因子Egr-1和p16的p-Egr-p16的质粒载体,以脂质体介导的方法,将重组载体导入人肝癌SMMC-7721细胞,采用RT-PCR的方法检测了不同剂量60Co γ射线照射转染后的人肝癌细胞p16基因转录水平的变化和2 Gy照射后不同时间的p16基因转录水平的变化.结果经研究证实,1～6 Gy照射后p16的转录水平高于对照,在2～4 Gy照射后达到峰值,2 Gy照射后不同时间均有所增高,在照射后24 h增高明显.结论2 Gy60Coγ射线照射后p16基因转录水平在2～24 h呈现时间依赖性的增高,在24 h增高明显,48和72 h逐渐降低,但仍高于对照组.提示60C0 γ射线可激活早期反应生长因子Egr-1,从而介导其下游基因p16的表达增强.
-
电离辐射调控脂质体介导的p16基因在HeLa细胞中的表达
目的探讨不同剂量γ射线照射后诱导脂质体介导的p16基因在HeLa细胞中的表达及抗癌作用.方法用脂质体Lipofectamin介导重组质粒Egr-p16转染人HeLa细胞,采用RT-PCR的方法检测了60Co γ射线照射转染后的人HeLa细胞剂量效应和时程变化,用细胞计数检测细胞增殖的变化,用流式细胞术检测细胞周期的变化.结果研究证实0.5～8 Gy照射后p16的转录水平高于对照,在2～4Gy照射后达到峰值,2Gy照射后2～24h高于对照组,在照射后4 h达到峰值,然后逐渐下降.细胞生长曲线显示体外稳定转染联合60Co γ射线照射对HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用.细胞周期变化显示转染后的HeLa细胞经过照射后G0/G1期比例呈现剂量依赖性的下降,而S期则出现剂量依赖性的增加,出现明显的S期阻滞,G2/M期在2Gy出现明显的阻滞,在5和10Gy时逐渐下降,但是仍然高于对照组.结论60Co γ射线可诱导转染的HeLa细胞p16转录水平的增强,同时在细胞增殖上出现明显的变化.
-
辐射诱导pEgr-sHemopexin在MCF-7细胞的表达和侵袭能力及人脐静脉内皮细胞小管形成的影响
将治疗基因克隆于可被辐射诱导激活的Egr-1启动子下游,利用Egr-1基因的调控序列可被辐射刺激的特点,形成基因和射线对肿瘤的双重杀伤作用,是近年来放射治疗研究的热点[1-2].下游目的基因的选择,对提高肿瘤基因放射治疗疗效至关重要.基质金属蛋白酶2(MMP-2)C端血色素结合蛋白样片段PEX可阻断血管生成和细胞外基质的降解,从而抑制肿瘤的生长、侵袭和转移[3-5].本研究根据Egr-1基因启动的辐射激活特性和PEX的抗血管生成和阻断细胞外基质的降解作用,将肿瘤抑制基因治疗和放射治疗二者联合起来,在构建pEgr-sHemopexin(pEgr-sPEX)重组表达质粒的基础上,观察体外pEgr-sPEX重组质粒辐射诱导表达特性,检测辐射诱导pEgr-sPEX对MCF-7细胞侵袭能力及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成的影响,探讨抑癌作用.
-
宫颈癌患者超声造影特征及与即刻早期基因表达和病理指标的相关性分析
目的 探讨宫颈癌超声造影特征及与即刻早期基因(Cyr61、EGR-1)表达和病理指标的相关性,为宫颈癌早期无创性筛查方案提供参考依据.方法 收集2016年2月-2018年4月徐州市中心医院妇科收治的宫颈癌患者80例.行超声造影检查绘制时间-信号曲线,得出峰值强度和达峰时间;宫腔镜下获取宫颈癌组织和癌旁正常组织,RT-PCR检测Cyr61、EGR-1mRNA表达水平;收集有无宫颈肿物、肿块大小、淋巴结转移、病理分级情况,分析超声造影特征与Cyr61、EGR-1基因和病理指标的相关性.结果 宫颈癌组织Cyr61、EGR-1 mRNA的相对表达量明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(均P＜0.05);以宫颈癌组织Cyr61、EGR-1 mRNA相对表达量的中位数为界值,将80例宫颈癌患者分为Cyr61基因低表达58例,高表达22例;EGR-1基因低表达62例,高表达18例.宫颈癌病灶组织峰值强度明显高于癌旁正常组织的,差异有统计学意义(P＜0.01);宫颈癌病灶组织达峰时间明显短于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05).宫颈癌病灶组织的峰值强度、达峰时间在不同Cyr61、EGR-1基因表达水平之间差异有统计意义(均P＜0.05);宫颈有无肿物、肿块大小、是否存在淋巴结转移、病理分级在不同Cyr61、EGR-1基因表达水平之间差异有统计意义(均P＜0.05).其中Cyr61、EGR-1基因低表达的患者峰值强度＞75.60％、达峰时间≤32.54 s、有宫颈肿物、肿块大小＞4 cm、有淋巴结转移、病理分级为低分化的比例明显高于Cyr61、EGR-1基因高表达的患者,差异有统计学意义(均P＜0.05).Cyr61、EGR-1基因表达水平在不同宫颈癌超声造影增强程度和增强模式之间差异有统计学意义(P＜0.05);肿块大小、淋巴结转移、病理分级在不同宫颈癌超声造影增强程度和增强模式之间差异无统计学意义(均P＞0.05).其中宫颈癌超声造影增强程度为等/低的患者Cyr61、EGR-1基因高表达的比例明显高于超声造影增强程度为高的患者,增强模式为均匀的患者Cyr61、EGR-1基因高表达的比例明显高于增强模式为非均匀的患者,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 超声造影指标与Cyr61、EGR-1基因表达明显相关,而Cyr61、EGR-1基因表达与宫颈癌临床病理指标相关;超声造影与Cyr61、EGR-1基因联合检测有望成为宫颈癌早期无创性诊断和对治疗预后评估的有效方案.
-
早期生长反应基因-1的表达与射线诱导胶质母细胞瘤凋亡的相关研究
目的 研究Egr-1基因在胶质母细胞瘤细胞放射前后的表达变化和放射敏感性的研究.方法 培养人恶性神经胶质母细胞瘤(GBM)细胞系T98G,分别提取4Gy剂量射线照射前及照射后不同时间点细胞的总RNA,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测Egr-1表达水平;.收获4Gy剂量射线照射后0、4、8、12、24和36h的细胞,采用细胞增殖抑制实验,及流式细胞术进行细胞周期和细胞凋亡检测.结果 T98G细胞在照射后Egr-1表达水平与对照组比较有显著差异(P =0.017);T98G细胞在射线照射后的生长抑制率与对照组比较有显著差异(P=0.026);射线照射后0、4、8、12 h细胞S期比例逐渐减低,G0/G1期比例逐渐升高,并在照射后12 h达到峰值,G2/M期无明显变化,照射后12、24、36 h细胞S期比例逐渐升高,G0/G1期比例逐渐减低,G2/M期无明显变化,各组之间相比,差异有统计学意义(P=0.035).射线照射后0、4、8、12h细胞凋亡率逐渐升高,并在照射后12 h达到峰值,照射后12、24、36 h细胞凋亡率逐渐降低,各组之间相比,差异有统计学意义(P =0.019).结论 通过射线诱导Egr-1基因表达而引起细胞周期和细胞凋亡的变化;射线诱导的Egr-1基因表达水平与射线诱导的细胞凋亡成正相关.
-
小鼠Egr-1基因启动子的克隆及其辐射诱导基因表达
目的:研究克隆小鼠Egr-1基因启动子及其辐射诱导基因表达特性.方法:用合成的一对引物,以BALB/c小鼠基因组为模板,扩增出449bp大小含6个CC(A/T)6GG基序的序列,通过亚克隆技术分别将其插入pBluescriptⅡ测序载体和pHGFP-S65T报告载体中.利用测序载体对克隆的DNA序列进行分析,报告质粒载体经LipofecTAMINE脂质体介导转染COS-7细胞后给予γ射线照射或H2O2处理,用流式细胞仪观察GFP表达阳性细胞数.结果:PCR扩增的DNA片段经测序证实与文献报道完全一致,报告质粒转细胞实验结果提示,照射或H2O2处理可经Egr-1基因启动子而诱导GFP(绿色荧光蛋白)的表达.结论:成功地克隆了Egr-1基因启动子,经照射能诱导报告基因GFP的表达,为今后的进一步深入研究奠定了基础.
-
Egr-1基因辐射诱导表达的研究
Egr-1基因是"立即早期基因",是基因家族中的一个,同类的还有c-jun、NF-KB、c-fos、Egr-2、Egr-3、Egr-4等.Slaimizu N 等人于1992年在研究人HL-60细胞分化时首次发现人Egr-1基因[1].
-
宫颈癌超声造影的诊断价值及与Egr-1基因表达的相关性
目的 探讨宫颈癌患者的超声造影特征及其与Egr-1基因表达的相关性.方法 分析40例病理确诊为宫颈癌患者的经腹超声造影特征,观察肿瘤的形态结构、血流信号分布及多普勒血流特征,对术后的肿瘤组织应用QRT-PCR检测Egr-1基因的表达,分析超声造影表现与Egr-1基因表达之间的相关性.结果 肿瘤组织的峰值强度(PI)为(75.71±2.13)显著高于正常组织(58.12±1.92),差异具有统计学意义(P＜0.001).肿瘤组织的病灶达峰时间(TTP)为(32.43±1.76)s显著短于正常组织(40.41±2.24)s,差异具有统计学意义(P=0.003);Egr-1基因在宫颈癌组织标本中的表达明显低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P＜0.001);Egr-1基因的表达与宫颈有无肿物,肿块的大小(≤4 cm)、淋巴结转移及病理分级相关(P均＜0.05);宫颈癌造影增强强度与Egr-1表达相关,与肿瘤大小、淋巴结转移及病理分级无明显相关关系(P＞0.05);非均匀性增强在Egr-1低表达患者中的比率明显高于Egr-1高表达者,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 宫颈癌超声造影特征可显示其与Egr-1基因表达的相关性,有助于无创性评估宫颈癌的预后评估.
