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重组质粒p-Egr-p16的构建及在SMMC-7721细胞中的辐射诱导表达
目的构建重组质粒p-Egr-p16并探讨在SMMC-7721细胞中的辐射诱导表达及抗肝癌的作用.方法用双酶切、粘端连接的方法构建了含有辐射诱导特性的早期反应因子Egr-1和p16的p-Egr-p16的质粒载体,以脂质体介导的方法,将重组载体导入人肝癌SMMC-7721细胞,采用RT-PCR的方法检测了不同剂量60Co γ射线照射转染后的人肝癌细胞p16基因转录水平的变化和2 Gy照射后不同时间的p16基因转录水平的变化.结果经研究证实,1～6 Gy照射后p16的转录水平高于对照,在2～4 Gy照射后达到峰值,2 Gy照射后不同时间均有所增高,在照射后24 h增高明显.结论2 Gy60Coγ射线照射后p16基因转录水平在2～24 h呈现时间依赖性的增高,在24 h增高明显,48和72 h逐渐降低,但仍高于对照组.提示60C0 γ射线可激活早期反应生长因子Egr-1,从而介导其下游基因p16的表达增强.
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电离辐射调控脂质体介导的p16基因在HeLa细胞中的表达
目的探讨不同剂量γ射线照射后诱导脂质体介导的p16基因在HeLa细胞中的表达及抗癌作用.方法用脂质体Lipofectamin介导重组质粒Egr-p16转染人HeLa细胞,采用RT-PCR的方法检测了60Co γ射线照射转染后的人HeLa细胞剂量效应和时程变化,用细胞计数检测细胞增殖的变化,用流式细胞术检测细胞周期的变化.结果研究证实0.5～8 Gy照射后p16的转录水平高于对照,在2～4Gy照射后达到峰值,2Gy照射后2～24h高于对照组,在照射后4 h达到峰值,然后逐渐下降.细胞生长曲线显示体外稳定转染联合60Co γ射线照射对HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用.细胞周期变化显示转染后的HeLa细胞经过照射后G0/G1期比例呈现剂量依赖性的下降,而S期则出现剂量依赖性的增加,出现明显的S期阻滞,G2/M期在2Gy出现明显的阻滞,在5和10Gy时逐渐下降,但是仍然高于对照组.结论60Co γ射线可诱导转染的HeLa细胞p16转录水平的增强,同时在细胞增殖上出现明显的变化.
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抑癌基因p16在成釉细胞瘤及牙源性角化囊肿中表达的研究
目的研究成釉细胞瘤(Ameloblastoma,AB)中p16蛋白及p16 mRNA表达,探讨其生物学意义.方法应用免疫组化方法(SP)检测40例AB及牙源性角化囊肿(Odontogenic keratocyst,OKC)7例,基底细胞癌(Basal cell carcinoma,BCC)8例p16蛋白的表达,同时用原位杂交法检测p16 mRNA在20例AB中表达.结果 40例AB,7例OKC,8例BCC,p16蛋白缺失表达分别为70%,85.7%,100%.p16 mRNA缺失率80.5%,与蛋白缺失表达一致率53.8%.结论 (1)AB与OKC的发生与p16蛋白缺失有关.(2)AB中原发与复发比,原发与恶变比p16蛋白缺失率不同(P＜0.05).(3)AB及OKC,BCC三种不同病变经统计学处理P＞0.05,未见明显相关性.(4)在AB中p16蛋白与p16 mRNA表达P＜0.05,具有一定相关性.
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应用原位杂交技术检测鼻咽癌p16 mRNA基因表达研究
目的研究p16 mRNA在鼻咽癌组织中的表达情况,探讨p16 mRNA与鼻咽癌生物学行为的关系. 方法应用生物素标记RNA探计的原位杂交技术,对20例散发性鼻咽癌(NPC)患者及3个NPC家系中NPC患者的组织标本进行mRNA检测,探讨p16mRNA的异常表达在NPC的发生发展中的作用,以20例鼻咽炎患者的鼻咽部组织做为对照. 结果20例NPC标本原位杂交阳性8例,p16mRNA阳性表达为40%(8/20),3个高发家系的NPC标本无阳性表达,20例对照(鼻咽炎患者的标本)全部有p16mRNA阳性表达.结论p16mRNA在鼻咽癌组织中呈低表达,提示p16基因作为一种重要的抑癌基因,它的突变或缺失可能与鼻咽癌的发生发展及恶性行为起一定的作用.
