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特异性PCR方法鉴别蛇胆汁及其伪品
建立一种简便准确的蛇胆汁药材DNA分子鉴别方法.测试并优化胆汁药材基因组DNA提取方法,并针对蛇类的COⅠ,Cyt b,16S基因序列设计4对蛇类鉴别引物,根据特异性和扩增效率筛选佳引物.使用其中1对引物Cytb1,20种蛇胆汁DNA均能扩增得到约400 bp的条带,同样条件下7种其他动物胆汁DNA均无扩增条带.该方法特异性强,准确度高,重复性好,为加强控制蛇胆汁药材质量提供了有效方法.
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中药穿山甲的DNA分子鉴定研究
对中药穿山甲及其混伪品进行分子鉴定研究,建立一个稳定、准确的位点特异性PCR鉴别体系.收集整理穿山甲属动物组织样本及NCBI序列,提取基因组总DNA,PCR扩增Cytb和COⅠ序列并测序,通过BioEdit软件进行序列比对,应用MEGA6.0构建序列系统聚类树,并根据序列特异位点设计和筛选中华穿山甲特异性鉴别引物,并对PCR反应条件进行退火温度、DNA模板上样量和PCR循环数等条件的适应性考查.结果表明:Cytb和COⅠ序列均能有效对穿山甲正、伪品进行聚类分析;在位点特异性PCR反应体系中,当退火温度为55~60℃,DNA模板量3~100ng,PCR扩增35个循环时,基于COⅠ序列的引物COⅠ-S10/A5能使中华穿山甲扩增出约400bp的特异性条带,而其他穿山甲品种扩增结果为阴性.该文基于COⅠ序列的引物COⅠ-S10/A5能实现中华穿山甲与伪品印度穿山甲、马来穿山甲、树穿山甲等的准确、稳定鉴别.
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线粒体DNA标记在动物类药材分子鉴定中的应用进展
动物类中药材是中华医药宝库中重要的组成部分,药用历史悠久,功效显著.随着野生动物资源的破坏和日益增长的市场需求,动物类药物中混伪品掺杂现象时有发生,为其临床应用带来了安全隐患.线粒体DNA因其严格的母系遗传特征和丰富的遗传多样性,被广泛应用于动物群体遗传、谱系生物地理和系统发育等研究领域.近年来,线粒体DNA标记在动物类药材分子鉴定中的应用日益广泛,并取得了丰硕的成果,为动物类药物的质量控制提供了技术保障.对COI、Cytb、12S rRNA等线粒体DNA标记在动物类药材分子鉴定中的应用现状进行总结,结合课题组前期的研究结果,对线粒体DNA分子标记技术在动物类药材鉴定中的后续应用开发进行了展望,以期为我国药用动物资源的合理利用提供参考和借鉴.
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SOX4、BRMS-1等基因mRNA在乳腺癌中的表达的关系
目的 比较癌组织与正常组织中SOX4、BRMS-1、CYTB、P53表达的差异,了解乳腺癌与表达的关系.方法 通过SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中SOX4、BRMS-1的含量.结果 (1) SOX4和CYTB在乳腺癌组织中表达升高(P＜0.05),而BRMS-1在乳腺癌组织中表达降低(P＜0.05);(2)在癌组织中SOX4和BRMS-1的表达存在正相关关系(r=0.57,P＜0.05);在正常组织中SOX4和CYTB的表达存在负相关关系(r=-0.64,P＜0.05).结论 SOX4在乳腺癌组织中处于高表达状态,并与BRMS-1和CYTB基因表达有关.
