首页 > 文献资料
-
小鼠脊髓发育与神经细胞凋亡
目的：通过观察小鼠脊髓发育过程中神经元的增殖、分化与凋亡，探讨小鼠脊髓的发育过程及其调控机制。方法取妊娠第18天（E18）至生后第90天（P90）小鼠173只，用5’-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）技术标记增殖的神经干细胞，免疫荧光法（DCX，NeuN和Caspase8）标记脊髓中的新生神经元，成熟神经元和凋亡细胞。结果在胚胎与出生早期，BrdU阳性细胞均匀分布于小鼠脊髓各部位。随着小鼠日龄的增加，脊髓神经干细胞可以分化为神经胶质细胞与神经元。其后，位于神经管侧脑室的新生神经元向中间层（未来的灰质）迁移，逐渐分化为成熟神经元。后，神经元向脊髓中央聚集，灰质呈现典型的“H”型。随着神经元的分化，一些凋亡神经细胞出现在新生神经元与成熟神经元中。荧光双标显示，大部分的凋亡神经细胞都是新生神经元，说明神经元凋亡常常发生在新生神经元中。统计学分析表明，DCX、NeuN、Caspase-8标记的阳性细胞数均随小鼠日龄的增加而减少，说明神经元的分化和凋亡在脊髓的发育过程中逐渐减少。结论在脊髓的发育过程中存在着神经元的增殖、分化与凋亡。三者相互协同，共同调节脊髓的形成与发育。
-
神经干细胞及其对脑缺血损伤的潜在治疗作用
新神经元在成年哺乳动物脑的特定区域出现,起源于海马齿状回和室下带的神经干细胞.神经干细胞可以分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞.采用双标技术可以检测新神经元的发生.神经干细胞具有自我更新和多方向分化的潜能,受内在因素和外部环境的调控.证据显示成年人脑海马齿状回的颗粒细胞产生新神经元,恒河猴的室下带产生新神经元,迁移到新皮质区分化为成熟神经元.人的神经干细胞已从胚胎前脑获得.缺血损伤可以激活齿状回的神经干细胞增殖.激活或移植神经干细胞对缺血损伤的脑组织具有潜在的治疗作用.
-
大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导向神经元分化
目的探讨大鼠中胚层来源的骨髓问充质干细胞(MSCs),在诱导因子的诱导下体外向神经元方向分化的能力.方法贴壁法分离的MSCs,用NIM诱导,相差显微镜观察细胞形态变化,神经元特异抗体NeuN,MAP2,NSE免疫组化染色鉴定转化情况.结果在诱导后30～40min即开始形态变化,形成神经元样的细胞,免疫组化染色神经元样细胞表达NeuN(50.83%±3.43%),NSE(59.83%±9.24%)和MAP-2(45.17%±8.42%).结论MSCs在体外诱导下可以分化为神经元样的细胞,表明它是有别于一般成体干细胞的多能干细胞.
-
黄芩苷对体外培养神经干细胞分化的影响
[目的]探索黄芩苷对体外神经干细胞分化的影响.[方法]培养胎鼠脑皮质神经干细胞,应用细胞免疫化学方法,以神经元特异性的微管相关蛋白-2(MAP-2)和星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)为标记,对分化后的神经干细胞进行区分,评价黄芩苷对神经干细胞分化的影响.[结果]黄芩苷可以促进神经干细胞向神经元分化,其中高剂量组明显优于对照组.[结论]黄芩苷具有促进神经干细胞分化为神经元的作用.
-
异氟醚麻醉抑制海马齿状回神经干细胞的增殖及分化
背景:异氟醚由于起效快、苏醒迅速、无积蓄等优点在儿科手术也逐渐被推广使用,然而其安全性还需要进一步观察.目的:观察异氟醚麻醉对新生大鼠海马齿状回神经干细胞增殖及神经元分化的影响.方法:将大鼠随机分为异氟醚组和对照组,分别予以异氟醚吸入麻醉和仅吸入空气.分别在给药前及停止给约后对动物予以5-溴脱氧球苷(BrdU)腹腔注射,第2次注射后24 h处死大鼠,获得脑组织,检测BrdU+和脑内神经源性分化因子表达情况.结果与结论:停止麻醉处理之后进行血糖以及动脉血气检测,发现异氟醚组大鼠 PaCO2出现轻度上升,pH值出现轻微下降,而PaO2、BE、SaO2以及血糖水平则均未出现改变.与对照组相比,异氟醚组经异氟醚麻醉之后,未出现明显的缺氧表现,包括紫绀和呼吸抑制等.大鼠海马齿状回神经干细胞大多分布在门区,异氟醚组的BrdU阳性细胞数少于对照组(P < 0.05).两组大鼠海马齿状回存在大量新生细胞表达NeuroD,门区NeuroD+/BrdU+阳性细胞数明显高于颗粒细胞下区,且异氟醚组显著高于对照组(P < 0.05).结果证实,异氟醚麻醉会对新生大鼠海马齿状回神经干细胞增殖及神经元分化产生一定的影响,抑制其增殖,并促进其神经元分化.
-
异氟醚对新生大鼠海马神经干细胞增殖及分化的影响
背景：异氟醚麻醉药物会对神经系统产生一定的影响，研究表明其可能是通过影响神经干细胞功能或形态而引起神经功能障碍。目的：探讨异氟醚对大鼠海马神经干细胞增殖和分化的影响。方法：培养新生7 d SD大鼠海马神经干细胞并进行诱导分化，取传至第3代细胞，将其分为2组：异氟醚组通入2.8%异氟醚和体积分数为5%CO2，体积分数为95%O2的混合气体；对照组仅通入体积分数为5%CO2，体积分数为95%O2的混合气体。干预6 h后，再常规培养2 h。抗BrdU单克隆抗体进行免疫荧光染色检测细胞增殖情况，Western blot法测定神经元标志物β3-微管蛋白和胶质细胞标志物GFAP蛋白的表达。结果与结论：与对照组相比，异氟醚组BrdU阳性细胞数目明显减少，说明异氟烷抑制了神经干细胞增殖；与对照组相比，异氟醚组 GFAP 表达水平上调，β3-微管蛋白表达水平无明显改变，说明异氟烷可促进神经干细胞更多地向星形胶质细胞分化。
-
星形胶质细胞对PC12细胞的分化及突触素和生长相关蛋白43表达的影响
目的:体外观察星形胶质细胞对PC12细胞向神经元分化的作用,以及对PC12细胞突触素和生长相关蛋白43(GAP-43)表达的影响,探讨星形胶质细胞促进非神经元细胞形成神经突触的可能性.方法:采用PC12细胞与新生大鼠皮层组织来源的星形胶质细胞共同孵育,分为共育组和对照组,应用免疫荧光技术检测星形胶质细胞对PC12细胞分化、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、突触素和GAP-43表达的影响.结果:共育组培养4 d,大部分PC12细胞已具备神经元形态,PC12有突细胞/总细胞数目比率、突起长度和突触数目明显高于对照组(P＜0.01);NSE、突触素和GAP-43免疫荧光染色强阳性的PC12细胞明显增多,与对照组比较具有统计学意义(P＜0.01).结论:提示星形胶质细胞有助于促进非神经元细胞形成神经突触.
-
中枢神经系统microRNA的研究进展
神经系统通过精密的神经网络连接以及突触间准确的识别接收外界的传入信号并作出反应,完成记忆、学习等过程[1].神经系统各阶段发育的异常都有可能引起一系列不明原因的神经精神疾病,对此知之甚少.MicroRNA是一种大小21～23nt的单链小分子RNA,在神经系统中存在一组特有的microRNA参与中枢发育、神经元分化和突触塑形的过程,与神经系统疾病的发生有关[2],这使microRNA成为研究神经系统的又一新焦点,现就microRNA在中枢神经系统研究中的进展及前景进行综述.
-
Necdin蛋白与神经元的生长分化
在神经系统,Necdin只在成熟神经元的细胞核中表达,可能与成熟神经元分裂静止状态的保持有关.近年的研究表明,Necdin是一种生长抑制蛋白,能与多种因子如SV40大T抗原,腺病毒E1A,转录因子E2F1以及肿瘤抑制蛋白p53等结合,在功能上类似于成视网膜瘤蛋白Rb.necdin基因缺陷时,会引起脑内,特别是下丘脑神经元分化障碍.人类necdin基因位于PWS综合征的基因缺失区,可能与PWS的一些症状有关.本文从Necdin蛋白的基本概况,生物功能以及Necdin与疾病三个方面进行了综述.
-
再程序化星形胶质细胞的制备及体外定向分化为神经元的研究
目的：探讨再程序化星形胶质细胞制备并在体外诱导其分化为神经元。方法在体外培养大鼠脑皮质来源星形胶质细胞（astrocyte），随后将提纯、鉴定过的第三代星形胶质细胞接种于12孔培养皿中，并分为A、B、C 3组。其中 A 组为带有绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体介导 neurogenin2（Ngn2）基因转染的星形胶质细胞，制备再程序化星形胶质细胞；B 组为带有 GFP 基因的空载体病毒转染的星形胶质细胞；C 组为未进行慢病毒介导基因转染的星形胶质细胞；转基因1周后加入含细胞生长因子诱导培养基诱导分化15 d，光镜下观察各组细胞形态变化以及定向神经元分化的差异。结果A 组星形胶质细胞转基因后再诱导15 d，很大部分细胞形态呈神经元样改变，胞体呈梭形或椭圆形，有多个突起伸出且突起较长，表达神经元核蛋白（NeuN）、神经丝蛋白（NF）及神经元特异性烯醇化酶（NSE）的比例大大提高，相比 B 组及 C 组，差异有统计学意义（均 P ＜0．05）；而B 组与 C 组神经元分化比例的差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论慢病毒介导 Ngn2基因体外转染星形胶质细胞可制备出再程序化星形胶质细胞，诱导后具有更强的向神经元定向分化能力。
关键词： neurogenin2 星形胶质细胞 神经元分化 再程序化 -
再程序化脂肪源性干细胞的制备及体外定向分化为神经元的实验研究
[目的]制备再程序化脂肪源性干细胞以及探索诱导其定向分化为神经元的[方法].[方法]体外培养脂肪来源干细胞(ADSCs),取纯化、鉴定过的第3代ADSCs接种于24孔板中并分A,B,C三组:A组为带有绿色荧光基因(GFP)的慢病毒载体介导Neurogenin2(Ngn2)基因转染的ADSCs,制备再程序化脂肪干细胞；B组为带有GFP的空载体病毒转染的ADSCs；C组为未进行慢病毒介导基因转染的ADSCs；转基因7d后加入含细胞生长因子诱导培养基诱导分化15d.光镜下观察各组细胞形态变化以及免疫荧光研究各组ADSCs诱导后定向分化为神经元的差异.[结果]与B组和C组相比,A组ADSCs转基因后再经诱导分化15d后绝大部分细胞类似神经元,胞体呈梭形或椭圆形,有两个或三个突起伸出,细胞表达神经丝蛋白NF、神经元特异性蛋白NeuN及神经元特异性烯醇化酯酶NSE比例大大提高.B组与C组的神经元分化效率,无显著差异,P＞0.05.[结论]慢病毒介导Neurogenin2基因体外转染ADSCs可以制备出再程序化脂肪源性干细胞,诱导后具有更强的定向分化为神经元的能力.
-
人神经前体细胞分化过程中p27Kip1的作用及其调节机制研究
目的 研究视黄酸(RA)诱导人神经前体细胞(hNPCs)分化的过程中,细胞周期调节蛋白p27Kip1的变化及其调节机制,以掌握hNPCs的增殖分化特性.方法 取原代hNPCs体外培养,在细胞进入对数生长期时给予RA诱导,在诱导d 3、5、7收集细胞,用流式细胞分析术观察细胞周期的变化、用Western blot法观察p27Kip1及其相关的细胞周期调节蛋白p21 Cipl、cdk2的变化,以及参与p27Kip1泛素-蛋白酶降解途径的重要因子skp2的变化.结果 RA诱导d3,hNPCs细胞G0/G1期的比例由诱导前的65.20%上升至80.72%;而S期的比例由诱导前的28.39%下降到8.62%;p27Kip1蛋白表达在RA诱导d 3增加,并在d 5达到高峰;p21Kipl和cdk2的表达在RA诱导前后变化不明显,但反映cdk2活性的p-cdk2蛋白的表达在RA诱导后明显下降:skp2的表达在RA诱导后明显下降.结论 在RA诱导hNPCs分化的过程中,p27Kip1蛋白泛素降解途径受阻,致使其含量增加,并通过抑制cdk2的活性而发挥了促进hNPCs分化的作用.
-
p27Kip1在RA诱导人神经前体细胞分化中的作用
目的 观察全反式视黄酸(RA)对体外培养的人神经前体细胞的诱导作用,研究在这个过程中细胞周期调节蛋白p27Kip1、p21Cip1及相关分子cdk2、cyclinE的变化,探讨p27Kip1在RA诱导的人神经前体细胞分化过程中的作用.方法 取12 wk的人胚胎前脑纹状体,原代培养人神经前体细胞.在细胞进入对数生长期时给予1 μmol·L-1 RA诱导.在诱导的d 1、3、7,用相差显微镜观察细胞形态的变化;用免疫细胞化学染色、RT-PCR等方法检测p27Kip1、p21Cip1及其相关的cdk2、cyclinE的变化.结果 在RA诱导d 3,人神经前体细胞形态发生变化,至d 7时已接近成熟神经元形态.免疫细胞化学染色结果显示p27Kip1的表达在RA诱导d 3增加,在RA诱导d 7时明显增加,与未经RA诱导的细胞相比差异有统计学意义(P<0.05).RT-PCR结果显示,p27Kip1mRNA的表达在RA诱导d 3增加,并在RA诱导d 5达到高峰,而p21Cip1mRNA的表达在RA诱导后略呈下降趋势.cdk2、cyclinE的mRNA水平在RA诱导前后没有明显变化.结论 p27Kip1在RA诱导的人神经前体细胞分化过程中具有重要作用,并且其表达增加是通过转录水平调节的.
-
ANP32 A 对神经系统功能调节作用的研究进展
酸性核磷蛋白32A（ANP32A）由1个球形的富含亮氨酸重复序列（LRRs）的氨基端和1个伸展的富含酸性氨基酸的羧基端组成，其在细胞增殖、凋亡、转录调控、信号转导和细胞内物质运输等多种重要生命过程中发挥作用。近年研究发现，ANP32A与多种神经系统疾病的发生、发展有关。 ANP32A参与神经系统的发育并可调控神经元分化；其过表达可导致tau蛋白高磷酸化，促进阿尔茨海默病的发生；其能保护神经元免于兴奋性毒性损伤；其可通过影响PP2A通路在1型脊髓小脑共济失调中发挥作用。
-
JAK2/STAT3信号通路调节骨髓间充质干细胞神经定向分化
骨髓间充质干细胞(MSCs)是来源于中胚层的骨髓非造血干细胞,具有较强的自我更新和跨胚层分化潜能.探索MSCs神经诱导分化的内在调节机制,提高MSCa向神经元分化的比例,降低向神经胶质细胞分化比例,对于干细胞移植治疗中枢神经系统损伤有重要的临床意义.
-
REST和CoREST在神经细胞分化发育过程中的调节作用
神经元限制性沉默因子(neuron-restrictive silencer factor,NRSF),是一种重要的锌指蛋白转录负调控因子,它与某些基因中相应的神经元限制性沉默元件(neuron restrictive silencer element,NRSE),又称RE-1(repressor element 1,RE-1)相结合,从而对许多与神经元发育及功能相关的基因的表达发挥阻遏作用.
关键词： 神经元限制性沉默因子 REST CoREST 神经元分化 -
双氢青蒿素增强自噬调节PC12向神经元分化
目的 探讨DHA对PC-12细胞的分化促进作用.方法 通过CCK8法筛选DHA的适浓度,免疫荧光法检测神经元标志物MAP2,qPCR检测Beclin、ATG5和LC3基因表达量.Western blotting检测蛋白水平的含量.结果 结果显示浓度为0.01、0.1、1μg/mL的DHA干预PC12h,细胞活力和正常组比较无差异.DHA浓度为0.1 μg/mL,干预48 h后PC-12细胞内MAP2阳性细胞数显著增多(P =0.029),细胞突触伸长.qPCR结果显示ATG5、Beclin的mRNA表达水平显著升高,LC-3的mRNA表达水平升高,Western blotting结果显示Beclin、ATG5蛋白水平有显著升高.结论 低浓度的双氢青蒿素可以通过自噬调节PC12细胞突触伸长,促进细胞分化,对神经退行性等疾病预防和治疗有重要意义.
