首页 > 文献资料
-
Dravet综合征患者SCN1A基因启动子区突变位点的检测及分析
目的 对Dravet综合征患者SCN1A基因启动子区突变位点进行筛查及分析,预测其致病易感性.方法 收集24例Dravet综合征患者及100例正常人的外周血,抽提基因组DNA,PCR扩增SCN1A基因启动子区序列并测序;用生物信息学方法 分析了SCN1A启动子区变异位点邻近序列的保守性及潜在的结合元件,推测其致病易感性.结果 从患者中发现两个突变位点-244 C>T和-662 G>-,都来自父亲,而没有血亲关系的正常人中没有发现;-244和-662突变位点在哺乳动物中高度保守(100%);人与其他哺乳动物之间-244突变位点邻近序列(位点上、下游20个碱基)的平均同源率高达90%,而-662突变位点邻近序列的平均同源率只有60%;含-244位点的序列分别能预测到4种不同的转录因子结合元件,而含-662位点的序列均未能预测剑.结论 这两个突变与疾病存在一定程度的相关性,其致病的机制有待于实验证实.
-
变性高效液相色谱法检测中国汉族人SCN1A外显子16T1067A基因多态性
目的 建立检测SCN1A外显子16 T1067A单核苷酸多态性(SNP)的变性高效液相色谱(DHPLC)方法,并检测中国汉族人SCN1A外显子16 T1067A基因多态性.方法 设计针对SCN1A编码区引物,应用DHPLC技术检测其序列多态性,并检测127例中国汉族人SCN1A外显子16 T1067A基凶多态性.结果 127例汉族人中,SCNIA T1067A AA、AG、GG表型频率分别为0.8031、0.1969、0,SCNIA T1067A A、SCN1A T1067A G基因频率分别为0.9016、0.0984.结论 DHPLC简便、快速、准确.适合于大规模的人群调查.SCN1A外显子16 T1067A基因多态性在不同种族间分布存在着明显的差异.
-
全面性癫(癎)伴热性惊厥附加症39个家系的临床表型和SCN1A基因突变分析
目的 分析全面性癫(癎)伴热性惊厥附加症(generalized epilepsy with febrile seizures plus,GEFS+)家系的临床表型,并筛查家系钠离子通道α1亚单位基因SCN1A突变,分析GEFS+基因型与表型的相关性.方法 收集先证者及其家系成员临床资料及外周血DNA,对家系受累者临床表型进行分析,并采用PCR和DNA直接测序的方法进行SCN1A基因突变筛查.结果 在39个GEFS+家系中,共有196例受累者,每个家系中有2～22例受累者不等.196例受累者的临床表型包括热性惊厥( febrile seizures,FS)92例(46.9％),热性惊厥附加症(febrile seizures plus,FS+ )62例(31.6％),FS或FS+伴部分性发作12例(6.1％),无热全面强直阵挛发作(afebrile generalized tonic-clonic seizures,AGTCS) 11例(5.6％),肌阵挛失张力癫(癎)8例(4.1％),Dravet综合征2例(1.0％),儿童失神癫(癎)1例(0.5％),FS+伴肌阵挛发作1例(0.5％),AGTCS和肌阵挛发作1例(0.5％),部分性发作1例(0.5％),发作分类不能明确5例(2.6％).39个GEFS+家系中发现4个家系(1O.3％)有SCN1A基因突变,其中3例错义突变(N935H、R1O1Q、G1382R),1例碱基缺失(C373fsx378).3例有错义突变的家系表型包括FS、FS+、FS+伴部分性发作和AGTCS.截断突变位点C373fsx378的家系表型包括FS、Fs+和Dravet综合征.有错义突变R101Q的家系其先证者的母亲和有截断突变C373fsx378的家系先证者的父亲均为体细胞突变嵌合体,表型均为Fs+.结论 GEFS+家系常见的表型为FS和FS+,严重的表型为Dravet综合征.GEFS+家系SCN1A基因突变率约为10％,突变类型以错义突变为主,可有截断突变.GEFS+家系中少数受累成员SCN1A突变可为体细胞嵌合体,表型相对较轻.
关键词： 表型 基因 全面性癫(癎)伴热性惊厥附加症 SCN1A -
10个全面性癫痫伴热性惊厥附加症家系的SCN1A基因突变筛查研究
目的 分析全面性癫痫伴热性惊厥附加症(GEFS+)家系的临床表型并筛查SCN1A基因突变情况.方法 收集先证者及其家系成员临床资料及外周血DNA,对家系受累者临床表型进行分析,并采用DNA直接测序法进行SCN1A基因突变筛查.结果 在10个GEFS+家系中,共有33例受累者,每个家系中有2～7例受累者.受累者临床表型包括热性惊厥(FS)11例(33.3％),热性惊厥附加症(FS+)11例(33.3％),FS伴部分性发作1例(3.0％),无热全面强直阵挛发作(AGTCS)3例(9.1％),Dravet综合征1例(3.0％),儿童失神癫痫1例(3.0％),发作分类不能明确5例(15.2％).10个GEFS+家系中发现3个家系有SCN1A基因突变,其中1个家系发现1个错义突变(glu14441ys),2个家系发现同义突变:第15外显子同义突变(c.2592G＞A);第9外显子(c.1212G＞A)与26外显子(c.5385 G＞A)突变.结论 本研究在3个家系中的SCN1A基因编码区中发现1个新的错义突变和3个同义突变,其中1个家系先证者两外显子同时存在突变情况.GEFS+家系遗传机制复杂,病因学有待进一步研究.
关键词： 基因 表型 全面性癫痫伴热性惊厥附加症 SCN1A -
SCN1A基因突变致遗传性异卵双生Dravet综合征家系分析并文献复习
目的 总结遗传性异卵双生Dravet综合征家系临床及SCN1A基因突变特点.方法 分析华中科技大学同济医学院附属同济医院2017年6月收治的异卵双生Dravet综合征患儿兄妹各1例和全身性热性惊厥附加症(GEFS+)母亲家系的临床特征,进行SCN1A基因测序.并结合文献分析基因突变类型与Dravet综合征的关系.结果 2例患儿及其母亲均携带未报道过的SCN1A基因突变c.3624A＞ T(p.R1208S),该突变位于蛋白的罕见区域(Na+通道α亚基第2个环).SCN1A基因突变以点突变多见,约占93.8％,突变位置与Dravet综合征临床表型的相关性复杂.结论 该病例为国内首次报道的遗传自双亲之一的异卵双生Dravet综合征.SCN1A基因突变c.3624A＞T(p.R1208S)发生于蛋白罕见区域,目前国际尚未报道.
-
苯妥英的遗传药理学进展
目前研究认为基因多态性是抗癫(癎)药物苯妥英个体差异的重要原因,基因多态性导致癫(癎)患者个体出现不同的苯妥英药理、毒理作用.随着遗传药理学的不断深入研究,研究者对苯妥英用药有了新的认识.本文介绍了苯妥英的遗传药理学研究进展.
-
In-Fusion技术构建Ⅰ型钠通道与绿色荧光蛋白融合表达及其突变载体
目的:构建Ⅰ型钠通道(Nav1.1)与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体及其突变载体.方法:利用In-Fusion技术将SCN1A基因亚克隆到绿色荧光蛋白真核细胞融合表达载体(pAcGFP1-C In-Fusion Ready Linear Vector).PCR扩增SCN1A基因(与线性载体对应两端有15个相同碱基),In-Fusion技术进行融合即得到pCMV-GFP-C-SCN1A.将其转染HEK293T细胞,Western blot检测Nav1.1的表达.定点诱变试剂盒对其进行定点诱变.结果:1.成功构建Nav1.1与GFP融合表达载体pCMV-GFP-C-SCN1A;2.DNA测序表明:在预期位点已经发生突变,SCN1A基因第190位色氨酸密码子(TGG)突变为终止密码子(TGA).结论:Nav1.1与GFP融合表达载体及其突变载体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致Nav1.1功能的改变奠定了基础.
关键词： In-Fusion技术 诱变 SCN1A 癫痫 -
钠离子通道基因SCN1A突变及其相关癫综合征
癫是多种原因引起的慢性脑功能障碍综合征,是由脑神经元过度同步化放电所导致.近10年来,国际上已发现许多离子通道编码基因是癫的致病基因,故癫又被称为"离子通道病" .编码电压门控Na+通道α1亚单位的基因SCN1A是与癫发病相关的重要的基因之一[1].SCN1A基因突变导致的癫综合征临床表现多样化,轻者表现为预后良好的热性惊厥(FS),重者表现为难治性癫.SCN1A基因突变引起的常见的遗传性癫有:Dravet 综合征、全面性癫伴热性惊厥附加症(GEFS+)和肌阵挛-站立不能性癫(MAE)等.已报道的与癫相关的SCN1A基因突变类型有300余种[2].本文重点综述SCN1A基因突变导致的遗传性癫的表型及基因突变特点.
-
上海市崇明县热性惊厥与SCN1A基因热点多态性变异的相关性分析
目的·了解上海市崇明县儿童热性惊厥(FS)与电压门控钠离子通道α1亚型(SCN1A)基因外显子25,26及3'UTR区域之间的相关性.方法·提取96例4 FS患儿[包括32例全面性癫痫伴热性惊厥附加症(GEFS+)患儿]和53例健康对照组儿童的外周静脉血基因组DNA,进行SCN1A基因E25、E26及3'UTR区域PCR扩增及测序分析.结果·病例组和对照组SCN1A基因E25、E26均未见突变.3'UTR区域1例GEFS+患儿存在c.310-311 delGT变异,2例FS患儿存在c.589T＞G变异,6例存在c.593T＞G变异;对照组均未发现变异.病例组和对照组已报道的单核苷酸多态性(SNP)c.1025T＞C发生频率分别为18.2％和24.5％,2组间差异无统计学意义.预测结果显示114种miRNA能与SCN1A基因3'UTR区结合.c.310-311delGT不位于miRNA与SCN1A基因3'UTR区的结合序列内,c.589T＞G变异、c.589T＞G变异均位于此序列中.结论·经检测SCNIA基因E25、E26均未见突变;3'UTR区域发现c.310-311 delGT、c.589T＞G和c.593T＞G变异;SNPc.1025T＞C与FS无明显关联.
关键词： 热性惊厥 SCN1A 全面性癫痫伴热性惊厥附加症 单核苷酸多态性 3'UTR -
Dravet综合征2个家系的致病基因筛查和早期用药分析
目的 分析Dravet综合征患儿临床表现和治疗情况并筛查其致病基因,以便早期诊断和合理用药.方法 收集先证者及其家系成员临床资料及外周血DNA,对家系先证者临床表现和治疗情况进行分析,并采用二代测序的方法进行致病基因突变筛查.结果 本研究共收集Dravet综合征2个家系,2例先证者在病程中或起病阶段都出现部分性发作形式,均选用了奥卡西平、卡马西平等钠通道药物,其中1例病情加重,1例无明显疗效,2个家系中基因筛查都检测出SCN1A基因突变,包括p.V1767L和p.A905D.结论 本研究发现2个错义突变,SCN1A是Dravet综合征重要致病基因,早期致病基因筛查有利于早期诊断和早期合理用药.
-
MLPA技术检测热性惊厥患儿SCN1A基因
目的 探讨热性惊厥的临床特点及其与电压门控性钠离子通道α1亚单位基因(SCN1A)的关联.方法 收集34例热性惊厥患儿的临床资料及外周血并提取其DNA,采用多重连接依赖式探针扩增技术对热性惊厥患儿的sCN1A基因进行检测.结果 34例热性惊厥患儿中单纯性热性惊厥29例,复杂性热性惊厥5例,所有患儿均进行SCN1A基因检测,均未发现SCN1A基因外显子缺失或重复.结论 SCN1A基因外显子的缺失或重复可能不是热性惊厥的潜在病因.
关键词： 惊厥 发热性 基因 SCN1A 多重连接依赖式探针扩增 -
全面性癫(癎)伴热性惊厥附加症家系SCN1A及GABRG2基因突变筛查
目的 探讨全面性癫(癎)伴热性惊厥附加症(GEFS+)家系SCN1A及GABRG2基因突变情况.方法 收集8个GEFS+家系中包括先证者在内符合GEFS+临床表型的生存患者共31例,健康对照组100例,均为汉族.采集外周血提取DNA,设计合适引物特异性扩增SCN1A及GABRG2基因组全部外显子序列,应用PCR产物直接测序方法进行突变筛查.结果 全部GEFS+患者在SCN1A及GABRG2基因均未发现迄今已报道的所有已知突变.然而,在家系E先证者的SCN1A基因第1外显子发现了新核苷酸多态性(SNP) c.69G>A,呈杂合子变异,密码子由GCG序列突变为GCA,属同义突变;随后在2/100例健康对照人群中也证实存在.另外,在GABRG2基因的翻译起始密码前发现1个新SNP c.-14delA,表现为cDNA序列的第-14号核苷酸A缺失变异,未参与氨基酸的表达;该变异存在于所有GEFS+患者及92/100例健康对照者中.结论 SCN1A基因发现的1个新SNP(c.69G>A)虽未引起氨基酸改变,但可能通过影响mRNA的稳定性,从而改变受体蛋白的功能.GABRG2基因发现的新SNP(c.-14delA)是我国人群高频SNP,并非GEFS+致病的潜在因素.该新发现的2个碱基多态性丰富了SNP数据库,为癫(癎)易感多态位点的研究提供了候选位点.SCN1A及GABRG2基因很可能不是我国南方汉族GEFS+家系的主要致病基因,证实GEFS+具有明显的遗传异质性.
关键词： 全面性癫(癎)伴热性惊厥附加症 SCN1A GABRG2 基因 突变 -
中国汉族部分发作癫痫患者中SCNIA基因的两个功能性位点与卡马西平单药治疗疗效的相关性研究
目的:观察SCN1A基因rs2298771和rs3812718两功能性位点突变对卡马西平抗癫痫疗效的影响.方法:研究对象为628位癫痫患者,对rs2298771和rs3812718两位点进行基因分型,卡马西平单药治疗新发作的部分发作患者,与患者起始病情比较,采用四分类标准对抗癫痫疗效进行半定量:发作完全控制,发作减少＞75％,发作减少50％～75％,发作减少＜50％.结果:351位患者完成了12个月单药治疗.rs2298771位点G等位基因携带者发作完全控制率显著低于AA型个体(P=0.003),对于发作完全控制和不完全控制二分类疗效,也表明G等位基因为影响疗效的风险因子.结论:rs2298771位点与卡马西平抗癫痫的疗效显著相关.
-
部分替换法构建SCN1A基因突变载体
目的 构建SCN1A基因突变载体.方法 首先将要含有需要突变位点的SCN1A基因片段克隆到pGEM-11Zf(+)载体,定点诱变试剂盒对其进行定点诱变,经测序筛选阳性克隆.然后再将重组质粒上的突变片段替换PC-MV-SCN1A表达质粒上的对应片段,经测序筛选阳性克隆.结果 成功构建了SCN1A基因突变载体,SCN1A基因第377位精氨酸密码子(CGA)突变为谷酰胺密码子(CAA).结论 该方法先将目的基因部分片段在小质粒上进行定点诱变,然后再替换到大质粒,减少了意外突变的可能性,适合于较大载体的定点诱变.
-
GEFS+致病相关基因SCN1A表达载体的定点诱变
目的:利用长距离PCR定点突变技术对GEFS+致病相关基因SCN1A进行定点诱变.方法:在突变位点处设计一对延伸方向相反的引物,通过长距离 PCR扩增,得到携带突变位点的新质粒;然后用Dpn I酶切去掉母质粒;再转化至大肠杆菌进行克隆.结果:DNA测序表明:在预期位点已经发生突变,SCN1A所编码的第1765位密码子由苯丙氨酸(Phe)突变为亮氨酸(Leu).结论:SCN1A突变表达载体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致I型电压依赖型钠通道功能的改变奠定了基础.
-
热性惊厥附加症伴孤独症临床特征及与SCN1A基因突变的相关性分析
目的：探讨孤独症在热性惊厥附加症（FS＋）中的临床特征及与SCN1A突变的相互关系。方法：收集并分析在广州医科大学附属第二医院癫痫中心就诊的103例FS＋患者的临床资料。根据国际上认可的标准诊断全面性癫痫伴热性惊厥附加症（GEFS＋）、部分性癫痫伴热性惊厥附加症（PEFS＋）、Dravet综合征（DS）和孤独症。收集FS＋患者血样，测序SCN1A基因并分析结果。结果：53．8％的GEFS＋和69．2％的PEFS＋患者有智力发育障碍，所有的DS患者均存在智力障碍。 GEFS＋和PEFS＋患者中各有1例孤独症，DS患者有9例孤独症（P＜0．01）。FS＋伴孤独症的患者中，PEFS＋中有1例SCN1A突变，而DS则有6例。结论：大部分GEFS＋和PEFS＋患者存在智力发育障碍，而DS均有智力发育障碍。DS伴孤独症的几率高于GEFS＋和PEFS＋。孤独症与SCN1A突变没有明确相关性。
-
Dravet综合征患者c.1738C＞T突变体体外剪接分析
目的:选取本实验室筛查SCN1A突变的Dravet综合征患者,通过生物信息学方法分析其对剪接的影响,构建迷你基因进行体外剪接分析.方法:使用Human Splicing Finder数据库预测c.1738C＞T突变对剪接的潜在影响,通过PCR方法扩增SCN1A第10、11、12、13号外显子及两端部分内含子,克隆到pTARGET真核表达载体,构建pTARGET-EXON-10-11-12-13迷你基因,以野生型pTARGET-EXON-10-11-12-13为模板构建c.1738C＞T突变体.将野生型和c.1738C＞T突变体分别转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR.结果:野生型与c.1738C＞T突变体RT-PCR产物大小都为591 bp.结论:c.1738C＞T突变不是通过对剪接的影响导致疾病发生.
-
In-Fusion技术构建Ⅰ型钠通道与红色荧光蛋白共表达载体及其突变载体
目的:构建Ⅰ型钠通道(NaV1.1)与红色荧光蛋白(DsRed)共表达载体及其突变载体.方法:利用In-Fusion技术将SCN1A基因亚克隆到DsRed真核细胞表达载体(pCMV-IRES-DsRed).限制性内切酶对载体进行酶切并回收线性载体片段,PCR扩增SCN1A基因(与线性载体对应两端有15个相同碱基),In-Fusion技术进行融合即得到pCMV-SCN1A-IRES-DsRed.将其转染HEK293T细胞,Western blot检测NaV1.1的表达.定点诱变试剂盒对其进行定点诱变.结果:成功构建NaV1.1与DsRed共表达载体,SCN1A基因所编码的第1 623位密码子由谷氨酸(Glu)突变为丙氨酸(Ala).结论:NaV1.1与DsRed共表达载体及其突变载体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致NaV1.1功能的改变奠定了基础.
-
SCN1A基因多态性与拉莫三嗪治疗儿童癫痫疗效的关系
目的:探讨SCN1A IVS5N+5 G＞A对拉莫三嗪治疗儿童癫痫疗效的影响.方法:选取2011年1月至2012年4月在湖南省儿童医院住院及门诊应用拉莫三嗪治疗的癫痫患儿100例,并选取同期健康儿童100例作为对照组.检测癫痫患儿及健康儿童SCN1A IVS5N+5基因型,监测癫痫患儿拉莫三嗪血药浓度,分析不同基因型间拉莫三嗪血药浓度情况和拉莫三嗪治疗有效及无效患儿的SCN1A IVS5N+5基因多态性分布.结果:癫痫患儿中SCN1A IVS5N+5 G＞A突变率为65.5％,高于健康儿童对照组的22.5％;拉莫三嗪治疗有效的患儿中AA突变频率为35.62％,远低于治疗无效患儿的59.26％,差异具有统计学意义(P＜0.01)；拉莫三嗪治疗有效的患儿中,AA基因型患儿血药浓度及维持剂量均高于GG型及GA型,GG型患儿血药浓度及维持剂量低.结论:SCN1A IVS5N+5 G＞A基因多态性与拉莫三嗪治疗癫痫的疗效有关.
-
熄风胶囊对难治性癫痫大鼠海马Ⅰ型钠通道α亚基蛋白及mRNA表达的影响
目的:探讨熄风胶囊对氯化锂—匹罗卡品致难治性癫痫模型大鼠Ⅰ型钠通道α亚基蛋白及mRNA表达的影响.方法:建立氯化锂—匹罗卡品癫痫大鼠模型.实验大鼠随机分为8组:正常对照组(空白组)、模型对照组(模型组)、熄风胶囊低剂量组(熄低组)、熄风胶囊中剂量组(熄中组)、熄风胶囊高剂量组(熄高组)、卡马西平治疗组(CBZ组)、熄风胶囊中剂量+卡马西平组(熄卡组)、熄风胶囊中剂量+1/2卡马西平组(熄卡低组).熄低、中、高组分别予熄风胶囊0.33 g、0.66g、0.99g,浓缩剂2 mL;CBZ组予CBZ20 mg/kg;熄卡、熄卡低组分别予熄风胶囊0.66g和CBZ 20 mg/kg、CBZ 10 mg/kg;模型组和空白组分别予生理盐水2 mL.每天上午灌胃1次,共持续60天.给药结束后检测各组大鼠Ⅰ型钠通道α亚基蛋白及mRNA的表达.结果:1)免疫组化染色法示:与空白组比较,模型组SCN1A的表达高于空白组(P＜0.05);与模型组比较,各组治疗SCN1A的表达均低于模型组(P＜0.05);与CBZ组相比,熄卡组SCN1A的表达均低于CBZ组(P＜0.05);2)Western-blot示:与空白组比较,模型组SCN1A的表达高于空白组(P＜0.05);与模型组比较,各治疗组SCN1A的表达均低于模型组(P＜0.05);与CBZ组比较,熄卡低组SCN1A的表达低于CBZ组(P＜0.05);3)Real-t ime RT-PCR示:熄高组、熄中组、熄低组、熄卡组对SCN1A mRNA表达有抑制作用,而卡马组、熄卡低组对SCN1AmRNA表达有促进作用.结论:免疫组化、West ern-b lot、Rea l-t imeRT-PCR结果显示:与正常大鼠相比,IE大鼠海马SCN1A在蛋白与mRNA两个层面均表达上调.熄风胶囊可能通过抑制癫痫大鼠海马Ⅰ型钠通道α亚基蛋白及基因的表达抑制钠电流,从而降低癫痫反复自发性发作的可能.
