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血小板反应蛋白1反义寡核苷酸抑制TGF-β1诱导大鼠心肌纤维化
目的 观察血小板反应蛋白1(TSP-1)反义寡核苷酸在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠心肌成纤维细胞中的作用.方法 差速贴壁法分离新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs).反义、正义TSP-1寡核苷酸与TGF-β1(20μg/L)共培养24 h,采用MTT法测CFs生长数目,羟脯氨酸法测胶原含量,RT-PCR法测TSP-1和VEGF的mRNA表达.结果 TGF-β1可以明显促进CFs TSP-1 mRNA的表达且呈浓度-时间依赖性(P<0.01).VEGF mRNA的表达呈浓度-时间依赖性降低(P<0.01).TSP-1反义寡核苷酸作用后的MTT A值、胶原蛋白含减少,VEGF的表达明显增高(P<0.01).结论 TSP-1反义寡核苷酸可抑制TGF-β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖、胶原合成和升高VEGF的表达.TSP-1反义寡核苷酸可能具有抗心肌纤维化的作用.
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去泛素化酶USP14对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响
目的 研究抑制去泛素化酶USP14的活性对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响.方法 用胰酶消化法和差速离心法分离培养新生SD大鼠CFs,加入不同浓度去泛素化酶USP14的抑制剂IU1作用48小时后,采用MTS、细胞计数法和结晶紫染色法检测CFs的增殖,采用LDH释放检测测定IU1对CFs的细胞毒性作用.结果 IU1可以浓度依赖的抑制CFs的增殖,并且没有明显的细胞毒性作用.结论 抑制去泛素化酶USP14活性可以抑制CFs的增殖,去泛素化酶USP14可能是一个抗心肌纤维化的重要靶点.
关键词： 去泛素化酶USP14 大鼠心肌成纤维细胞 增殖 -
野黄芩苷对血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞的增殖及ERK1/2、p38 MAPK信号通路的影响
目的:研究野黄芩苷对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs)的增殖及细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响.方法:体外分离培养新生大鼠CFs,将细胞分为空白组(空白培养基)、AngⅡ组(10-7 μmol/L)、50 μmol/L野黄芩苷组和AngⅡ (10-7 μmol/L)+5、10、20、50 μmol/L野黄芩苷组,培养48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖能力.另取细胞分为空白组(空白培养基)、AngⅡ组(10-7 μmol/L)和Ang Ⅱ (10-7 μmol/L)+5、10、20、50 μmol/L野黄芩苷组,培养48 h后,检测细胞中I型胶原(Col I)、ColⅢ、α-平滑肌肌蛋白(α-SMA) mRNA表达和细胞培养液中羟脯氨酸(HYP)含量,以及细胞中ERK1/2、p38MAPK磷酸化水平.结果:5、10、20、50 μmol/L的野黄芩苷均能显著抑制AngⅡ诱导的CFs的增殖(P<0.05),显著下调AngⅡ刺激的CFs中Col I、ColⅢ和a-SMA mRNA的表达(P<0. 05),显著抑制AngⅡ刺激后细胞培养液中HYP含量的增加和细胞中ERK1/2、p38 MAPK的磷酸化(P<0. 05),且具有一定的浓度依赖性.结论:野黄芩苷对AngⅡ诱导的CFs的增殖具有一定的抑制作用,其机制可能与抑制ERK1/2、p38 MAPK的磷酸化有关.
关键词： 野黄芩苷 大鼠心肌成纤维细胞 增殖 细胞外调节蛋白激酶 p38丝裂原活化蛋白激酶
