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姜黄素通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体-γ预防大鼠大肠癌变的实验研究
目的 探讨姜黄素对二甲基肼(DMH)诱导的大鼠大肠癌发生的防治作用及其机制.方法 Wistar大鼠按随机数字表法分为模型组(20只)和姜黄素组(20只),同时设正常对照组(10只).应用DMH 20 mg/kg皮下注射诱导制备大鼠大肠癌模型.计算各组大鼠大肠肿瘤的诱癌率及抑制率;利用免疫组化和Western blot方法观察姜黄素对大鼠大肠黏膜组织过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisomeproliferator-activated receptor gamma,PPARγ)表达的影响.培养人结肠癌HT 29细胞株,分为正常对照组、姜黄素加2-氯-5-硝基-N-苯基苯酰胺(GW9662)干预组和姜黄素组.采用MTT法检测不同浓度姜黄素对人结肠癌HT 29细胞株生长的抑制作用,Western blot方法检测姜黄素对人结肠癌HT 29细胞株PPARγ表达的影响.结果 模型组大鼠诱癌率为80.00％(12/15),明显高于姜黄素组58.82％(10/17)(P＜0.05),姜黄素对DMH诱导的大鼠大肠癌的抑制率达26.46％.与正常对照组比较,模型组和姜黄素组PPARγ表达均明显增强(P＜0.01);与模型组同期比较,姜黄素组PPARγ表达亦明显增强(P＜0.05).MTT实验表明姜黄素可以抑制体外培养人结肠癌细胞株HT 29的增殖,且呈剂量和时间依赖性.与对照组比较,GW9662干预组及姜素组PPARγ表达均增强(P＜0.01);与GW9662干预组比较,姜黄素组PPARγ表达亦增强(P＜0.05).结论 姜黄素可抑制DMH诱导的大鼠大肠癌的形成,抑制体外培养的大肠癌细胞增殖,这种作用可能是通过激活PPARγ途径实现.
关键词： 姜黄素 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ 大肠癌 结肠癌细胞株 HT29 -
人参皂苷Rg3对HT-29细胞株MMP-9和TIMP-1表达的影响
目的:研究人参皂苷Rg3对HT-29结肠癌细胞株细胞增殖及对MMP-9和TIMP-1表达的影响,探讨其抑制肿瘤细胞侵袭、转移的机制.方法:分别用低剂量(25 μg/mL)、中剂量(50 μg/mL)和高剂量(100 μg/mL)人参皂苷Rg3及对照(0 μg/mL,DEME培养液和DMSO助溶剂)培养HT-29细胞24 h、48 h、72 h,采用RT-PCR方法检测MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达,MTT法检测肿瘤细胞增殖的抑制率.结果:人参皂苷Rg3可以抑制HT-29细胞MMP-9 mRNA的表达,抑制作用随着剂量的增加及时间的延长而增强;可以促进HT-29细胞TIMP-1 mRNA的表达,促进作用随着剂量的增加及时间的延长而增强;对HT-29细胞生长的抑制作用与随着药物浓度的增加及作用时间的的延长而增强.结论:人参皂苷Rg3抑制HT-29结肠癌细胞株MMP-9的表达,促进TIMP-1的表达,并具有抑制肿瘤细胞生长的作用.
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阿司匹林对胶质瘤细胞生长增殖及NOS表达的影响
目的:观察阿司匹林对胶质瘤细胞生长增殖、NOS表达及NO、CEA含量的动态变化.方法:应用MTT法测定不同浓度阿司匹林对胶质瘤细胞的生长抑制率,免疫组化检测NOS表达,Griess法测定NO的浓度,微粒子捕捉免疫法分析CEA含量变化.结果:阿司匹林对胶质瘤细胞具有抑制作用,并能诱导iNOS的表达,增加培养基中NO浓度,减少CEA的生成.结论:阿司匹林具有抑制胶质瘤细胞的作用,这种抑制作用可能是阿司匹林的直接毒性或通过诱导iNOS的表达,增加NO含量产生大量超氧阴离子的结果,监测CEA含量的变化可能是判断胶质瘤发生、发展及预后的有效指标.
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血管生成素2经PI3K/Akt途径对HCT-8细胞增殖的促进作用
目的:研究外源性血管生成素2(Ang-2)蛋白对结肠癌细胞株(HCT-8)中Tie-2、1-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、Akt基因及蛋白表达的影响,探讨其与PI3K/Akt通路的关系.方法:用不同浓度的Ang-2蛋白(0、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0、3.0 mg·L-1)作用于HCT-8细胞,用MTT法检测细胞增殖活性,根据实验结果选定Ang-2蛋白的后续实验浓度.细胞分为正常对照组(C组)、无血清培养液组(SD组)、Ang-2组(SA2组)及LY294002组(SA2L组),应用RT-PCR及Western blotting技术分析Tie-2、PI3K、Akt基因及蛋白的变化.结果:加入不同浓度的外源性Ang-2蛋白,HCT-8细胞均有不同程度的增殖,当Ang-2的浓度为2 mg·L-1时,细胞的增殖力强.SA2组中Tie-2、PI3K及Akt 3种基因及蛋白的表达均较SD组增强(Tie-2:均P＜0.01；PI3K:P＜0.01及P＞0.05; Akt:均P＜0.01),而在SA2L组中3种基因及蛋白的表达均较SA2组减弱(Tie-2:P＜0.05及P＜0.01; PI3K:P＜0.05及P＜0.01; Akt:P＜0.01及P＜0.05).结论:Ang-2蛋白在结肠癌细胞中有促增殖作用,且其作用机制与Ang-2/Tie-2/PI3K/Akt调节的通路有关,应用LY294002可抑制该通路,实现抗肿瘤作用.
关键词： 血管生成素2 结肠癌细胞株 增殖 受体 Tie-2 1-磷脂酰肌醇3-激酶 癌基因蛋白质v-akt -
DLC-1基因表达对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响
目的:研究DLC-1基因对结肠癌细胞侵袭迁移能力的影响.方法:将DLC-1 shRNA(短发夹状RNA,short hairpin RNA)序列克隆到质粒pGCsi-U6/Neo载体,采用脂质体介导的转染方法将构建的DLC-1 shRNA表达质粒转入结肠癌细胞系LoVo细胞.采用RT-PCR技术和Western Blot技术分别检测LoVo细胞中DLC-1mRNA和蛋白表达水平的变化.Transwell小室人工重组基底膜侵袭转移实验观察LoVo细胞侵袭迁移能力的改变.结果:结肠癌细胞系LoVo细胞表达DLC-1分子.所构建质粒表达载体能有效地干扰LoVo细胞DLC-1 mRNA和蛋白质表达水平;Transwell小室人工重组基底膜侵袭转移实验结果显示,转染后LoVo细胞侵袭转移能力明显增强(p＜0.05).结论:结肠癌细胞系LoVo细胞表达DLC-1基因,应用RNAi技术可特异性降低其表达.DLC-1的表达水平与结肠癌细胞侵袭转移相关.
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OM对于人结肠癌细胞株SW1116的杀伤作用及其抗肿瘤作用的机制
目的 探究OM对于人结肠癌细胞株SW1116的杀伤作用及其抗肿瘤作用的机制.方法 基于本院自2013年7月～2015年7月期间收治的203例结肠癌患者的临床资料,按照临床治疗方式的不同,随机的将这203例患者分为观察组(常规放化疗+5％GS+苦参素注射液10 ml治疗)和对照组(常规放化疗),观察组106例,对照组97例,观察比较两组患者的临床治疗效果.结果 观察组:患者的白细胞均不同程度的升高,且106例患者的临床治疗总有效率93.3 ％(99/106).对照组:患者白细胞均有不同程度下降,且97例患者的临床治疗总有效率为73.2％(71/97).OM能够有效的影响肿瘤细胞周期、抑制端粒酶表达与活性、引起DNA甲基化模式变化、引发细胞信号改变.结论 OM对于人结肠癌细胞株SW1116的杀伤作用及其抗肿瘤作用显著.
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苦参素诱导入结肠癌LoVo细胞凋亡及其机制的研究
目的:观察苦参素对结肠癌LoVo细胞体外生长的影响.方法:用苦参素处理结肠癌LoVo细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化.结果:在苦参素作用下,结肠癌LoVo细胞呈凋亡改变.细胞凋亡的同时,细胞周期发生特定的改变.结论:苦参素能抑制结肠癌细胞增殖,能诱导结肠癌细胞凋亡.
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XAF1基因与p53基因在结直肠肿瘤中的表达研究
目的观察两个相邻位置的抑癌基因XIAP相关因子1(XAF1)与p53基因在结直肠肿瘤中的表达.方法选取结肠癌细胞株Colo 205、Colo 320、LoVo、SW1116为体外研究对象,另取41例结直肠癌、28例结直肠腺瘤/息肉以及31例正常人结肠黏膜为体内研究对象.应用逆转录聚合酶链反应检测XAF1 mRNA与p53 mRNA在体内外的表达,应用免疫组化法检测P53蛋白在结直肠组织中的表达.结果4种细胞株中XAF1表达均较为低下,p53 mRNA表达均较高.结直肠肿瘤组织中的XAF1mRNA表达显著低于正常组织(P＜0.01),结直肠癌中的表达又显著低于良性肿瘤(P＜0.05).结直肠肿瘤组织中的p53 mRNA表达显著高于正常组织(P＜0.01),但在良、恶性肿瘤中的表达差异无统计学意义(P＜0.05).P53蛋白在正常组织中未见表达,良、恶性肿瘤组的组织P53蛋白表达之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论XAF1基因在结直肠肿瘤中表达降低,且结直肠癌XAF1 mRNA表达显著低于良性肿瘤,可作为判断良、恶性肿瘤的鉴别指标.
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ZSTK474对结肠癌细胞PI3K、Akt、FASN表达及细胞增殖的作用研究
目前,大多数肿瘤组织的恶性表型与特殊的物质代谢和能量代谢密切相关.近期研究表明,脂肪酸合酶( fatty acid synthase,FASN)介导的代谢异常在肿瘤发生、发展过程中具有重要作用[1].同时,磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)信号通路也与细胞代谢密切相关.因此,本研究将一种新型的PI3K抑制剂ZSTK474作用于结肠癌细胞株Caco-2,以探讨PI3K/Akt信号通路调控Caco-2细胞FASN表达的作用及其对Caco-2细胞增殖的影响.
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棉籽酚诱导结肠癌细胞系凋亡的作用
目的:研究棉籽酚gossypol对结肠癌细胞的致凋亡作用及其方式.方法:将不同浓度棉籽酚与结肠癌细胞株HT29和Lovo作用,采用集落形成法检测细胞经棉籽酚处理后的细胞存活曲线,通过荧光显微镜观察用药后细胞周期时相改变.结果:HT29和Lovo经棉籽酚处理后增殖能力降低,2种细胞均显示明显凋亡征象,表现典型DNA梯,2种细胞均于用药后24与48h出现凋亡峰(亚G1峰),并随药物浓度和用药时间增加而增加.细胞周期分布无明显变化.结论:棉籽酚在体外能诱导结肠癌细胞发生G1期凋亡,抑制细胞增殖,是一种具有潜在抗肿瘤作用的化疗药,值得进一步临床试验.
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BCL6B基因启动子区域甲基化与结肠癌的关系研究
目的 探讨BCL6B基因启动子区域甲基化与结肠癌的关系.方法 选取在广州军区武汉总医院2013年1月至2015年1月经病理检查确诊为结肠癌53例患者的癌组织和癌旁组织,来自该院实验室的结肠癌细胞株和正常人外周血淋巴细胞及正常结肠黏膜组织.比较结肠癌组织、癌旁组织和正常结肠黏膜组织BCL6B甲基化状况的差异;比较结肠癌组织和癌旁组织中BCL6B表达和免疫染色评分的差异.分析各病理参数对结肠癌组织BCL6B甲基化的影响.结果 53例结肠癌组织中41例发生BCL6B启动子区域甲基化,甲基化率为77.36％;结肠癌细胞系RKO、HT29为完全BCL6B甲基化,其余为半甲基化;正常结肠黏膜组织未发现甲基化.53例结肠癌组织中有45例(84.91％) BCL6B低表达或表达缺失;53例癌旁组织中有9例(16.98％) BCL6B低表达或表达缺失,两种组织BCL6B表达的差异具有统计学意义(P＜0.05);结肠癌组织的染色评分低于癌旁组织[(4.35±2.15)分vs(6.28 ±3.46)分,P＜0.05].结肠癌组织BCL6B甲基化率在有淋巴结转移、高TNM分期、低分化程度患者中较无淋巴结转移、低TNM分期、高分化程度患者中明显增高,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 结肠癌组织BCL6B启动子区域甲基化高于癌旁组织和正常结肠黏膜组织,BCL6B甲基化与淋巴结转移、TNM分期、分化程度相关.
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白藜芦醇对结肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用研究
目的:观察白藜芦醇对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用.方法:使用不同浓度白藜芦醇处理体外培养结肠癌细胞系HT-29后,运用细胞计数试剂盒检测法(CCK-8)检测白藜芦醇对HT-29细胞生长的影响,流式细胞术(FCM)检测白藜芦醇对HT-29细胞凋亡率的影响.结果:CCK-8法检测显示白藜芦醇对HT-29细胞的增殖有明显抑制作用,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性(P<0.01).FCM法检测结果提示,与阴性对照组比较,不同浓度的白藜芦醇可以提高HT-29细胞凋亡率(P<0.05).结论:白藜芦醇对人结肠癌HT-29细胞的增殖有抑制作用,且能诱导HT-29细胞凋亡,是一种高效低毒的药物,其具体机制有待进一步探讨.
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3种结肠癌细胞株中DLC-1基因的表达及其启动子区的甲基化状态研究
目的:研究候选抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨结肠癌细胞株DLC-1基因表达水平与其启动子区甲基化的相关性.方法:采用RT-PCR技术分别检测DLC-1基因在人结肠癌细胞株CaCo-2、HT-29和LoVo中的表达水平;应用甲基化特异性PCR(MSP)方法和亚硫酸氢盐修饰DNA测序检测启动子区域甲基化状态;分别用0、5、10 μmol·L-1浓度的去甲基化药物5氮杂胞苷处理DLC-1基因启动子区域高甲基化状态细胞后,再检测DLC-1基因mRNA表达水平.结果:人结肠癌细胞株CaCo-2和LoVo中DLC-1 mRNA呈阳性表达,HT-29中的表达呈阴性表达;CaCo-2和LoVo细胞DLC-1基因启动子区域未发生甲基化,而HT-29出现启动子区高甲基化状态;经5氮杂胞苷药物干预后,HT-29结肠癌细胞的DLC-1基因表达明显增强.结论:结肠癌细胞株HT-29中DLC-1基因表达沉默与启动子区高甲基化状态有关.
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结直肠癌患者血浆溶血磷脂酸测定的意义
目的 探讨血浆溶血磷脂酸(LPA)在结直肠恶性肿瘤诊断、病情监测及治疗中的意义.方法 选择结直肠癌患者58例,健康成人8例作为对照.用不同浓度LPA(0.5、1.0、2.0、5.0和10.0)×103 nmol/L干预结肠癌细胞株LoVo,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell侵袭实验检测细胞株迁移能力,ELISA方法测定血浆LPA水平.结果 LPA促进LoVo细胞的增殖,并呈剂量、时间依赖性.LPA(5.0和10.0)×103 nmol/L可增强LoVo细胞的侵袭能力(P＜0.05).C、D期和A、B期直肠癌患者血浆LPA高于对照组[(2115.48±865.76) nmol/L和(1765.31±519.79) nmol/L vs.(861.47±164.92) nmol/L](P＜0.05).结论 血浆LPA测定对结直肠恶性肿瘤的诊断、基因治疗及病情监测随访有一定的临床价值.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株抑制作用的体外研究
目的 探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT -8细胞)增殖的抑制作用及对细胞凋亡和细胞周期的影响,研究其对结肠癌的抑癌机制.方法 体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG(10,20,35μg/ml)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株增殖的抑制作用；用流式细胞仪检测EGCG对结肠癌细胞株凋亡和细胞周期的影响.结果 MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株的抑制作用均具有浓度依赖性,且HT29细胞株尚具有时间依赖性.流式细胞仪检测EGCG能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关.EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,将HCT -8细胞阻滞在G,/M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制结肠癌细胞株的增殖.结论 EGCG对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制与增强细胞凋亡和影响细胞周期有关,具体作用机制有待进一步研究.
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p38MAPK在结肠癌细胞凋亡中的作用及与COX-2的关系
目的 探讨结肠癌细胞p38MAPK介导celecoxib(COX-2选择性抑制剂)抗肿瘤的作用及与COX-2的关系.方法 用MTT法检测celecoxib对人结肠癌HT-29细胞生长的作用,用Western blot法测定各组细胞COX-2和Phosph p38MAPK蛋白表达量,采用流式细胞术检测celecoxib和SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)作用后HT-29细胞凋亡和细胞周期分布.结果 p38MAPK和COX-2蛋白表达量与对照组(0.23±0.12)(0.95±0.14)相比,celecoxib可使p38MAPK蛋白表达水平明显升高(0.62±0.11),而使COX-2蛋白表达水平降低(0.44±0.11);SB203580使p38MAPK(0.12±0.05)及COX-2蛋白(0.23±0.13)表达水平均降低;SB203580和celecoxib共同作用后,p38MAPK表达量介于celecoxib和SB203580作用之间(0.43±0.12),COX-2表达量下降为显著(0.15±0.10).celecoxib和celecoxib+SB203580 均可显著诱导HT-29细胞凋亡(P＜0.01和P＜0.05),与对照组(4.31%)相比,其凋亡率分别为40.95%、26.24%.结论 在HT-29细胞中,celecoxib 可通过活化p38MAPK而诱导结肠癌细胞凋亡,p38MAPK是COX-2的上游激酶,COX-2的表达水平受p38MAPK调控,并且COX-2可能对p38MAPK有负反馈调节作用.celecoxib是通过COX-2及其以外的p38MAPK通路诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用的.
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配体活化的过氧化物酶体增殖物激活受体γ诱导结肠癌细胞凋亡
目的:探讨配体活化的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制结肠癌细胞生长,及诱导细胞凋亡的作用.方法:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫杂交(Western-blot)法测定PPARγ在SW480和LS174T结肠癌细胞中的表达.MTT法检测PPARγ激动剂15脱氧前列腺素J2(15 d-PGJ2)和吡格列酮(Pioglita-zone,PGZ)对结肠癌细胞生长的抑制作用.流式细胞术检测细胞凋亡率,电镜观察凋亡细胞形态.免疫细胞化学法检测凋亡相关分子Fas、bcl-XL蛋白表达的变化.结果:PPARγ在SW480和LS174T结肠癌细胞株中均有表达,15 d-PGJ2和PGZ对两种细胞的生长均有抑制作用,并呈剂量依赖效应.15 d-PGJ2和PGZ显著诱导结肠癌细胞凋亡率增加(P＜0.05或P＜0.01),电镜显示凋亡细胞特有的形态学改变.免疫细胞化学结果显示,PPARγ激动剂诱导Fas蛋白表达明显增多(P＜0.01),bcl-XL蛋白表达显著降低(P＜0.01),该改变与凋亡程度呈正相关.结论:PPARγ经配体活化后,通过诱导凋亡抑制结肠癌细胞增殖,该作用可能与促凋亡基因Fas抗原表达上调以及凋亡抑制基因bcl-XL表达下调相关.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 凋亡 Fas Bcl-xl 结肠癌细胞株 -
Genistein对结肠癌作用的研究
目的：探讨Genistein对结肠癌的作用。方法：采用光学显微镜和倒置显微镜观察Genistein对结肠癌细胞株HT-29生长的影响，并通过免疫细胞化学染色检测环氧化酶-2（COX-2）、bax蛋白的表达。结果：Genistein在25μg/mL和50μg/mL作用48h后，对HT-29细胞生长均有抑制作用，凋亡率均较对照组显著增加（P均＜0.01），并呈剂量依赖性；COX-2蛋白表达较对照组明显下降(P均＜0.01)，而bax蛋白则较对照组明显增加(P均＜0.01)，呈剂量依赖性。结论：Genistein既可以抑制HT-29细胞的增殖，又可以诱导细胞凋亡，其机制可能与其上调bax蛋白以及下调COX-2蛋白的表达有关。
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蛋白激酶C抑制剂staurosporine对人结肠癌COLO320细胞周期的影响
目的 探讨蛋白激酶C(protein kinase c,PKC)抑制剂staurosporine(STS)对人结肠癌细胞株COLO320的增殖抑制、凋亡诱导及对细胞周期的影响.方法 在培养的COLO320细胞中,加20、60及100ng/mL STS和100ng/mL佛波酯(PMA),作用24h后,用MTT法测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化.结果 STS抑制COLO320细胞生长,24h的IC50为55ng/mL.20、60及100ng/mL STS分别作用细胞24h后,发现G0/G1期细胞分别为(47.30%±1.53%)、(49.50%±1.54%)和(51.60%±2.12%),G2/M期细胞分别为(30.45%±1.32%)、(34.50%±1.23%)和(37.70%±1.82%);100ng/mL PMA组G0/G1期细胞为(57.10%±1.89%),G2/M期细胞为(24.70%±0.35%);空白对照组G0/G1期细胞为(50.60%±1.69%),G2/M期细胞为(1.85%±0.78%).20、60及100ng/mL STS组与100ng/mL PMA组及空白对照组比较,STS使细胞G0/G1期均减少(P<0.05)及G2/M期均明显增加(P<0.01).STS作用24h后细胞的G1期前出现明显的凋亡峰.结论 STS通过抑制PKC的活性,使细胞被阻滞于G2期,从而抑制COLO320细胞的增殖及诱导细胞凋亡.
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吡柔比星诱导结肠癌细胞株SW-260的凋亡
目的:观察吡柔比星(pirarubicin,THP)对结肠癌细胞株SW-260凋亡的影响.方法:将THP加入SW-260细胞培养液,Hoechst 33258荧光染色、透射电镜观察SW-260细胞形态学变化;DNA抽提琼脂糖电泳观察DNA的"梯状"条带;并测定细胞DNA断裂百分率,以探讨THP能否引起人结肠癌细胞株SW-260发生凋亡.结果:不同浓度THP(5,10,15μmol/L)作用于SW-260细胞24小时及10μmol/LTHP作用于SW-260细胞不同时间(12,24,48小时)后,Hoechst 33258染色荧光显微镜观察及透射电镜观察均可见细胞出现典型凋亡形态学改变;DNA抽提琼脂糖电泳出现凋亡细胞特征性生化变化-DNA"梯状"条带;DNA断裂百分率则随着THP浓度的增大或作用时间延长而逐渐增高.结论:THP能诱导体外培养的结肠癌细胞株SW-260发生凋亡.
