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活血及活血解毒配伍中药含药血清对肿瘤坏死因子-α诱导人内皮细胞与中性粒细胞黏附及相关通路蛋白表达的影响
目的 探讨活血及活血解毒配伍中药含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(H UVECs)与外周血中性粒细胞(PMN)黏附、炎症反应及相关通路蛋白的影响.方法 采用随机数字表法将32只大鼠分为空白对照组、芎芍胶囊组、黄连胶囊组及芎芍胶囊加黄连胶囊组,每组8只,各给药组按临床等效剂量灌胃,采血制备含药血清.空白对照组予等体积蒸馏水作对照.常规方法培养HUVECs,以TNF-α(100 ng/mL)为刺激物,制备HUVECs细胞损伤模型.细胞分为5组:空白对照组、模型组、活血组、解毒组及活血解毒组.空白对照组及模型组给予正常大鼠血清,其他3组以10％含药血清干预24 h后收集细胞,应用孟加拉玫瑰红染色法观察HUVECs与PMN发生病理性黏附情况;酶联免疫法检测细胞上清液相关炎症因子E选择素(E-selectin)、细胞黏附分子-1(ICAM-1)及白细胞介素-1β(IL-1β)含量;Western blot法检测丝裂素活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)蛋白磷酸化水平.结果 与空白对照组比较,模型组细胞出现明显的氧化损伤,PMN黏附数量明显增加,IL-1β、E-selectin及ICAM-1水平升高,且HUVEC上清p-p38MAPK、p-ERK 1/2蛋白表达增加(均P＜0.01).与模型组比较,活血组、解毒组及活血解毒组HUVECs与PMN黏附数量减少(P＜0.05),细胞培养上清液IL-1β、E-selectin及ICAM-1水平降低(P ＜0.05,P＜0.01),且内皮细胞p-p38MAPK、p-ERK 1/2蛋白表达降低(P＜0.01).结论 活血及活血解毒含药血清能减轻TNF-α诱导的HUVECs损伤,抑制HUVECs-PMN黏附和黏附因子释放.其机制可能与调节内皮细胞MAPK通路p38MAPK、ERK 1/2蛋白磷酸化水平有关.
关键词： 活血解毒 内皮细胞 细胞黏附 丝裂素活化蛋白激酶p38 细胞外信号调节激酶1/2 -
p38MAPK表达与血管平滑肌细胞增殖关系的研究
目的探讨丝裂素活化蛋白激酶p38(p38MAPK)的表达与血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的关系以及检测p38MAPK反义寡核苷酸(AODN)对VSMC增殖的抑制作用.方法将培养大鼠胸主动脉VSMC,随机分为对照组、p38MAPK AODN组、正义寡核苷酸(SODN)组.采用噻唑蓝比色分析法(MTT)和流式细胞仪检测VSMC,用蛋白免疫印迹法测定p38MAPK蛋白量.结果 p38MAPK AODN能减少p38MAPK蛋白表达,明显抑制VSMC增殖,其抑制作用与p38MAPK蛋白表达相关,呈剂量依赖性.结论 p38MAPK AODN能抑制大鼠VSMC增殖,该信号分子与VSMC增殖密切相关,可能是VSMC增殖的信号途径.
关键词： 反义寡核苷酸 丝裂素活化蛋白激酶p38 血管平滑肌细胞 增殖 蛋白表达 -
丝裂素活化蛋白激酶基因在不同胎龄的胎儿皮肤中表达特征及意义
目的探讨细胞外信号调节激酶1(erk1)、erk2,丝裂素活化蛋白激酶p38(p38MAPK)和3种c-Jun氨基末端激酶(jnk1、jnk2和jnk3)基因在不同胎龄的胎儿和少儿皮肤中表达的变化特征.方法用病理学技术检测不同发育时期皮肤的结构特征后,提取不同胎龄的胎儿和少儿皮肤的总RNA,分离mRNA,用RT-PCR方法检测这6种基因在不同组织中的表达特征.结果与早期妊娠胎儿相比,晚期妊娠胎儿皮肤中,p38MAPK和jnk1基因表达水平显著降低,jnk2和jnk3基因的mRNA含量明显升高.在少儿皮肤中erk2、p38MAPK和jnk1基因表达水平进一步降低,而jnk2和jnk3基因表达明显增加.结论早期妊娠胎儿皮肤中erk2和p38MAPK基因高表达、jnk2和jnk3基因低表达可能与胎儿皮肤创面无瘢痕愈合相关.
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高糖刺激人脐静脉内皮细胞丝裂素活化蛋白激酶P38的表达
目的探讨丝裂素活化蛋白激酶P38(P38MAPK)在糖尿病血管并发症中的作用.方法采用体外培养和Western-blot等方法,以不同浓度D-葡萄糖及不同时间刺激人脐静脉内皮细胞系,分别检测人脐静脉内皮细胞系P38MAPK的蛋白表达.结果随D-葡萄糖浓度增加,P38MAPK磷酸化蛋白表达量增加;延长刺激时间,P38MAPK磷酸化蛋白表达量亦随之增加.结论高糖引发的P38MAPK表达异常,可能在糖尿病血管并发症的发生、发展中起关键作用.
关键词： 高糖 丝裂素活化蛋白激酶p38 糖尿病 血管并发症 人脐静脉内皮细胞 -
p38 MAPKα/β和ERK1/2在心肌缺氧预处理信号传递中的不同作用
建立培养乳鼠心肌细胞的缺氧/复氧(A/R)损伤模型和缺氧预处理(APC)模型, 以细胞存活率、细胞内超氧化物趋化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性作为反映心肌细胞损伤的指标.采用细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)抑制剂PD98059及丝裂素活化蛋白激酶p38α/β (p38α/β)阻滞剂SB203580干预模型, 并以胶内原位磷酸化法测定ERK1/2和p38 活性, 借以探讨ERK1/2和p38α/β在缺氧预处理保护机制中的作用.结果表明: (1)在APC组, 于预处理的缺氧时相给予PD98059, 可以完全消除APC的延迟保护作用; 在A/R组的缺氧时相加入PD98059对细胞损伤无影响; (2)在APC组的预处理缺氧时相给予p38α/β抑制剂SB203580并不能消除APC的保护作用, 而在A/R组的持续缺氧时相给予SB203580则可显著减轻缺氧对细胞的损伤; (3) ERK1/2和p38总活性测定表明, 缺氧可激活ERK1/2和p38, 它们的活性在缺氧后4 h时达到高峰, 而经过APC处理后, 两者活性高峰提前于缺氧后3 h时出现, 且峰值显著降低.上述结果提示, 预处理过程中ERK1/2的激活可能是缺氧预处理延迟保护机制中细胞信号传递的重要环节, 预处理阶段p38α/β的活化不参与APC诱导的延迟保护信号传递过程, p38 的过度激活可能是缺氧/复氧损伤过程中的一个致损伤参与因素, 而预处理抑制随后持续缺氧阶段p38的过度激活可能是其保护机制的一个环节.
关键词： 生理学 心肌保护 缺氧 心肌缺血预处理 丝裂素活化蛋白激酶p38 细胞外信号调节蛋白激酶 大鼠 -
p38在大鼠骨性关节炎模型中的表达
目的 检测大鼠骨性关节炎﹙OA﹚软骨细胞中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)p38的表达.方法 取大鼠20只,雌雄各半,以任一后腿膝关节作为实验组(OA)组,另一侧为手术对照(C)组.OA组离断大鼠前交叉韧带及切除内外侧半月板前半部分建立大鼠骨性关节炎模型;C组仅打开关节腔,缝合切口.饲养8周后摄X线片后取关节软骨观察,通过HE、甲苯胺蓝(PG)观察软骨形态学的改变,免疫组织化学染色及免疫印迹(Western blot)检测磷酸化p38(P-p38).结果 与C组相比,OA组膝关节软骨表面粗糙,软骨被破坏;C组关节表面光滑.免疫组织化学染色及Western blot检测OA组膝关节P-p38阳性细胞表达明显增多.结论 大鼠骨性关节炎模型软骨细胞中p38 MAPK被激活.p38 MAPK被激活可能是造成骨性关节炎的又一环节.
关键词： 骨性关节炎 丝裂素活化蛋白激酶p38 软骨细胞
