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葱白提取物对脂肪变性肝细胞模型PPAR-α及PGC-1表达的影响
目的:观察葱白提取物对脂肪变性肝细胞模型中PPAR-α及PGC-1表达的影响,探讨其防治脂肪肝的作用机制.方法:建立游离脂肪酸诱导的细胞脂肪变性模型.用不同浓度葱白提取物进行干预24h后,MTT检测的细胞活性；油红O染色观察细胞内的脂滴；生化细胞内TG、ALT、AST含量；RT-PCR和Western Blotling分别检测细胞内PPAR-α、PGC-1基因的mRNA和蛋白表达.结果:游离脂肪酸诱导24h后,油红O染色显示脂肪变性；模型组TG含量较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)；各组转氨酶没有明显变化；同时胞内PPAR-α、PGC-1的mRNA、蛋白表达降低.而葱白提取物各剂量组胞内的TG较模型组显著降低,差异有统计学意(P<0.05,P<0.01),并且胞内PPAR-α、PGC-1的mRNA、蛋白表达显著升高,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论:葱白提取物对脂肪变性肝细胞有明显的保护作用,其机制町能与PPAR-α、PGC-1基因表达上调有关.
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两种髓鞘染色方法在Cuprizone诱导脱髓鞘小鼠模型中的比较
目的 比较2种神经髓鞘染色方法在Cuprizone小鼠模型脑组织中脱髓鞘的形态学变化,为实验诊断提供病理依据.方法 将Cuprizone掺入饲料中喂食小鼠4周,造成神经脱髓鞘模型.取脑后切片,分别用牢固蓝(Luxol Fast Blue)和油红O两种染色方法观察脑纹状体和海马两个切面胼胝体髓鞘脱失变化.结果 牢固蓝和油红O两种染色方法均可显示Cuprizone模型小鼠脑内胼胝体部位有脱髓鞘发生,但在纹状体切面油红O染色法能清晰显示髓鞘脱失和炎性细胞浸润,而牢固蓝染色法显示髓鞘脱失与周围组织结构界限不明显.结论 与牢固蓝染色法相比,油红O染色法能更清晰显示脱髓鞘,颜色对比明显,是一种简单易行的神经髓鞘染色方法.
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2011年秋季实验用鼠健康状况的病理学调查和分析
2011年10月本实验室对14家实验动物单位的实验用鼠进行了病理学抽检.主要内容是对实验动物的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠进行取材,通过甲醛固定,石蜡切片HE染色、冰冻切片油红O染色、PAS染色等方法对实验用鼠的健康状况进行鉴定.结果显示,绝大多数实验用鼠为健康状态,而非健康动物主要以肝脏脂肪变性和轻度肺脏病变为主.这可能与饲养环境和饲料有关,通过加强饲养管理可以使这种情况得到改善.
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脂蛋白肾小球病的诊断（附4例报告）
目的：分析、总结脂蛋白肾小球病的临床病理特点。方法回顾性分析2007年4月～2013年4月我院收治4例临床表现为蛋白尿或肾病综合征行经皮穿刺肾活检患者，肾组织除免疫荧光及光镜检查外，行冰冻切片行油红O染色及透射电子显微镜检查诊断脂蛋白肾小球病。结果4例脂蛋白肾小球病患者血清总胆固醇及甘油三酯升高。肾组织免疫荧光检查肾小球血管襻、系膜区IgG、IgM微弱阳性表达；光学显微镜检可见肾小球体积增大，毛细血管襻不同程度扩张，襻内可见层状改变的大小不同、多少不等的栓子。油红O染色显示血管襻内沉积物为脂蛋白沉积或血栓；电子显微镜超微结构观察为内含颗粒状嗜锇酸脂质空泡。结论脂蛋白肾小球病属少见的肾小球病变，肾小球毛细血管襻内脂蛋白沉积或形成栓子是脂蛋白肾小球病特征性的形态学改变。
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共轭亚油酸对肥胖大鼠肝脏脂质代谢的影响
目的研究共轭亚油酸(CLA)对高脂高糖饮食诱导的肥胖大鼠体质量、血脂及肝脏脂质代谢的影响.方法成年雌性Sprague-Dawley大鼠35只按体质量随机分为5组,即基础对照组、肥胖对照组和CLA低、中、高剂量组(分别为0.4、0.8、1.6 g·kg-1).除基础对照组喂饲基础饲料外,其余4组喂饲高脂高糖饲料,喂饲5周后灌胃CLA 1个月,测定体质量和血脂水平,并对肝脏组织切片进行油红O染色.结果与肥胖对照组相比,CLA低、中、高剂量组体质量分别降低了5.28%、5.67%、7.16%,CLA 3个剂量组的脂体比分别降低了52.8%、54.6%、54.6%(P<0.05);CLA 3个剂量组的血清甘油三酯水平分别降低了18.6%、34.8%、49.1%,其中高剂量组与肥胖对照组相比差异有显著性(P<0.05);CLA组大鼠肝脏切片油红O染色后肝细胞内的红染脂滴随CLA剂量的增加逐渐减少.结论 CLA可降低大鼠体质量、血脂水平,并通过影响肝脏脂质代谢起到抗肥胖的作用.
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泽泻汤对油酸诱导HepG2细胞脂肪堆积的抑制作用
目的 评价泽泻汤95%乙醇、50%乙醇和水提取物抑制HepG2肝细胞脂肪累积能力.方法 采用油酸诱导HepG2细胞脂肪累积建立模型,以噻唑兰染色和油红O染色法吸光度值为指标,结合细胞内脂滴形态,评价泽泻汤对油酸诱导HepG2细胞脂肪累积的干预作用.结果 泽泻汤提取物作用HepG2细胞后,经染色后均发现细胞内脂滴明显减少,且质量浓度越高脂类含量越少,50%乙醇提取物和水提物在终质量浓度160、320μg/mL时,细胞内脂滴与模型组相比明显降低(P<0.01),95%乙醇提物80μg/mL作用细胞24 h后,细胞内脂滴较模型组有减少(P<0.05).结论 3种泽泻汤提取物均能够减少细胞内脂肪的堆积,其中以50%乙醇提取物对HepG2细胞脂肪堆积抑制能力强.
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人羊膜间充质干细胞体外大量扩增的方法
背景：一个胎盘羊膜的面积约600 cm2，羊膜来源间充质干细胞即取材于胎盘上的羊膜。
目的：建立一种简单的体外分离培养人羊膜来源间充质干细胞的方法，并分析其生物学特性。
方法：采用胰酶和直接贴壁相结合的方法分离获取人羊膜来源间充质干细胞并进行体外培养，观察细胞形态，分析传代第5代细胞生长曲线，检测第5代细胞表面标志表达和检测细胞周期。取传代第4代细胞行体外成骨细胞诱导和成脂诱导，冻存第4代细胞6个月后复苏，计数复苏后细胞存活率并绘制复苏细胞生长曲线。
结果与结论：原代接种后第9天有少许细胞爬出，15 d左右细胞达80%-90%融合，细胞以梭形为主。细胞传代后，细胞形态均一，螺旋状排列。传代细胞潜伏期48 h，对数增殖期4 d左右，对数增殖期后进入平台期。间充质干细胞表面CD34、CD14、CD19、CD45、HLA-DR 呈阴性表达，CD73、CD105、CD90呈阳性表达。茜素红染色及油红O染色阳性，证实具有向脂肪细胞、成骨细胞分化的能力。流式细胞术细胞周期检测，S期占28%。冻存复苏后细胞存活率达90%以上，且与未冻存传代细胞具有相同的生长特性。结果证实实验成功地建立了一种简化的人羊膜来源间充质干细胞大量扩增的方法。 -
慢性腱病模型大鼠肌腱干细胞体外成脂和成肌腱的分化能力
背景：慢性腱病是一种常见的肌腱退行性病变，好发于运动员以及肌腱过度劳损的人群。由于慢性腱病的发病机制尚未阐明，临床上还缺乏有效的治疗手段。
目的：体外研究比较慢性腱病大鼠和正常大鼠来源肌腱干细胞成脂、成肌腱分化能力。
方法：从慢性腱病大鼠以及正常大鼠髌腱中分离培养原代肌腱干细胞，传代培养至第3代，体外观察细胞形态学变化。将两种来源肌腱干细胞(P3)单层培养至细胞融合，分为2组，成脂诱导组用成脂诱导培养基培养，对照组用基础培养基培养。成脂诱导分化21 d后，将两种来源肌腱干细胞的成脂诱导组和对照组分别行油红O染色定量分析。实时荧光定量PCR检测各组细胞成脂性基因C/EBPα和PPARγ2的mRNA的表达。将两种来源的肌腱干细胞体外单层培养至70%-80%融合时，行实时荧光定量PCR检测慢性腱病来源肌腱干细胞以及正常肌腱干细胞成肌腱相关基因Col1a1，Scx，Tnmd和Dcn的mRNA的表达。
结果与结论：肌腱干细胞体外培养至第3代时，正常肌腱来源的肌腱干细胞保持细长纺锤形的典型的干细胞形态，而慢性腱病来源的肌腱干细胞虽然形态发生改变，但仍保持纺锤形形态。肌腱干细胞(P3)体外成脂诱导分化21 d后，慢性腱病来源的肌腱干细胞胞体变大、变圆，可见大量油红O染色阳性的细胞，油红O染色阳性率显著高于正常大鼠(P=0.004)。实时荧光定量PCR结果显示，慢性腱病大鼠来源肌腱干细胞的成脂性基因(C/EBPα和PPARγ2)mRNA的表达均显著高于正常大鼠(P=0.004)，肌腱特异性基因Col1a1，Scx， Tnmd以及Dcn mRNA表达量均明显低于正常大鼠(P =0.009)。说明与正常大鼠来源的肌腱干细胞相比，慢性腱病来源的肌腱干细胞体外成肌腱分化的能力减弱，而成脂分化的能力增强，此结果为进一步揭示慢性腱病发病机制提供了细胞生物学依据。 -
人脂肪干细胞的提取和鉴定
背景：脂肪干细胞是存在于脂肪中的全能干细胞，具备自我更新能力与多向分化潜能，遗传背景相当稳定，体内植入后免疫排斥少，是一种比较理想的种子细胞。目的：提取人大网膜脂肪干细胞，并进行成脂和成骨分化能力鉴定。
方法：收集手术患者大网膜的脂肪组织，经Ⅰ型胶原酶消化、过滤、离心后进行原代培养，观察细胞生长状态；用细胞计数法绘制人脂肪干细胞增殖曲线，计算处于对数生长期的倍增时间；用相应的定向诱导液诱导人脂肪干细胞向脂肪细胞及骨细胞方向分化，并用油红O染色、茜素红染色进行鉴定。
结果与结论：从手术患者大网膜脂肪组织中成功分离人脂肪干细胞，贴壁生长的人脂肪干细胞为长梭形，形态类似成纤维细胞。第3代人脂肪干细胞生长曲线呈S形，对数生长期人脂肪干细胞的倍增时间为45.90 h。人脂肪干细胞经成脂、成骨定向诱导分化2，3周后，油红O染色显示细胞内有大小不等的橘红色脂肪滴，茜素红染色可见着橘红色的典型钙化结节，提示所培养的脂肪干细胞具有向脂肪细胞、骨细胞系分化的能力。 -
构建不同周龄载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠血脂和病理学观察
背景：载脂蛋白E基因敲除小鼠形成的动脉粥样硬化病变与人类全身动脉粥样硬化好发处相近，是目前建立动脉粥样硬化理想的动物模型。
目的：研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理进程，探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响。
方法：将8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠，随机分为2组，分别给予高脂饮食和普通饮食喂养8，12，16，20，24周。
结果与结论：血清学指标检测显示，不同周龄的高脂饮食组血清中总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平显著高于普通饮食组(P<0.05)，呈时间依赖性。大体和冰冻切片油红O染色结果显示，高脂饮食组动脉粥样硬化管腔斑块面积显著高于普通饮食组(P<0.05)，呈时间依赖性，此时两组各周龄小鼠管腔斑块面积相比均有显著性意义(P <0.05)，小鼠在高脂饮食16周时主动脉可见明显的脂质斑块。结果表明，实验成功构建了载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠，此模型形成脂质条纹和纤维增生病变的时间较普通饮食组更快。 -
成人脂肪干细胞分离培养与鉴定
目的 探讨成人皮下脂肪组织提取脂肪干细胞(ADSCs)的可能性.方法 取健康成年人皮下脂肪组织,经酶消化法获得含有AD-SCs的细胞悬液,差速贴壁法分离ADSCs、红细胞及少量脂肪细胞.体外培养第3代,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长曲线,免疫细胞化学法检测CD29、CD44、CD34及CD106,脂肪细胞诱导分化后进行油红0染色.结果 倒置显微镜下观察原代培养细胞呈长梭形、漩涡状生长.免疫化学法检测结果显示细胞表面抗原CD44、CD29阳性表达,CD106、CD34阴性表达,说明分离培养的细胞是ADSCs.脂肪细胞诱导后进行油红0染色证明所得细胞具有向成熟脂肪细胞分化的能力.结论 成人皮下脂肪组织可作为ADSCs种子来源,并且所得ADSCs具有分化能力.
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高脂小鼠脂肪肝组织油红O特殊染色的应用
[目的]探讨2种油红O染色法在非酒精性脂肪肝病中脂肪变性检测的应用.[方法]选取非酒精性脂肪肝病动物疾病模型C57BL/6J小鼠30只,安乐死处理后摘取左肝叶,将肝组织用4％多聚甲醛固定液充分固定后分为2份进行组织学制片,1份样品制作石蜡切片,石蜡切片制备完成后进行苏木精-伊红(HE)染色,作为脂肪变性的鉴定,另1份样品用30％蔗糖溶液脱水后用OCT包埋制作冰冻切片,冰冻切片制备完成后进行2种方法的油红O染色.通过盲测的方法,在光学显微镜下观察油红O在脂滴细胞的定位情况,并对2种染色方法进行对比.[结果]2种染色方法对组织及细胞没有任何病理性的损伤,并具有较好的显色与定位作用.[结论]运用良好的特殊染色技术,可以清晰分辨脂滴细胞,并显示出脂滴细胞的数量,从而对非酒精性脂肪肝病中的脂肪变性进行定位与半定量的分析.
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介绍一种新型高效的油红O染色法
油红O染料对脂肪变性、脂质沉积的组织器官有良好的溶脂及吸附作用,它具有操作简便、色彩鲜亮等特点,优于苏丹Ⅲ染液,被广泛运用于临床和科研病理工作中.针式滤膜过滤器原用于过滤色谱分析样品及流动相,对色谱柱的保护、防止进样阀和输液泵管系统被污染等具有较好的作用,广泛应用于无菌实验、胶体分离及质量与微量分析.油红O染液中含醇类物质易挥发且杂质多,因此传统染色需要异丙醇漂洗分色,整个步骤历时较长且不易控制,对人体也有吸人性危害.本文现介绍一种新型、高效的针式滤膜过滤器油红O染色方法,与传统方法相比具有快速高效、经济环保的优势.
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动脉粥样硬化组织冷冻切片的染色技术
本实验室在辅助科研工作中制作大量动脉粥样硬化的实验动物模型,在实践中摸索出HE染色和油红O染色两种技术的优化制片方法.同时应用新型实用专利封片剂(已经申请专利保护),不再使用传统明胶甘油封片,改进封片技术不但使病理切片色泽艳丽,而且可以在室温下长期保存不再褪色.笔者用该方法制作切片标本长达2年,室温保存至今未褪色,现结合实践工作介绍如下.
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亲环素A在巨噬细胞荷脂过程中的表达及普罗布考干预的影响
目的观察亲环素A在氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达变化及其与细胞内胆固醇蓄积的关系,进而探讨亲环素A在动脉粥样硬化形成中的作用机制. 方法采用75 mg/L 氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7巨噬细胞共同孵育,建立巨噬细胞荷脂化模型,油红O染色观察细胞内脂滴的形成,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量,Western-blot检测亲环素A的蛋白表达;用75 mg/L普罗布考干预对上述检测的影响.结果氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共同孵育48 h后,油红O染色显示细胞内有大量脂滴形成,细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量均明显增加,胆固醇酯/总胆固醇的比值为42.3%±5.9 %,符合荷脂细胞特征;亲环素A的蛋白表达明显减弱.予普罗布考处理,细胞内脂滴明显减少,胆固醇酯/总胆固醇的比值降至32.9%±2.5 %,亲环素A的蛋白表达增加81.3%±3.6 %,较对照组差异有显著性(P均<0.05).结论氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞荷脂过程中,亲环素A表达下调,促进细胞胆固醇蓄积;普罗布考干预可上调亲环素A蛋白表达,减轻细胞内的胆固醇蓄积.
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斑马鱼血管内脂代谢研究方法的构建
目的 构建系统的斑马鱼血管内脂代谢的研究方法.方法 利用油红O染色、荧光探针标记、直接血脂检测等方法研究斑马鱼胚胎、幼鱼、成鱼等不同发育时期血管内的脂质代谢,以及不同饮食对斑马鱼血脂的影响.结果 油红可将斑马鱼胚胎血管内的脂质染色,荧光探针可荧光标记斑马鱼胚胎血管内的胆固醇.喂食蛋黄液可升高斑马鱼幼鱼的血脂水平,油红O染色可反映这种血脂的变化.高胆固醇饮食可升高斑马鱼幼鱼血管内胆固醇水平,荧光探针可标记幼鱼血管内胆固醇的变化.血脂检测显示高脂饮食的斑马鱼血清总胆固醇和甘油三酯均高于普通饮食的斑马鱼.结论 本研究利用油红O染色、荧光探针标记及血脂检测等技术构建了斑马鱼不同发育阶段血管内脂代谢的研究方法.
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THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定
目的 以人类单核细胞株THP-1建立泡沫细胞模型及建立鉴定模型的方法.方法 以160 nmol/L的佛波酯诱导THP-124 h后分化成为巨噬细胞,继与80 mg/L的氧化型低密度脂蛋白孵育48 h,油红O染色后显微镜下观察细胞形态,采用HPLC-MS的方法测定细胞内胆固醇和胆固醇酯的含量.结果 经油红O染色后,诱导建模的细胞内有大量的红色脂质颗粒存在;HPLC-MS测定结果显示,与正常单核细胞相比,建模的细胞内胆固醇和胆固醇酯含量均明显增加.结论 THP-1细胞经佛波酯和氧化型低密度脂蛋白诱导后,能成功建立人类巨噬细胞源性泡沫细胞模型.
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油红O和苏丹Ш染色剂对脂肪样病变肝组织脂质染色效果的比较
目的比较油红O和苏丹睾染色剂对脂肪样病变肝组织脂质染色效果。方法选取高脂饮食小鼠脂肪样病变肝组织，分别用油红O和苏丹睾染色剂进行染色，比较肝组织内脂肪滴的染色效果及脂肪滴的轮廓界面清晰度。结果脂肪样肝病变组织经苏丹Ⅲ染色后，肝组织内脂肪滴被染成橘红色，或淡橘红色，但是大多数被染脂肪滴的轮廓界面不清晰；相反，经油红O染色肝细胞内的脂肪滴呈红色或鲜红色，而且大多数被红染的脂肪滴的轮廓界面清晰。结论油红O进行脂肪样病变肝组织脂质染色效果好于苏丹睾染色。
