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过表达死亡结构相关蛋白加剧胆固醇β环糊精诱导的巨噬细胞凋亡
目的 巨噬细胞凋亡在动脉粥样斑块的发展、病灶的坏死、斑块的不稳定以及急性血管事件中起着重要的作用,因此研究死亡结构相关蛋白(Daxx)对巨噬细胞凋亡的调控作用有利于揭示新的药物靶点,为动脉粥样硬化的发生与发展提供理论依据.方法 应用脂质体2000将pCDNA3.1-Daxx、pCDNA3.1转入RAW264.7细胞中,G418(500 mg/L)筛选15天后,建立过表达Daxx稳定细胞株,RT-PCR和Western blot检测稳定细胞株内Daxx的转染效率.模型组和转染的细胞用胆固醇β环糊精(Chol:MβCD)孵育48 h,建立RAW264.7荷脂和细胞凋亡模型,运用酶荧光法检测细胞内胆固醇蓄积情况,MTT检测细胞活性,流式细胞术观察细胞凋亡.Westem blot测定细胞内Caspase3蛋白的表达.结果 RT-PCR和Western blot检测转染细胞内Daxx mRNA和蛋白明显高表达,表明稳定转染成功.在Chol:MβCD的诱导下,模型组细胞内胆固醇的含量升高,细胞活性下降,凋亡数目增加.而Daxx高表达组可以加剧Chol:M3CD诱导的胆固醇蓄积,细胞活性显著下降,凋亡细胞数目明显增加;同时,Daxx转染细胞组Caspase3蛋白表达明显增高.结论 过表达Daxx可以加剧胆固醇β环糊精诱导的巨噬细胞凋亡.
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氨氯地平对平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A表达和胆固醇蓄积的影响
目的 观察氨氯地平预处理对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A表达的影响及其对胆固醇蓄积的作用,从新的角度探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用.方法 实验分为6组:对照组、氧化型低密度脂蛋白组、氨氯地平(0.1、1.0和10.0 μmol/L)处理细胞1 h后加入80 mg/L氧化型低密度脂蛋白共同孵育72 h组及10.0 μmol/L氨氯地平单独处理组,Western-blot和RT-PCR分别检测亲环素A mRNA和蛋白质的表达改变;油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量变化.结果 氧化型低密度脂蛋白处理组的细胞内亲环素A的表达明显减少;经氨氯地平处理后,随着氨氯地平浓度的增加,细胞内亲环素A的表达逐渐增加,10.0μmoL/L氨氯地平预处理细胞组效果明显,较氧化型低密度脂蛋白组差异有显著性(P<0.05).油红O染色显示,氧化型低密度脂蛋白组细胞内大量脂滴形成,细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值为57.9%,符合泡沫细胞特征;预先予氨氯地平处理后,随着药物浓度的增加,细胞内脂滴逐渐减少,细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值逐渐降低,10.0μmol/L氨氯地平预处理细胞组效果明显,为37.8%;结论 氨氯地平预处理,可上调氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A的表达,减轻细胞内的胆固醇蓄积.
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依泽替米贝对血管平滑肌源性荷脂细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1和肝X受体α表达的影响
目的 观察依泽替米贝对血管平滑肌源性荷脂细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1和肝X受体α表达的影响,探讨依泽替米贝促进血管平滑肌源性荷脂细胞胆固醇流出的作用机制.方法 采用20 mg/L胆固醇、B环糊精混合物处理大鼠主动脉平滑肌细胞建立荷脂细胞模型,用不同浓度的依泽替米贝(3、10μmol/L和30 μmoL/L)处理荷脂细胞24 h,选择30μmol/L的依泽替米贝处理荷脂细胞不同的时间(0、6、12、24 h和48 h).通过逆转录聚合酶链反应检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1mRNA变化和免疫印迹法检测肝X受体α蛋白的表达.结果 (1)三种浓度的依泽替米贝处理荷脂细胞后,逆转录聚合酶链反应显示随着依泽替米贝浓度增加,血管平滑肌源性荷脂细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的mRNA表达明显上调,30μmoL/L依泽替米贝处理24 h组相比模型组上调3.4倍左右;当选用30 μmol/L依泽替米贝处理荷脂细胞不同的时间(0、6、12、24 h和48 h)后,三磷酸腺苷结合盒转运体A1的mRNA水平在0～24 h之间随时间增加而增加并于24 h达到峰值.(2)三种浓度的依泽替米贝处理荷脂细胞后,免疫印迹结果显示随着浓度增加血管平滑肌源性荷脂细胞肝X受体α蛋白的表达逐步增加,其中30 μmol/L依泽替米贝组作用强,较模型组增加2倍多.30 μmol/L依泽替米贝分别处理荷脂细胞不同时间(0、6、12、24 h和48 h)后,肝X受体α蛋白表达随时间增加而增加,24 h组作用佳.结论 依泽替米贝能明显上调平滑肌源性荷脂细胞ATP结合盒转运体A1和肝X受体α表达.
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依泽替米贝对血管平滑肌源性荷脂细胞胆固醇蓄积的影响
目的 观察依泽替米贝对血管平滑肌源性的荷脂细胞胆固醇蓄积的影响.方法 采用20 mg/L胆固酵、β环糊精混合物处理培养的大鼠主动脉平滑肌细胞建立荷脂细胞模型,用不同浓度的依泽替米贝(3、10μmo/L和30 μmol/L)处理荷脂细胞24 h,随后用30 μmol/L的依泽替米贝处理荷脂细胞不同的时间(0、6、12、24 h和48 h).通过高效液相色谱仪检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇的含量;油红0染色观察细胞内胆固醇蓄积的情况.结果 (1)3、10μmol/L和30μmol依泽替米贝处理荷脂细胞后,细胞内总胆固醇含量分别为110.8±3.56、90.5±2.30μmol/g和60.9±1.86μmol/g,游离胆固醇含量分别为85.5±3.12、74.6±2.89啤.,异和53.8±1.56μmol/g;与模型组比较,中、高剂量组总胆固醇、游离胆固醇差异均有显著性(P<0.05),随浓度升高,两者都有降低趋势(趋势性X2检验,P=0.007),且30μmol/L组作用佳.(2)选择30μmol/L依泽替米贝处理荷脂细胞0、6、12、24 h和48 h,各时间点细胞内总胆固醇含量分别为120.1±2.37、117.9±3.05、80.3±2.81、69.2±1.56 nlg,g和72.1±2.98 mg/g,随着时间的延长,总胆固醇浓度逐渐降低,两者呈负相关(r=-0.776,P<0.05);游离胆固醇含量分别为92.9-I-2.11、90.7±3.76、71.4±2.57、60.1±1.21 μmol/g和64.2±2.48μmol/g,随着时间的延长,游离胆固醇浓度逐渐降低,两者呈负相关(r=-0.786,P<0.05);与O h组比较,12、24 h和48 h组差异均有显著性(P<0.01),并呈时间依赖性,24 h组效果显著.结论 依泽替米贝能降低血管平滑肌源性荷脂细胞胆固醇蓄积.
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亲环素A在巨噬细胞荷脂过程中的表达及普罗布考干预的影响
目的观察亲环素A在氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达变化及其与细胞内胆固醇蓄积的关系,进而探讨亲环素A在动脉粥样硬化形成中的作用机制. 方法采用75 mg/L 氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7巨噬细胞共同孵育,建立巨噬细胞荷脂化模型,油红O染色观察细胞内脂滴的形成,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量,Western-blot检测亲环素A的蛋白表达;用75 mg/L普罗布考干预对上述检测的影响.结果氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共同孵育48 h后,油红O染色显示细胞内有大量脂滴形成,细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量均明显增加,胆固醇酯/总胆固醇的比值为42.3%±5.9 %,符合荷脂细胞特征;亲环素A的蛋白表达明显减弱.予普罗布考处理,细胞内脂滴明显减少,胆固醇酯/总胆固醇的比值降至32.9%±2.5 %,亲环素A的蛋白表达增加81.3%±3.6 %,较对照组差异有显著性(P均<0.05).结论氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞荷脂过程中,亲环素A表达下调,促进细胞胆固醇蓄积;普罗布考干预可上调亲环素A蛋白表达,减轻细胞内的胆固醇蓄积.
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亲环素A在巨噬细胞荷脂过程中的影响
目的观察胆固醇转运复合物中关键蛋白亲环素A在氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达变化及其与细胞内胆固醇蓄积的关系,进而分析亲环素A在巨噬源性泡沫细胞形成过程中的作用.方法采用75 mg/L氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共同孵育,建立巨噬细胞荷脂化模型;Western-blot、免疫荧光法检测亲环素A蛋白的表达水平;高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化.结果 75 mg/L氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共同孵育48 h后,亲环素A的蛋白表达逐渐减弱,48 h、72 h分别较未处理组下降了54.5%±6.3%、59.8%±5.9%(P<0.05).间接免疫荧光定位检测发现氧化型低密度脂蛋白显著抑制RAW264.7细胞中亲环素A在胞膜、胞浆中的表达,且随着处理时间的延长作用更明显.细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值由未处理组的28.3%±1.2 %上升至48 h的42.3%±5.9 %(P均<0.05).结论氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化过程中,亲环素A的表达下调与细胞胆固醇蓄积密切相关.
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GDF-15与动脉粥样硬化
生长分化因子-15(GDF-15)具有抑制巨噬细胞活性,缓解动脉粥样硬化病变作用,并参与心肌细胞缺血与再灌注损伤保护过程,其机制可能与调节脂质代谢和炎症反应有关.本文主要针对GDF-15与动脉粥样硬化之间相互作用的研究进展做一综述,以期进一步明确GDF-15在心血管疾病尤其动脉粥样硬化发生发展中的重要作用和意义.
