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紫菀酮对脂多糖诱导巨噬细胞释放IL-1β,TNF-α及NO的影响
目的:探讨紫菀酮的体外抗炎作用及其机制分析.方法:利用脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,通过紫菀酮对其进行干预,采用SunBioTMAm-Blue细胞增殖与活性检测试剂检测紫菀酮对RAW264.7巨噬细胞增殖的影响;Griess法检测细胞培养上清液中NO含量;ELISA法检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果:与空白组比较,50 μmol·L-1紫菀酮组RAW264.7巨噬细胞的增殖抑制率明显高于空白组,0.1,1,10,20,30μmol·L-1紫菀酮组RAW264.7巨噬细胞的增殖抑制率无显著性差异;10,30 μmol·L-1紫菀酮组NO释放量均显著低于脂多糖组;1,10,30 μmol·L-1紫菀酮组IL-1β和TNF-α释放量均显著低于脂多糖组.结论:紫菀酮呈剂量依赖性抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性细胞因子IL-1β,TNF-α及NO的释放,具有体外抗炎作用.
关键词： 紫菀酮 脂多糖 RAW264.7巨噬细胞 抗炎机制 -
紫菀酮基于NF-κB信号通路的体外抗炎机制研究
目的:探讨紫菀酮体外抗炎作用及其机制.方法:采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎性反应模型,用紫菀酮对其进行干预,实验结束后,Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞p-ERK1/2、IκB α和iNOS蛋白的表达.结果:与LPS组比较,紫菀酮可显著下调LPS所致炎性RAW264.7巨噬细胞中p-ERK1/2和iNOS蛋白表达(P＜0.05),升高IκB α蛋白的表达(P＜0.05).结论:紫菀酮抗炎作用机制与其下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平,减少IκBα蛋白磷酸化降解和抑制iNOS蛋白表达等环节有关.
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HPLC法测定紫菀中紫菀酮的含量
目的:测定不同收集地及产地紫菀中紫菀酮的含量,以期评价紫菀药材的质量.方法:采用HPLC法直接测定.色谱柱Polaris C18柱,流动相为乙腈,流速1.0 mL*min-1,检测波长200 nm.结果:测定了10个地区的商品紫菀,紫菀酮含量在0.06%～0.18%.结论:所测样品中紫菀酮含量均低于2000年版<中国药典>(一部)规定紫菀酮的低限度.
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HPLC法测定雪梨止咳糖浆中紫菀酮的含量
目的 建立雪梨止咳糖浆中紫菀酮的含量测定方法.方法 采用HPLC法测定雪梨止咳糖浆中紫菀酮的含量.结果 在HPLC法中紫菀酮在0.106～1.696μg范围内呈良好的线性关系,r=0.999 9(n=5),平均加样回收率为99.26%,RSD为1.24%(n=6).结论 该方法操作简单、结果准确、重复性好,可用于该制剂的质量控制.
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紫菀中紫菀酮的微波辅助加压溶剂提取研究
目的利用正交实验研究紫菀中紫菀酮的佳提取条件.方法利用微波辅助加压溶剂提取法提取紫菀中紫菀酮,通过正交实验,考察了微波提取条件(包括溶剂、提取时间、提取次数和料液比)对紫菀中紫菀酮的影响.采用HPLC检测紫菀酮的含量,其中色谱柱:Spherisorb C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(98:2);流速:1.0 mL·min-1;柱温40℃;检测波长为200 nm.结果溶剂使用体积分数为80%乙醇,提取时间为30 min,提取次数为3次,料液比为1:20时,提取率佳.结论采用本实验方法提取紫菀中紫菀酮具有效率高,时间短,所需温度低以及绿色环保等优点.
关键词： 紫菀 紫菀酮 微波辅助加压溶剂提取法 正交实验 高效液相色谱法 -
薄层扫描法测定紫菀中表木栓醇的含量
紫菀为菊科植物紫菀 Aster tataricus L.f.的干燥根及根茎.为镇咳祛痰药,具有润肺下气,消痰止咳之功效[1],主治气逆咳嗽,痰吐不利,肺虚久咳,痰中带血等症.紫菀中含有紫菀酮、表木栓醇、木栓酮[2]等多种成分,中国药典2000年版一部紫菀项下仅以紫菀酮作为定量指标,关于表木栓醇的含量测定我们尚未见报道,且表木栓醇具有明显的祛痰作用[3～4].我们采用双波长薄层扫描法对其中表木栓醇进行含量测定.
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牛大力的化学成分研究
目的 研究牛大力(美丽崖豆藤Millettia speciosa的干燥根)中的化学成分.方法 采用大孔吸附树脂、硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱和重结晶等分离方法进行分离纯化,综合运用各种波谱手段和理化性质鉴定各化合物的结构.结果 从牛大力95％乙醇提取物中分离纯化得到16个化合物,分别鉴定为7-羰基-β-谷甾醇(1)、橙黄胡椒酰胺乙酸酯(2)、紫菀酮(3)、顺丁烯二酸(4)、补骨脂素(5)、N-甲基金雀花碱(6)、咖啡酸羽扇豆醇酯(7)、双去氧基姜黄素(8)、香草酸(9)、丁香酸(10)、6-甲氧基二氢血根碱(11)、甘草酸(12)、(E)-3,3’-二甲氧基-4,4'-二羟基-1,2-二苯乙烯(13)、五味子醇乙(14)、7-羟基千金二萜醇(15)、苷松新酮(16).结论 所有化合物均为首次从该植物中分离得到,其中化合物3、7、8、11、l3～16为首次从该科植物中分离得到,化合物2、4～6、9、10为首次从该属植物中分离得到.
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HPLC-DAD法同时测定益肺清化颗粒的10种成分
目的 建立HPLC-DAD法同时测定益肺清化颗粒中苦杏仁苷、齐墩果酸、熊果酸、仙鹤草酚B、甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、鲁斯可皂苷元、没食子酸、补骨脂素和紫菀酮的方法.方法 采用反相液相色谱法,色谱柱为Waters Symmetry-C18(250 mm×4.6 mm,5.0 μm);流动相为KH2PO4缓冲溶液(KH2PO4 1.0 g,加水1 000 mL使溶解,磷酸调节pH值至3.5)-(乙腈-甲醇1∶1),梯度洗脱,体积流量0.8 mL/min;柱温40℃.结果 苦杏仁苷、齐墩果酸、熊果酸、仙鹤草酚B、甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、鲁斯可皂苷元、没食子酸、补骨脂素和紫菀酮10种成分能够达到良好分离;其线性范围分别为0.2～2.0 μg/mL (r=0.999 5)、0.4～4.0 μg/mL (r=0.999 4)、0.3～3.0 μg/mL (r=0.999 6)、0.1～1.0 μg/mL(r=0.999 3)、0.5～5.0 μg/mL (r=0.999 1)、0.15～1.50 μg/mL(r=0.999 2)、0.25～2.50μg/mL (r=0.999 5)、0.6～6.0 μg/mL(r=0.999 1)、0.45～4.50 μg/mL (r=0.999 3)、0.12～1.20 μg/mL (r=0.999 4),平均加样回收率分别为98.7％、98.0％、99.6％、98.0％、99.1％、99.4％、98.8％、101.1％、100.6％、101.7％,RSD分别为0.7％、1.3％、1.4％、1.4％、1.1％、0.8％、0.9％、0.5％、0.5％、0.8％.10批次供试品中苦杏仁苷、齐墩果酸、熊果酸、仙鹤草酚B、甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、鲁斯可皂苷元、没食子酸、补骨脂素和紫菀酮质量浓度分别为0.104～0.123、0.600～0.621、0.501～0.523、0.100～0.121、0.103～0.122、0.231～0.260、0.043～0.065、0.055～0.069、0.061～0.079、0.031～0.043 mg/g.结论 本方法操作简便,结果准确可靠,可用于益肺清化颗粒的质量控制.
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正交试验优选紫百止嗽胶囊中紫菀的提取工艺
目的 筛选紫百止嗽胶囊中紫菀的佳提取工艺.方法 采用正交设计试验,以紫菀酮提取率为指标,考察溶剂体积分数、溶剂用量倍数、提取时间、提取次数4个因素对提取结果的影响.结果 佳提取工艺为药材质量8倍量80％乙醇、提取3次、每次60 min.结论 该工艺所得浸膏得率和紫菀酮提取率均较高,工艺稳定、重复性好,可为紫百止嗽胶囊的生产提供参考.
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蜜制紫菀饮片的质量标准研究
紫菀为菊科植物紫菀Aster tataricus L.f.的干燥根及根茎,具有润肺下气、止咳祛痰之功效,临床用于治疗气逆咳嗽,痰吐不利,肺虚久咳,痰中带血等症[1].紫菀中的紫菀酮是其祛痰镇咳作用的有效成分之一[2].紫菀药材中紫菀酮的测定已有报道[3,4].但是紫菀在临床应用上以蜜制饮片为主,因此,本实验采用TLC法和HPLC法对蜜制紫菀饮片进行质量标准研究.
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HPLC法测定紫菀中紫菀酮的含量
目的建立紫菀中紫菀酮含量测定的HPLC方法.方法外标法,Zorbax C8色谱柱为固定相,100%乙腈为流动相,检测波长为200 nm,流速为1.0 mL/min.结果紫菀酮线性范围为49.8～498μg/mL(r=0.999 9,n=7),平均回收率为98.10%,RSD=1.44%(n=3).结论本方法操作简便、快速、准确,可作为紫菀酮的定量分析方法.
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紫菀祛痰镇咳作用及其有效部位和有效成分
对紫菀祛痰镇咳作用进行了系统实验研究,发现紫菀水煎剂、石油醚及醇提液中乙酸乙酯提取物部分都明显增加小鼠呼吸道酚红排泄,而醇提液中正丁醇提取及剩余母液却无明显影响,提示紫菀祛痰作用的有效部位为石油醚、乙酸乙酯部分.从以上两部位中分得的紫菀酮、表木栓醇单体亦表现出明显祛痰作用,表明紫菀祛痰作用的有效成分至少包括紫菀酮、表木栓醇.紫菀水煎剂对小鼠氨水致咳没表现出明显镇咳作用,而紫菀酮、表木栓醇却显著抑制小鼠的咳嗽反应.
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正交试验优化小儿止咳颗粒提取工艺研究
目的：研究小儿止咳颗粒佳提取工艺。方法：采用正交试验设计，以紫菀酮含量为指标，考察乙醇浓度、溶剂用量、提取时间、提取次数4个因素不同水平的提取效果；以干膏得率为指标，考察溶剂用量、提取次数、提取时间3个因素不同水平的提取效果，优选小儿止咳颗粒提取工艺。结果：紫菀等药的佳提取工艺为A2 C2 B3 D1，即加6倍量60％乙醇，提取3次，每次1 h；茯苓等药佳提取工艺为B3 A1 C3，即加16倍量水，提取3次，每次1h。结论：该提取工艺合理可行，并能较好的保证制剂质量。
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高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定紫菀止咳冲剂中紫菀酮的含量
紫菀止咳冲剂为紫菀、知母、百合、川贝等中药组成的经水煎取的冲剂,具有化痰止咳的功能.为了进一步提高中药的产品质量标准,达到质量可控,对该制剂中的君药紫菀的有效成分紫菀酮,采用高效液相色谱法(HPLC)测定含量.
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咳喘口服液中紫菀的提取工艺研究
我院医院制剂咳喘口服液由紫菀、麻黄、黄芩等中药组成,具有解表化饮、止咳平喘的功效,主治毛细支气管炎、哮喘等.其中紫菀具有润肺下气、止咳祛痰之功效,主治气逆咳嗽、痰吐不利、肺虚久咳、痰中带血等症.
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薄层扫描法测定止咳清肺口服液中紫菀酮的含量
目的:制定止咳清肺口服液中紫菀酮的含量测定方法.方法:采用薄层扫描法进行测定.结果:紫菀酮点样量在0.87～4.95μg之间线性关系良好,相关系数r=0.999 1.回收率为99.4%,RSD=1.2%.结论:本法灵敏、简便、准确,可用于本制剂的测定和质量控制.
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紫菀酮蛋白结合率的HPLC测定
建立THPLC法测定紫菀酮在大鼠血浆、人血浆和牛血清白蛋白(BSA)中的总浓度及游离药物浓度,并分别计算蛋白结合率,以及紫菀酮与人血浆和BSA中自蛋白结合药物的表观大能力(βp)和药物一蛋白复合物的解离常数(Kdp).结果表明体外紫菀酮与三者的蛋白结合率均较高,在人血浆和BSA中的βp分别为0.314和0.5161amol/L,Kdp分别为1.78x10<'-2>和8×10<'-4>μmol/g.
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紫菀酮对去泛素化酶2活性的抑制作用
目的 从天然产物中发现新的去泛素化酶2 (USP2)抑制剂.方法 利用泛素荧光检测试剂盒进行USP2抑制剂筛选.100 μmol/L紫菀酮(SH)处理NB4细胞不同时间,Western blotting检测USP2底物蛋白Cyclin D1表达变化,流式细胞术检测细胞周期分布,分子对接技术分析SH与USP2结合情况.结果 体外筛选结果显示:SH抑制USP2活性,50％抑制浓度(IC50值)为69 μmol/L.Western blotting检测结果显示:SH引起USP2底物蛋白Cyclin D1表达水平降低.流式细胞术检测结果显示:SH处理NB4细胞48 h时,S和G2/M期细胞减少,并出现典型的细胞凋亡峰(Sub-G1峰);分子对接结果显示:SH的氧原子及其骨架中心和USP2的K503、W439、R363及D440对于两者之间的结合起到重要作用.结论 SH能够抑制USP2活性,为发展新的USP2抑制剂提供了先导化合物.
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不同紫菀饮片中紫菀酮的含量比较
目的:比较不同紫菀饮片中紫菀酮的含量.方法:以紫菀酮为指标,建立了HPLC法的测定条件,并对生紫菀、蒸紫菀、炒紫菀、蜜紫菀、醋紫菀、酒紫菀中该成分的含量进行了测定.结果:紫菀酮的含量大小依次为生紫菀＞炒紫菀＞蒸紫菀＞醋紫菀＞酒紫菀＞蜜紫菀;以纯紫菀计,不同紫菀饮片中紫菀酮的含量大小依次为蜜紫菀＞炒紫菀＞生紫菀＞醋紫菀＞酒紫菀＞蒸紫菀.结论:紫菀经过不同方法炮制所得各种紫菀饮片中紫菀酮的含量均较生品低;但以纯紫菀计,紫菀蜜炙后紫菀酮的含量升高.
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候选新药紫菀酮的药代动力学研究
目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定大鼠体内紫菀酮浓度.方法 样品以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定.用Waters shieldTM RP18色谱柱(150 mm×3.9 mm,5μm),以乙腈-0.05％磷酸为流动相(98:2),流速为1.0 ml/min,检测波长为200 nm.结果 紫菀酮的线性范围为0.043～1.720 μg/ml(r =0.995),精密度均小于10％,符合生物样本分析要求.结论 首次建立一种测定大鼠血样中紫菀酮浓度的分析方法,并成功地应用于药代动力学研究.
