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产KPC酶肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性分析
目的 评价临床常用的5种药物敏感性(药敏)试验方法对KPC酶介导碳青霉烯类抗菌药物耐药性的检出率.方法 收集2007年10月-2008年9月浙江大学医学院附属第一医院36株经PCR证实产KPC酶的肠杆菌科细菌,包括32株肺炎克雷伯菌、1株大肠埃希菌、1株弗氏枸橼酸杆菌、1株产酸克雷伯菌和1株黏质沙雷菌,用琼脂稀释法、纸片扩散法检测菌株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的耐药性,ATB G-5药敏卡检测亚胺培南、美罗培南的耐药性,BD Phoenix 100NMIC-109药敏卡检测亚胺培南的耐药性,VITEK 2 Compact AST-GN13药敏卡检测亚胺培南、厄他培南的耐药性.结果 ATB、BD Phoenix100、VITEK 2 Compact、琼脂稀释法和纸片扩散法检测亚胺培南耐药率分别为13.9%(5株)、11.1%(4株)、13.9%(5株)、22.2%(8株)和69.4%(25株);ATB、琼脂稀释法和纸片扩散法检测美罗培南耐药率分别为22.2%(8株)、55.6%(20株)和47.2%(17株);VITEK 2 Compact、琼脂稀释法和纸片扩散法检测厄他培南耐药率分别为69.4%(25株)、77.8%(28株)和88.9%(32株).VITEK 2 Compact和琼脂稀释法检测结果显示,厄他培南对所有产KPC酶菌株的MIC均≥2 μg/mL.结论 纸片扩散法和琼脂稀释法能更好地检出KPC酶介导的碳青霉烯类抗菌药物的耐药性,厄他培南可作为筛选产KPC酶菌株的指示药物.
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KPC型碳青霉烯酶分子进化及与底物结合自由能分析
目的 分析KPC-2、KPC-5和KPC-10型碳青霉烯酶的分子进化及与10种β-内酰胺类药物的结合自由能.方法 用MEGA 4.1软件中的Minimum Evolution法分析KPC-2、KPC-5和KPC-10型碳青霉烯酶的分子进化,用ArgusLab 4.1软件中的Dock模块作这3种酶与10种β-内酰胺类药物的分子对接,并计算酶与底物的结合自由能(△G).结果 有碳青霉烯酶活性的A类β-内酰胺酶在同一簇且保守性较好,无碳青霉烯酶活性的普通A类β-内酰胺酶则在另一簇.KPC-2、KPC-5和KPC-10型碳青霉烯酶与碳青霉烯类药物结合自由能均下降,且降幅居前,它们的结合自由能比第三代头孢类抗生素更低.结合自由能较高的为氨曲南和克拉维酸.结论 KPC型碳青霉烯酶对碳青霉烯类药物的催化能力高于对第三代头孢类抗生素的催化能力,对氨曲南和克拉维酸的催化活性低.
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武汉地区耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因的研究
目的 探讨武汉地区产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的主要耐药基因,并对耐碳青霉烯类的耐药机制进行初步分析.方法 采用Carba NP试验对88株耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌进行耐药表型确证.采用PCR方法检测KPC、NDM、VIM、IMP以及OXA-48共5种主要的碳青霉烯酶耐药基因并行测序验证.结果 88株临床分离菌对头孢唑林和氨苄西林耐药率均高达100.0％,对哌拉西林、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟和亚胺培南均>90.0％;Carba NP实验阳性菌株76株(86.4％),其中弱阳性11株;29株检出NDM-1耐药基因,24株携带KPC-2型碳青霉烯酶耐药基因,14株检出IMP-1型耐药基因,9株检出VIM-1型耐药基因,未检出OXA-48型耐药基因;4株联合产KPC和NDM基因肺炎克雷伯菌,2株联合产NDM和VIM基因阴沟肠杆菌.结论 本地区肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制主要是携带NDM-1和KPC-2型碳青霉烯酶基因.
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阴沟肠杆菌的临床分布及其产碳青霉烯酶研究
目的 探讨阴沟肠杆菌分离菌株的临床分布及其对常用抗菌药物的耐药及产碳青霉烯酶情况.方法 收集2014年6月至2016年2月武汉大学人民医院298例患者分类标本培养的菌株,应用BD PhoenixTM 100细菌鉴定及药敏系统鉴定菌种和药物敏感性,并适当补充K-B法药敏试验;对碳青霉烯类抗菌药物敏感性下降的菌株进行Carba NP实验表型确证,并且进行PCR测序确定基因型;采用阴沟肠杆菌的MLST技术进行分子分型.结果 共检出非重复分离的阴沟肠杆菌298株,其中标本主要为痰液(29.87%),其次为尿液(25.50%).科室分布中,神经外科(17.79%)检出多,其次为肝胆外科(12.75%).阴沟肠杆菌对头孢唑林的耐药率高(98.1%)、其次为氨苄西林(89.7%);对碳青霉烯类抗菌药物耐药的菌株中,9株菌通过Carba NP实验检测,其中8株为阳性,1株为阴性.PCR扩增出4株产NDM-1基因的菌株,其中1株联合产VIM-19基因的菌株,一株单产VIM-19型基因,均经过测序比对验证.将4株产NDM-1碳青霉烯酶的细菌进行MLST分型,得到3个不同的ST型,分别为ST508,ST509和ST145.结论 阴沟肠杆菌的耐药较为严峻,感控部门应加强对本地区产碳青霉烯酶菌的监测,以减少耐药菌的产生和播散.
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自动细菌鉴定药敏系统对肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶菌株的检测评价
目的：本研究旨在探讨自动细菌鉴定药敏仪器对碳青霉烯非敏感肺炎克雷伯菌株的检测效果，并对其实用性、可靠性做出初步评价。方法采用改良Hodge试验对菌株进行产碳青霉烯酶筛选，同时与常规药敏实验筛选的可能产碳青霉烯酶实验菌株对照，对可疑菌株进行相关耐药基因PCR扩增、测序，以此结果作为标准来判断上述试验的敏感性和特异性。结果研究期间临床共检出87株可疑产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌菌株，经Hodge试验初筛、PCR扩增证实产KPC酶的菌株40株，待测序确认6株；无VIM和IMP基因型；VITEK2专家系统提示碳青霉烯酶表型的敏感性87.0%，特异性92.7%。结论 VITEK2自动药敏鉴定仪因其对低水平耐药的产碳青霉烯酶菌株检测效果欠佳，敏感性和特异性不高，在筛选产碳青霉烯酶菌株时需谨慎使用。
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药物对美罗培南抑制耐碳青霉烯类抗菌药物鲍曼不动杆菌的影响
目的 探讨体外药物对美罗培南抑制耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌的影响.方法 采用PCR法对6株耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌产生碳青霉烯酶进行鉴定;微量肉汤稀释法观察大蒜素、头孢哌酮/舒巴坦和美罗培南的小抑菌浓度值(MIC),计算大蒜素、头孢哌酮/舒巴坦分别与美罗培南两药联用的部分抑制浓度指数(FIC).检测维生素C联用美罗培南和单用美罗培南的抑菌率.结果 鲍曼不动杆菌IMP、OXA-23型碳青霉烯酶基因PCR扩增阳性.大蒜素、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦对6株耐碳青霉烯类抗菌药物鲍曼不动杆菌的MIC值分别为512 mg/L、128 mg/L和1024 mg/L,大蒜素联用美罗培南的FIC值为0.25,头孢哌酮/舒巴坦联合美罗培南的FIC值为1.25.亚抑菌状态下,相同浓度美罗培南联合维生素C后,其抑菌率显著降低.结论 头孢哌酮/舒巴坦联用美罗培南对本研究组中的耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌无协同作用;大蒜素联用美罗培南对本研究组中的耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌具有体外协同作用;维生素C可降低美罗培南的抑菌率.
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检测产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌常用药物敏感试验方法的比较
目的 比较几种常用的检测产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌药物敏感试验方法 的检出率.方法 采用PCR技术及序列分析判定产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌;采用纸片扩散法、VTKTU 2 Compact AST-GN13药敏板、ATB G-5药敏板和WalkAway 96 PLUS NC31药敏板分别检测菌株对碳青霉烯酶类抗菌药物的耐药性.结果 纸片扩散法检出8株(72.7%)产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药,AST-GN13药敏板、ATB G-5药敏板和NC31药敏板均检出3株(27.7%)对亚胺培南耐药;纸片扩散法检出11株(100%),G-5药敏板检出7株(63.6%)对美罗培南耐药;纸片扩散法和AST-GN13药敏板均检出11株(100%)对厄他培南耐药.KPC阳性基因测序结果 为KPC-2型碳青霉烯酶.结论 纸片扩散法经济、方便,对碳青霉烯类抗菌药物耐药性检出率高,是筛查产KPC型碳青霉烯酶菌株的佳方法.
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肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶基因型研究
目的 探讨对碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低的肠杆菌科细菌携带碳青霉烯酶基因的类型.方法 收集2016年2月至2017年2月武汉大学人民医院分离自临床的87株对碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低的肠杆菌科细菌.运用改良Hodge试验进行碳青霉烯酶的表型确证.PCR检测碳青霉烯酶基因:blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM.将PCR产物纯化后进行测序,运用SeqMan软件对测序结果进行拼接后在NCBI网站BLAST比对,得到碳青霉烯酶基因亚型.结果 87株碳青霉烯类抗菌药物不敏感肠杆菌科细菌中,产碳青霉烯酶菌株检出率为70.1％,携带blaKPC-2、blaNDM-1、blaNDM-5、blaIMP-4和blaVIM-1的菌株分别为29、16、11、7和1株.产碳青霉烯酶多的肠杆菌科细菌为肺炎克雷伯菌(33株),其次为大肠埃希菌(15株),肺炎克雷伯菌以产KPC型碳青霉烯酶为主,而大肠埃希菌仅产NDM型碳青霉烯酶.改良Hodge试验检测碳青霉烯酶的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为93.4％、96.2％、98.3％和86.2％,可准确检测KPC-2和NDM-5型碳青霉烯酶.碳青霉烯类抗菌药物不敏感肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南和美罗培南的不敏感率分别为93.1％和79.3％,产KPC和NDM肠杆菌科细菌对青霉素类、除第四代头孢菌素以外的头孢菌素类、碳青霉烯类及加酶抑制剂的复合制剂耐药率均为100％,对其他临床常用抗菌药物的耐药率均保持在较高水平.结论 本院碳青霉烯类抗菌药物不敏感肠杆菌科细菌株主要产KPC-2、NDM-1和NDM-5型碳青霉烯酶.
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ICU和非ICU患者感染肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶和碳青霉烯酶检测
目的 比较分析医院ICU和非ICU患者分离的肺炎克雷伯菌的耐药性、以及产超广谱β-内酰胺酶(ES-BL)和碳青霉烯酶的情况.方法 收集2016年1-12月医院ICU和菲ICU患者感染的肺炎克雷伯菌50株,其中来自ICU患者20株,非ICU患者30株,经VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪进行鉴定;应用K-B纸片扩散法对抗菌药物进行敏感性测定;表型确证试验筛选ESBL;改良Hodge试验(MHT)检测碳青霉烯酶活性;聚合酶链反应(PCR)实验进一步确证KPC型碳青霉烯酶.结果 ICU患者和非ICU患者分离的肺炎克雷伯菌对三代头孢菌素耐药率均在90.00％以上,对亚胺培南和美罗培南耐药的肺炎克雷伯菌仅来自于ICU患者;分离菌株中共有39株为ESBL表型确证实验阳性,其中来自ICU患者的有15株(75.00％),来自非ICU患者的有24株(80.00％),两组肺炎克雷伯菌在产ESBL方面差异无统计学意义,分离菌株中共有6株为MHT试验阳性,均来自ICU患者,其中有一株同时产ESBL和碳青霉烯酶,ICU患者和非ICU患者中分离的肺炎克雷伯菌在产碳青霉烯酶方面差异有统计学意义(P＜0.05),6株MHT试验阳性菌株中,仅有3株为KPC型碳青霉烯酶,检出率为50.00％.结论 ICU患者分离的肺炎克雷伯菌对头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、庆大霉素和环丙沙星的耐药率要高于非ICU患者,ESBL依然是临床分离肺炎克雷伯菌产生高耐药率的主要原因之一,耐碳青霉烯类抗菌药物肺炎克雷伯菌仅出现于ICU患者,KPC型碳青霉烯酶是原因之一.
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Carba N P试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌和鲍氏不动杆菌的应用价值研究
目的 评价Carba NP试验用于产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌和鲍氏不动杆菌的应用价值.方法 将2014年-2015年临床分离的耐碳青霉烯类抗菌素肠杆菌科细菌39株和鲍氏不动杆菌37株,采用Carba NP 试验检测碳青霉烯酶;并采用PCR方法检测碳青霉烯酶相关基因,评价该试验的灵敏度和特异性.结果 26株肠杆菌科细菌PCR检出碳青霉烯酶相关基因,Carba NP试验检测肠杆菌科的敏感性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别为96.1%、94.8%、92.5% 和97.3%;21株鲍氏不动杆菌 PCR检出碳青霉烯酶相关基因,Carba NP试验检测鲍氏不动杆菌的敏感性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别为4.7%、100.0%、100.0% 和45.9%.结论Carba NP试验能快速检出携带 KPC、NDM-1、IMP-1和VIM-2基因肠杆菌科细菌的碳青霉烯酶,未能检出携带OX A-23基因的鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶.
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耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性及碳青霉烯类失活法检测分析
目的 分析临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)对临床常用药物的耐药情况及碳青霉烯类失活法(CIM)、改良Hodge试验(MHT)对产碳青霉烯酶的筛选能力.方法 使用聚合酶链式反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳的方法检测菌株携带碳青霉烯酶相关基因结果为标准,评估CIM和MHT对医院2016年1月-2017年9月临床分离的非重复30株CRKP及40株敏感菌株的碳青霉烯酶(CSKP)表型筛选能力.结果 30株CRKP对替加环素、阿米卡星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率分别为0、13.33％、16.67％,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和美罗培南耐药率分别为86.67％、93.33％、93.33％,对其他9种β-内酰胺类抗菌药物的耐药率为100.00％;除磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、头孢唑林及替加环素外,CRKP对其他抗菌药物的耐药性较CSKP差异有统计学意义(P＜0.05).PCR结果表明30株CRKP均携带碳青霉烯酶基因;CIM和MHT灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为100.00％、100.00％、100.00％和100.00％;96.67％、100.00％、100.00％和97.56％.结论 CRKP对常用抗菌药物表现出较高耐药性,碳青霉烯酶的产生是主要耐药机制,提示临床应加强抗菌药物的管理;与PCR相比,MHT和CIM均具有较高的灵敏度、特异度和预测值,可在常规实验室开展,CIM具有结果更准确、更易于观察、结果读取时间短等优势.
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5株携带blaNDM-5基因大肠埃希菌临床株的分子流行特征分析
目的 探讨耐碳青霉烯类抗菌药物大肠埃希菌的耐药机制并对分离株的分子流行特征进行分析,为医院感染的防控提供依据.方法 选取2015年5月-2016年10月住院患者标本分离的5株耐碳青霉烯类抗菌药物的大肠埃希菌,产金属碳青霉烯酶的筛选采用亚胺培南/EDT A复合E-test条,采用PCR方法检测菌株携带的碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶、ampC酶和喹诺酮类耐药相关基因,并测序确认类型及其亚型,脉冲场凝胶电泳技术检测分离株间的同源性,液相质粒接合试验分析质粒的转移特性.结果 除了阿米卡星和氨曲南外,5株大肠埃希菌对目前测试的头孢菌素、碳青霉烯类和喹诺酮类抗菌药物都耐药,且金属酶表型实验结果都呈现阳性;5株大肠埃希菌携带不同的耐药基因,但都携带blaN DM-5和 blaT EM-1基因;脉冲场凝胶电泳显示5株大肠埃希菌的脉冲带型不一致,没有呈现克隆聚集性;质粒接合试验没有显示5株大肠埃希菌临床株(供体菌)将携带blaN DM-5的质粒转移到大肠埃希菌J53AziR(受体菌).结论 研究结果表明本地区存在携带blaN DM-5基因的大肠埃希菌的流行,但没有呈现克隆聚集暴发性,为预防和控制医院感染的暴发,必须重视和加强对耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌的监测.
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三亚地区医院肠杆菌科细菌分子流行病学研究
目的 探讨三亚地区医院耐碳青霉烯类抗菌药物的肠杆菌科细菌(CRE)的耐药性及耐药基因的携带情况.方法 收集医院2014年1月-2018年1月临床分离的肠杆菌科细菌标本1699份,并对其中复苏成功的29株CRE和2株多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-AB)用改良Hodge试验(M HT)检测碳青霉烯酶,采用聚合酶链反应(PCR)法检测耐药基因N DM-1、K PC-2,并对扩增产物进行测序确认.结果 1699株肠杆菌中共检出CRE 50株,检出率为2.94％.CRE对阿米卡星耐药率较低为38.00％,对其他临床常用抗菌药物均表现出较高的耐药率(≥50.00％).所研究的29株CRE中2株M H T试验阳性,阳性率为6.90％;26株扩增出碳青霉烯酶基因,检出率89.66％,其中21株携带NDM-1、11株携带K PC-2,6株同时具有NDM-1和K PC-2基因.1株MDR-AB同时含有N DM-1和K PC-2基因.结论 医院检出CRE菌株所携带耐药基因以N DM-1为主,本地区的耐药菌流行具有热带地区的特点,具有一定的临床意义.
关键词： 碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌 碳青霉烯酶 耐药基因 -
耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌耐药机制研究
目的：探讨碳青霉烯酶和主动外排泵在鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药中的作用，为临床治疗提供参考依据。方法收集医院2014年临床分离耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌（CRAB ）100株，采用琼脂稀释法测定其对临床常用15种抗菌药物的敏感性；PCR检测碳青霉烯酶及外排泵基因的携带情况；随机选取10株CRAB与1株敏感菌，实时荧光定量PCR分析外排泵基因表达量。结果100株CRAB对多黏菌素B均敏感；PCR扩增结果显示，PER、SHV、TEM 阳性率分别为54．00％、32．00％和16．00％；OXA-23阳性率86．00％， adeB、adeJ阳性率分别为55．00％、33．00％；实时荧光定量PCR显示，adeB基因表达量比敏感菌高10倍以上，而adeJ表达量与敏感菌差异无统计学意义。结论 CRAB耐药性较严峻，对碳青霉烯类耐药由携带碳青霉烯酶和主动外排泵共同介导。
关键词： 耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌 碳青霉烯酶 外排泵 耐药机制 -
耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药特征及基因分型
目的 研究耐碳青霉烯肠杆菌科细菌的耐药特征及基因分型,为研究耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药机制提供实验依据.方法 收集重庆某三甲医院2017年1月-2017年12月临床分离的81株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌,采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)法检测KPC、IMP、VIM、NDM和OXA-48共5种主要的碳青霉烯酶耐药基因并行测序验证,并利用VITEK-MS质谱仪对所有菌株进行鉴定,采用小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)法测定其对15种常用抗生素的敏感性,通过WHONET 5.6软件对药敏资料进行统计分析.结果 81株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌中有73株确定为产碳青霉烯酶,其中KPC型51株、NDM型14株、IMP型8株,未检出VIM型和OXA-48型耐药基因;其中肺炎克雷伯菌61株、大肠埃希菌5株、阴沟肠杆菌4株、弗劳地枸橼酸杆菌3株,分别来自ICU 37株、神经外科10株、康复科7株、RICU 6株、NICU6株、CCU 4株、创伤外科3株;73株临床分离菌对头孢唑林、氨苄西林/舒巴坦、氨曲南和亚胺培南耐药率均高达100.0％,对头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、头孢替坦和复方新诺明均＞90.0％.结论 医院患者临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌对多种抗菌药物的耐药率较高,且大多数的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌均携带有耐药基因,临床应加强对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的监测和控制,合理选用抗生素.
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产NDM-1肺炎克雷伯菌引起的新生儿感染及其同源性检测
目的 调查对碳青霉烯酶类抗菌药物耐药肺炎克雷伯菌的分子机制及其同源性,为新生儿感染的预防和监测提供参考依据.方法 5株肺炎克雷伯菌分离自2015年1-2月新生儿病房患儿吸痰标本;用法国生物梅里埃公司VITEK-2 Compact系统对细菌进行鉴定和药敏;菌株产碳青霉烯酶的筛选是采用改良Hodge和金属酶试验;PCR和产物测序法检测以及确认菌株携带的超广谱β内酰胺酶、AmpC酶和碳青霉烯酶耐药基因;脉冲场凝胶电泳分析细菌的同源性;质粒接合试验分析质粒的特性.结果 除了氨曲南以外,5株肺炎克雷伯菌对二、三代头孢菌素和碳青霉烯类抗菌药物均耐药,且Hodge试验和金属酶试验均呈现阳性;每一株菌均携带bla NDM-1、blaCMY-6和blaDHA-1基因;脉冲场凝胶电泳显示5株菌的带型完全相同;质粒接合试验显示供体菌将携带blaNDM-1的质粒成功转移到受体菌.结论 经检索,携带bla NDM-1、bla CMY-6和blaDHA-1基因的肺炎克雷伯菌在新生儿中的聚集流行为国际上首次报道,应加强医院感染的监测、预防和控制.
关键词： 肺炎克雷伯菌 bla NDM-1基因 新生儿 碳青霉烯酶 基因 -
2株耐碳青霉烯类植生拉乌尔菌耐药基因检测分析
目的 研究耐碳青霉烯类抗菌药物的植生拉乌尔菌耐药机制.方法 收集2014年10月-2015年03月临床分离的两株来自痰液标本耐碳青霉烯类植生拉乌尔菌,采用Vitek2-compact全自动微生物分析仪进行细菌鉴定,并用16S rRNA进行菌株确认,采用E-test进行药敏试验,用PCR扩增检测碳青霉烯酶(KPC、GES、IMI、NDM、VIM、IMP、SIM、OXA-48)、超广谱 β 内酰胺酶(TEM、S HV、CTX-M、VEB、PER)、质粒介导的喹诺酮耐药基因(qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib-cr)以及 Ⅰ 类整合子可变区结构,Southern杂交方法检测2株菌株质粒相关情况.结果 1号菌株携带blaK PC-2和qnrB4耐药基因,Ⅰ 类整合子基因盒种类为arr-3-dfrA27;2号菌株携带blaIM P-4、blaTEM-1、blaCTX-M-3、blaSHV-12、qnrS1和aac(6')-Ib-cr等耐药基因,但无相关整合子基因盒结构.质粒分析发现blaKPC-2和blaIM P-4均位于54kb-60kb可结合质粒上.结论 两株耐碳青霉烯类泛耐药植生拉乌尔菌分别产KPC-2和IM P-4型碳青霉烯酶,需加强耐药监测,避免多重耐药菌播散.
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Carba NP法对产碳青霉烯酶菌株快速检测的研究
目的 探讨生化试验Carba NP法用于产碳青霉烯酶肠杆菌属和假单胞菌属细菌的快速检测,以及鉴别区分产碳青霉烯酶A、B、D类型的准确程度与适用性.方法 对2014年10月-2015年3月从医院临床标本分离的23株亚胺培南耐药菌株进行Carba NP法试验,并将阳性结果与PCR结果进行比对.结果 Carba NP法检测的23株胺培南耐药菌株中4株显色结果呈阳性,说明其产生碳青霉烯酶,并可将其进一步区分为2株A型、2株B型;对该4株耐药菌进行PCR检测产碳青霉烯酶基因,1株含基因VIM,1株含基因NDM(B型),2株含基因KPC(A型),该结果与Carba NP法结果相符.结论 Carba NP法简单易行、成本低廉、快速方便,特异性和灵敏度均较高,不仅能快速检测出产碳青霉烯酶菌株,并且能进一步判定产碳青霉烯酶菌株的类型,节省了检测时间,有助于提高产碳青霉烯酶菌株的检出率,结合PCR及测序能有效控制医院获得性感染.
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宁夏地区某医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌临床分布及耐药基因的分析
目的 探讨医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的临床分布特点、耐药情况及耐药机制,以便指导临床医生合理使用抗菌药物.方法 采用WHONET5.6软件统计医院2014年1月-2016年12月所有检出的CRE菌株,MIC法检测药敏结果,改良Hodge试验和EDTA协同试验检测是否产碳青霉烯酶;用PCR技术检测碳青霉烯酶的耐药基因并进行测序.结果 共分离CRE 70株,以阴沟肠杆菌28株和肺炎克雷伯菌23株为主;主要分布在肝胆外科;对青霉素类及头孢类抗菌药物的耐药率均＞90％;改良Hodge试验和EDTA协同试验阳性率分别为77.1％和87.1％;NDM-1耐药基因阳性率高,为75.7％,其余耐药基因KPC-2、IMP-4阳性率分别为17.1％与11.4％,其中3株同时携带两种耐药基因,未检出GES-4、VIM-2、OXA-48耐药基因.结论 碳青霉烯酶耐药基因以NDM-1为主,医院需加强细菌的耐药监测,合理使用抗菌药物,防止感染的暴发性流行.
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粪便标本中耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的分子生物学与相关的β内酰胺酶特征研究
目的 探讨研究住院患者粪便标本中耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的碳青霉烯酶和相关的β-内酰胺酶分子生物学特征.方法 收集2011年12月-2012年2月医院临床分离非重复的21株CRE菌株,筛选碳青霉烯酶和相关β-内酰胺酶.采用改良Hodge试验(MHT)对21株CRE进行碳青霉烯酶表型的筛选,采用聚合酶链式反应(PCR)和基因测序法检测21株CRE的碳青霉烯酶和相关β内酰胺酶的耐药基因型.使用接合转移肉汤法进行质粒的接合试验.结果 MHT共检出9株碳青霉烯酶阳性菌株,占42.9％;PCR法共检出13株携带CTX-M型ESBLs酶,占61.9％;4株IMP-4阳性的菌株中有3株接合成功,4株KPC-2阳性的菌株中有2株接合成功,菌株KOR1中的NDM-1接合成功.结论 医院住院患者肠道分离CRE耐药机制以携带KPC-2和IMP-4为主,且与β-内酰胺酶耐药基因高度相关.医院应该采取严格的感染控制措施,避免CRE在居民卫生保健设施中广泛传播.
