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健脾方对克罗恩大鼠结肠NF-κBP65、IL-23和CCL20及其受体表达的影响
目的:观察核因子NF-κB p65信号通路介导细胞因子IL-23、趋化因子巨噬细胞炎症蛋白-3α(CCL20)及其受体CCR6表达的影响,及健脾方防治三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病中相关作用机制.方法:24只清洁级雄性SD大鼠随机分为:①正常对照组(NG,n=8):从造模第2周起双蒸水灌胃,每日1次,灌胃量按0.1 mL·kg-1,共3周;②TNBS模型组(MG,n=8):从第1周开始TNBS灌肠,灌肠剂量(mL)=体质量(g)×0.003 ml·g-1,每周1次,造模持续共4周;③模型+健脾方防治组(JP,n=8):从造模第2周开始,在TNBS灌肠后的第2天予以中药健脾方灌胃治疗,灌胃量按0.1 mL·kg-1,每日1次,灌胃持续3周;采用结肠组织学损伤评分及HE组织病理的方法观察健脾方的疗效,免疫荧光、ELISA、原位杂交等技术观察各组大鼠结肠黏膜中NF-κB P65、IL-23、CCL20、CCR6蛋白与基因的表达差异;结果:免疫荧光和原位杂交结果显示,CCL20及其受体CCR6在正常组大鼠结肠中呈低表达,在模型组中呈高表达状态(P＜0.05).健脾方可显著降低大鼠结肠趋化因子CCL20及其受体CCR6的表达水平(P＜0.05).正常组大鼠结肠中NF-κB P65呈低表达,在模型组中呈高表达状态(P＜0.05),健脾方可显著降低大鼠结肠NF-κB P65表达水平(P＜0.05). ELISA结果显示IL-23在正常组大鼠结肠中呈低表达,在模型组中呈高表达状态(P＜0.05).健脾方可显著降低大鼠结肠细胞因子IL-23的表达水平(P＜0.05).结论:健脾方可减轻TNBS诱导的CD大鼠结肠炎症程度,其潜在的机制与抑制NF-κB P65、IL-23和CCL20/CCR6的表达有关.
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CCL20抑制小鼠胸腺CD4+CD25+天然调节性T细胞的发育
本研究探讨趋化因子CCL20对小鼠胸腺CD4+CD256双阳性调节性T细胞发育的影响.为天然调节性T细胞调控的研究提供基础数据.采用14.5天龄胚鼠胸腺进行体外培养,以FACS检测不同时间点胸腺CD4+CD25+细胞的改变,同时计数每个胸腺小叶的细胞数变化.结果表明:体外胸腺培养的第1-6天胸腺细胞比例、细胞数量的变化趋势与胸腺体内发育的第14.5、15、16、17、18、19天CD4+CD25+双阳性T细胞的比例、细胞数量的变化趋势相似;在胸腺体外培养的第1-6天,CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例分别为58.29%、12.14%、6.08%、17.78%、9.06%、4.04%,占CD25+T细胞的比例分别为3.75%、10.81%、17.20%、51.93%、61.64%、80.06%,这一发育趋势与体内结果具有一致性.在4μg/ml的CCL20干预下,胸腺体外培养的第3、6天CD4+CD25+胸腺细胞分别从3.24±0.18、3.96±0.24下降至1.27±0.11、1.76±0.22(p值均＜0.001).结论:体外培养的CD46CD25+双阳性胸腺细胞数量和比例变化与体内发育变化趋势一致,CCL20明显下调胸腺CD4+CD25+的表达,这将为天然调节性T细胞的调控研究提供有效的参考依据.
关键词： 胸腺细胞 CD4 CD25 CCL20 CD4+CD25+T细胞 -
HBV感染对趋化因子CCL20表达的影响及其意义
目的研究HBV不同感染状态对CCL20表达水平的影响,探讨CCL20在乙肝病毒感染中的作用. 方法通过基因体外转染技术,建立HBV不同感染状态的肝细胞模型;以内对照定量RT-PCR检测HBV不同感染状态下CCL20的表达水平. 结果 HBV不同感染状态下CCL20的表达水平不同,HBV未感染肝细胞CCL20表达水平每106细胞为(2.65±0.02) pg/10 μl,HBV短暂感染肝细胞CCL20的表达水平每106细胞为(3.43±0.02) pg/10 μl,而HBV持续感染肝细胞CCL20的表达水平每106细胞为(1.22±0.04) pg/10 μl,上述三种不同感染状态下肝细胞表达CCL20的水平差异有统计学意义,表现为HBV短暂感染肝细胞＞未感染肝细胞＞HBV持续性感染肝细胞(P＜0.05).在HBV同一感染状态下,CCL20的表达水平与HBV感染时间、细胞的培养时间、病毒载量等因素未见显著性相关;上述细胞经乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)活化后,相应细胞CCL20表达均明显增加(P＜0.05),但并不改变CCL20在各细胞中的表达格局. 结论 HBV的不同感染状态影响了CCL20的表达.
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趋化因子CCL20在慢性乙型肝炎活检组织中的表达及意义
目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)肝活检组织CCL20的表达与病理分级分期的关系,探讨CCL20在慢性HBV感染中的作用及意义.方法 通过内参照竞争逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对处于正常状态和慢性感染状态的肝细胞系的CC120 mRNA进行定量检测,观察CCL20的表达差异.定量检测正常肝脏和CHB活检组织的CC120水平,结合肝脏组织学积分研究其相关性.结果 在体外细胞系水平上,HBV未感染肝细胞HepG2的CCL20表达量为(2.65±0.02)pg/106细胞,而HBV持续感染肝细胞HepG2.2.15的CC120表达量为(1.22±0.04)pg/106细胞(t=39.66,P<0.01);PMA刺激CCL20表达的增加但不改变CCL20在二类细胞之间的表达格局.在HBV慢性感染状态下肝活检组织的CCL20的表达(3.54±0.65)pg/20 mg显著低于其在正常肝组织中的平均表达量(8.74±0.56)pg/20 mg(t=30.09,P<0.01),且与肝脏的组织学积分相关(r=0.675,P=0.023).结论 HBV慢性感染状态下CCL20的表达下调,CCL20的表达与CHB患者肝脏组织学积分相关.
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CCL20、CCR6及IL-17A在寻常型银屑病患者血清中的表达及意义
目的 观察趋化因子CCL20及其受体CCR6、白细胞介素(IL)-17A在银屑病患者血清中的变化,并探讨其在银屑病发病中的作用.方法 采用酶联免疫吸附法测定26例斑块型、7例点滴型银屑病患者及8名健康人血清中CCL20、CCR6及IL-17A的浓度,并对银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)评分、病程进行相关性分析.结果 斑块型银屑病患者血清CCL20、CCR6及IL-17A浓度(748.74±268.72,10.20±3.75,39.22±13.21)均显著高于健康对照组(578.45±204.93,6.79±4.61,25.54±13.04) (P分别＜0.05,＜0.01,＜0.01).点滴型银屑病与对照组差异无统计学意义.CCL20、CCR6与PASI评分呈正相关(r=0.416,r=0.350)(P＜0.05).CCL20、CCR6及IL-17A三者之间均存在显著正相关(r=0.852,r=0.801,r=0.825)(P＜0.001),与病程无明显相关性.结论 CCL20、CCR6及IL-17A参与斑块型银屑病的病理过程.
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CC亚族趋化因子配体20与胰腺癌
趋化因子是一类能趋化细胞向炎症组织定向迁移的细胞因子.CC亚族趋化因子配体20(CCL20)是趋化因子家族中的重要成员之一,其受体为趋化因子受体6(CCR6),是目前发现的唯一一个与单一受体结合的趋化因子.CCL20在树突状细胞、T细胞、激活的单核细胞及内皮细胞中均有表达,且受白细胞介素1β、IL-17、肿瘤坏死因子α和干扰素y等细胞因子诱导.CCL20与CCR6特异性结合后,在病原体清除、炎症反应、移植排斥、造血、血管生成、肿瘤发生等过程中起重要作用.
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CCL20单克隆抗体与雷公藤治疗胶原诱导性关节炎模型小鼠的对照研究
目的 研究趋化因子CCL20在胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠中的表达,探讨CCL20单克隆抗体对CIA小鼠的治疗作用及临床治疗类风湿关节的潜在价值.方法 ①建立CIA小鼠模型:40只DBA/1小鼠随机分为健康对照组、模型组、CCL20单克隆抗体治疗组、雷公藤治疗组；②观察不同时间点小鼠一般情况、关节肿胀度；③测定造模42天后小鼠血清CCL20、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达水平；④观察各组小鼠关节病理变化.结果 ①模型组、雷公藤组和单抗组CCL20,TNF-α和IL-1β均高于对照组,CCL20(29.45±4.92) ng/L、(18.32±4.80) ng/L、(14.13±3.82) ng/L vs (2.83±1.37) ng/L;TNF-α(63.1±2.82) ng/L、(43.15±2.31) ng/L、(42.91±2.02) ng/L vs (26.78±3.50) ng/L;IL-1β(83.72±4.04) ng/L、(53.78±5.89) ng/L、(56.77±4.98)ng/L vs(16.54±2.45)ng/L,雷公藤组和单抗组的CCL20、TNF-α和IL-1β均低于模型组.②HE染色观察,模型组较正常组滑膜肥厚,排列紊乱、滑膜内有大量炎症细胞浸润,有血管翳形成.雷公藤组和单抗组较模型组明显减轻.结论 CCL20在CIA小鼠中异常高表达,以CCL20单克隆抗体阻断CCL20作用可有效缓解关节炎症,且与雷公藤效果相当,CCL20单克隆抗体在临床治疗类风湿关节炎方面具有潜在价值.
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麻黄-桂枝药对对白介素-22诱导的HaCaT细胞分泌CCL20的影响
目的:观察麻黄-桂枝药对对白介素-22(IL-22)诱导的人永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞株)分泌CCL20的影响,探讨麻黄-桂枝药对治疗银屑病的可能作用机制,从而为汗法治疗银屑病提供科学的理论依据.方法:用IL-22刺激HaCaT细胞,并加入不同浓度的麻黄-桂枝药对水煎液共培养适当时间,运用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测HaCaT细胞分泌的CCL20;运用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定HaCaT细胞CCL20mRNA的表达.结果:IL-22能明显促进HaCaT细胞分泌CCL20并使CCL20mRNA的表达增加.麻黄-桂枝药对能够抑制IL-22诱导的HaCaT细胞分泌CCL20及表达CCL20mRNA,并与其药物浓度成依赖性关系.结论:麻黄-桂枝药对可能是通过抑制角质形成细胞分泌CCL20从而治疗银屑病.
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恒河猴胃肠道相关淋巴组织中CCL25、CCR9、CCL20及CCR6转录水平的定量分析
目的:阐明恒河猴胃肠道相关淋巴组织中CCL25、CCR9、CCL20和CCR6转录产物的分布和丰度.方法:建立CCL25、CCR9 、CCL20和CCR6转录水平的Taqman探针实时定量PCR检测方法.提取胃肠道相关淋巴组织和非胃肠道相关淋巴组织的总细胞RNA,检测CCL25、CCR9、CCL20和CCR6的mRNA的存在和表达水平.结果:(1)在恒河猴的所有检测组织中CCL25、CCR9、CCL20和CCR6的mRNA均有表达.在胃肠道相关淋巴组织中,CCL25和CCR9的mRNA表达主要在小肠而不是大肠,而CCL20和CCR6的mRNA则表达在胃肠道所有节段中.在非胃肠道相关淋巴组织中,CCL25和CCR9的mR-NA在胸腺中的表达水平高;而CCR6mRNA在脾脏和腹股沟淋巴结中含量丰富.(2)相关分析结果显示CCL25与CCR9mRNA的表达具有显著的相关性(P=0.002 0,r2=0.480 2),CCR9与CCR6 mRNA的表达也具有相关性(P =0.003 9,r2=0.436 4).结论:与人相似,CCL25、CCR9、CCL20和CCR6 mRNA在恒河猴的胃肠道相关淋巴组织中高度且有区别地表达,表明恒河猴适宜用于与这些分子相关的黏膜免疫及人类疾病研究.
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趋化因子CCL22和CCL20协同皮肤抗原诱导的调节性T淋巴细胞对皮肤移植的影响
目的：研究小鼠皮肤移植模型中趋化因子CCL20和CCL22联合调节性T细胞对移植皮肤存活时间的影响。方法：将皮肤移植小鼠分为四组，每组3只小鼠，分别为Treg组、Treg＋CCL20组、Treg＋CCL22组与对照组。其中Treg细胞经同种异体皮肤抗原诱导。以C57BL／6小鼠为同种异体供体，BALB／c小鼠为受体行皮肤移植手术。进行皮肤移植后立即于异体皮下注射Treg细胞2×105个细胞／鼠，体积为200μl。以后每日于异体皮下注射趋化因子CCL20或CCL22，共连续注射10 d，观察并记录皮肤的存活情况。 Treg细胞定植实验：首先利用磁珠分选方法分离皮肤抗原诱导Treg细胞，并利用锝99标记分离到的Treg细胞；皮下注射3 h后，处死小鼠，用GC-2016γ放射免疫计数器检测各脏器及移植皮肤的放射性活度。结果：①经Treg进行干预的小鼠，其异体皮肤存活时间均显著长于手术对照组（ P＜0.05），而且同种异体抗原诱导Treg在趋化因子CCL20或CCL22存在下异体皮肤存活时间显著高于单纯使用Treg组和对照组（ P＜0.001）。②注射皮肤抗原诱导的Treg细胞后，自体和异体皮肤移植组Treg细胞主要分布在自体和异体皮肤，分别占注射Treg组细胞的60％和98％；加趋化因子CCL20组和CCL22组的Treg主要分布在肝脏。结论：趋化因子CCL20和CCL22能够协同促进经皮肤抗原诱导的Treg细胞延长异体皮肤的存活时间，这种作用效果可能与趋化因子CCL20和CCL22趋化Treg细胞向肝脏大量定植相关。
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CCL20在人体炎症牙髓表达的免疫组化研究
目的：研究 CCL20蛋白在人炎症牙髓中的表达情况，以探讨 CCL20在急、慢性牙髓炎中的可能作用，推测在炎症牙髓中 CCL20表达的意义。方法临床选取正常、炎症人牙髓标本共60个，根据临床症状分为无症状组（NS组，20例）、慢性牙髓炎组（CP 组，20例）、急性牙髓组（AP 组，20例）3组，采用免疫组化方法检测3组标本中 CCL20的表达情况。结果在健康牙髓中，CCL20无表达，在急性牙髓炎，慢性牙髓炎时，牙髓组织中 CCL20在树突状细胞、浆细胞、T 细胞上有不同程度的表达。结论CCL20在人体急、慢牙髓炎中呈动态表达，CCL20可能参与调节牙髓炎。
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CCR6及CCL20在相关疾病中的研究进展
趋化因子也称化学趋化性细胞因子（ chemoattractant cyto-kines），是一组由组织细胞和炎性细胞产生的具有多种生物学功能的小分子生物活性肽，相对分子质量为8000-10000（含70-100个氨基酸残基）。根据其 N 末端保守的半胱氨酸（Cys）的排列方式可分为CXC亚族、CC亚族、C亚族和CX3C亚族四类。趋化因子受体是一类具有7个跨膜区的G蛋白偶联蛋白，主要表达于内皮细胞和免疫细胞。根据结合配体的不同，趋化因子受体也可分为 CXCR 类、CCR 类、C 类和CX3CR四类。CCR6属 CCR类，表达于未成熟 DCs、B细胞、CD4+T细胞亚群、CD8+T细胞亚群、NKT细胞及多种肿瘤细胞［1-3］。趋化因子CCL20是目前发现的CCR6在体内唯一的配体，表达于肝脏组织、皮肤角质上皮细胞和肠道上皮细胞等部位［4-5］。CCL20生理条件下表达较低的基础水平，但是可经强烈的促炎信号诱发其表达升高，如主要细胞因子 TNFα、来源于细菌的Toll样受体激动剂［6］。CCL20可趋化CCR6+细胞向抗原出现的组织部位定向迁移［7］。近年来国内外对CCR6/CCL20功能及其在体内的作用进行了大量研究，现在我们对趋化因子受体CCR6及其配体CCL20在炎性疾病、自身免疫性疾病及肿瘤领域的研究展开简单的综述。
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CCL20对HBV基因疫苗的免疫增强作用
CCL20为CC家族的趋化因子,对未成熟DC和T细胞具有较强的正向趋化作用.HBsAg是乙肝病毒中具有保护作用的结构抗原.以HBsAg为目的抗原进行基因免疫可诱导HBV特异性免疫应答.为进一步增强基因疫苗的免疫效果,研究中,应用基因重组技术,构建CCL20和HBsAg的真核表达载体,将重组体用肌肉注射方式免疫C57BL/6小鼠,通过ELISA方法检测C57BL/6小鼠的抗-HBs抗体水平、淋巴细胞增殖试验检测抗原特异性Th活性、FACS检测CTL效应.结果显示,用CCL20/HBsAg真核表达质粒共注射免疫后,100%小鼠能在第4、6周检测到抗-HBs抗体,CCL20可显著增强HBsAg基因疫苗诱导的体液免疫应答;Th活性和CTL效应检测也显示,CCL20增强了HBsAg诱导的特异性细胞免疫反应.这将为新型乙肝疫苗的分子设计和研制提供新的理论与实践依据.
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CCR6与免疫细胞关联性研究进展
趋化因子受体6 (chemokine receptor 6,CCR6)是趋化因子受体CCR亚家族成员之一,可表达在单核细胞、树突状细胞、T细胞、B细胞等多种免疫细胞上.新近研究显示,CCR6在免疫细胞介导的炎症反应、移植排斥反应以及肿瘤免疫逃逸等中发挥了重要作用.本文就其相关研究进展做一综述.
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趋化因子CCL20及其受体CCR6在乳腺癌患者外周血中的表达及意义
目的 研究乳腺癌患者外周血中趋化因子CCL20及其受体CCR6的表达变化在乳腺癌发病机制中的作用.方法 把乳腺癌患者分为2组,癌组织上有CCR6表达的为CCR6+组,癌组织上未见有CCR6表达的为CCR6 -组.采用酶联免疫吸咐试验(ELISA)检测乳腺癌患者及正常人血清中CCL20水平,同时用流式细胞仪分析外周血CD3 +T淋巴细胞表面CCR6的表达.结果 CCR6+组患者血清CCL20水平明显高于正常对照组和CCR6 -组(P均＜0.01),各组外周血CD3+T淋巴细胞表面CCR6的表达差异无统计学意义.结论 CCR6+组患者血清CCL20水平升高可能在部分乳腺癌的发病过程中发挥作用.
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CCL20单克隆抗体对小鼠噁唑酮结肠炎的治疗作用
背景:趋化因子是一类具有趋化作用的小分子细胞因子,与免疫和炎症反应密切相关.炎症性肠病(IBD)是一组肠道慢性炎症性疾病,免疫反应异常为其特征性表现之一.目的:研究趋化因子CCL20及其受体CCR6在小鼠实验性结肠炎中的表达以及抗CCL20治疗对实验性结肠炎的疗效.方法:30只昆明小鼠随机分为正常对照组、结肠炎模型组和CCL20单抗组,后两组以嗯唑酮溶液灌肠诱导结肠炎模型.造模后每天予单抗组小鼠CCL20单抗1 mg/kg腹腔注射一次,连续4 d.第5 d行疾病活动指数(DAI)评估后处死小鼠,行结肠大体形态和组织学损伤评分,测定结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性;以荧光定量聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测结肠组织CCL20mRNA和蛋白表达;分离肠黏膜固有层单个核细胞(LPMC),流式细胞仪分析CCR6阳性CD4+T细胞比例.结果:与正常对照组相比,结肠炎模型组的DAI、结肠大体形态和组织学损伤评分、MPO活性以及结肠组织CCL20 mRNA和蛋白表达、LPMC中CCR6阳性CIM+T细胞比例均显著增高(P<0.05);而CCL20单抗组上述指标均较结肠炎模型组显著降低(P<0.05).结论:CCL20/CCR6在嚼唑酮诱导的小鼠实验性结肠炎中表达增高,以CCL20单抗阻断CCL20/CCR6可有效缓解结肠炎症.
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Ad5-CCL20联合热疗对结肠癌CT-26细胞小鼠移植瘤生长的抑制作用
目的:探讨重组腺病毒Ad5-CCL20联合热疗对结肠癌CT-26细胞小鼠移植瘤的抑制作用.方法:将Ad5-CCL20转染CT-26细胞,采用ELSA法和趋化实验分别检测CT-26细胞中CCL20的表达及其对DC的趋化作用.Western blot-ting检测热激结肠癌CT-26细胞中HSP70、GP96的表达.用热激后细胞蛋白(Heat组)对DC进行诱导,并设对照组(Control组)和阴性对照组(Unheat组),流式细胞术检测DC的表型.建立CT-26细胞移植瘤模型,设Ad5-CCL20/Heat、Heat、Ad5-CCIL20、Ad5-GFP和Control组,观察各组荷瘤小鼠肿瘤生长和生存时间;采用ELISAPOT法和LDH法分别检测脾组织T淋巴细胞分泌IFN-y的能力和对CT-26细胞的CTL杀伤活性,免疫组化法检测肿瘤组织DC浸润情况.结果:Ad5-CCL20转染CT-26细胞后可高表达CCL20,且对iDC、mDC都具有趋化活性,对iDC更为明显(P＜0.05).CT-26细胞热激后可高表达诱导型HSPT0和GP96.与Control、Unheat组相比,Heat组细胞蛋白诱导后DC的CD80、CD86、CCR6和MHC-Ⅱ的表达率明显升高(均P＜0.01).与Control、Ad5-GFP、Ad5-CCL20组和Heat组相比,联合治疗组荷瘤小鼠的肿瘤抑制为明显(均P＜0.01),生存时间明显延长(均P ＜0.05).联合治疗后的荷瘤小鼠脾组织T淋巴细胞的CTL活性要明显高于另外四组(均P＜0.05),其瘤组织中CD11c+ DC的阳性率也明显增高(均P＜0.05).结论:重组腺病毒Ad5-CCL20联合热疗可召募并促进DC成熟和抗原提呈,明显抑制肿瘤生长,并延长荷瘤小鼠的生存期,提示其对结肠癌有潜在的治疗作用.
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模拟失重30 d后再超重对猴牙龈组织趋化因子CCL20及其受体CCR6表达的影响
目的:探讨模拟失重30 d后再超重对猴牙龈组织趋化因子CCL20及其受体CCR6表达的影响.方法:23只雄性猕猴随机分为4组,即对照组(A)、失重组(B)、超重组(C)、模拟失重30 d后再超重组(D).其中,D组根据载荷量大小又分为4个亚组,即+11Gx/270 s组(Dl)、+13Gx/230 s组(D2)、+15 Gx/200s组(D3)和+13 Gx/230 s恢复9d组(D4).采用组织学方法观察牙龈的形态学变化,通过免疫组织化学、Q-PCR方法检测牙龈组织中CCL20、CCR6的表达情况.采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:各实验组中牙龈结构均未见明显损伤,但实验组中的淋巴细胞及中性粒细胞浸润较对照组多.对照组牙龈组织几乎不表达CCL20,但弱表达CCR6;实验组CCL20阳性表达主要位于牙龈上皮组织的基底层,CCR6阳性表达主要位于牙龈上皮棘层和基底层.除失重组的CCL20外,各实验组牙龈组织中的CCL20和CCR6在蛋白水平、mRNA水平上的表达均显著高于对照组(P＜0.05).结论:模拟失重30 d后再超重环境中,猴牙龈组织结构未见明显改变,但牙龈组织趋化因子CCL20及其受体CCR6表达明显增强.
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CCL20对CBA/J小鼠CCR6+调节性T细胞及妊娠结局的影响
目的 才研究CCL20对CBA/J小鼠CCR6+调节性T细胞(Treg细胞)及妊娠结局的影响.方法 将CBA/J(♀)×DBA/2(♂)作为自然流产小鼠模型(自然流产组),CBA/J(♀)×Balb/c(♂)作为正常妊娠小鼠模型(正常妊娠组).于CBA/J小鼠不同的妊娠时期,观察妊娠结局,采用RT-PCR、Western blotting、ELISA、流式细胞技术检测CCL20及CCR6+ Treg细胞的动态变化.给予正常妊娠小鼠CCL20中和抗体,自然流产小鼠重组CCL20,观察妊娠结局的变化.体外观察CCL20及其抗体对Treg细胞的趋化、增殖、细胞因子水平的变化.结果 妊娠14.5 d(gd 14.5),自然流产组和正常妊娠组的胚胎吸收率分别为11.25％和2.54％,两者之间差异有统计学意义(P=0.001 8).不同妊娠时期,自然流产组小鼠外周血及子宫中CCL20及CCR6的表达均低于正常妊娠组.在妊娠早期尤其是gd2.5时,正常妊娠组小鼠CCL20和CCR6表达水平及Treg细胞比例均明显上升,而在自然流产组小鼠中并未出现明显的上升.在gd 0.5给予正常妊娠小鼠CCL20中和抗体后,小鼠的胚胎吸收率显著增加,而CCR6+ Treg的比例明显下降.给予自然流产小鼠重组CCL20后,小鼠的胚胎吸收率下降,而CCR6+ Treg的比例上升.CCL20能够促进Treg细胞的趋化功能、增殖功能以及其抑制性细胞因子的分泌功能,从而导致T细胞之间的平衡向Th2及Treg细胞倾斜,有利于妊娠的维系.结论 CBA/J(♀)×DBA/2(♂)小鼠的自然流产可能与CCL20及CCR6+ Treg的下调有关,尤其在孕早期.早期干预CCL20的蛋白水平能够改变CCR6+ Treg细胞的数量及功能,影响妊娠结局.
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银屑病患者皮损Toll样受体4、核因子-κBp65、CC趋化因子配体20的表达
目的 探讨Toll样受体4(TLR4)、核因子(NF)-κBp65、CC趋化因子配体20(CCL20)在银屑病患者皮损区及非皮损区的表达及意义.方法 用免疫组化EnVision法检测40例进行期银屑病患者斑块状皮损及20例进行期银屑病患者非皮损区皮肤、10例正常皮肤石蜡标本中的TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达,对其在皮损中的表达水平进行相关性分析.结果 银屑病皮损区角质形成细胞中TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达(A值分别为0.3006±0.1200、0.4551±0.1572和0.3862±0.1304)较正常人皮肤TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达(A值分别为0.1379±0.0663、0.1970±0.0679和0.1262±0.0612)及银屑病非皮损区组(A值分别为0.1930±0.0687、0.2626±0.0606和0.2387±0.0467)明显上调(t值分别为4.113、5.044、6.106、3.711、5.265和4.889,均P＜0.05).与正常人皮肤相比,银屑病非皮损区TLR4、NF-κBp65、CCL20表达明显上调(t值分别为2.118、2.685和5.608,均P＜0.05).银屑病患者TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达水平间均呈正相关(r值分别为0.766、0.851和0.885,均P＜0.05).结论 TLR4、NF-κBp65、CCL20的高表达可能与银屑病发病有关.
