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贵州十种民族药的应用研究
黑骨藤、大乌泡、透骨香、小花清风藤、珊瑚姜、飞龙掌血、蓝布正、马鞭草、蜘蛛香、五倍子是10种较为常用的贵州民族草药.本文对其开发应用现状,以及来源、化学及药理研究、成分制剂构成及其功能、用法、用量,进行较为系统的文献挖掘研究,为进一步探索采用民族药防病治病的实用性、有效性和开发应用前景奠定了基础.
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黑骨藤抗类风湿性关节炎作用及其分子机制
目的:研究黑骨藤对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的防治作用及其作用的分子机制.方法:将Wister 雄性大鼠70只分成7组,sc Freund's完全佐剂(空白组除外)建立佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)动物模型,观察黑骨藤提取物低、中、高剂量(20,50,100 mg·kg-1)对AA大鼠足肿胀、体重、器官指数及血清与炎性组织液中白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-a)含量水平的影响.结果:黑骨藤能有效抑制AA大鼠足肿胀,降低胸腺指数,下调AA大鼠血清与炎性组织液中IL-1β,IL-6,TNF-α的含量水平.造模第12 d后,黑骨藤高、中剂量组较模型组大鼠足跖肿胀度有极显著差异(P＜0.01);模型组胸腺指数平均为1.50%,黑骨藤高剂量组为1.12%,两者差异极显著(P＜0.01);黑骨藤高剂量组AA大鼠血清与炎性组织液中IL-1β,IL-6和TNF-α 3项指标与模型组比较差异均显著(P＜0.05).结论:黑骨藤具有良好的抗RA作用,其作用机制可能与调节免疫器官功能及促炎细胞因子IL-1β,IL-6,TNF-α的含量水平有关.
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黑骨藤的抗肿瘤活性成分
目的:确定黑骨藤中抗肿瘤活性成分.方法:采用MTT法对萃取、分离得到的黑骨藤乙醇提取物、活性部位以及化合物进行抗肿瘤实验；利用色谱技术进行提取分离,利用理化性质和光谱分析进行结构鉴定.结果:质量浓度在25 mg·L-1时黑骨藤乙酸乙酯部位对白血病K562抑制率可达到80.71％.从该部位分离所得化合物Ⅵ和化合物Ⅸ在10 mg·L-1质量浓度下肿瘤抑制率分别达到97.48％,40.56％.结论:黑骨藤乙酸乙酯部位为其抗肿瘤活性部位,从中分离得到的2个化合物有较好抗肿瘤活性.
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苗药黑骨藤中总皂苷含量的测定
目的:建立苗药黑骨藤中总皂苷含量测定的方法,并对不同来源药材中总皂苷的含量进行测定.方法:以熊果酸为对照,用5％的香草醛-冰醋酸及高氯酸进行显色,在550 nm波长下运用紫外分光光度法对总皂苷含量进行测定.结累:熊果酸在9～55 mg·L-1线性关系良好,回归方程Y=0.011 9X +0.097 2(r =0.999 2),方法的平均回收率为98.74％,RSD1.2％；不同来源黑骨藤中总皂苷的含量存在差异.结论:该方法快速、简便,精密度和稳定性良好,可用于黑骨藤中总皂苷含量的测定.
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5种特色苗药品种的研究进展与文献分析
苗药与藏、蒙、维、傣、彝并称为六大民族药,其中常用药物289种,经筛选与再评价研究,已开发上百种苗药药材及成方制剂,但收集苗药的相关专著比较零散,无系统整理.文章首次梳理了苗药研究的主要专著,并重点对头花蓼、吉祥草、大果木姜子、艾纳香和黑骨藤5种特色苗药品种的资源分布和成方制剂进行归纳总结.通过分析近10年相关中英文文献、专利及基金资助情况,讨论苗药发展现状与存在问题,为其资源的可持续利用和深入研发提供依据.
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黑骨藤多糖含量测定方法研究
目的:对黑骨藤中的活性多糖进行含量测定方法研究.方法:以精制黑骨藤多糖测得黑骨藤多糖对葡萄糖的换算因子;采用苯酚一硫酸比色法测定黑骨藤粗多糖部位的多糖含量.结果:黑骨藤粗多糖部位的多糖含量为54.68%(RSD3.0%,n=6),平均加样回收率101.7%(RSD 6.0%,n=6).结论:该方法简便,快速,测定结果更接近真实值.
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黑骨藤中极性部位化学成分研究
目的:对黑骨藤Periploca forrestii的化学成分进行研究.方法:利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、重结晶及高效液相制备色谱进行分离纯化,采用波谱学技术进行结构鉴定.结果:从黑骨藤中分离鉴定了9个化合物,分别是:3-O-乙酰基齐墩果酸(1),乌苏-14-烯-3-醇-1-酮(2),蒲公英甾醇(3),jacoumaric acid(4),杠柳苷元(5),2α,3β-二羟基熊果酸(6),反式对羟基肉桂酸(7),咖啡酸(8),proanthocyaniclin A_2(9).结论:除化合物6外,其余化合物均为首次从该植物中分离得到,化合物4,9为首次从杠柳属中分离得到.
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HPLC测定黑骨藤中槲皮素-3-O-α-L- 吡喃阿拉伯糖苷含量
目的:建立黑骨藤中槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷的含测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法,HypersilC18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱,甲醇-水(33:67)为流动相,流速为1 mL·min-1,检测波长370 nm,柱温25℃.结果:槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷在0.2044～2.044 μg线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为97.78%,RSDO.8%(n=9).黑骨藤药材中槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷的平均含量0.19%.结论:该方法分离效果好,简便准确,可用于黑骨藤中槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷的含量测定,以控制黑骨藤药材质量.
关键词： 黑骨藤 槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷 HPLC 含量测定 -
黑骨藤中苷类化合物的研究
目的:研究黑骨藤Periploca forrestii茎正丁醇部位化学成分.方法:采用各种色谱法及重结晶分离纯化,运用理化性质和波谱数据鉴定结构.结果:从黑骨藤中分离得到6个苷类化合物,分别为:大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(1),大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷(2),山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷(3),山柰酚-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(4),槲皮素-3-O-β-D-毗喃葡萄糖苷(5),槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(6).结论:6个苷类化合物均为首次从该植物中分离得到.
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苗药黑骨藤不同提取方法提取物的GC-MS分析
黑骨藤为萝蘼科植物黑龙骨Periploca forrestiiSchlechter的干燥根或全株,是苗族习用药材.具有通经络,祛风湿,活血,消炎的功效[1-3].在民间广泛应用于治疗风湿关节痛,跌打损伤,月经不调等.近年采用黑骨藤研制的民族药在祛风除湿、通络止痛上取得良好的效果[4,5].陈庆等[6,7]应用镇痛和抗炎两方面的药理试验对黑骨藤药效部位进行筛选,结果发现有效部位是醇提取物.为使其资源得到充分利用,本研究首次报道采用微波辅助提取法(MAE)、同时蒸馏萃取法(SDE)分别提取黑骨藤茎、叶的挥发性成分,并用气相色谱-质谱(GC-MS)联用对其进行了分析研究,旨在为黑骨藤的进一步开发利用提供科学依据.
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苗药黑骨藤多糖部位HGT -5A的细胞免疫抑制作用及其可能的活性成分
目的 观察苗药黑骨藤多糖部位HGT-5A的细胞免疫抑制作用及探讨其可能的活性成分.方法 采用二硝基氯苯建立小鼠迟发型超敏反应模型,初次致敏当天开始ig给予HGT-5A,每天1次,连续10d,第11天处死小鼠测定耳肿胀度,观察HGT-5A体内对细胞免疫反应的影响；用[3H] TdR掺入法检测HGT-5A及其多糖组分对小鼠脾细胞增殖反应的影响；用MTT法检测HGT-5A对脾淋巴细胞存活的影响.结果 HGT-5A 50和100 mg·kg-1可以明显抑制迟发型超敏反应模型小鼠耳肿胀,耳肿胀度由模型组的(8.9±2.2)mg分别降低至6.4±1.7和(7.1±1.5)mg;HGT-5A 50 ～500 mg·L-1体外应用可促进小鼠脾细胞自发增殖反应,但在HGT-5A 100 mg·L-1以上时可明显抑制刀豆蛋白A诱导的小鼠脾细胞增殖反应(P＜0.05),对脂多糖诱导的小鼠脾细胞增殖反应无明显影响；HGT-5A与脾细胞共培养24,48和72 h对脾细胞存活无明显影响.从HGT-5A分离获得的中性糖部位HP1,酸性糖部位HP2,从HP1中分离得到的多糖成分HP1-3,以及从HP2中分离得到的多糖成分HP2-3和HP2-4 0.5～50 mg· L-1可促进脾细胞自发增殖反应；HP2,HP1-3,HP1-4,HP2-2和HP2-4明显抑制刀豆蛋白A诱导的T细胞增殖反应.结论 HGT-5A可抑制T细胞活化增殖,对细胞免疫反应具有抑制作用,多糖成分HP1-3,HP1-4,HP2-2和HP2-4可能是黑骨藤发挥免疫抑制作用的活性成分.
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黑骨藤化学成分的研究
目的 研究黑骨藤的化学成分.方法 应用硅胶、MCI、Sephadex LH-20、BP-18柱色谱进行分离、纯化,根据理化常数和光谱分析鉴定结构.结果 从黑骨藤氯仿萃取部分分离鉴定了13个单体化合物:β-谷甾醇(1),熊果酸C2),大黄素(3),臭矢菜素A(4),臭矢菜素a(5),胡萝卜苷(6),滇杠柳苷Ⅰ(7),杠柳苷(8),2α,3β,5,24-四羟基-齐墩果-12-烯-28-羧酸(9),大黄素-8-甲醚(10),北五加皮苷E(11),香草酸(12),3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸(13).结论 化合物4、5、9、12、13为首次从黑骨藤中分离鉴定.
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黑骨藤化学成分的研究
目的 研究黑骨藤Periploca forrestii的化学成分.方法 利用各种色谱技术反复分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据进行结构鉴定.结果 从黑骨藤中分离并鉴定了9个化合物,分别鉴定为:3β-乙酰基-乌苏-12-烯-11-酮(Ⅰ)、3β-羟基-齐墩果-11,13(18)-二烯-28-羧酸(Ⅱ)、齐墩果酸(Ⅲ),滇杠柳苷元A(Ⅳ)、正十六烷酸(Ⅴ)、正十七烷(Ⅵ)、东莨菪素(Ⅶ)、山柰酚(Ⅷ)、槲皮素(Ⅸ).结论 除化合物Ⅳ外均为首次从该植物中分离得到,其中化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ为首次从杠柳属中分离得到.
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正交试验优选黑骨藤的超声提取工艺研究
目的 研究黑骨藤的佳提取工艺.方法 以杠柳苷提取率为指标,采用正交试验优选提取工艺参数.结果 佳工艺条件:溶剂为50％乙醇,料液比1∶15,功率800 W,温度50℃,提取2次,每次20 min.结论 此工艺合理可行,适用于黑骨藤中杠柳苷的提取.
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反相高效液相色谱法测定黑骨藤中滇杠柳苷Ⅰ的含量
目的:建立反相高效液相色谱法测定黑骨藤中滇杠柳苷Ⅰ的含量.方法:采用Agilent Zorba SB C18色谱柱,以乙腈-水为流动相作梯度洗脱,流速1.0mL?min-1,检测波长214nm.柱温为30℃.结果:滇杠柳苷Ⅰ在0.6～2.1μg的范围内呈良好的线性关系,平均回收率为91.99%,RSD=1.76%.结论:本法操作准确,可用于黑骨藤的质量控制.
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双藤汤醇提取物对寒痹型胶原诱导型关节炎大鼠凋亡调节作用
目的:观察双藤汤对寒痹型胶原诱导型关节炎大鼠抗凋亡作用.方法:随机选取雄性SD大鼠分为空白组、模型组、双藤汤60、40、20 g/kg组、青藤碱28 mg/kg组,每组10只.除空白组外,其余各组构建模型.连续给药4周后测量动物足跖厚度;HE染色分析脾脏病理变化;免疫组化法检测脾脏Bax和Bcl-2蛋白表达,Western-blotting检测脾脏Caspase-1,Caspase-3和CytC蛋白表达.结果:与模型组比较,空白组、双藤汤60g/kg和40 g/kg组和青藤碱28 mg/kg组足跖部肿胀程度下降;脾脏病理切片显示空白组、双藤汤60 g/kg和40 g/kg组和青藤碱28 mg/kg抑制脾小体萎缩减少并促进其发育;免疫组织法显示双藤汤60、40、20 g/kg组、青藤碱28mg/kg组Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达上调;蛋白印迹显示双藤汤60、40、20 g/kg组、青藤碱28 mg/kg组Caspase-1、Caspase-3、CytC蛋白表达受到不同程度抑制.结论:双藤汤可能通过调节凋亡途径中Bax、Bcl-2、Caspase-1、Caspase-3、CytC蛋白表达起到对寒痹型胶原诱导关节炎大鼠炎症的抑制作用.
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黑骨藤抗急性痛风性关节炎的实验研究
目的：探讨黑骨藤在急性痛风性关节炎中的治疗效果。方法：健康雄性SD大鼠60只，随机等分为空白对照组（NC组）、模型组（M组）、秋水仙碱组（C组）、黑骨藤高剂量组（HD组）、黑骨藤中剂量组（MD组）和黑骨藤低剂量组（LD组）。除空白对照组外，其余大鼠均采用尿酸钠制备大鼠痛风性关节炎模型，用秋水仙碱（阳性对照）和不同剂量的黑骨藤灌胃给药治疗。治疗3、5、7 d后观察各组大鼠关节肿胀情况。治疗7 d后处死大鼠，取踝关节组织进行病理学检查，应用ELISA检测各组大鼠外周血中IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的表达。结果：黑骨藤干预组大鼠踝关节肿胀程度明显低于模型组，且治疗7 d后黑骨藤高剂量组疗效显著高于低剂量组（P＜0.05）；与模型组相比，黑骨藤治疗组均有较少的炎细胞浸润，且黑骨藤高剂量组趋于正常对照组；黑骨藤干预组炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α水平显著低于模型组，呈剂量依赖性。结论：黑骨藤在大鼠急性痛风性关节炎中具有很好的治疗效果，且呈剂量依赖性，其机制可能与黑骨藤降低急性痛风性关节炎大鼠血清炎症因子表达有关。
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苗药黑骨藤化学成分及药理作用研究进展
黑骨藤为民间常用草药,主要分布于贵州、云南、四川、西藏等地,目前发现黑骨藤中主要含有黄酮类、三萜类、甾体类和挥发油等化学成分.现代药理研究表明,黑骨藤具有抗炎、镇痛、抗类风湿性关节炎、抗肿瘤等作用,但具体药效成分尚不明确.本文对黑骨藤的本草考证及民间用药化学成分及药理作用进行了归纳总结,以期为黑骨藤的研究及开发利用提供参考.
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黑骨藤追风活络胶囊的真伪鉴别
贵州老来福药业公司生产的黑骨藤追风活络胶囊,主要成分为黑骨藤、大风藤、追风伞等民族药材,具有祛风除湿、通络止痛功效.用于风寒湿痹、肩臂腰腿疼痛等症.近,我们发现有假冒的黑骨藤追风活络胶囊流入市场,经检验及鉴定,并经贵州老来福药业公司确认,确系假冒产品.为杜绝此类假冒药品的出现,提供有关鉴定资料和依据,现将黑骨藤追风活络胶囊与假冒品的鉴别研究结果报告如下.
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黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类化合物体外抗类风湿性关节炎机制研究
目的 探讨黑骨藤中分离得到的8个咖啡酰基奎宁酸类单体化合物抑制人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)增殖的作用,并对其活性较好的2个化合物进行可能的分子机制研究.方法 采用50μg·L-1 TNF-α 活化MH7A细胞.MTS法测定8个单体化合物对MH7A细胞增殖的影响;ELISA法测定细胞上清液中IL-1β、PGE2含量;Griess试剂法测定NO的含量;Western blot检测各组细胞中COX-2、iNOS、NF-κB及MAPK通路相关蛋白表达.结果 与TNF-α模型组比较,8个单体化合物均可不同程度抑制MH7A细胞的增殖和细胞因子的分泌(P<0.05,P<0.01),在200μmol·L-1浓度下,3-O-咖啡酰基奎宁酸(3-CQA)作用明显,其次是1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸(1,3-DCQA);Western blot结果表明,3-CQA和1,3-DCQA均能明显降低COX-2、iNOS、NF-κB p65、p-IκB的蛋白水平,以及MAPK信号通路相关蛋白ERK、JNK、p38的磷酸化程度(P<0.01).结论 黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类化合物具有较好的抗类风湿性关节炎活性,其作用机制可能与抑制MAPK信号通路的激活,降低NF-κB活性,抑制下游炎症因子表达,进而减轻炎症反应有关.
