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右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞中TGF-β、BMP-7、BGP表达影响实验研究
目的:通过对大鼠骨髓间充质干细胞中TGF-β、BMP-7、BGP蛋白表达的分析,探究右归丸含药血清通过TGF-β信号通路诱导BMSCs向成骨细胞分化的机制,从而为“肾主骨”这一理论提供实验依据.方法:42只SPF级SD雌性大鼠,体质量(210±20)g,随机分为:正常组、诱导液组、右归丸组、福善关组、骨疏康组各8只,对大鼠灌胃5d,制备含药血清,并分离和培养大鼠BMSCs,观察不同实验组合药血清对成骨细胞中TGF-β、BMP-7、BGP蛋白表达的影响.结果:与正常组相比,其余各实验组均不同程度上调了TGF-β、BMP-7、BGP的表达水平,并且右归丸组与其余各组相比,结果有统计学差异(P＜0.01).结论:①正常大鼠BMSCs中存在TGF-β、BMP-7、BGP蛋白表达;②右归丸含药血清能够通过调控TGF-β、BMP-7、BGP的蛋白浓度促进BMSCs向成骨细胞分化,以起到对骨质疏松症的防治作用.
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肺泡表面活性物质联合双水平气道正压通气治疗新生儿呼吸窘迫综合征的临床疗效及对其血清TGF-β1和BMP-7表达水平的影响
目的 探讨肺泡表面活性物质(PS)联合双水平气道正压通气(BiPAP)治疗新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的临床疗效及对其血清中转化生长因子-β1 (TGF-β1)和骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达水平的影响,为临床诊治提供参考依据.方法 将2015年1月-2017年4月佳木斯大学附属第一医院收治的80例NRDS患儿随机分为观察组及对照组;对照组采用BiPAP治疗,观察组在对照组治疗的基础上联合PS治疗;在治疗结束后对临床疗效进行评估;治疗前及治疗结束后1h记录患儿呼吸频率、心率、氧合指数指标,并记录不良反应;治疗前及治疗后24h检测患儿血清中TGF-β1及BMP-7水平.结果 观察组临床疗效显著优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗后患儿心率、呼吸显著降低,氧合指数显著升高,且观察组患儿心率、呼吸显著低于对照组,氧合指数显著高于对照组,差异有统计学意义(均P＜0.05);治疗后两组患儿血清中TGF-β1及BMP-7水平均显著降低,且观察组显著低于对照组,差异有统计学意义(均P＜0.05);观察组不良反应发生率显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用PS联合BiPAP对NRDS患儿治疗后,可有效提高临床疗效并降低不良反应发生率,并可有效改善血清中TGF-β1及BMP-7水平.
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化瘀泻浊方对肾间质纤维化大鼠骨形态发生蛋白-7的影响
目的 观察化瘀泄浊方对肾间质纤维化(RIF)大鼠骨形态发生蛋白 (BMP)-7的影响.方法 选用健康、雌性SD大鼠50只,用单侧输尿管结扎方法复制大鼠RIF模型,将其随机分为假手术组、化瘀泄浊方组(化瘀泄浊方5.7 g·kg-1·d-1经口灌服)、阿魏酸哌嗪分散片组(予阿魏酸哌嗪分散片6.7 mg·kg-1·d-1)、缬沙坦组(予缬沙坦5.3 mg·kg-1·d-1经口灌服)及模型组(予同等量生理盐水经口灌服),每组10只大鼠.行HE、Masson染色观察梗阻侧肾脏组织形态学改变并用免疫组化方法检测观察梗阻侧肾脏BMP-7表达水平.结果 模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害,梗阻肾间质BMP-7蛋白表达也明显减少(P<0.01).各治疗组与模型组比较,BMP-7表达明显增加(P<0.01).治疗各组间比较,化瘀泄浊方组优于阿魏酸哌嗪分散片组(P<0.01),其他各组间均无明显差异(P>0.05).结论 输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,肾纤维化面积明显增加,这可能与BMP-7表达减少有关,化瘀泄浊方对其有一定的上调作用.
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2型糖尿病肾病患者血清中骨形态发生蛋白-7及转化生长因子-β1水平的变化及意义
目的：探讨2型糖尿病肾病患者（DN）血清中骨形态发生蛋白-7（BMP-7）及转化生长因子-β1（TGF-β）水平的变化及意义。方法用ELISA法检测T2DM组（87例）及同期门诊健康体检者 D 组（24例）人群血清中 TGF-β1、BMP-7水平，根据尿微量白蛋白/肌酐值（ ACR）（＜30 mg/g；30～300 mg/g；＞300 mg/g）将T2DM组分为正常白蛋白尿A组32例，微量白蛋白尿B组31例，临床白蛋白尿C组24例，同时检测糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹血糖（FPG）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、总胆固醇（TC）、体重指数（BMI）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）。结果糖尿病组患者血清中的水平较健康对照组显著升高，BMP-7的水平较健康对照组显著降低。 A组与B组中TGF-β1因子水平未见统计学差异（ P＞0.05），A组与C组比较有统计学差异（P＜0.05）；A组与B组、A组与C组以及B组与C组中BMP-7比较均有统计学差异（P＜0.05）；整体糖尿病组ACR与TGF-β1呈正相关（r＝0.433，P＜0.001），与BMP-7呈负相关（r＝-0.493，P＜0.001）。结论 TGF-β1和 BMP-7的表达变化可能与 DN的进展有关，对其检测和早期靶向治疗可能成为诊断和治疗早期DN的新方向。
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重组人骨形态发生蛋白-7工程菌的高密度发酵
目的 建立重组入骨形态发生蛋白-7(dIBMP.7)工程菌的高密度发酵工艺.方法 采用摇瓶及发酵罐培养T程菌B121/pBV221-rhBMP-17,观察不同培养基、乙酸浓度、pH值、诱导时间等对工程菌菌体生长及目的蛋白表达的影响.在优化的发酵条件下培养工程菌,当菌体A鲫值达100时,42~C升温诱导,并对表达产物进行纯化.结果 发酵培养基与LB培养基培养的_T程菌目的蛋白的表达量无明显差异;乙酸可明显抑制菌体生长及目的蛋白表达;适于菌体生长和目的蛋白表达的pH值分别为6.8和7.6;佳诱导时同为3 h.以优化的发酵条件培养的工程菌诱导3 h后,目的蛋白的表达量可达菌体总蛋白的34.9%,终菌体A600值可达139.5;经纯化的目的蛋白纯度可达95%以上.结论 已初步建立了rhBMP-7工程菌的高密度发酵工艺.
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参地补肾胶囊对肾小球硬化大鼠BMP -7、CTGF 表达的影响
目的：探讨参地补肾胶囊对肾小球硬化大鼠BMP-7、CTGF表达的影响。方法：采用单侧肾脏切除同时尾静脉注射阿霉素的方法建立肾小球硬化大鼠模型，实验分为正常对照组、模型组、西药（洛汀新）对照组、中药（苏黄泄浊丸）组和参地补肾胶囊组，分组给药处理8周。检测各组大鼠24小时尿蛋白定量、血肌酐（ SCr）、尿素氮（ BUN）、血浆蛋白（ ALB）；光镜观察大鼠肾脏病理学变化；免疫组化法检测BMP-7、CTGF表达。结果：各治疗组大鼠24小时尿蛋白及血SCr、BUN、ALB较模型组明显改善（ P＜0.05）。各给药组大鼠肾脏病理变化明显改善。各治疗组均能抑制CTGF的表达（ P＜0.05），上调BMP-7表达（P＜0.05）；参地补肾胶囊组作用明显优于两阳性对照组（P＜0.05）。结论：参地补肾胶囊对肾小球硬化大鼠肾功能具有保护作用，上调BMP-7表达、抑制CTGF表达可能是其部分作用机制。
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应用转染BMP7基因组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损观察
目的 构建转染骨形态发生蛋白-7(BMP7)基因组织工程软骨,观察对家兔膝关节软骨缺损的修复作用.方法 将转染BMP7基因的软骨细胞(5×109个/L)接种于胶原-纤维蛋白凝胶的支架中,培养14 d后移植于家兔膝关节软骨表面,直径为5.0 mm,深达软骨下骨板的全层软骨缺损部位.移植后4、8、12周处死家兔,通过创面形态观察、组织形态的光镜观察、BMP7基因在移植部位的表达,评价转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损的修复作用.结果 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨培养物的体积分别为9 mm × 9 mm×2 mm和8 mm×8 mm×2 mm.转染BMP7基因组移植于家兔膝关节软骨后4、8、12周,均有软骨缺损修复作用,且移植部位有红褐色BMP7 mRNA和棕红色BMP7蛋白表达.移植后12周修复效果佳.优于未转染BMP7基因组.结论 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损均有修复作用,但转染BMP7基因组织工程软骨修复作用更强.
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慢性马兜铃酸肾病患者血清TGF-β1、BMP-7的改变
目的:探讨慢性马兜铃酸肾病(CAAN)患者血清转化生长因子-β1 (TGF-β1)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)的变化及临床意义.方法:采用ELISA法测定30例CAAN患者血清TGF-β1及BMP-7水平,并用20例正常健康人作对照.结果:与对照组相比病例组TGF-β1明显增高(P＜0.05),BMP-7明显降低(P＜0.05).TGF-β1与BMP-7呈负相关(r=-0.379,P＜0.05).结论:TGF-β1、BMP-7二者的表达水平及其相互间调节作用是慢性马兜铃酸肾病发病机制中的重要环节.
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不同剂量健腰密骨片对骨形成和小鼠骨髓间充质干细胞中BMP-7表达的影响
目的 探讨不同剂量健腰密骨片对小鼠椎体和骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)成骨分化过程中骨形态发生蛋白-7(bone morphogenic protein-7,BMP-7)表达的影响.方法 选取1月龄昆明小鼠48只,雌雄各半,按体质量随机分为健腰密骨片高、中、低剂量组及生理盐水4组,灌胃8周后取材.用Micro-CT扫描分析I4腰椎,免疫组化染色观察不同剂量健腰密骨片对椎体BMP-7表达的影响;分离培养获得各组小鼠原代骨髓间充质干细胞(BMSCs),利用碱性磷酸酶(ALP)染色、实时荧光定量RT-PCR法检测BMSCs成骨分化过程中BMP-7的表达情况.结果 与生理盐水组比较,健腰密骨片高剂量组能够改善小鼠椎体三维结构,促进椎体BMP-7蛋白的表达;健腰密骨片高剂量组能够明显增加BMSCs中ALP活性,上调成骨基因BMP-7 mRNA的表达量(p＜0.05).结论 健腰密骨片高剂量组能够明显提高小鼠椎体骨量,促进BMSCs成骨分化,上调椎体和BMSCs成骨分化过程中BMP-7表达,从而促进骨形成.
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骨形态发生蛋白-7对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的:探讨骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的作用机制.方法:采用线栓法建立大脑局灶性脑缺血再罐注损伤模型,按照随机数字表法将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、BMP-7治疗组.在缺血2h再灌注24 h后对各组进行神经功能评分.采用原位末端标记法(TUNEL法)检测皮质区神经细胞凋亡,采用实时定量-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测皮层区凋亡活化因子-1(apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)和Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B 19 kDa interacting protein 3,BNIP3)的mRNA及蛋白的表达.结果:与模型组相比,BMP-7治疗组大鼠神经功能评分明显降低,TUNEL阳性细胞数减少,缺血侧皮层Apaf-1和BNIP3的mRNA和蛋白表达均降低.结论:BMP-7可能通过下调Apaf-1和BNIP3的表达抑制神经细胞凋亡,从而减轻脑缺血再灌注损伤.
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骨形态发生蛋白7对 C2C12及 HepG2细胞胰岛素信号传导的负调控作用研究
目的：研究骨形态发生蛋白7（BMP7）对骨骼肌细胞C2C12及肝细胞HepG2胰岛素信号途径的影响，并初步探讨其作用机制。方法用不同浓度BMP7处理骨骼肌细胞C2C12及肝实质细胞HepG2，用Western印迹方法检测胰岛素信号途径中各主要蛋白的变化。同时，提取细胞总RNA后用定量PCR方法检测BMP7对胰岛素效应分子基因表达的影响。另外，用Western印迹方法检测BMP7对JNK信号途径的影响。结果在分化的C2 C12与HepG2细胞中，胰岛素处理可显著增加磷酸化胰岛素受体（ p-IR）、磷酸化Akt（ p-Akt）及磷酸化糖原合成酶3β（ p-GSK3β）的表达，并促进葡萄糖向细胞内的转运（ P＜0．05）。而BMP7处理可明显降低胰岛素对这些磷酸化蛋白的刺激，并可抑制胰岛素诱导的葡萄糖向细胞内的转运（P＜0．05）。 BMP7处理对胰岛素效应分子Akt1、胰岛素样生长因子受体（Igf1r）、胰岛素受体（Insr）及胰岛素受体底物（Irs1）的基因表达均没有显著影响。在HepG2细胞中，BMP7处理5 min即可提高磷酸化JNK信号通路，随着作用时间的延长这种促进作用逐渐减弱。结论 BMP7降低HepG2及C2C12细胞中的胰岛素信号传递，这种抑制作用可能是通过激活JNK信号途径实现的。
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BMP-7介导的间叶 -上皮转化与器官纤维化研究进展
纤维化是各种器官慢性损伤的共同结果.研究发现上皮-间叶转化(EMT)可能是导致多种器官纤维化的潜在机制.目前认为转化生长因子-β<,1>(TGF-β<,1>)能诱导EMT,促进器官纤维化,而骨形态发生蛋白-7(BMP-7)可通过拮抗TGF-β的作用,诱导间叶-上皮转化,改善多种器官纤维化.然而,至今BMP-7的抗纤维化分子机制仍不清楚,对其进行深入研究具有重要意义,可能提供一种纤维化疾病的新治疗手段.
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重组hBMP7基因转染成纤维细胞及其表达
目的探讨重组骨形态发生蛋白-7腺病毒载体(AdCMV-BMP7)在人真皮成纤维细胞获得稳定表达的可行性.方法 重组腺病毒载体AdCMV-BMP7经293细胞包装、扩增后,转染人真皮成纤维细胞.转染48 h后以免疫组织化学、RT-PCR等方法检测hBMP7基因在人真皮成纤维细胞内的表达情况.结果在合适的滴度下,重组腺病毒载体AdCMV-BMP7对成纤维细胞的增殖能力无明显影响.转染48 h后免疫细胞化学显示已转染AdCMV-BMP7的成纤维细胞内有大量的hBMP7表达,RT-PCR 也检测到特异的hBMP7基因片段的表达.结论重组腺病毒载体AdCMV-BMP7能够被转导入成纤维细胞内,并稳定表达hBMP7.
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BMP-7防治实验性肝纤维化的研究
目的 观察骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对实验性肝纤维化的影响.方法 运用猪血清腹腔注射法,诱导免疫性大鼠肝纤维化模型.实验动物分为5组:肝纤维化模型组、早期治疗组、后期治疗组、预防组、对照组.预防组从实验开始、早期治疗组从实验第2周、晚期治疗组从实验第4周腹腔注射外源性BMP-7,每周3次;时照组注射等剂量生理盐水.采用免疫组化和Western印迹法检测BMP-7对实验性肝纤维化大鼠肝组织中转移生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响.结果 实验性肝纤维化大鼠的早期治疗组、后期治疗组和预防组的肝纤维化级别与模型组之间的差异均有统计学意义(P<0.05);预防组和治疗组中BMP-7可以抑制纤维化肝组织中TGF-β1的表达,治疗组中的TGF-β1的表达较模型组中明显减少(P<0.05).结论 BMP-7有效预防和治疗实验性肝纤维化,其机制可能与抑制纤维化肝组织中的TGF-β1的表达有关.
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螺内酯与苯那普利联合应用对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏骨形态发生蛋白-7表达的影响
目的 探讨螺内酯与苯那普利联合应用对单侧输尿管梗阻大鼠(UU0)肾脏骨形态发生蛋白-7(BMP-7)及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为5组:单侧输尿管梗阻(UUO)组;假手术组,除不结扎离断输尿管外,其余处理同UUO组;螺内酯组,给予UUO模型大鼠螺内酯混悬液50 nag·kg-1·d-1;苯那普利组,给予苯那普利30 mg·kg-1·d-1;联合治疗组,给予螺内酯50 nag·kg-1·d-1+苯那普利30 mg·kg-1·d1.观察第14天血浆和肾组织醛固酮含量的变化及肾间质纤维化程度、BMP-7及TGF-β1,的表达.结果 ①与假手术组相比,UUO组大鼠肾间质蓝染面积显著增加(P<0.05),血浆和肾组织醛固酮含量显著增高(P值均<0.05),螺内酯、苯那普利和联合治疗组则显著低于UUO组(P值均<0.05).②与假手术组相比,UUO组的肾小管间质TGF-β1阳性面积百分比显著增高(P<0.05),BMP-7阳性面积百分比显著降低(P<0.05),螺内酯、苯那普利和联合治疗组的TGF-β1阳性面积百分比显著低于UUO组(P值均<0.05),而BMP-7阳性面积百分比则显著增加(P值均<0.05).联合治疗组与螺内酯、苯那普利组的差异均有统计学意义(P值均<0.05).结论 与单用螺内酯、苯那普利相比,两药联合应用能减轻UUO大鼠肾间质纤维化,下调TGF-β1的表达及BMP-7表达增加可能是其机制之一.
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骨形态发生蛋白-7及抑制性Smads在糖尿病肾病发生发展中的表达变化
本文采用免疫组化、Western blot及荧光实时定量PCR方法,动态观察链脲佐菌素(streptozocin,STz)诱导的大鼠糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)发生早期肾脏骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)、Smad6、Smad7蛋白及mRNA表达.结果显示,在正常及DN大鼠肾小管均有BMP-7、Smad6、Smad7蛋白表达,以胞浆表达为主.DN大鼠BMP-7、Smad6蛋白表达较正常大鼠明显增多(P＜0.05),且BMP-7的mRNA表达呈先增加后降低的状态;而Smad7蛋白和mRNA的表达均呈先增加后降低的状态.转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)及Ⅰ型胶原(collagentype Ⅰ,COL-I)mRNA在DN大鼠肾脏表达较正常大鼠明显增多(P＜0.05),且随着糖尿病进展有逐渐增加的趋势.结果提示,作为TGF-β超家族信号分子的一员,BMP-7信号及抑制性Smad通路在DN肾纤维化发生早期可能起重要的反馈性抑制作用.
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骨形态发生蛋白-7的研究进展
骨形态发生蛋白-7(BMP-7)作为骨形态发生蛋白家族成员,能刺激未分化细胞定向分化为成骨细胞,调节骨发育,具有较强的骨诱导活性,能够在体内、体外诱导骨、软骨形成完成骨修复能力.BMP 7能完善移植骨的机械性能和功能,增强同种异体移植物的脊柱融合作用.除了在骨科中的应用外,BMP 7在口腔疾病和肾脏疾病中的应用日广.BMP-7在齿、牙槽骨的发育和重建中可发挥骨诱导作用,诱导牙髓牙本质的再生,从而减轻炎症反应.BMP-7在肾脏高度表达,能够保护肾小球完整性,具有抗肾脏纤维化作用.
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正常高值血压者血清中转化生长因子β1和骨形态发生蛋白-7的表达
目的:分析正常高值血压者血清中转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形态发生蛋白-7(BMP-7)水平,探讨其临床意义.方法:选择正常高值血压者386例、正常血压者596例,用酶联免疫法分别测定全部受试者血清中TGF-β1和BMP-7水平,同时检测体重指数、尿酸、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯.结果:正常高值血压组患者血清TGF-β1水平高于正常血压组(P＜0.05)；BMP-7水平低于正常血压组(P＜0.05).Pearson相关分析表明正常高值血压患者血清TGF-β1和BMP-7水平与血压、脉压、平均动脉压无明显相关关系(P＞0.05).多元线性回归分析表明血糖、血脂、收缩压是TGF-β1和BMP-7的重要影响因素.结论:正常高值血压者TGF-β1水平升高,BMP-7水平降低；TGF-β1和BMP-7可能独立于血压水平参与靶器官损害的病理生理过程.
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大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导向神经细胞样细胞分化
目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)离体分离和培养方法,探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、全反式维甲酸(RA)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)在体外诱导BMSCs向神经干细胞(NSCs)分化的作用.方法 采用出生4周SD大鼠的全骨髓细胞进行培养,传至第3代时,分为3组:A组,bFGF+EGF+RA进行诱导分化;B组,BMP-7进行诱导分化;C组,不加因子继续培养.在倒置显微镜下每日观察、记录BMSCs的诱导分化情况,并应用免疫组化技术对细胞进行兔抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)单抗鉴定.结果 A组诱导7 d后有部分细胞具备神经元样细胞形态,胞体呈锥形或圆形,有较长单极或多极的突起,有NSE阳性细胞表达.而B组、C组细胞仍为典型的成纤维细胞形态,无NSE阳性细胞.结论 bFGF、EGF和RA可以联合诱导BMSCs向NSCs分化,并可调控神经元分化,而BMP-7在此种诱导条件下未见明显的诱导BMSCs向NSCs分化的作用.
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特发性肺纤维化患者中血清TGF-β1及BMP-7的表达变化及临床意义
目的 探讨特发性肺纤维化(IPF)患者血清TGF-β1与BMP-7水平变化及临床意义.方法 选择2015年3月至2016年12月特发性肺纤维化患者90例为观察组,选择同时期健康体检人员90例为对照组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测观察组治疗前后及对照组TGF-β1与BMP-7水平,比较两组患者血清TGF-β1与BMP-7的水平变化情况.结果 治疗前观察组血清TGF-β1水平比正常对照组高(P<0.05),而观察组BMP-7水平比正常对照组明显降低(P<0.05).有效组经治疗后血清中TGF-β1水平比无效组明显降低(P<0.05),且比治疗前明显降低(P<0.05),但仍高于对照组,而BMP-7水平比无效组明显升高(P<0.05),且比治疗前明显升高(P<0.05),但仍低于对照组.无效组治疗后血清TGF-β1水平进一步升高,血清BMP-7水平进一步降低.结论 患者血清中TGF-β1与BMP-7水平变化与IPF的发生发展存在密切关系,可指导IPF临床检测、疗效评定及抗纤维化治疗提供思路.
