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CXCL8/CXCR1对结肠癌细胞增殖和表型及相关基因改变的影响
目的:探讨趋化因子/趋化因子受体(CXCL8/CXCR1)相互作用对结肠癌细胞株colo205增殖、表型及相关基因转录的影响.方法:CXCL8刺激前后,采用流式细胞术分析胞膜CXCR1表达、胞质内F-actin浓度变化,MTT法比较细胞增殖活性,Real-time PCR比较CXCR1、E-cadherin、Ki-67及β-catenin转录水平变化,蛋白质印迹法比较β-catenin在胞质与胞核内分布变化.结果:CXCL8刺激后,CXCR1转录、表达和细胞增殖呈波动性变化.刺激6～48 h,E-cadherin、Ki-67转录下降.刺激24～48 h,细胞内F-actin 荧光强度逐渐减弱,48～72 h又逐渐升高;0～72 h,细胞表型呈上皮-间叶可逆性转化特征.0～72 h,β-catenin胞质积累逐渐增加、入核减少.Ly294002阻断CXCR1抑制β-catenin的入核效应,但未改变β-catenin胞质积累效应.结论:CXCL8/CXCR1促进β-catenin胞质积累、抑制其入核,协调细胞增殖、可逆的上皮-间叶转化(EMT)过程及相关基因转录变化.
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结直肠癌组织E-cadherin和β-catenin的表达与临床病理特征相关性研究
目的:探讨结直肠癌组织中E-cadherin和β-catenin蛋白的表达与临床病理的相关性及意义.方法:应用免疫组织化学染色检测56例结直肠癌组织和56例癌旁组织中E-cadherin、β-catenin蛋白的表达.结果:E-cadherin蛋白在结直肠癌组织中的表达明显低于癌旁组织,P=0.000 0；低分化癌E-cadherin蛋白的表达低于高分化和中分化癌,P=0.000 0；浸润至或侵出浆膜层的癌E-cadherin蛋白的表达低于浸润至肌层的癌,P=0.000 8；有肿瘤出芽者E-cadherin蛋白的表达低于无肿瘤出芽者,P=0.006 1；淋巴结转移组E-cadherin蛋白的表达低于无淋巴结转移组,P=0.000 0.β-catenin蛋白在结直肠癌组织中的表达低于癌旁组织,P=0.036 9；低分化结直肠癌组织β-catenin蛋白的表达低于高分化和中分化结直肠癌组织,P=0.023 8；浸润至或侵出浆膜层的结直肠癌组织β-catenin蛋白的表达低于浸润至肌层的结直肠癌组织,P=0.020 2；有肿瘤出芽的结直肠癌组织β-catenin蛋白的表达低于无肿瘤出芽的结直肠癌组织(P=0.025 7)；有淋巴结转移的结直肠癌组织β-catenin蛋白的表达低于无淋巴结转移的结直肠癌组织(P=0.013 3).结论:结直肠癌组织E-cadherin和β-catenin蛋白表达状况的变化标志着癌细胞在形态-分子表型上发生了改变,表达丢失时即意味着出现了上皮-间叶转化(EMT),后者预示着肿瘤趋向浸润和转移.E-cadherin和β-catenin在肿瘤发展的过程中发挥着不同的作用,因而调控E-cadherin和β-catenin的表达有望成为肿瘤的个体化干预靶点.
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上皮-间质转化与乳腺癌转移
癌细胞的远处转移是肿瘤发展的终形式,也是癌症患者死亡的主要原因[1].尽管早期乳腺癌患者通过规范化治疗,5年生存率达到了目前的98%;但转移性乳腺癌患者的5年生存率较40年前相比,只是从20%提高到目前的26%,而因乳腺癌死亡的患者几乎都死于转移[2].
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BMP-7介导的间叶 -上皮转化与器官纤维化研究进展
纤维化是各种器官慢性损伤的共同结果.研究发现上皮-间叶转化(EMT)可能是导致多种器官纤维化的潜在机制.目前认为转化生长因子-β<,1>(TGF-β<,1>)能诱导EMT,促进器官纤维化,而骨形态发生蛋白-7(BMP-7)可通过拮抗TGF-β的作用,诱导间叶-上皮转化,改善多种器官纤维化.然而,至今BMP-7的抗纤维化分子机制仍不清楚,对其进行深入研究具有重要意义,可能提供一种纤维化疾病的新治疗手段.
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microRNA-192在晚期糖基化终产物诱导人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化中的作用
目的 探讨microRNA-192(miR-192)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人腹膜间皮细胞上皮·间叶转化(EMT)的调控作用.方法 人腹膜间皮细胞、转染miR-192抑制物后人腹膜间皮细胞和转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞在含AGEs的培养基培养72 h,以M199培养基和含80 mM BSA的M199培养基为对照,然后运用实时荧光定量PCR法检测miR-192和mRNA的表达情况,运用蛋白质印迹法检测蛋白的表达情况.结果 在AGEs刺激后,人腹膜间皮细胞miR-192、胶原蛋白Ⅰ (CollagenI) mRNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA和蛋白表达水平显著上升(P＜0.05),而E-钙黏蛋白(E-cadherin) mRNA和蛋白表达水平显著下降(P＜0.05).与转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞相比,转染miR-192抑制物的人腹膜间皮细胞miR-192、Collagen Ⅰ mRNA、α-SMAmRNA和蛋白表达水平显著下降(P＜0.05),而E-cad-herin mRNA和蛋白表达水平显著上升(P＜0.05).结论 AGEs可能通过上调miR-192表达诱导人腹膜间皮细胞EMT.miR-192抑物可能通过下调miR-192表达阻止AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT.miR-192在AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT中起重要调控作用.
关键词： 晚期糖基化终产物 间皮细胞 上皮-间叶转化 MicroRNA-192 -
骨形成蛋白-7对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化的影响
目的 探讨骨形成蛋白-7(BMP-7)对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响.方法 晚期糖基化终产物诱导发生上皮-间叶转化的体外培养大鼠腹膜间皮细胞,分别经含5 ng/mL及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基和含10 ng/mL BMP-7及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基培养48 h,以含80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基为对照,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)、转化生长因子β1(TGF-31)、血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达；应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达；应用ELISA法检测间皮细胞TGF-31、VEGF蛋白表达水平.结果 BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P＜0.05).BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮α-SMA、Collagen Ⅰ、TGF-31、VEGFmRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著下降(P＜0.05).结论 BMP-7能上调上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin表达和下凋α-SMA、Collagen Ⅰ、TGF-β、VEGF表达,BMP-7能逆转晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT.
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晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化
目的 探讨晚期糖基化终产物对大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响,建立大鼠腹膜间皮细胞EMT模型.方法 体外培养的大鼠腹膜间皮细胞经含40 mmol/L晚期糖基化终产物(AGEs)、80 mmol/L AGEs的M199培养基分别培养48、72 h；以正常M199培养基和含80 mmol/L BSA的M199培养基为对照.采用相差显微镜观察细胞形态学改变,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGF mRNA的表达；应用Western blot检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达；应用ELISA法检测间皮细胞TGF-β1、VEGF蛋白表达水平.结果 ①AGEs(40 mmol/L、80 mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞由典型的上皮细胞形态逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞；②AGEs (40 mmol/L、80mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGF mRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著增加(P＜0.05)；③AGEs(40 mmol/L、80 mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著下降(P＜0.05).结论 AGEs能上调α-SMA、Collagen I、TGF-β、VEGF表达和下调E-cadherin表达,AGEs诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT.
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肺肉瘤样癌的病理特征及诊断
肺肉瘤样癌(pulmonary sarcomatoid carcinomas,PSCs)是一组分化差的伴有肉瘤样分化[梭形细胞和(或)巨细胞]或肉瘤成分(恶性骨、软骨或骨骼肌)的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancers,NSCLCs).发病率占所有肺恶性肿瘤的0.1%～1.3%.WHO(2004)将PSCs分为多形性癌、梭形细胞癌、巨细胞癌、癌肉瘤和肺母细胞瘤5个亚型,组织学具有高度异质性.由于PSCs的大体观察、细胞形态学和组织学图像复杂多样,常造成诊断困难,其鉴别诊断范围宽广.该文现综合介绍PSCs的概念、组织发生、各组织学亚型的病理学特征以及诊断和鉴别诊断的新进展,以提高对PSCs的认识及诊断水平.
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EMT诱导因子的新研究进展
上皮-间叶转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)分为生理性和病理性,与胚胎发育、肿瘤的转移等密切相关.病理性EMT被认为是正常机体在某些诱导因素作用下,上皮细胞向间质细胞转变分子机制的重新激活.诱导因素是发生EMT的第一步,也是研究抗肿瘤药物的重要入口.该文主要综述几种EMT重要诱导因子的作用机制及意义.
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TRB3在肾纤维化中的表达及其与上皮-间叶转化的关系
目的 研究TRB3与肾纤维化的关系和作用机制.方法 结扎♂性C57BL/6小鼠单侧输尿管,建立肾纤维化模型.利用H&E染色和Masson染色确立纤维化病变.在过表达TRB3条件下,利用免疫印迹检测E-cadherin和α-SMA表达改变.在干扰TRB3条件下,利用细胞划痕实验检测细胞迁移.结果 肾纤维化模型组TRB3蛋白表达高于假手术组(P<0.01),且与纤维化严重程度正相关.在大鼠肾小管上皮细胞NRK中过表达TRB3,导致E-cadherin表达降低,而α-SMA表达增高.干扰TRB3降低TGF-β1诱导的HepG2细胞迁移.结论 TRB3在纤维化肾脏组织中表达增高.TRB3可能通过诱导上皮-间叶转化在纤维化的进展中发挥促进作用.
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缺氧诱导宫颈癌Siha细胞发生上皮-间叶转化的研究
目的 探讨宫颈癌Siha细胞在二氯化钴(CoCl2)诱导的化学缺氧环境中能否发生上皮-间叶转化(EMT),从而获得侵袭性表型,并初步分析其分子机制.方法 划痕实验及Transwell体外侵袭实验检测化学缺氧对细胞迁移、侵袭及转移能力的影响;Western blot印迹法、细胞免疫化学及免疫荧光检测缺氧对Siha细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、上皮细胞标记分子E-cadherin、间叶细胞标记分子vimentin表达的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测缺氧对EMT诱导因子snail、zeb、twist mRNA表达的影响.结果 缺氧可促进人宫颈SCC Siha细胞的迁移、侵袭和转移能力;宫颈癌Siha细胞在常氧、缺氧12 h、缺氧24 h、缺氧48 h条件下E-cadherin蛋白的相对表达逐渐减少,vimentin蛋白的相对表达逐渐增加,缺氧组与常氧组比较差异有统计学意义(P＜0.05);缺氧状态下HIF-1α在Siha细胞中聚集,发现Siha细胞形态发生明显变化、且伴有上皮性标记蛋白E-cadherin的表达减弱;Siha细胞twist及snail mRNA的表达与HIF-1α mRNA表达成正相关,且在缺氧12h后差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 缺氧微环境可能通过活化HIF-1α,调节twist、snail等转录因子的表达,促进宫颈癌细胞发生上皮-间叶转化,产生侵袭性表型.
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Snail和E-cadherin在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与上皮-间叶转化的关系
目的:探讨上皮-间叶细胞转变(EMT)的标记分子Snail和E-cadherin在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌恶性生物学行为的相关性.方法:采用免疫组化方法分别检测45例卵巢上皮性癌组织中Snail和Ecadherin的表达状况,并分析其与卵巢癌主要临床病理参数之间的关系.结果:45例卵巢癌组织中Snail阳性表达率为40%(18/45),23例中观察到E-cadherin表达的降低.Snail的表达和淋巴结转移(P＜0.05)、远处转移(P＜0.01),E-cadherin表达降低(P＜0.05)都存在着相关性.Snail的阳性表达和E-cadherin的表达降低与卵巢癌的转移存在着明显的相关性.结论:Snail在卵巢癌组织中存在着重新表达的现象,同时伴随着E-cadherin的表达降低,调控上皮-间叶转化从而在卵巢癌的侵袭过程中发挥重要作用.
关键词： 卵巢肿瘤 Snail E-cadherin 上皮-间叶转化 -
肝细胞癌患者循环血肿瘤细胞的检测、分型鉴定及其临床意义
目的 通过对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者外周循环血肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的检测及亚型鉴定,分析其与HCC临床分期的关系及对手术预后的影响.方法 采用CanPatrolTM CTC-二代捕获技术联合RNA多重原位杂交分析(RNA in situ hybridisation,RNA-ISH),检测112例可手术切除HCC患者术前1～2 d与术后8～10 d外周循环血中的肿瘤细胞,并根据上皮-间叶转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达情况对其进行分型鉴定.同时,抽取20名健康志愿者的外周血作对照.结果 112例HCC患者术前1～2 d检测出CTCs101例(90.18％),20名健康志愿者的外周血中未检测到CTCs.根据EMT相关标志物的表达情况,将检测出的CTCs分为上皮型CTCs、上皮为主型CTCs、上皮/间叶混合型CTCs、间叶为主型CTCs及间叶型CTCs.其中CTC总数及间叶型CTC的比例与HCC的巴塞罗那肝癌临床(barcelona clinic liver cancer,BCLC),分期密切相关.当以CTC总数等于16作为临界点时,预测患者术后极早期复发的敏感性为55.3％,特异性为92.3％,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.74;当以间叶型CTC的比例等于2％作为临界点时,预测患者术后极早期复发的敏感性为80.9％,特异性为69.2％,AUC为0.748.CTC总数≥16且间叶型CTC的比例≥2％组的患者中位无瘤生存期为3.5个月,明显低于单纯CTC总数≥16或间叶型CTC的比例≥2％组(7个月)和CTC总数＜16且间叶型CTC的比例＜2％组(13.5个月),差异有统计学意义(P＜0.05).112例HCC患者术后8～10 d CTC总数较术前有所下降,但间叶型CTC的比例较术前增多.术后出现间叶型CTC的比例增多的患者无瘤生存期短于间叶型CTC的比例下降(或不变)的患者,其预后也较差(P＜0.05).对10例患者进行术后连续定期CTCs变化的动态监测直至复发,发现其中8例患者于出现临床可见复发病灶前的1～2个月,CTCs就可出现逐渐增多的趋势.结论 HCC患者外周血CTC阳性率高,CTCs能被检测出存在于早期HCC患者外周血中,提示HCC的播散转移是早期事件;术前高CTC总数或高间叶型CTC的比例以及术后出现间叶型CTC的比例增多的患者,其复发时限较短,预后较差.术后动态监测CTCs变化,对HCC极早期复发的预测具有一定的临床意义.
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晚期糖基化终产物对体外培养人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化的影响
目的 建立晚期糖基化终产物(AGEs)诱导体外培养人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(Epithelial-to-Mesenchymal Transition,EMT)的模型.方法 体外培养的人腹膜间皮细胞经含40mM、80mM AGEs的M199培养基分别培养48、72小时;以正常M199培养基和含80mM BSA的M199培养基为对照.采用相差显微镜观察细胞形态学改变,运用实时荧光定量PCR法检测mRNA的表达情况;运用Western印迹法检测蛋白的表达情况.结果 (1)AGEs刺激后人腹膜间皮细胞由典型的上皮细胞形态逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞;(2)AGEs刺激后,人腹膜间皮细胞胶原蛋白I(CollagenI)mRNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和α-SMA蛋白表达水平显著增加(P<0.05);(3)AGEs刺激后,人腹膜间皮细胞E-钙粘蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.05).结论 AGEs能上调体外培养人腹膜间皮细胞α-SMA、Collagen I表达和下调E-cadherin表达,AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT.
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Snail和E-cadherin在上皮性卵巢癌组织中的表达及其意义
目的:探讨Snail和E-cadherin在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌恶性生物学行为的相关性.方法:采用免疫组化方法分别检测60例卵巢上皮性癌组织中Snail和E-cadherin的表达状况,并分析其与卵巢癌主要临床病理参数之间的关系.结果:60例卵巢癌组织中Snail阳性表达率为43％(26/60),31例中观察到E-cdherin表达的降低.Snail的表达和淋巴结转移(P＜0.05)、远处转移(P＜0.01),E-cdherin表达降低(P＜0.05)都存在着相关性.Snail的阳性表达和E-cadherin的表达降低与卵巢癌的转移存在着明显的相关性.结论:Snail在卵巢癌组织中存在着重新表达的现象,同时伴随着E-cadherin的表达降低,调控上皮-间叶转化从而在卵巢癌的侵袭过程中发挥重要作用.
关键词： 卵巢肿瘤 Snail E-cadherin 上皮-间叶转化
