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丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠脑缺血再灌注后ERK信号通路的影响
目的:研究ERK信号通路在大鼠缺血再灌注脑组织的表达情况,并观察丹参酮ⅡA磺酸钠对其的调控作用.方法:建立大鼠脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学染色法检测缺血再灌注脑组织Ras,MEK,ERK阳性细胞数的表达,Tunel法检测神经细胞凋亡数量,观察Ras,MEK,ERK表达水平与神经坏死和凋亡的关系.结果:在缺血再灌注脑组织中Ras,MEK以及ERK表达均发生上调,给予REK抑制剂以及丹参酮ⅡA磺酸钠处理后,Ras,MEK以及ERK的表达均受到抑制,同时减少了细胞坏死和凋亡数量,与模型组相比均具有统计学差异(P＜0.05).结论:脑缺血再灌注后REK信号通路激活,丹参酮ⅡA磺酸钠可能通过抑制该通路的激活起到脑保护作用.
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RSK4与TRAF4在不同乳腺细胞中的表达及分子作用通路研究
目的 研究抑癌基因p90核糖体S6蛋白激酶4(p90 ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4)相互作用蛋白与肿瘤坏死因子受体相关因子4(tumor necrosis factor receptor associated factor 4,TRAF4)在不同乳腺细胞株中的表达,探讨RSK4-TRAF4相互作用蛋白所在分子作用通路对乳腺癌侵袭转移的影响.方法 采用实时荧光定量PCR法检测RSK4和TRAF4在HBL-100正常乳腺细胞株和MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231人乳腺癌细胞株中的表达情况.用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RSK4和TRAF4以及MAPK通路下游蛋白ERK1/2在HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231 4种乳腺细胞株中的表达.结果 RSK4 mRNA、TRAF4mRNA在4种细胞中均表达,RSK4 mRNA在HBL-100表达量高,在MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231细胞中含量依次降低;TRAF4 mRNA在4种细胞中的表达量由低到高依次为HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231细胞,RSK4 mRNA、TRAF4mRNA在4种细胞中两两比较,差异有统计学意义(P＜0.05).RSK4与TRAF4在4种细胞中蛋白表达水平与mRNA表达水平相一致,具有高度相关性(rRSK4=0.92,P＜ 0.01;rTRAF4=0.82,P＜0.01);ERK1/2蛋白表达量由高到低依次为MDA-MB-231、Her-2阳性型、MCF-7、HBL-100.在mRNA转录水平,RSK4和TRAF4表现出负相关(r1=-0.81,P＜0.01);在蛋白翻译水平,RSK4和TRAF4同样呈现出高度负相关(r2=-0.84,P＜0.01).结论 RSK4和TRAF4具有较高的负相关性,RSK4与TRAF4相互作用后可能通过MAPKs下游信号通路ERK起分子调控作用.
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原儿茶酸对Aβ1-42寡聚体诱导AD海马神经元的保护作用
目的：应用Aβ1-42寡聚体诱导SD胎鼠海马神经元制备细胞损伤模型，观察海南益智仁提取物-原儿茶酸(PCA)对模型细胞的保护作用。方法采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力，流式细胞技术检测细胞凋亡，蛋白质印迹法(Western blot)检测ERK蛋白，观察原儿茶酸对模型细胞的保护作用。结果 Aβ1-42寡聚体干预SD胎鼠海马神经元后,神经元生存率下降，神经元凋亡率升高，ERK蛋白表达下调。添加原儿茶酸后，模型细胞存活率改善明显、凋亡率显著性降低，且呈现浓度依赖性，并且ERK蛋白表达上调。结论原儿茶酸可拮抗Aβ1-42寡聚体所诱导的海马神经元损伤，具有神经保护作用。
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基于细胞外信号调节激酶通路探讨胰高糖素样肽-1受体激动剂促肝星状细胞凋亡的机制
不少研究结果已经证实胰高糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)具有抗脏器纤维化(包括抗肝纤维化)作用[1-5].肝星状细胞(HSC)是肝纤维化的中心细胞,HSC活化并生成大量细胞外基质是肝纤维化的基础,活化HSC的凋亡则控制着肝纤维化的发生、发展速度.细胞凋亡涉及多个胞内信号转导通路,不同的信号通路介导着不同机制的凋亡进程.其中丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)是目前研究得比较深入的与细胞凋亡关系密切的一组信号通路,它包括c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38MAPK和细胞外信号调节激酶(ERK)三大信号通路.本研究基于ERK信号通路考察了GLP-1 RA促HSC凋亡的作用,并探讨其分子机制.
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紫铆因抑制脂多糖诱导小胶质细胞炎性反应的作用机制研究
目的 探讨紫铆因抑制脂多糖(LPS)诱导BV2小胶质细胞炎性反应的作用机制.方法 以LPS诱导BV2小胶质细胞活化建立体外神经炎症细胞模型.MTT法检测紫铆因对BV2细胞存活率的影响;qPCR法检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平;Western blot法检测各组细胞内核因子-κB(NF-κB) p65和ERK信号通路相关蛋白的表达变化;免疫荧光染色观察各组细胞内NF-κcB p65的核转录活性变化.结果 紫铆因干预BV2细胞24 h后,对细胞活力无明显影响;紫铆因能显著下调LPS诱导BV2细胞活化后炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平;紫铆因能明显降低LPS诱导BV2细胞活化后,ERK信号通路相关蛋白的磷酸化水平,并且能有效抑制NF-κB p65的核转录活性,阻止其向核内转移.结论 紫铆因可以抑制LPS诱导的小胶质细胞活化,降低BV2小胶质细胞的炎性反应.
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苯并芘激活ERK1/2信号通路促进气道平滑肌细胞外基质蛋白沉积对气道重塑的影响
目的 探讨苯并芘对人气道平滑肌细胞(HASMC)细胞外基质(ECM)蛋白沉积的影响及相关通路机制.方法 原代培养HASMC,将2～6代细胞用于实验.用实时荧光定量PCR和Western Blot法分别检测ECM的基因及蛋白的表达量;用Western Blot法分析ERK1/2的磷酸化水平.结果 苯并芘可以诱导HASMC胶原蛋白Ⅰα1(P＜0.01)及ECM蛋白(包括胶原蛋白Ⅰ α1、多功能蛋白聚糖、纤连蛋白、层粘连蛋白α2)mRNA表达增加(P＜0.05).苯并芘可引起ERK1/2磷酸化水平快速增高(P＜0.01);ERK通路抑制剂PD98059能显著抑制苯并芘诱导的胶原蛋白Ⅰ α1(P＜0.01)及ECM蛋白(包括胶原蛋白Ⅰ α1、纤连蛋白、多功能蛋白聚糖、层粘连蛋白α2) mRNA表达增加(P＜0.01).结论 苯并芘通过激活ERK1/2通路诱导HASMC中ECM蛋白沉积,阻断ERK1/2信号通路可以抑制苯并芘诱导的气道重塑.
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FGFR2功能增强对软骨内成骨作用的机制研究
目的：利用模拟人Apert综合征的FGFR2S252W／＋小鼠模型，研究ERK信号通路在成纤维细胞生长因子受体2（FG‐FR2）功能持续增强对软骨内成骨过程的影响。方法动物繁殖、鉴定后分为FGFR2功能获得突变型和同窝野生型。于出生后6周获取骨髓间充质干细胞（BMSCs）进行体外培养及2代BMSCs成软骨诱导，对ERK信号蛋白检测，并比较Col2、Col10、OC、OP基因的表达。加入ERK信号通路阻滞剂PD98059后再次培养观察相应基因的表达。胚胎骨体外培养技术比较 ERK信号通路在FGFR2功能持续增强对软骨内成骨过程的影响。结果在体外BMSCs成软骨诱导后观察发现，FGFR2功能突变小鼠BM‐SCs表达总ERK蛋白量无明显变化，但磷酸化增强。FGFR2S252W／＋小鼠BMSCs表达Col2、Col10较野生型弱，但OC、OP基因强于野生型小鼠。加入ERK信号通路阻滞剂PD98059培养后，对Col2、Col10基因影响不大，但OC、OP表达量增高。并且在胚胎骨体外培养过程中，发现PD98059治疗组能纠正FGFR2功能持续增强所致软骨内成骨发育障碍。结论 ERK信号通路是FG‐F R2下游影响软骨内成骨的关键通路，特别对软骨内成骨后期成骨过程影响巨大。其信号通路阻滞剂对软骨内成骨发育障碍有一定救治作用。
关键词： 成纤维细胞生长因子受体2 ERK信号通路 骨髓间充质干细胞 软骨内成骨 软骨分化 -
大鼠子宫内膜异位症的细胞外信号调节激酶信号通路参与机制及来曲唑的改善作用
目的：分析大鼠子宫内膜异位症（ endometriosis，EMs）的细胞外信号调节激酶（ extracellular signal－regulated kinase，ERK）信号通路参与机制及来曲唑的改善作用。方法将40只雌性SD大鼠随机分为4组，每组10只，即假手术（Sham）组、子宫内膜异位症模型（EMs）组、PD98059（PD）组及来曲唑（LE）组。自体移植法手术建立EMs模型，PD98059组及来曲唑组进行对应灌胃治疗。采用Western Blotting分析各组大鼠异位组织中ERK信号通路的关键蛋白甲基乙基酮（ Methyl Ethyl Ketone，MEK）、细胞外信号调节激酶1／2（extracellular signal－regulated kinase，ERK1／2）、pMEK（extracellular regulated protein kinase）及pERK1／2蛋白的表达及参与细胞外基质重构的基质金属蛋白酶2（ matrix metalloproteinase， MMP2）及细胞凋亡蛋白Caspase3的表达。结果 EMs模型大鼠的ERK信号通路关键蛋白MEK、pMEK、ERK1／2及pERK1／2的表达均增高（分别为123.6％、136.4％、144.7％、141.2％）； MMP2及Caspase3的表达增强（分别为187.6％、134.7％）；来曲唑组大鼠的上述蛋白的异常表达得到显著恢复，且较子宫内膜异位症模型组降低（ P ＜0.05）。结论激活的ERK信号通路及其所诱导的细胞外基质重构和细胞凋亡参与了大鼠EMs的发生过程，来曲唑通过抑制激活的ERK通路改善EMs的异常。
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异常黑胆质成熟剂对抑郁症模型大鼠海马ERK信号通路的影响
目的:观察异常黑胆质成熟剂(ASMq)对抑郁症模型大鼠海马ERK信号通路的影响,探讨异常黑胆质成熟剂抗抑郁作用机制.方法:84只雄性SD大鼠,随机分为6组:正常对照组、抑郁症模型组、阳性对照组(氟西汀,3.5mg/kg)及异常黑胆质成熟剂低、中、高剂量组(浓度分别为1.5、3.0、6.0g/kg),每组14只.除正常对照组外,其它组采用慢性不可预见性温和应激(CUMS)诱导建立大鼠抑郁症模型,阳性对照组和异常黑胆质成熟剂各剂量组连续灌胃给药24天,1次/天.通过Open-field实验和糖水消耗实验来评估大鼠抑郁活动状态.末次给药24h后断头处死大鼠、迅速分离海马组织、冻存备用,蛋白印迹法(Western blot)检测大鼠海马p-ERK1/2,ERK1/2表达.结果:应激结束后与正常对照组相比,抑郁症模型组大鼠体重增加量降低、糖水消耗量减少,水平穿越格数、竖立次数均明显降低,处于抑郁状态;各组之间ERK1/2的表达没有显著性差异.与正常对照组相比,抑郁症模型组大鼠海马p-ERK1/2表达明显下降,差异有显著性.与抑郁症模型组相比,阳性对照组和异常黑胆质成熟剂中、高剂(浓度为3.0、6.0g/kg)量组大鼠体重增加量上升、糖水消耗量升高,水平穿越格数、竖立次数均明显增加;与抑郁症模型组相比,阳性对照组、异常黑胆质成熟剂中剂(浓度为3.0 g/kg)量组海马组织p-ERK1/2表达量明显升高,差异有显著性.结论:异常黑胆质成熟剂可能是通过调节ERK信号通路来发挥抗抑郁作用.
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ERK信号通路通过CXCR-4作用于乳腺癌细胞的侵袭转移研究
目的：：ERK信号通路与肿瘤的侵袭转移密切相关,本研究拟阻断ERK通路,检测乳腺癌细胞CXCR-4表达变化,分析ERK信号通路对乳腺癌细胞CXCR-4表达的影响,探讨乳腺癌转移的分子机制。方法：以培养的人乳腺癌MDA-MB-435细胞为研究对象,加入ERK特异性阻断剂PD98059为实验组,加入等量生理盐水为对照组,作用于人乳腺癌MDA-MB-435细胞24 h后,采用Western blotting法检测ERK通路重要因子ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达；采用流式细胞术检测细胞表面CXCR-4表达；采用Transwell侵袭实验观察空白对照组、CXCR-4配体SDF-1α组、ERK通路阻断组和SDF-1α+ERK阻断组细胞的侵袭转移情况。结果： ERK通路被有效阻断后,CXCR-4表达量明显下调；在趋化因子受体CXCR-4的配体SDF-1α的作用下,细胞侵袭能力提高,而在ERK通路阻断后,细胞侵袭能力明显降低且SDF-1α不能逆转这种降低效应反而具有协同作用。结论：在人乳腺癌MDA-MB-435细胞中,ERK信号通路可能通过上调CXCR-4的表达参与乳腺癌细胞的侵袭和转移。
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细胞外调节蛋白激酶与肿瘤坏死因子α的研究进展
近年来,研究者发现丝裂原活化蛋白激(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路与炎症反应的关系密切,而细胞外调节蛋白激酶(extracellular-signal regulated protein kinases,ERK)是迄今为止MAPK家族中研究得较为透彻的一个成员,本文通过综述近年来关于ERK信号通路与肿瘤坏死因子α研究进展的文献,探讨ERK信号通路与炎症反应的关系.
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ERK信号通路与哮喘的相关研究进展
ERK信号通路是促进细胞增殖的一条重要的细胞信号传导途径,可介导细胞生长、分化、凋亡等多种生理过程.支气管哮喘被世界卫生组织公认为临床难治性疾病之一,是一种病理机制尚未完全阐明的慢性炎症性疾病,其主要病理特征包括慢性气道炎症和气道重构等.目前研究表明,ERK信号通路与哮喘气道炎症和气道重构关系密切.通过对ERK信号通路调控哮喘气道炎症相关炎性因子、哮喘气道重构中平滑肌的增殖及干预ERK信号通路的传导可能对哮喘的发病及治疗产生的影响等方面作以综述,提出中医药治疗哮喘的研究思路.
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普萘洛尔对人血管内皮细胞影响机制初步研究
目的:研究普萘洛尔对人血管内皮细胞的细胞毒作用、增殖影响及p-ERK表达影响,为进一步研究普萘洛尔治疗血管瘤机制提供基础参数.方法:以离体培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)为模型,采用MTT法测定不同浓度的普萘洛尔对人血管内皮细胞的细胞毒作用、增殖影响及蛋白质免疫印迹法测定磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)变化.结果:普萘洛尔浓度为1-16ug/ml时对人血管内皮细胞有促进增殖作用,当普纳洛尔浓度为4ug/ml时为明显,其增殖率为19.21%(P<0.001),未见细胞毒现象及p-ERK比表达无明显改变(P<0.05).结论:细胞试验证实普萘洛尔浓度在1-16ug/ml的范围内,对正常人血管内皮细胞安全、无细胞毒作用.
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E RK信号通路在人牙髓干细胞增殖与分化中的作用
目的：探讨细胞外信号调节激酶（ERK）通路是否参与对人牙髓干细胞（hDPSCs）增殖及分化过程的调控。方法：用不同浓度的ERK通路抑制剂U0126干预hDPSCs，用CCK－8法检测细胞增殖；在矿化液诱导条件下，用不同浓度U0126干预hDPSCs 14 d，茜素红染色观察矿化结节的形成，RT－PCR检测成骨／成牙相关基因ALP、OCN、DSPP及BSP的表达；Western blot检测U0126（25μmol／L）干预后，ERK通路活性的变化。结果：不同浓度的U0126对hDPSCs的增殖能力无显著影响（P＞0．05）；与对照组相比，不同浓度的U0126对矿化结节的形成和成骨／成牙相关基因ALP、OCN、DSPP及BSP的表达均有抑制作用，25μmol／L U0126的抑制作用明显（P＜0．05）；Western blot结果显示随着时间的延长，p－ERK的表达量逐步增加，在加入25μmol／L U0126后，p－ERK表达量下降（P＜0．05）。结论：ERK信号通路可能不参与对hDPSCs增殖的调控，而在促进hDPSCs成骨／成牙分化过程中起调控作用。
关键词： 人牙髓干细胞(hDPSCs) ERK信号通路 增殖 分化 -
靶向ERK信号通路的新型抗病毒策略
病毒的耐药性愈发严重，开发具有全新抗病毒机制的药物十分紧迫。研究发现病毒的复制依赖宿主的ERK信号通路，ERK信号通路抑制剂可显著抑制病毒的复制及致病，并具有传统抗病毒药物无法比拟的优势，这为抗病毒药物的开发提供了一种全新的策略。
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miR-223通过作用CDK2及ERK信号通路参与Lewis肺癌细胞周期调控
目的 研究miR-223对Lewis肺癌细胞(LLC)周期调控作用及其分子机制.方法 将miR-223真核表达载体转染至LLC细胞中,应用流式细胞仪检测其细胞周期分布变化,实时定量PCR、western blot检测对CDK2表达和ERK信号通路的影响.结果 流式细胞周期检测显示miR-223过表达导致G0/G1细胞由53.8%减少到45.3%,G2细胞由4.29%增加到13.2%;实时定量PCR及western blot显示,miR-223过表达抑制CDK2 mRNA及蛋白表达,并下调ERK信号通路.结论 miR-223通过作用CDK2及ERK通路参与Lewis肺癌细胞周期调控.
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细胞ERK/MAPK通路参与人类RNA病毒复制致病作用的研究进展
病毒与宿主细胞间存在着复杂的相互作用关系,其中细胞信号通路是参与相互作用过程的重要因素.细胞外调节蛋白激酶( extracellular regulated protein kinases,ERK)是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路家族中的一个重要信号通路[1].越来越多的研究证明,该通路在病毒(包括DNA病毒和RNA病毒)的感染致病过程中具有重要的作用[2-3].本文主要关注引起人类疾病的病毒复制与该通路的关系.
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ERK信号通路:病毒感染依赖的宿主机制及潜在抗病毒靶标
细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路是20世纪80年代初发现的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族中的一个重要成员,由Raf、MEK (MAPK/ERK kinase)、ERK三个不同层级的激酶蛋白组成,并依次顺序激活.生理情况下,ERK通路主要参与调控细胞生长、分化和凋亡等功能,某些病理情况下该通路也发挥重要作用.例如,许多肿瘤细胞中,ERK信号通道呈高度激活状态[1-2],而抑制该通道的活性(如用Raf、MEK抑制剂)能有效抗肿瘤生长[3-6].
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丝裂原活化蛋白激酶信号通路与白血病的研究新进展
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路可参与凋亡、分化、自噬等多种细胞活动,人类细胞中主要有细胞外信号调节激酶(Erk)、p38 MAPK、c-Jun N端激酶(JNK)3条通路,每条信号通路都具有高度特异性,有其独立的功能.MAPK信号通路与白血病的发生、发展密切相关,其对白血病细胞的作用主要通过与细胞凋亡、介导细胞耐药、调控细胞自噬分化等方面有关.现就MAPK信号通路与白血病的相关研究进展进行综述.
关键词： JNK信号通路 p38 MAPK信号通路 ERK信号通路 白血病
